第１８卷第６期
２００９年１２月
中国组织化学与细胞化学杂志
ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ
ＡＮＤ
ＶｏＩ．１８．Ｎｏ．６Ｄｅｃ．２００９
ＣＹＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ
脂肪组织冰冻切片简易操作技术
徐林丽
陈丽丽
赵
静屈长青’
（阜阳师范学院生命科学学院，安徽，２３６０４１）
（关键词］
脂肪组织；冰冻切片；
Ｒ４４６．８
［中图分类号）（文献标识码）
Ａ
ＤＯＩ：１０．３８７０／ｚｇｚｚｈｋ２００９．０６．０２２
组织切片的染色与观察是细胞生物学实验中的重要内容之一，在教学过程中，经常用到冰冻切片技术，也就是借助低温冷冻将组织快速冻结达到一定的硬度进行制片的一种方法。由于冰冻切片机购价昂贵，在高等院校教学单位，一般都安排专人管理与操作，因此在细胞生物学教学中，无法让学生真正亲自操作，获得锻炼。此外，目前冰冻切片机的组织包埋剂大多使用进口的ｏ．Ｃ．Ｔ，该包埋剂价格昂贵，随机配带数量有限，用完购买不便Ｌ１］。每次使用前，实验人员还需要长时间的准备，等待切片机降到所需温度。在教学过程中，我们探索出一种简便的手制冰冻切片的方法，耗资少，节约时间且操作简便，学生可自己制作切片，并通过染色观察，起到了较好的效果，现介绍如下。
材料和方法
Ｉ．材料
刀片，载玻片，托物台，普通办公用胶水，普通冰箱，冰块。
２．试剂
Ｉ％ＨＣＩ，９５％乙醇，油红０染色液，５０％乙醇，７０％乙醇。
３．方法
３．１
水洗净，绸布拭干后待用［２］。
３．２托物台预处理
将数个托物台放入一２０℃冰箱中进行预处理
１０
ｍｉｎ左右。３．３切块包埋
小鼠皮下脂肪组织为例，将小鼠处死后，取新
鲜脂肪组织，用吸水纸将组织块的水分充分吸干，切成１ｃｍ×０．５ｃｍ×ｌｃｍ左右的小块。取出托物台，滴上胶水冷冻，待其形成一个小台后取出。将组织小块置于小台上，滴上胶水，速放于冰箱内冰冻。
３．４切片
待胶水和组织发白后进行切片，刀片与包埋剂之间要保持适当角度，轻刮或者平切组织块。
３．５
对照
实验员在冰冻切片机上蒯作脂肪组织切片，厚
度为３—５ｐｒｏ。
３．６油红Ｏ染色［３Ｈ］。！～‘
切片干燥后入５０％乙醇稍洗一油红（）染液作
用８ｍｉｎ－，７０％乙醇分化一自来水冲洗一苏木素复
染１ｍｉｎ一自来水冲洗返蓝一甘油明胶封片，显微镜下观察，拍照。
结
果
载玻片预处理
将载玻片先用１％ＨＣＬ浸泡０．５ｈ，捞出用清水将酸冲洗干后再用９５％酒精浸泡１０ｍｉｎ，蒸馏
经过多次实践，比较发现按上述方法制作的冰冻切片（图１）与机制的冰冻切片（图２）在切片的质量和染色等方面基本相同，没有明显差别。
［收稿日期］２００９－０２－１２［修回日期］２００９－０３－３０
讨论
［基金项目］安徽省教育厅教学研究资助项目（２００７ｊｙｘｍ－
３４５）和安徽省高校自然科学研究资助项目（ＫＪ２００８８２２８）
［作者简介］徐林丽，女（１９８６年），汉族。
＊通讯作者（Ｔｏｗｈｏｍｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅｓｈｏｕｌｄｂｅａｄｄｒｅｓｓｅｄ）
胶水和进口包埋剂Ｏ．Ｃ．Ｔ都是无色透明液体，冷冻后都有与组织块相近的韧度，都对组织起到了良好的支撑、填塞和凝固作用‘引。实验证明，胶水与ｏ．Ｃ．Ｔ都有稳定的染色效果和良好的透明
第６期徐林丽等．脂肪组织冰冻切片简易操作技术
２００８，２３（３）：５１
７１９
度，并且用低廉的胶水取代价格昂贵的进口包埋剂０．Ｃ．Ｔ，大大降低了实验成本，减少了实验开支；用刀片代替了冰冻切片机的防卷板及切片刀和持刀架，灵活性强，易操作，学生可从实验中得到锻炼而掌握实验技巧，大大提高了学生的实验兴趣，起到了较好的效果。
致
谢
［２］杨秀静。陈书嫒．免疫组织化学胶片制作方法的改进．
临床和实验医学杂志，２００６，５（６）：８０５
Ｃ３３田玉旺，李琳，李丽。等．介绍一种改良的油红０脂
肪染色法．中国组织化学与细胞化学杂志．２００７，１６
（６）：７３６
Ｃ４３屈长青，李东伟。朱茂英，等．一种改进的培养脂肪
细胞染色法．中国组织化学与细胞化学杂志，２００８，
１７（３）：３２９—３３０
感谢阜阳师范学院生命科学学院范海燕老师在制作切片中给予的指导与帮助。
参考文献
Ｃ１７李晓锋，邓元，曹培龙，等．普通胶水代替进口
ｏ．Ｃ．Ｔ包埋剂制作冰冻切片．现代检验医学杂志，
图
版说明
图１手制冰冻切片油红０染色×４００
Ｆｉｇ．１
Ｍａｎｕａｌｆｒｏｇｅｎｓｅｃｔｉｏｎ。ＯｉｌｒｅｄＯｓｔａｉｎｉｎｇ．×４００
图２机制冰冻切片油红０染色×２００
Ｆｉｇ．２Ｃｒｙｏｓｔａｔｓｅｃｔｉｏｎ．ＯｉｌｒｅｄＯ
ｓｔａｉｎｉｎｇ．×２００
脂肪组织冰冻切片简易操作技术
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：
徐林丽， 陈丽丽， 赵静， 屈长青
阜阳师范学院生命科学学院,安徽,236041
中国组织化学与细胞化学杂志
CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY2009,18(6)
参考文献(4条)
1. 屈长青;李东伟;朱茂英 一种改进的培养脂肪细胞染色法[期刊论文]-中国组织化学与细胞化学杂志 2008(03)2. 田玉旺;李琳;李丽 介绍一种改良的油红O脂肪染色法[期刊论文]-中国组织化学与细胞化学杂志 2007(06)3. 杨秀静;陈书媛 免疫组织化学胶片制作方法的改进[期刊论文]-临床和实验医学杂志 2006(06)
4. 李晓锋;邓元;曹培龙 普通胶水代替进口O.C.T包埋剂制作冰冻切片[期刊论文]-现代检验医学杂志 2008(03)
本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgzzhxyxbhxzz200906022.aspx
第１８卷第６期
２００９年１２月
中国组织化学与细胞化学杂志
ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ
ＡＮＤ
ＶｏＩ．１８．Ｎｏ．６Ｄｅｃ．２００９
ＣＹＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ
脂肪组织冰冻切片简易操作技术
徐林丽
陈丽丽
赵
静屈长青’
（阜阳师范学院生命科学学院，安徽，２３６０４１）
（关键词］
脂肪组织；冰冻切片；
Ｒ４４６．８
［中图分类号）（文献标识码）
Ａ
ＤＯＩ：１０．３８７０／ｚｇｚｚｈｋ２００９．０６．０２２
组织切片的染色与观察是细胞生物学实验中的重要内容之一，在教学过程中，经常用到冰冻切片技术，也就是借助低温冷冻将组织快速冻结达到一定的硬度进行制片的一种方法。由于冰冻切片机购价昂贵，在高等院校教学单位，一般都安排专人管理与操作，因此在细胞生物学教学中，无法让学生真正亲自操作，获得锻炼。此外，目前冰冻切片机的组织包埋剂大多使用进口的ｏ．Ｃ．Ｔ，该包埋剂价格昂贵，随机配带数量有限，用完购买不便Ｌ１］。每次使用前，实验人员还需要长时间的准备，等待切片机降到所需温度。在教学过程中，我们探索出一种简便的手制冰冻切片的方法，耗资少，节约时间且操作简便，学生可自己制作切片，并通过染色观察，起到了较好的效果，现介绍如下。
材料和方法
Ｉ．材料
刀片，载玻片，托物台，普通办公用胶水，普通冰箱，冰块。
２．试剂
Ｉ％ＨＣＩ，９５％乙醇，油红０染色液，５０％乙醇，７０％乙醇。
３．方法
３．１
水洗净，绸布拭干后待用［２］。
３．２托物台预处理
将数个托物台放入一２０℃冰箱中进行预处理
１０
ｍｉｎ左右。３．３切块包埋
小鼠皮下脂肪组织为例，将小鼠处死后，取新
鲜脂肪组织，用吸水纸将组织块的水分充分吸干，切成１ｃｍ×０．５ｃｍ×ｌｃｍ左右的小块。取出托物台，滴上胶水冷冻，待其形成一个小台后取出。将组织小块置于小台上，滴上胶水，速放于冰箱内冰冻。
３．４切片
待胶水和组织发白后进行切片，刀片与包埋剂之间要保持适当角度，轻刮或者平切组织块。
３．５
对照
实验员在冰冻切片机上蒯作脂肪组织切片，厚
度为３—５ｐｒｏ。
３．６油红Ｏ染色［３Ｈ］。！～‘
切片干燥后入５０％乙醇稍洗一油红（）染液作
用８ｍｉｎ－，７０％乙醇分化一自来水冲洗一苏木素复
染１ｍｉｎ一自来水冲洗返蓝一甘油明胶封片，显微镜下观察，拍照。
结
果
载玻片预处理
将载玻片先用１％ＨＣＬ浸泡０．５ｈ，捞出用清水将酸冲洗干后再用９５％酒精浸泡１０ｍｉｎ，蒸馏
经过多次实践，比较发现按上述方法制作的冰冻切片（图１）与机制的冰冻切片（图２）在切片的质量和染色等方面基本相同，没有明显差别。
［收稿日期］２００９－０２－１２［修回日期］２００９－０３－３０
讨论
［基金项目］安徽省教育厅教学研究资助项目（２００７ｊｙｘｍ－
３４５）和安徽省高校自然科学研究资助项目（ＫＪ２００８８２２８）
［作者简介］徐林丽，女（１９８６年），汉族。
＊通讯作者（Ｔｏｗｈｏｍｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅｓｈｏｕｌｄｂｅａｄｄｒｅｓｓｅｄ）
胶水和进口包埋剂Ｏ．Ｃ．Ｔ都是无色透明液体，冷冻后都有与组织块相近的韧度，都对组织起到了良好的支撑、填塞和凝固作用‘引。实验证明，胶水与ｏ．Ｃ．Ｔ都有稳定的染色效果和良好的透明
第６期徐林丽等．脂肪组织冰冻切片简易操作技术
２００８，２３（３）：５１
７１９
度，并且用低廉的胶水取代价格昂贵的进口包埋剂０．Ｃ．Ｔ，大大降低了实验成本，减少了实验开支；用刀片代替了冰冻切片机的防卷板及切片刀和持刀架，灵活性强，易操作，学生可从实验中得到锻炼而掌握实验技巧，大大提高了学生的实验兴趣，起到了较好的效果。
致
谢
［２］杨秀静。陈书嫒．免疫组织化学胶片制作方法的改进．
临床和实验医学杂志，２００６，５（６）：８０５
Ｃ３３田玉旺，李琳，李丽。等．介绍一种改良的油红０脂
肪染色法．中国组织化学与细胞化学杂志．２００７，１６
（６）：７３６
Ｃ４３屈长青，李东伟。朱茂英，等．一种改进的培养脂肪
细胞染色法．中国组织化学与细胞化学杂志，２００８，
１７（３）：３２９—３３０
感谢阜阳师范学院生命科学学院范海燕老师在制作切片中给予的指导与帮助。
参考文献
Ｃ１７李晓锋，邓元，曹培龙，等．普通胶水代替进口
ｏ．Ｃ．Ｔ包埋剂制作冰冻切片．现代检验医学杂志，
图
版说明
图１手制冰冻切片油红０染色×４００
Ｆｉｇ．１
Ｍａｎｕａｌｆｒｏｇｅｎｓｅｃｔｉｏｎ。ＯｉｌｒｅｄＯｓｔａｉｎｉｎｇ．×４００
图２机制冰冻切片油红０染色×２００
Ｆｉｇ．２Ｃｒｙｏｓｔａｔｓｅｃｔｉｏｎ．ＯｉｌｒｅｄＯ
ｓｔａｉｎｉｎｇ．×２００
脂肪组织冰冻切片简易操作技术
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：
徐林丽， 陈丽丽， 赵静， 屈长青
阜阳师范学院生命科学学院,安徽,236041
中国组织化学与细胞化学杂志
CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY2009,18(6)
参考文献(4条)
1. 屈长青;李东伟;朱茂英 一种改进的培养脂肪细胞染色法[期刊论文]-中国组织化学与细胞化学杂志 2008(03)2. 田玉旺;李琳;李丽 介绍一种改良的油红O脂肪染色法[期刊论文]-中国组织化学与细胞化学杂志 2007(06)3. 杨秀静;陈书媛 免疫组织化学胶片制作方法的改进[期刊论文]-临床和实验医学杂志 2006(06)
4. 李晓锋;邓元;曹培龙 普通胶水代替进口O.C.T包埋剂制作冰冻切片[期刊论文]-现代检验医学杂志 2008(03)
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