细菌菌落总数的检测
一、 实验目的
学习并掌握标准平皿活菌计数（SPC）的基本原理和方法
明确菌落总数测定对被检样品进行卫生学评价的意义
二、 实验原理
菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培基基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计数法
将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来。
反映食品被细菌污染的程度
由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验条件下不生长，故计数结果要比实际值低。
三、 实验器材
一）培养基
平板计数琼脂培养基
（二）实验材料
豆浆
（三）其他
1、无菌培养皿7套
2、无菌吸管（ 1支10mL， 5支1mL）
3、无菌生理盐水（225mL三角瓶1个，9mL试管5支）
（四）仪器
超净工作台
四、 实验步骤
1、样品处理：
以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面后，用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-3
、选择10-1、10-2、10-3三个稀释度的样品均液，用无菌移液管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个平皿；同时，吸取1mL无菌生理盐水到2个平皿中作为空白对照
4、熔化培养基
5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中，并转动平皿使其混合均匀
6、37℃倒置培养2天
7、按照计数原则计数
五、菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的
平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用
两个平板的平均数。
其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
六、 菌落总数的报告
菌落数小于100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
菌落数大于或等于100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：
NC
(n10.1n2)d
N——样品中菌落数；
ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）。
七、实验结果与分析
样品菌落总数N= cfu/mL
八，实验参考标准
中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品微生物学检验和菌落总数测定GB 4789.2—2010
细菌菌落总数的检测
一、 实验目的
学习并掌握标准平皿活菌计数（SPC）的基本原理和方法
明确菌落总数测定对被检样品进行卫生学评价的意义
二、 实验原理
菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培基基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计数法
将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来。
反映食品被细菌污染的程度
由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验条件下不生长，故计数结果要比实际值低。
三、 实验器材
一）培养基
平板计数琼脂培养基
（二）实验材料
豆浆
（三）其他
1、无菌培养皿7套
2、无菌吸管（ 1支10mL， 5支1mL）
3、无菌生理盐水（225mL三角瓶1个，9mL试管5支）
（四）仪器
超净工作台
四、 实验步骤
1、样品处理：
以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面后，用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-3
、选择10-1、10-2、10-3三个稀释度的样品均液，用无菌移液管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个平皿；同时，吸取1mL无菌生理盐水到2个平皿中作为空白对照
4、熔化培养基
5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中，并转动平皿使其混合均匀
6、37℃倒置培养2天
7、按照计数原则计数
五、菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的
平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用
两个平板的平均数。
其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
六、 菌落总数的报告
菌落数小于100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
菌落数大于或等于100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：
NC
(n10.1n2)d
N——样品中菌落数；
ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）。
七、实验结果与分析
样品菌落总数N= cfu/mL
八，实验参考标准
中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品微生物学检验和菌落总数测定GB 4789.2—2010