常规HE染色步骤
（1）二甲苯（Ⅰ） 5-10 min
(2) 二甲苯（Ⅱ） 5-10 min
(3) 95%乙醇（Ⅰ） 1-3 min
（4）95%乙醇（Ⅱ） 1-3 min
（5）80%乙醇 1 min
（6）蒸馏水 1 min
（7）苏木精液染色 5-15 min
(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s
(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s
(10) 稍水洗 10-30 s
(11)促蓝液返蓝 10-30 s
(12) 流水冲洗 10-15 min
（13）蒸馏水过洗 1-2 s
(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min
(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s
(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s
(17) 95%乙醇（Ⅰ） 3-5min
(18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 min
(19) 无水乙醇 5-10 min
(20) 无水乙醇 5-10 min
(21) 二甲苯（Ⅰ） 3-5 min
(22) 二甲苯（Ⅱ） 2-5 min
(23) 二甲苯（Ⅲ） 3-5 min
(24) 中性树胶封固
结果：细胞浆红色，细胞核蓝紫色。
转：常规HE染色步骤
（1）二甲苯（Ⅰ）
(2) 二甲苯（Ⅱ）
(3) 95%乙醇（Ⅰ）
（4）95%乙醇（Ⅱ）
（5）80%乙醇
（6）蒸馏水
（7）苏木精液染色 5-10 min 5-10 min 1-3 min 1-3 min 1 min 1 min 5-15 min
(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s
(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s
(12) 流水冲洗 20-30min
（13）蒸馏水过洗 1-2 s
(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min
(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s
(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s
(17) 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s
(18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 s
(19) 无水乙醇 5-10 min
(20) 石炭酸二甲苯 无水乙醇 5-10 min
(21) 二甲苯（Ⅰ） 2 min
(22) 二甲苯（Ⅱ） 2 min
(23) 二甲苯（Ⅲ） 2 min
(24) 中性树胶封固
注：①第（10）、（11）步可省去，（12）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（20）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。
2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。（各两次，然后把水吸干）
3．苏木素染色5min，自来水冲洗。（吸干水）
4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。
5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。（吸干水）
6．置伊红液2min。
7．常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min（省略）→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂封固。
HE染色步骤
一、HE染液的配制：
1、 Harris苏木素： 称取 苏木素精 1g
一氧化汞 0.5g
硫酸铝钾 20g
量取 无水乙醇 10ml
蒸馏水 200ml
苏木素溶于无水乙醇，钾明矾溶于蒸馏水，二者混合后煮沸，离火，加入氧化汞，用玻棒搅拌，试剂变为深紫色，立即移入冷水快速冷却，静置一夜，过滤，棕色小磨口试剂瓶密封保存。使用前加入5%冰乙酸4ml（或冰乙酸3滴）。
2、0.5%伊红(水溶性)： 称取 伊红 0.5g
量取 95%乙醇 25ml
蒸馏水 75ml
先取少量蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红碾碎并搅溶，再加入全部蒸馏水，完全溶解后，再加入乙醇，最后加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存。
3、1%盐酸水溶液：
盐酸 3ml
蒸馏水 297ml
混匀，白色试剂瓶保存。
4、中性树胶封片剂：
往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干，加入二甲苯适量
用吸管调匀，有一定粘稠度即可。
试剂 二甲苯 1瓶 Harris苏木素染液
无水乙醇 2瓶 1%盐酸水溶液
95%乙醇 2瓶 0.5%伊红(水溶性)染液
中性树胶封片剂
二、染色步骤
1、 电吹风吹片或烤片，至溶蜡；
2、 入二甲苯（I）中脱蜡5分钟，用吸水纸吸干液体；
3、 入二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透明），用吸水纸吸干液体；
4、 入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；
5、 入100%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；
6、 入95%乙醇3分钟；
7、 入流水2分钟，用吸水纸吸干水分；
8、 Harris苏木素 染色 4~8分钟；
9、 自来水稍洗；
10、1%盐酸水溶液分化5~10秒（切片由蓝变红）；
11、自来水洗返蓝15~30分钟；
12、0.5%伊红(水溶性)染色30秒~1分
13、95%乙醇（I）脱水5分钟，用吸水纸吸干液体；
14、95%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；
15、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；
16、入100%乙醇（II）2分钟，用吸水纸吸干液体；
17、入二甲苯（I）中透明2--3分钟，用吸水纸吸干液体；
18、入二甲苯（II）中透明5分钟；
19、中性树胶封片。
20、镜下观察结果：细胞核深蓝色，胞浆及纤维组织呈深浅不等的红色。
三、注意事项
1、苏木素染色时间应根据染液的新鲜或陈旧、及着色力决定。
2、盐酸分化要恰当，分化不足，会核、浆共染，分化过度会造成核染色过浅。
3、水洗蓝化时间应充分，以防褪色。
4、封片后，玻片应及时贴上标签并写上编号。
常规HE染色步骤
（1）二甲苯（Ⅰ） 5-10 min
(2) 二甲苯（Ⅱ） 5-10 min
(3) 95%乙醇（Ⅰ） 1-3 min
（4）95%乙醇（Ⅱ） 1-3 min
（5）80%乙醇 1 min
（6）蒸馏水 1 min
（7）苏木精液染色 5-15 min
(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s
(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s
(10) 稍水洗 10-30 s
(11)促蓝液返蓝 10-30 s
(12) 流水冲洗 10-15 min
（13）蒸馏水过洗 1-2 s
(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min
(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s
(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s
(17) 95%乙醇（Ⅰ） 3-5min
(18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 min
(19) 无水乙醇 5-10 min
(20) 无水乙醇 5-10 min
(21) 二甲苯（Ⅰ） 3-5 min
(22) 二甲苯（Ⅱ） 2-5 min
(23) 二甲苯（Ⅲ） 3-5 min
(24) 中性树胶封固
结果：细胞浆红色，细胞核蓝紫色。
转：常规HE染色步骤
（1）二甲苯（Ⅰ）
(2) 二甲苯（Ⅱ）
(3) 95%乙醇（Ⅰ）
（4）95%乙醇（Ⅱ）
（5）80%乙醇
（6）蒸馏水
（7）苏木精液染色 5-10 min 5-10 min 1-3 min 1-3 min 1 min 1 min 5-15 min
(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s
(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s
(12) 流水冲洗 20-30min
（13）蒸馏水过洗 1-2 s
(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min
(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s
(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s
(17) 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s
(18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 s
(19) 无水乙醇 5-10 min
(20) 石炭酸二甲苯 无水乙醇 5-10 min
(21) 二甲苯（Ⅰ） 2 min
(22) 二甲苯（Ⅱ） 2 min
(23) 二甲苯（Ⅲ） 2 min
(24) 中性树胶封固
注：①第（10）、（11）步可省去，（12）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（20）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。
2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。（各两次，然后把水吸干）
3．苏木素染色5min，自来水冲洗。（吸干水）
4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。
5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。（吸干水）
6．置伊红液2min。
7．常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min（省略）→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂封固。
HE染色步骤
一、HE染液的配制：
1、 Harris苏木素： 称取 苏木素精 1g
一氧化汞 0.5g
硫酸铝钾 20g
量取 无水乙醇 10ml
蒸馏水 200ml
苏木素溶于无水乙醇，钾明矾溶于蒸馏水，二者混合后煮沸，离火，加入氧化汞，用玻棒搅拌，试剂变为深紫色，立即移入冷水快速冷却，静置一夜，过滤，棕色小磨口试剂瓶密封保存。使用前加入5%冰乙酸4ml（或冰乙酸3滴）。
2、0.5%伊红(水溶性)： 称取 伊红 0.5g
量取 95%乙醇 25ml
蒸馏水 75ml
先取少量蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红碾碎并搅溶，再加入全部蒸馏水，完全溶解后，再加入乙醇，最后加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存。
3、1%盐酸水溶液：
盐酸 3ml
蒸馏水 297ml
混匀，白色试剂瓶保存。
4、中性树胶封片剂：
往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干，加入二甲苯适量
用吸管调匀，有一定粘稠度即可。
试剂 二甲苯 1瓶 Harris苏木素染液
无水乙醇 2瓶 1%盐酸水溶液
95%乙醇 2瓶 0.5%伊红(水溶性)染液
中性树胶封片剂
二、染色步骤
1、 电吹风吹片或烤片，至溶蜡；
2、 入二甲苯（I）中脱蜡5分钟，用吸水纸吸干液体；
3、 入二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透明），用吸水纸吸干液体；
4、 入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；
5、 入100%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；
6、 入95%乙醇3分钟；
7、 入流水2分钟，用吸水纸吸干水分；
8、 Harris苏木素 染色 4~8分钟；
9、 自来水稍洗；
10、1%盐酸水溶液分化5~10秒（切片由蓝变红）；
11、自来水洗返蓝15~30分钟；
12、0.5%伊红(水溶性)染色30秒~1分
13、95%乙醇（I）脱水5分钟，用吸水纸吸干液体；
14、95%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；
15、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；
16、入100%乙醇（II）2分钟，用吸水纸吸干液体；
17、入二甲苯（I）中透明2--3分钟，用吸水纸吸干液体；
18、入二甲苯（II）中透明5分钟；
19、中性树胶封片。
20、镜下观察结果：细胞核深蓝色，胞浆及纤维组织呈深浅不等的红色。
三、注意事项
1、苏木素染色时间应根据染液的新鲜或陈旧、及着色力决定。
2、盐酸分化要恰当，分化不足，会核、浆共染，分化过度会造成核染色过浅。
3、水洗蓝化时间应充分，以防褪色。
4、封片后，玻片应及时贴上标签并写上编号。