中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第4期277
4种常用蛋白浓度测定方法的比较
李海玲1,彭书明1,李 凛1,张雪梅2
(1.成都理工大学材料与化学化工学院,四川成都610059;2.成都生物制品研究所,四川成都610040)
摘 要:目的比较4种常用蛋白浓度测定方法的准确性及各自的影响因素。方法采用Lowry法、BCA法、磺基水杨酸沉淀法、Bradford法等4种常用蛋白浓度测定方法对几种样品进行对比试验。结果研究了蛋白质样品中的添加物对不同方法的影响,采用BCA法测定PEG2IL26的蛋白浓度以及采用Bradford法测定变性液中的蛋白浓度不仅准确而且重复性好。结论确定PEG2IL26的最佳蛋白浓度测定方法为BCA法,而包涵体变性液中的蛋白浓度只能用Bradford法测定。
关键词:蛋白质;含量测定;Lowry法;BCA法;磺基水杨酸沉淀法;Bradford法 中图分类号:TQ460.7 文献标识码:A 文章编号:100521678(2008)0420277202
Studiesonfourconventionalmethodsforproteindetermination
LIHai2ling1,PENGShu2ming1,LILin1,ZHANGXue2mei2
(1.SchoolofMaterialandChemistryandChemicalEngineering,,Chengdu
610059,China;2.ChengduInstituteof,,)
Abstract:PurposeTocomparewhichareLowry,BCA,Bradford
andSulfosalicylicanalyingthevaluesofIL26,PEG2IL26,Endotoxin,BSAandrespectively.ResultsAllsortsofadditivesofproteinsampleshavedifferentItwasfoundthatBCA′methodtomeasurePEG2IL26andBradford′methodtobodieswerenotonlyaccurate,butalsomorerepeatable.ConclusionBCA′methodwasmoreaccurateandmoreprecisefordeterminationofPEG2IL26contentthatothers.Bradford′methodwasonlyusedtodeterminedtheconcentrationofinclusionbodies.
Keywords:protein;determination;Lowry;BCA;Sulfosalicylicprecipitation;Bradford
蛋白浓度测定方法有很多种,各种蛋白质含量测定的研究也屡见报道[123]。每种方法都有其优点和局限性,在蛋白质样品中往往会含有一些化学试剂,有些化学试剂会干扰蛋白浓度测定。因此,寻找合适的实验方法以避免干扰对蛋白浓度测定的准确性至关重要。基于Lowry法在测定PEG2IL26样品时出现大量黄绿色沉淀,尿素对BCA法测定蛋白浓度测定有严重干扰,影响结果准确性,我们试验了另外两种方法,并进一步对方法进行了比较分析。1 材 料
Folin酚试剂、考马斯亮蓝G2250及4,42二羧酸22,22二喹啉(BCA)均为Sigma公司产品;总蛋白
(BSA)标准购自上海生物制品研究所;变性液为大
肠杆菌破碎后加入β2巯基乙醇处理的样品;其它试剂均为国产分析纯。2 方 法
Lowry法操作参考文献[4]。
磺基水杨酸沉淀法操作参考文献[5]。
Bradford法操作参考文献[6],为方便试验稍作改变,即取0～500μg/mL的样品100μL加Bradford试剂2mL,室温放置5min在595nm波长处测定吸光度。3 结 果3.1 测定原理比较
Lowry法的测定原理为蛋白质与碱性硫酸铜作用形成铜-肽键络合物,后者与色氨酸和酪氨酸共同作用使酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸还原生成蓝色化合物;BCA法的测定原理为蛋白质价铜离子还原
收稿日期:2007211208
作者简介:李海玲(19722),女,黑龙江齐齐哈尔人,硕士研究生,
E2mail:[email protected]。
278中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第4期
成亚铜离子,后者在碱性溶液中与BCA结合生成紫红色络合物。Lowry法与BCA法同属于化学法。磺基水杨酸沉淀法属于物理法,Bradford法属于染料结合法,即考马斯亮蓝G2250在酸性溶液中呈红棕色,与蛋白质结合后转变为蓝色,颜色深浅与蛋白浓度呈正比关系。3.2 用4种方法对含有5种不同类型蛋白质的3组样品的测定结果比较
结果见表1。标准品BSA为同一样品,3组样品为不同批次的蛋白质。
表1 4种方法对不同蛋白含量测定(n=3)
Tab1 Thevaluesofdifferentproteinsbyfourmethods(n=3)
样品
IL26
第1组含量/(mg/mL)第2组含量/(mg/mL)第3组含量/(mg/mL)
Lowry法BCA法沉淀法Bradford法Lowry法BCA法沉淀法Bradford法Lowry法BCA法沉淀法Bradford法
1.8470.332
1.8200.327
1.2380.150
1.8350.3400.05715.001.3320.620
1.3400.626
0.7700.364
1.3380.6280.11014.350.2240.591
0.2200.597
0.0600.580
0.2300.3220.0880.995破伤风类毒素
PEG2IL26变性样品()
-0.050 -24.5025.00 - -0.1200.036
27.7026.90 - -0.084 -18.84518.795 -3.3 BCA法测定PEG2IL26蛋白浓度及Bradford法
测定变性液中蛋白浓度的结果分析
对Lowry法测得的IL26样品浓度为250μg/mL,加入PEG修饰后再用BCA法测得的该样品的浓度为246μg/mL,说明PEG对BCA法没有影响。对BCA法测定的包涵体变性液中蛋白浓度为25mL的样品用Bradford法测得只有1.59L,BCA法,而对Brad,Bradford2是连续10次对同一PEG2IL26样品用BCA法测定和同一包涵体变性液样品用Bradford法测定的结果。
表2 BCA法测定PEG2IL26和Bradford法测定包涵体变性液中蛋白浓度的重复性结果
Tab2 ThevaluesofPEG2IL26byBCAandthevaluesofinclusionbodiesbyBradford
为10～100μg/mL;BCA法标准蛋白浓度设置在20
～1000μg/mL时r值仍大于0.998;磺基水杨酸沉
g/mL时,r值才淀法标准蛋白浓度设置在50μ
大于0.99;Bradford法
为,而非体积之比,因,可以通过减少样品体积来提高检测范围的上限。4.2 影响因素
影响Lowry法测定蛋白的主要因素有某些氨基酸、NH4+、兼性离子缓冲液、非离子表面活性剂、蔗糖、含硫化合物;影响BCA法测蛋白的主要因素有蔗糖、NH4+、尿素、EDTA[7],磺基水杨酸沉淀法虽然克服了以上各种因素,但是不同的蛋白所形成的沉淀性质差别很大。如本试验所显示,用牛血清白蛋白作标准测定破伤风类毒素和IL26蛋白含量误差可超过100%,且蛋白浓度越小误差越大,因此用此法测定蛋白含量时应选相同的或性质相近的蛋白做标准。影响Bradford法的主要因素有甘油、乙酸、去污剂和一些碱性缓冲系统。
由于用Lowry法测定PEG2IL26时会产生黄色沉淀,并且迅速沉淀到管底,无法用分光光度计测得均匀的吸光度。所以,测定PEG2IL26等PEG化的蛋白浓度时不能采用Lowry法,但可以采用BCA法。包涵体的变性液和复性液中经常会含有尿素和β2巯基乙醇,这些物质会干扰BCA法的测定,所以BCA法不适于含有尿素和β2巯基乙醇的变性液中蛋白含量的测定。根据表1可知,磺基水杨酸沉淀法对每种样品检测偏差都较大,因此,沉淀法必须用与样品同质的已知蛋白含量的对照品测定,也不适于检测
(下转第282页)
μ试验次数PEG2IL26/(g/mL)
[1**********]x±sRSD/%
μ包涵体变性液/(g/mL)
1.501.751.551.551.601.451.621.581.611.541.573±0.066
4.2
83.485.280.383.378.683.280.979.882.182.281.92±1.994
2.4
4 讨 论
4.1 蛋白浓度的测定范围
按照文献[427]所述方法操作,各种方法测定蛋
白浓度的范围如下:Lowry法标准蛋白浓度设置范围
282中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第4期
[13]ChoiO,KimJ,KimJG,etal.Pyrroloquinolinequinoneisaplant
growthpromotionfactorproducedbyPseudomonasfluorescensB16[J].PlantPhysiol,2007,146(2):6572668.
[14]KasaharaT,KatoT.Nutritionalbiochemistry:anewredoxcofactorvita2
minformammals[J].Nature,2003,422(6934):832.
[15]BauerlyKA,StormsDH,HarrisCB,etal.Pyrroloquinolinequinone
nutritionalstatusalterslysinemetabolismandmodulatesmitochondrialDNAcontentinthemouseandrat[J].BiochimBiophysActa,2006,1760(11):174121748.
[16]FranceneS,TracyES,PetterA,etal.Pyrroloquinolinequinoneim2
provesgrowthandreproductiveperformanceinmicefedchemicallyde2fineddiets[J].ExpBiolMed,2003,228(2):1602166.
[17]TaoR,KarlinerJS,SimonisU,etal.Pyrroloquinolinequinonepre2
servesmitochondrialfunctionandpreventsoxidativeinjuryinadultratcardiacmyocytes[J].BiochemBiophysResCommun,2007,363(2):2572262.
[18]HariS,Misraa,NiveditaP,etal.Pyrroloquinoline2quinone:areactive
oxygenspeciesscavengerinbacteria[J].FEBSLett,2004,578(1～2):26230.
[19]熊顺华,,李清,等.biosyntheticpathway[J].JBacterial,1995,177(17):508825095.[3] KrishnarajPU,GoldsteinAH.CloningofaSerraLiamarcescensDNA
fragmentthatinducesquinoproteinglucosedehydrogenase2mediatedgluconicacidproductioninEscherichiacoliinthepresenceofstation2aryphaseSerraLiamarcescens[J].FEMSMicrobiolLett,2001,205(2):2052215.
[4] MagnussonOT,ToyamaH,SaekiM,etal.Thestructureofabiosyn2
theticintermediateofpyrroloquinolinequinine(PQQ)andelucidationofthefinalstepofPQQbiosynthesis[J].JamChemSoc,2004,126(17):534225343.
[5] SchwarzenbacherR,Stenner2LiewenF,LiewenH,etal.Crystalstruc2
tureofPqqCfromKlebsiellapneumoniaeat2.14!resolution[J].Pro2teins,2004,56(2):4012403.[6]
ToyamaH,NishibayashiE,SaekiM,etal.FactorsrequiredforthecatalyticreactionofPqqC/Dwhichproducespyrroloquinolinequinine[J].BiochemBiophysResCommun,2007,354(1):2902295.[7] SpringerAL,RamamoorthiR,LidstromMaryeE.Characterizationand
nucleotidesequenceofpqqEandpqqFinMethylobacteriumextorquensAM1[J].JBacteriol,1996,178(7):215422157.
[8] KimCH,HanSH,KimKY,etal.Cloningandexpressionofpyrrolo2
quinolinequinone(pqq)genesfromaphosphate2solubilizingbacterium
Enterobacterintermedium[J].CurrMicrobiol,2003,47(6):4572461.
[J,25(4):4332435.
[20],,.D2半乳糖致衰老大
[9] UnkeferCJ,HouckDR,BrittBM,etal.Biogenesisoflinequinonefrom13C2labeledtyrosine[J].Methodsol,,258:2272235.
[10]MagnussonOT,ToyamaHtruc2
tureand,theintheproductionofpyrroloquinolinePNAS,2004,101(21):791327918.[11]VictorL,Davidson.Electrontransferinquinoproteins[J].ArchBiochem
Biophys,2004,428(1):32240.
[12]卫秀英,李秀菊,朱坤华.吡咯喹啉醌对苹果花粉萌发和花粉管
[J].中国行为医学科学,2006,15(3):
]ZhangY,FeustelPJ,KimelbergHK.Neuroprotectionbypyrroloquino2
linequinone(PQQ)inreversiblemiddlecerebralarteryocclusionintheadultrat[J].BrainRes,2006,1094(1):2002206.
[22]刘世清,李皓桓,彭昊.吡咯喹啉醌充填导管诱导外周神经再生
的实验研究[J].中华显微外科杂志,2005,28(2):1452147.
[23]闵向荣,赵永芳,汤红斌.吡咯喹啉醌对大鼠损伤坐骨神经的修
复作用[J].中国生化药物杂志,2002,23(2):55257.
生长的影响[J].植物生理学通讯,2000,36(4):3202321.
(上接第278页)
PEG2IL26和变性液蛋白测定。通过表2的结果显
[2] 王爱军,王凤山,王友联,等.低浓度蛋白质含量测定方法的研
示,BCA法检测PEG2IL26的干扰少重现性高(RSD
5%),而Bradford法可以不受变性液中的还原性物质干扰,对包涵体变性液中的蛋白浓度的检测比较准确,且重现性好(RSD
[1] 闫萍,牛勃,张悦红,等.蚯蚓提取物中蛋白质含量测定方法的
究[J].中国生化药物杂志,2003,24(2):78280.
[3] 杨欣,刘波,彭如惠,等.重组人粒细胞集落刺激因子成品蛋白
质含量测定方法的研究[J].中国生化药物杂志,2004,25(5):
3082310.
[4] 中国生物制品标准化委员会.中国生物制品规程[M].北京:化
学工业出版社,2000:672.
[5] 张耀廷,郭岩,辛暨华,等.应用磺基水杨酸法测定蛋白含量
[J].中国生物制品杂志,2001,14(4):2472248.
[6] 朱厚础.蛋白质纯化与鉴定实验指南[M].北京:科学出版社,
1999:1582159.
[7] 吴冠芸.生物化学与分子生物学实验常用数据手册[M].北京:
研究[J].中国生化药物杂志,2007,28(1):27229.
科学出版社,1999:166.
中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第4期277
4种常用蛋白浓度测定方法的比较
李海玲1,彭书明1,李 凛1,张雪梅2
(1.成都理工大学材料与化学化工学院,四川成都610059;2.成都生物制品研究所,四川成都610040)
摘 要:目的比较4种常用蛋白浓度测定方法的准确性及各自的影响因素。方法采用Lowry法、BCA法、磺基水杨酸沉淀法、Bradford法等4种常用蛋白浓度测定方法对几种样品进行对比试验。结果研究了蛋白质样品中的添加物对不同方法的影响,采用BCA法测定PEG2IL26的蛋白浓度以及采用Bradford法测定变性液中的蛋白浓度不仅准确而且重复性好。结论确定PEG2IL26的最佳蛋白浓度测定方法为BCA法,而包涵体变性液中的蛋白浓度只能用Bradford法测定。
关键词:蛋白质;含量测定;Lowry法;BCA法;磺基水杨酸沉淀法;Bradford法 中图分类号:TQ460.7 文献标识码:A 文章编号:100521678(2008)0420277202
Studiesonfourconventionalmethodsforproteindetermination
LIHai2ling1,PENGShu2ming1,LILin1,ZHANGXue2mei2
(1.SchoolofMaterialandChemistryandChemicalEngineering,,Chengdu
610059,China;2.ChengduInstituteof,,)
Abstract:PurposeTocomparewhichareLowry,BCA,Bradford
andSulfosalicylicanalyingthevaluesofIL26,PEG2IL26,Endotoxin,BSAandrespectively.ResultsAllsortsofadditivesofproteinsampleshavedifferentItwasfoundthatBCA′methodtomeasurePEG2IL26andBradford′methodtobodieswerenotonlyaccurate,butalsomorerepeatable.ConclusionBCA′methodwasmoreaccurateandmoreprecisefordeterminationofPEG2IL26contentthatothers.Bradford′methodwasonlyusedtodeterminedtheconcentrationofinclusionbodies.
Keywords:protein;determination;Lowry;BCA;Sulfosalicylicprecipitation;Bradford
蛋白浓度测定方法有很多种,各种蛋白质含量测定的研究也屡见报道[123]。每种方法都有其优点和局限性,在蛋白质样品中往往会含有一些化学试剂,有些化学试剂会干扰蛋白浓度测定。因此,寻找合适的实验方法以避免干扰对蛋白浓度测定的准确性至关重要。基于Lowry法在测定PEG2IL26样品时出现大量黄绿色沉淀,尿素对BCA法测定蛋白浓度测定有严重干扰,影响结果准确性,我们试验了另外两种方法,并进一步对方法进行了比较分析。1 材 料
Folin酚试剂、考马斯亮蓝G2250及4,42二羧酸22,22二喹啉(BCA)均为Sigma公司产品;总蛋白
(BSA)标准购自上海生物制品研究所;变性液为大
肠杆菌破碎后加入β2巯基乙醇处理的样品;其它试剂均为国产分析纯。2 方 法
Lowry法操作参考文献[4]。
磺基水杨酸沉淀法操作参考文献[5]。
Bradford法操作参考文献[6],为方便试验稍作改变,即取0～500μg/mL的样品100μL加Bradford试剂2mL,室温放置5min在595nm波长处测定吸光度。3 结 果3.1 测定原理比较
Lowry法的测定原理为蛋白质与碱性硫酸铜作用形成铜-肽键络合物,后者与色氨酸和酪氨酸共同作用使酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸还原生成蓝色化合物;BCA法的测定原理为蛋白质价铜离子还原
收稿日期:2007211208
作者简介:李海玲(19722),女,黑龙江齐齐哈尔人,硕士研究生,
E2mail:[email protected]。
278中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第4期
成亚铜离子,后者在碱性溶液中与BCA结合生成紫红色络合物。Lowry法与BCA法同属于化学法。磺基水杨酸沉淀法属于物理法,Bradford法属于染料结合法,即考马斯亮蓝G2250在酸性溶液中呈红棕色,与蛋白质结合后转变为蓝色,颜色深浅与蛋白浓度呈正比关系。3.2 用4种方法对含有5种不同类型蛋白质的3组样品的测定结果比较
结果见表1。标准品BSA为同一样品,3组样品为不同批次的蛋白质。
表1 4种方法对不同蛋白含量测定(n=3)
Tab1 Thevaluesofdifferentproteinsbyfourmethods(n=3)
样品
IL26
第1组含量/(mg/mL)第2组含量/(mg/mL)第3组含量/(mg/mL)
Lowry法BCA法沉淀法Bradford法Lowry法BCA法沉淀法Bradford法Lowry法BCA法沉淀法Bradford法
1.8470.332
1.8200.327
1.2380.150
1.8350.3400.05715.001.3320.620
1.3400.626
0.7700.364
1.3380.6280.11014.350.2240.591
0.2200.597
0.0600.580
0.2300.3220.0880.995破伤风类毒素
PEG2IL26变性样品()
-0.050 -24.5025.00 - -0.1200.036
27.7026.90 - -0.084 -18.84518.795 -3.3 BCA法测定PEG2IL26蛋白浓度及Bradford法
测定变性液中蛋白浓度的结果分析
对Lowry法测得的IL26样品浓度为250μg/mL,加入PEG修饰后再用BCA法测得的该样品的浓度为246μg/mL,说明PEG对BCA法没有影响。对BCA法测定的包涵体变性液中蛋白浓度为25mL的样品用Bradford法测得只有1.59L,BCA法,而对Brad,Bradford2是连续10次对同一PEG2IL26样品用BCA法测定和同一包涵体变性液样品用Bradford法测定的结果。
表2 BCA法测定PEG2IL26和Bradford法测定包涵体变性液中蛋白浓度的重复性结果
Tab2 ThevaluesofPEG2IL26byBCAandthevaluesofinclusionbodiesbyBradford
为10～100μg/mL;BCA法标准蛋白浓度设置在20
～1000μg/mL时r值仍大于0.998;磺基水杨酸沉
g/mL时,r值才淀法标准蛋白浓度设置在50μ
大于0.99;Bradford法
为,而非体积之比,因,可以通过减少样品体积来提高检测范围的上限。4.2 影响因素
影响Lowry法测定蛋白的主要因素有某些氨基酸、NH4+、兼性离子缓冲液、非离子表面活性剂、蔗糖、含硫化合物;影响BCA法测蛋白的主要因素有蔗糖、NH4+、尿素、EDTA[7],磺基水杨酸沉淀法虽然克服了以上各种因素,但是不同的蛋白所形成的沉淀性质差别很大。如本试验所显示,用牛血清白蛋白作标准测定破伤风类毒素和IL26蛋白含量误差可超过100%,且蛋白浓度越小误差越大,因此用此法测定蛋白含量时应选相同的或性质相近的蛋白做标准。影响Bradford法的主要因素有甘油、乙酸、去污剂和一些碱性缓冲系统。
由于用Lowry法测定PEG2IL26时会产生黄色沉淀,并且迅速沉淀到管底,无法用分光光度计测得均匀的吸光度。所以,测定PEG2IL26等PEG化的蛋白浓度时不能采用Lowry法,但可以采用BCA法。包涵体的变性液和复性液中经常会含有尿素和β2巯基乙醇,这些物质会干扰BCA法的测定,所以BCA法不适于含有尿素和β2巯基乙醇的变性液中蛋白含量的测定。根据表1可知,磺基水杨酸沉淀法对每种样品检测偏差都较大,因此,沉淀法必须用与样品同质的已知蛋白含量的对照品测定,也不适于检测
(下转第282页)
μ试验次数PEG2IL26/(g/mL)
[1**********]x±sRSD/%
μ包涵体变性液/(g/mL)
1.501.751.551.551.601.451.621.581.611.541.573±0.066
4.2
83.485.280.383.378.683.280.979.882.182.281.92±1.994
2.4
4 讨 论
4.1 蛋白浓度的测定范围
按照文献[427]所述方法操作,各种方法测定蛋
白浓度的范围如下:Lowry法标准蛋白浓度设置范围
282中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第4期
[13]ChoiO,KimJ,KimJG,etal.Pyrroloquinolinequinoneisaplant
growthpromotionfactorproducedbyPseudomonasfluorescensB16[J].PlantPhysiol,2007,146(2):6572668.
[14]KasaharaT,KatoT.Nutritionalbiochemistry:anewredoxcofactorvita2
minformammals[J].Nature,2003,422(6934):832.
[15]BauerlyKA,StormsDH,HarrisCB,etal.Pyrroloquinolinequinone
nutritionalstatusalterslysinemetabolismandmodulatesmitochondrialDNAcontentinthemouseandrat[J].BiochimBiophysActa,2006,1760(11):174121748.
[16]FranceneS,TracyES,PetterA,etal.Pyrroloquinolinequinoneim2
provesgrowthandreproductiveperformanceinmicefedchemicallyde2fineddiets[J].ExpBiolMed,2003,228(2):1602166.
[17]TaoR,KarlinerJS,SimonisU,etal.Pyrroloquinolinequinonepre2
servesmitochondrialfunctionandpreventsoxidativeinjuryinadultratcardiacmyocytes[J].BiochemBiophysResCommun,2007,363(2):2572262.
[18]HariS,Misraa,NiveditaP,etal.Pyrroloquinoline2quinone:areactive
oxygenspeciesscavengerinbacteria[J].FEBSLett,2004,578(1～2):26230.
[19]熊顺华,,李清,等.biosyntheticpathway[J].JBacterial,1995,177(17):508825095.[3] KrishnarajPU,GoldsteinAH.CloningofaSerraLiamarcescensDNA
fragmentthatinducesquinoproteinglucosedehydrogenase2mediatedgluconicacidproductioninEscherichiacoliinthepresenceofstation2aryphaseSerraLiamarcescens[J].FEMSMicrobiolLett,2001,205(2):2052215.
[4] MagnussonOT,ToyamaH,SaekiM,etal.Thestructureofabiosyn2
theticintermediateofpyrroloquinolinequinine(PQQ)andelucidationofthefinalstepofPQQbiosynthesis[J].JamChemSoc,2004,126(17):534225343.
[5] SchwarzenbacherR,Stenner2LiewenF,LiewenH,etal.Crystalstruc2
tureofPqqCfromKlebsiellapneumoniaeat2.14!resolution[J].Pro2teins,2004,56(2):4012403.[6]
ToyamaH,NishibayashiE,SaekiM,etal.FactorsrequiredforthecatalyticreactionofPqqC/Dwhichproducespyrroloquinolinequinine[J].BiochemBiophysResCommun,2007,354(1):2902295.[7] SpringerAL,RamamoorthiR,LidstromMaryeE.Characterizationand
nucleotidesequenceofpqqEandpqqFinMethylobacteriumextorquensAM1[J].JBacteriol,1996,178(7):215422157.
[8] KimCH,HanSH,KimKY,etal.Cloningandexpressionofpyrrolo2
quinolinequinone(pqq)genesfromaphosphate2solubilizingbacterium
Enterobacterintermedium[J].CurrMicrobiol,2003,47(6):4572461.
[J,25(4):4332435.
[20],,.D2半乳糖致衰老大
[9] UnkeferCJ,HouckDR,BrittBM,etal.Biogenesisoflinequinonefrom13C2labeledtyrosine[J].Methodsol,,258:2272235.
[10]MagnussonOT,ToyamaHtruc2
tureand,theintheproductionofpyrroloquinolinePNAS,2004,101(21):791327918.[11]VictorL,Davidson.Electrontransferinquinoproteins[J].ArchBiochem
Biophys,2004,428(1):32240.
[12]卫秀英,李秀菊,朱坤华.吡咯喹啉醌对苹果花粉萌发和花粉管
[J].中国行为医学科学,2006,15(3):
]ZhangY,FeustelPJ,KimelbergHK.Neuroprotectionbypyrroloquino2
linequinone(PQQ)inreversiblemiddlecerebralarteryocclusionintheadultrat[J].BrainRes,2006,1094(1):2002206.
[22]刘世清,李皓桓,彭昊.吡咯喹啉醌充填导管诱导外周神经再生
的实验研究[J].中华显微外科杂志,2005,28(2):1452147.
[23]闵向荣,赵永芳,汤红斌.吡咯喹啉醌对大鼠损伤坐骨神经的修
复作用[J].中国生化药物杂志,2002,23(2):55257.
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PEG2IL26和变性液蛋白测定。通过表2的结果显
[2] 王爱军,王凤山,王友联,等.低浓度蛋白质含量测定方法的研
示,BCA法检测PEG2IL26的干扰少重现性高(RSD
5%),而Bradford法可以不受变性液中的还原性物质干扰,对包涵体变性液中的蛋白浓度的检测比较准确,且重现性好(RSD
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