高效液相色谱使用方法
一、 开机
1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）； 把流动相放入溶剂瓶中。A瓶：为水相 B瓶：为有机相。
2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。
3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。
4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。
该页面主要由以下几部分组成：
——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等；
——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；
——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；
——中下部为动态监测信号；
——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
二、 编辑参数及方法
1、开始编辑完整方法：
从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。
2、方法信息：
在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。单击OK，进入下一画面。
3、泵参数设定：
进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击OK，进入下一画面。
4、DAD检测器参数设定：
进入“DAD signals”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）； 选择Stoptime：as Pupm；
在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测，则可选None； 范围Range：可选范围为190~950nm； 步长Step可选2.0nm； 阀值： 选择需要的灯；
Peak width（Response time）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或4s；
Slit-：狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。可选4nm
单击OK，进入下一画面。
5、进入“Signal Details”画面，单击OK，进入下一画面。
6、进入“Edit Integration Events”（编辑积分结果）画面，单击OK，进入下一画面。
7、进入“Specify report”（积分参数）画面，单击OK，进入下一画面。
8、进入“Instrument curves”画面，单击OK，进入下一画面。
9、进入“Run Time checklist”（运行时间表）画面，选择“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”，单击OK，完成参数设定，回到工作站画面。
10、单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入文件名，单击OK。（路径：e\HPCHEM\1\methods\***）
注：如果调用一个方法，则在“Method”菜单，选中“Load method”，选方法名，单击OK。
11、从菜单“View”中选择“Online signal”，选中Window 1 ，然后单击Change钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点OK。（如同时检测二个信号，则重复11，选中Window 2）。
三、运行样品
1、单击泵（Pump）图标下面的小瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，并且选停泵体积。单击OK。
2、手动打开Purge阀：逆时针转2~3圈。
3、单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。设Flow：5ml/min，单击OK。
4、开泵：直接点Pump图标下面的泵开关小图标，或单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump contrlo选项，选中On，单击OK。
5、系统开始排液（Purge），直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续排液，直到所有通道无气泡为止。（每个管线内液体约20ml，在5ml/min的流速下，均需4~5min才能排完）
6、单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。把Flow改为0.5~1.0ml/min，单击OK。
7、等待流速降下来后，关闭排液阀。
8、待压力稳定后，从“Instrument”菜单中选择“System on”或单击GUI图标的On图标启动系统。开始走基线，并可选择观察信号。
注：仪器运行过程，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”，表明可以进行分析。（此时如果要终止仪器的运行，可单击流程图右下角的“off”，再单击“Yes”，关闭输液泵和检测器氘灯）。
9、单击最大化按钮，将online Plot窗口放大。待基线平稳后，点信号窗口的“Banlance”，调至零点。
10、等仪器Ready ，从“Runcontrol”菜单中选择F5或“Run method”。
11、编辑样品信息：
从“Run control”菜单中选择“Sample into”选项，选择“Sample Info…..”，即打开了样品信息页面，输入操作者（Operator Name）、数据存贮通道（Subdirectory）、样品名（Sample Name）、进样瓶号（Vial）、浓缩因子（Multipline）、稀释因子（Dilution）、，“Data file”中选择 “Prefix”，在Prefix框中输入批号或日期等，在Counter框中输入计算器的起始位，仪器会自动命名。（样品量（Sample Amount）、内标量（ISID Amount）可不选，Location只对自动进样器有用，不填则走空白，检查干扰峰的来源。）
单击OK。
12、进样分析：
进样阀扳到Load位置，插入注射器，注样品，进样后扳动阀至Inject位置。
13、进样分析结束，点Close键退出样品分析。
（注意：检测完尽量要关DAD的灯，以保持灯的寿命。单击DAD图标，出现参数设定菜单，单击control ，选择关灯。）
四、数据分析方法编辑（可在offline下操作）
1、 从“View” 菜单中选“Date analysis”进入数据分析画面。该页面最上方为命令栏，依次为File ，Graphics，Integration……等。命令栏下为快捷操作图标，如积分、校正、色谱图、单一色谱图调用、多色谱图调用、调用方法、保存等。
2、 从“File”菜单中选“Load signal”，或单击快捷操作的“单一色谱图调用”图标，选择色谱图文件名，单击“OK”，画面中即出现所调用的色谱图。
3、 做图谱优化，从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项。从Ranges中选择Auao scale及合适的显示时间，单击OK，或选择“Use Ranges”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。
4、 积分
（1）先调用所要分析的色谱图，从“Integration”中选择“Auto integrate”，从“Integration”中选择“Integration Results”，此时仪器将内置的积分参数给出积分结果。如积分结果不理想，再从“Integration”菜单中选择“Integration Events”选项，或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标，此时，在屏幕下方左侧出现积分参数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数，如斜率（Slope sensitivity）、峰宽（Peak width）、最小峰面积（Area reject）、最低峰高（Height reject）等。
（2）从“Integration”中选择“Integrate”选项或单击快捷操作的“对现有色谱图积分”图标，仪器即按照新设定的积分参数重新积分。
（3）若积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
（4）完成后，单击左边的“ˇ”图标，将积分参数存入方法。
5、 打印报告：
（1）从“Report”菜单中选择“Specify report”选项，或单击最右侧快捷操作的“定义报告及打印格式”（右下角带叉的报告画面）图标，进入打印画面。
（2）根据实际要求选择报告的格式和输出形式等。可在“Calculate”右则的黑三角中选“Percent”（面积百分比），其它项不变。（如 “Destination”项下选择“Screen”； “Based On”选“Area”；“Sorted By”选“Signal”；“Repirt Style”选“Short”；选择“Add chromatogram Output（打印色谱图）”；选择“With Calibrated Peaks”；选择“Portrait”；可根据需要选择“Size”）。
（3）单击OK。
（4）选择快捷操作的“报告预览”图标，可预览报告的全貌。从“Report”菜单中，选择“Print Report”，则报告打印到屏幕上，如想输出到打字机上，则单击“Print”，即可进行报告的打印。最后，单击“close”退出此操作页面。
6、 定量分析
如果需要进行标准曲线制备，可按此项进行操作。
（1）一级校正表的建立：
在“Data Analysis”界面下，调用最低浓度的色谱图，在“栏“Calibration”下，选择“New Calibration Table”，选择“Automatic Setup Level”，并设校正级数为 “1”，单击“OK”。在画下方左侧出现校正表，右侧为校正图。在画面左下侧的校正表中选择所要的色谱峰，输入校正级数、化学物名称及浓度，如果采用内标法，需对内标峰进行标记。单击OK，工作站提示是否删除0浓度行，单击Yes 。
（2）二级校正表的建立：
调用第二个色谱图，在命令栏“Calibration”下，选择“Add Level”，设为“2”，单击“OK”，在画面左下侧的校正表中输入校正级数、化学物名称及样品浓度。（如需对校正表中的某些数据进行重新修正，可调用新的图谱，在命令栏“Calibration”下，选择“Recalibration”，并在校正表中输入校正级数，样品浓度。）此时，校正表右侧自动绘制各组分的标准曲线，并进行线性回归。单击校正表中的“Print”，可进行打印。
五、关机
1、 关机前，用过缓冲盐溶液必须先用100%的水冲洗系统（打开排液阀，调流速为5ml/min，冲洗约5 min，然后调流速为1ml/min，待流速降下来后，关闭排液阀，再冲洗冲洗约20 min）；然后用甲醇同法清洗20min，然后关泵。 注意：此方法适用于反相色谱柱，而正相色谱柱应用适当的溶剂冲洗。
2、清洗进样器：
将进样器扳至Load的位置，用专用的注射器装约10ml适当溶剂冲洗进样器。 当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时扳动进样阀数次，每次数毫升。
3、退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down）。
4、关掉Agilent 1100电源开关。
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高效液相色谱使用方法
一、 开机
1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）； 把流动相放入溶剂瓶中。A瓶：为水相 B瓶：为有机相。
2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。
3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。
4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。
该页面主要由以下几部分组成：
——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等；
——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；
——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；
——中下部为动态监测信号；
——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
二、 编辑参数及方法
1、开始编辑完整方法：
从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。
2、方法信息：
在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。单击OK，进入下一画面。
3、泵参数设定：
进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击OK，进入下一画面。
4、DAD检测器参数设定：
进入“DAD signals”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）； 选择Stoptime：as Pupm；
在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测，则可选None； 范围Range：可选范围为190~950nm； 步长Step可选2.0nm； 阀值： 选择需要的灯；
Peak width（Response time）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或4s；
Slit-：狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。可选4nm
单击OK，进入下一画面。
5、进入“Signal Details”画面，单击OK，进入下一画面。
6、进入“Edit Integration Events”（编辑积分结果）画面，单击OK，进入下一画面。
7、进入“Specify report”（积分参数）画面，单击OK，进入下一画面。
8、进入“Instrument curves”画面，单击OK，进入下一画面。
9、进入“Run Time checklist”（运行时间表）画面，选择“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”，单击OK，完成参数设定，回到工作站画面。
10、单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入文件名，单击OK。（路径：e\HPCHEM\1\methods\***）
注：如果调用一个方法，则在“Method”菜单，选中“Load method”，选方法名，单击OK。
11、从菜单“View”中选择“Online signal”，选中Window 1 ，然后单击Change钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点OK。（如同时检测二个信号，则重复11，选中Window 2）。
三、运行样品
1、单击泵（Pump）图标下面的小瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，并且选停泵体积。单击OK。
2、手动打开Purge阀：逆时针转2~3圈。
3、单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。设Flow：5ml/min，单击OK。
4、开泵：直接点Pump图标下面的泵开关小图标，或单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump contrlo选项，选中On，单击OK。
5、系统开始排液（Purge），直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续排液，直到所有通道无气泡为止。（每个管线内液体约20ml，在5ml/min的流速下，均需4~5min才能排完）
6、单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。把Flow改为0.5~1.0ml/min，单击OK。
7、等待流速降下来后，关闭排液阀。
8、待压力稳定后，从“Instrument”菜单中选择“System on”或单击GUI图标的On图标启动系统。开始走基线，并可选择观察信号。
注：仪器运行过程，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”，表明可以进行分析。（此时如果要终止仪器的运行，可单击流程图右下角的“off”，再单击“Yes”，关闭输液泵和检测器氘灯）。
9、单击最大化按钮，将online Plot窗口放大。待基线平稳后，点信号窗口的“Banlance”，调至零点。
10、等仪器Ready ，从“Runcontrol”菜单中选择F5或“Run method”。
11、编辑样品信息：
从“Run control”菜单中选择“Sample into”选项，选择“Sample Info…..”，即打开了样品信息页面，输入操作者（Operator Name）、数据存贮通道（Subdirectory）、样品名（Sample Name）、进样瓶号（Vial）、浓缩因子（Multipline）、稀释因子（Dilution）、，“Data file”中选择 “Prefix”，在Prefix框中输入批号或日期等，在Counter框中输入计算器的起始位，仪器会自动命名。（样品量（Sample Amount）、内标量（ISID Amount）可不选，Location只对自动进样器有用，不填则走空白，检查干扰峰的来源。）
单击OK。
12、进样分析：
进样阀扳到Load位置，插入注射器，注样品，进样后扳动阀至Inject位置。
13、进样分析结束，点Close键退出样品分析。
（注意：检测完尽量要关DAD的灯，以保持灯的寿命。单击DAD图标，出现参数设定菜单，单击control ，选择关灯。）
四、数据分析方法编辑（可在offline下操作）
1、 从“View” 菜单中选“Date analysis”进入数据分析画面。该页面最上方为命令栏，依次为File ，Graphics，Integration……等。命令栏下为快捷操作图标，如积分、校正、色谱图、单一色谱图调用、多色谱图调用、调用方法、保存等。
2、 从“File”菜单中选“Load signal”，或单击快捷操作的“单一色谱图调用”图标，选择色谱图文件名，单击“OK”，画面中即出现所调用的色谱图。
3、 做图谱优化，从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项。从Ranges中选择Auao scale及合适的显示时间，单击OK，或选择“Use Ranges”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。
4、 积分
（1）先调用所要分析的色谱图，从“Integration”中选择“Auto integrate”，从“Integration”中选择“Integration Results”，此时仪器将内置的积分参数给出积分结果。如积分结果不理想，再从“Integration”菜单中选择“Integration Events”选项，或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标，此时，在屏幕下方左侧出现积分参数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数，如斜率（Slope sensitivity）、峰宽（Peak width）、最小峰面积（Area reject）、最低峰高（Height reject）等。
（2）从“Integration”中选择“Integrate”选项或单击快捷操作的“对现有色谱图积分”图标，仪器即按照新设定的积分参数重新积分。
（3）若积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
（4）完成后，单击左边的“ˇ”图标，将积分参数存入方法。
5、 打印报告：
（1）从“Report”菜单中选择“Specify report”选项，或单击最右侧快捷操作的“定义报告及打印格式”（右下角带叉的报告画面）图标，进入打印画面。
（2）根据实际要求选择报告的格式和输出形式等。可在“Calculate”右则的黑三角中选“Percent”（面积百分比），其它项不变。（如 “Destination”项下选择“Screen”； “Based On”选“Area”；“Sorted By”选“Signal”；“Repirt Style”选“Short”；选择“Add chromatogram Output（打印色谱图）”；选择“With Calibrated Peaks”；选择“Portrait”；可根据需要选择“Size”）。
（3）单击OK。
（4）选择快捷操作的“报告预览”图标，可预览报告的全貌。从“Report”菜单中，选择“Print Report”，则报告打印到屏幕上，如想输出到打字机上，则单击“Print”，即可进行报告的打印。最后，单击“close”退出此操作页面。
6、 定量分析
如果需要进行标准曲线制备，可按此项进行操作。
（1）一级校正表的建立：
在“Data Analysis”界面下，调用最低浓度的色谱图，在“栏“Calibration”下，选择“New Calibration Table”，选择“Automatic Setup Level”，并设校正级数为 “1”，单击“OK”。在画下方左侧出现校正表，右侧为校正图。在画面左下侧的校正表中选择所要的色谱峰，输入校正级数、化学物名称及浓度，如果采用内标法，需对内标峰进行标记。单击OK，工作站提示是否删除0浓度行，单击Yes 。
（2）二级校正表的建立：
调用第二个色谱图，在命令栏“Calibration”下，选择“Add Level”，设为“2”，单击“OK”，在画面左下侧的校正表中输入校正级数、化学物名称及样品浓度。（如需对校正表中的某些数据进行重新修正，可调用新的图谱，在命令栏“Calibration”下，选择“Recalibration”，并在校正表中输入校正级数，样品浓度。）此时，校正表右侧自动绘制各组分的标准曲线，并进行线性回归。单击校正表中的“Print”，可进行打印。
五、关机
1、 关机前，用过缓冲盐溶液必须先用100%的水冲洗系统（打开排液阀，调流速为5ml/min，冲洗约5 min，然后调流速为1ml/min，待流速降下来后，关闭排液阀，再冲洗冲洗约20 min）；然后用甲醇同法清洗20min，然后关泵。 注意：此方法适用于反相色谱柱，而正相色谱柱应用适当的溶剂冲洗。
2、清洗进样器：
将进样器扳至Load的位置，用专用的注射器装约10ml适当溶剂冲洗进样器。 当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时扳动进样阀数次，每次数毫升。
3、退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down）。
4、关掉Agilent 1100电源开关。
朋友可以到行业内专业的网站进行交流学习！
分析测试百科网这块做得不错，气相、液相、质谱、光谱、药物分析、化学分析、食品分析。这方面的专家比较多，基本上问题都能得到解答，有问题可去那提问，网址百度搜下就有。