巨噬细胞炎症蛋白-1α在多发性骨髓瘤中的表达
作者：王晓桃 ， 罗绍凯， 莫汉有， 李 娟， 莫东华， 周润华 作者单位：1. 桂林医学院附院血液科， 广西 桂林 541004; 2. 中山大学附属第一医院血液科， 广东 广州 510080
【摘要】 【目的】 探讨巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α) 在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义。【方法】 夹心酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测实验组43例患者、15例对照组，以及随访37例治疗3疗程后骨髓血浆MIP-1α的水平。【结果】 ①65.1% 患者MIP-1α水平增高，其中实验组明显高于对照组(t=3.569，P=02处患者明显高于骨质破坏≤2处的患者
(t=5.56，P=0
【关键词】 多发性骨髓瘤; 巨噬细胞炎症蛋白-1α; 骨质破坏; 瘤负荷
[J SUN Yat-sen Univ(Med Sci), 2007, 28(2):152-154;157] 多发性骨髓瘤是浆细胞的恶性肿瘤，可引起骨质进行性破坏。骨质破坏主要是指骨质重吸收增加而骨质形成减少，多数学者认为其机制是瘤细胞同基质细胞相互黏附产生的多种破骨细胞激活因子如IL-1β、TNF-β、IL-6等起作用。然而Choi 等[1]发现在部分新诊断的伴骨质破坏的Ⅲ期患者瘤细胞培养上清液中IL-1β、TNF-β、IL-6的水平并不增高，且在临床上用抗IL-6、IL-1单克隆抗体治疗多发性骨髓瘤的疗效并不显著。这表明还存在其它因子在多发性骨髓瘤的发病机制中起重要作用。近来有学者发现MIP-1α在骨髓微环境里参与破骨细胞的征集、分化，对多发性骨髓瘤骨病的发生起重要作用[2]。我们旨在通过检测多发性骨髓瘤患者骨髓血浆中MIP-1α水平，进而探讨MIP-1α在多发性骨髓瘤中的临床意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象
实验组病例为2003年1月至2004年3月在中山大学附属第一医院血液科住院的据国内统一标准确诊的多发性骨髓瘤患者43例[3]，男 29例，女14例，中位年龄53(24～73) 岁，其中包括难治复发病例7例，浆细胞白血病1例。活动进展期15例，稳定期28例。免疫分型中IgG 型25例，IgA 型6例，IgD 型2例, IgE型1例, κ轻链型5例，λ轻链型4例。骨髓中各期浆细胞占0.07～0.84。β2-微
球蛋白(5 273.5±3 725.4) μg/L。多发性骨髓瘤骨病分级参考文献
[4]报道，骨质破坏以X 线为标准，其中1级6例(14%)，2级15例(35%)，3级22例(51%)。随访37例于化疗3疗程后复查相关指标，据国内统一标准判断疗效[3]。有效组30例(部分缓解11例，进步19例) ，无效组7例。15例对照组中男9例，女6例，中位年龄49(17～
56) 岁，其中正常健康人6名，特发性血小板减少性紫癜6例, 急性粒-单核细胞白血病3例。
实验抽取研究对象骨髓2 mL，肝素抗凝，常规离心取上清。
1.2 检测方法
用ELISA 定量检测方法，步骤严格按照MIP-1α ELISA 试剂盒(购自ENDOGEN 公司) 的说明书进行。
1.3 统计学分析
数据均用SPSS11.0统计软件包处理。参数检验的计量资料以均数(x±s)表示，两均数比较用t 检验; 变量之间的关系用线性相关、多重线性回归分析，性别的比较用χ2检验。
2 结 果
2.1 病人基线资料
实验组及对照组在年龄(t=1.546, P=0.053)及性别(?字
2=2.31,P=0.067)上的差别无统计学意义。
2.2 实验组和对照组MIP-1α水平
MIP-1α水平高于正常值上限+2s为显著增高，实验组MIP-1α水平(113.2±40.5)pg/mL，28例增高，占65.1%，对照组MIP-1α水平(43.3±11.2)pg/mL，6名健康正常人无1例增高，9例血液系统其它疾病中有3例(20%)增高，均为急性粒-单核细胞白血病患者。实验组明显高于对照组(t=3.569，P= 0
2.3 骨髓MIP-1α水平与骨病间的关系
实验组中，骨质破坏≤2处的患者17例，MIP-1α水平为
(67.5±55.9)pg/mL;骨质破坏>2处的患者26例，MIP-1α水平为
(216.3±121.6) pg/mL;差异有统计学意义(t =5.56, P =0
2.4 治疗前后MIP-1α水平
有效组化疗前MIP -1α水平(209.2±86.4) pg/mL，化疗3疗程后MIP -1α水平(134.4±54.6) pg/mL，除3例轻微升高外，其余27例均有不同程度的下降，下降幅度在(9.6-137.9) pg/mL，差异有
统计学意义(t =3.237，P=00.05)。
2.5 MIP-1α水平与实验室指标及临床特征的关系
骨髓血浆MIP-1α水平与患者性别、年龄、白细胞计数、红细胞计数、乳酸脱氢酶、β2-微球蛋白、白蛋白、血沉、血钙、碱性磷酸酶、骨损分、Durie-Salmon 分期及疗效分别做相关分析、多重线性回归分析。结果表明MIP-1α水平与红细胞计数、β2-微球蛋白、白蛋白、骨损分、Durie-Salmon 分期相关(P
3 讨 论
MIP-1α既是一种趋化因子，也是一种破骨细胞激活因子。我们发现约65% 多发性骨髓瘤患者骨髓MIP-1α水平增高，这与其他学者报道基本一致[1,5]。其中处于活动进展期患者的MIP-1α明显高于正常人、其它血液病及稳定期患者，增高的程度与疾病的活动度相
关。同时MIP-1α增高的程度与骨质破坏的程度呈正相关，3级患者明显高于1、2级患者，说明骨质破坏越严重骨髓MIP-1α水平越高，与其他报道一致[6-8]。其原因可能是骨质破坏越严重，局限区域里破骨细胞激活因子越多，破骨细胞激活因子可能通过旁分泌途径刺激瘤细胞增殖，从而促进多发性骨髓瘤细胞分泌的MIP-1α增多。 MIP-1α诱导骨质破坏的机制可能是与破骨细胞表达的CCR1、CCR5受体结合后作用于破骨细胞分化的最后一阶段，增强破骨细胞的活性，导致溶骨性的破坏[7,10]。
随访37例患者，有效治疗可使多发性骨髓瘤患者MIP-1α水平下降，其原因可能有：①有效化疗杀灭部分多发性骨髓瘤细胞，由多发性骨髓瘤细胞分泌的MIP-1α减少;②多发性骨髓瘤细胞减少，MIP-1α水平下降，阻断由MIP-1α促进多发性骨髓瘤进展的自分泌和旁分泌途径。动态监测骨髓MIP-1α可反映近期疗效。治疗前
MIP-1α水平与近期疗效不相关，说明治疗前MIP-1α水平不能反映近期疗效。
骨髓MIP-1α水平与红细胞计数呈负相关，这与Moller 等[9]学者报道相一致，其机制是因为骨髓CD34+红系祖细胞表达CCR1受体，MIP-1α与CCR1受体结合后抑制红系形成[9]。MIP-1α水平与白蛋白呈负相关， 白蛋白作为负性急性期蛋白，其血清浓度与骨髓瘤细胞生长因子白介素-6的活性、患者的体能状态呈负相关。而多
发性骨髓瘤骨病是影响病人体能状态的主要因素，进一步验证
MIP-1α与骨病相关。血β2-微球蛋白主要是由B 细胞系、单核细胞系等表达，在多发性骨髓瘤时β2-微球蛋白大量合成并进入血液循环，能较好地反映体内瘤负荷;DS 分期系统是最常用的分期系统，该系统侧重评估患者的总体瘤负荷。MIP-1α与β2-微球蛋白、
Durie-Salmon 分期相关，从而可推测MIP-1α能反映体内瘤负荷，但多元直线回归分析发现Durie-Salmon 分期未进入回归模型。
大部分多发性骨髓瘤患者骨髓MIP-1α水平增高，MIP-1α在多发性骨髓瘤发病机制中可能起重要作用，这值得进一步研究。
【参考文献】
HASHIMOTO T,ABE M,OSHIMA T,et al. Ability of myeloma cells to secrete macrophage inflammatory protein (MIP)-1 alpha and MIP-1 beta correlates with lytic bone lesions in patients with multiple myeloma[J]. Br J Haematol, 2004 ,125(1):38-41.
LENTZSCH S,GRIES M, JANZ M, et al. macrophage inflammatory protein-1α triggers migration and signaling cascades
mediating survival and proliferation in multiple myeloma cells[J].Blood, 2003, 101(9):3568-3573.
张之南, 沈 悌. 血液病诊断及疗效标准[M].2版. 北京:科学出版社，1998：373-379.
MICHAEL G. ALEXANDRAKIS A, FREDA H, et al. Evaluation of bone disease in multiple myeloma: a correlation between biochemical markers of bone metabolism and other linical
parameters in untreated multiple myeloma patients[J].Clinic Chim Acta, 2002, 325(1-2): 51-57.
OYAJOBI B O,FRANCHIN G,WILLIAS P J,et al. Dual effects of macrophage inflammatory protein-1alpha on osteolysis and tumor burden in the murine 5TGM1 model of myeloma bone
disease[J].Blood, 2003, 102(1):311-319.
ABE M, HIURA K, WILDE J, et al. Role for macrophage inflammatory protein (MIP)-1alpha and MIP-1beta in the
development of osteolytic lesions in multiple myeloma[J]. Blood,2002,100(6):2195-2202.
UNEDA S, HATA H, MATSUNO F,et al. Macrophage inflammatory protein-1 alpha is produced by human multiple myeloma (MM) cells and its expression correlates with bone lesions in patients with MM[J].Br J Haematol, 2003 , 120(1):53-55.
TERPOS E,POLITOU M,VINIOU N,et al. Significance of macrophage inflammatory protein-1 alpha (MIP-1alpha) in
multiple myeloma[J]. Leuk Lymphoma, 2005,46(12):1699-1707. MOLLER C, STROMBERG T, JUREMAM M, et al.Expression and function of chemokine receptors in human multiple
myeloma[J].Leuke,2003,17(1):203-210.
OBA Y, LEE J W, EHRLICH L A, et al. MIP-1alpha utilizes both CCR1 and CCR5 to induce osteoclast formation and increase adhesion of myeloma cells to marrow stromal cells[J]. Exp Hematol, 2005,33(3):272-278.
巨噬细胞炎症蛋白-1α在多发性骨髓瘤中的表达
作者：王晓桃 ， 罗绍凯， 莫汉有， 李 娟， 莫东华， 周润华 作者单位：1. 桂林医学院附院血液科， 广西 桂林 541004; 2. 中山大学附属第一医院血液科， 广东 广州 510080
【摘要】 【目的】 探讨巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α) 在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义。【方法】 夹心酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测实验组43例患者、15例对照组，以及随访37例治疗3疗程后骨髓血浆MIP-1α的水平。【结果】 ①65.1% 患者MIP-1α水平增高，其中实验组明显高于对照组(t=3.569，P=02处患者明显高于骨质破坏≤2处的患者
(t=5.56，P=0
【关键词】 多发性骨髓瘤; 巨噬细胞炎症蛋白-1α; 骨质破坏; 瘤负荷
[J SUN Yat-sen Univ(Med Sci), 2007, 28(2):152-154;157] 多发性骨髓瘤是浆细胞的恶性肿瘤，可引起骨质进行性破坏。骨质破坏主要是指骨质重吸收增加而骨质形成减少，多数学者认为其机制是瘤细胞同基质细胞相互黏附产生的多种破骨细胞激活因子如IL-1β、TNF-β、IL-6等起作用。然而Choi 等[1]发现在部分新诊断的伴骨质破坏的Ⅲ期患者瘤细胞培养上清液中IL-1β、TNF-β、IL-6的水平并不增高，且在临床上用抗IL-6、IL-1单克隆抗体治疗多发性骨髓瘤的疗效并不显著。这表明还存在其它因子在多发性骨髓瘤的发病机制中起重要作用。近来有学者发现MIP-1α在骨髓微环境里参与破骨细胞的征集、分化，对多发性骨髓瘤骨病的发生起重要作用[2]。我们旨在通过检测多发性骨髓瘤患者骨髓血浆中MIP-1α水平，进而探讨MIP-1α在多发性骨髓瘤中的临床意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象
实验组病例为2003年1月至2004年3月在中山大学附属第一医院血液科住院的据国内统一标准确诊的多发性骨髓瘤患者43例[3]，男 29例，女14例，中位年龄53(24～73) 岁，其中包括难治复发病例7例，浆细胞白血病1例。活动进展期15例，稳定期28例。免疫分型中IgG 型25例，IgA 型6例，IgD 型2例, IgE型1例, κ轻链型5例，λ轻链型4例。骨髓中各期浆细胞占0.07～0.84。β2-微
球蛋白(5 273.5±3 725.4) μg/L。多发性骨髓瘤骨病分级参考文献
[4]报道，骨质破坏以X 线为标准，其中1级6例(14%)，2级15例(35%)，3级22例(51%)。随访37例于化疗3疗程后复查相关指标，据国内统一标准判断疗效[3]。有效组30例(部分缓解11例，进步19例) ，无效组7例。15例对照组中男9例，女6例，中位年龄49(17～
56) 岁，其中正常健康人6名，特发性血小板减少性紫癜6例, 急性粒-单核细胞白血病3例。
实验抽取研究对象骨髓2 mL，肝素抗凝，常规离心取上清。
1.2 检测方法
用ELISA 定量检测方法，步骤严格按照MIP-1α ELISA 试剂盒(购自ENDOGEN 公司) 的说明书进行。
1.3 统计学分析
数据均用SPSS11.0统计软件包处理。参数检验的计量资料以均数(x±s)表示，两均数比较用t 检验; 变量之间的关系用线性相关、多重线性回归分析，性别的比较用χ2检验。
2 结 果
2.1 病人基线资料
实验组及对照组在年龄(t=1.546, P=0.053)及性别(?字
2=2.31,P=0.067)上的差别无统计学意义。
2.2 实验组和对照组MIP-1α水平
MIP-1α水平高于正常值上限+2s为显著增高，实验组MIP-1α水平(113.2±40.5)pg/mL，28例增高，占65.1%，对照组MIP-1α水平(43.3±11.2)pg/mL，6名健康正常人无1例增高，9例血液系统其它疾病中有3例(20%)增高，均为急性粒-单核细胞白血病患者。实验组明显高于对照组(t=3.569，P= 0
2.3 骨髓MIP-1α水平与骨病间的关系
实验组中，骨质破坏≤2处的患者17例，MIP-1α水平为
(67.5±55.9)pg/mL;骨质破坏>2处的患者26例，MIP-1α水平为
(216.3±121.6) pg/mL;差异有统计学意义(t =5.56, P =0
2.4 治疗前后MIP-1α水平
有效组化疗前MIP -1α水平(209.2±86.4) pg/mL，化疗3疗程后MIP -1α水平(134.4±54.6) pg/mL，除3例轻微升高外，其余27例均有不同程度的下降，下降幅度在(9.6-137.9) pg/mL，差异有
统计学意义(t =3.237，P=00.05)。
2.5 MIP-1α水平与实验室指标及临床特征的关系
骨髓血浆MIP-1α水平与患者性别、年龄、白细胞计数、红细胞计数、乳酸脱氢酶、β2-微球蛋白、白蛋白、血沉、血钙、碱性磷酸酶、骨损分、Durie-Salmon 分期及疗效分别做相关分析、多重线性回归分析。结果表明MIP-1α水平与红细胞计数、β2-微球蛋白、白蛋白、骨损分、Durie-Salmon 分期相关(P
3 讨 论
MIP-1α既是一种趋化因子，也是一种破骨细胞激活因子。我们发现约65% 多发性骨髓瘤患者骨髓MIP-1α水平增高，这与其他学者报道基本一致[1,5]。其中处于活动进展期患者的MIP-1α明显高于正常人、其它血液病及稳定期患者，增高的程度与疾病的活动度相
关。同时MIP-1α增高的程度与骨质破坏的程度呈正相关，3级患者明显高于1、2级患者，说明骨质破坏越严重骨髓MIP-1α水平越高，与其他报道一致[6-8]。其原因可能是骨质破坏越严重，局限区域里破骨细胞激活因子越多，破骨细胞激活因子可能通过旁分泌途径刺激瘤细胞增殖，从而促进多发性骨髓瘤细胞分泌的MIP-1α增多。 MIP-1α诱导骨质破坏的机制可能是与破骨细胞表达的CCR1、CCR5受体结合后作用于破骨细胞分化的最后一阶段，增强破骨细胞的活性，导致溶骨性的破坏[7,10]。
随访37例患者，有效治疗可使多发性骨髓瘤患者MIP-1α水平下降，其原因可能有：①有效化疗杀灭部分多发性骨髓瘤细胞，由多发性骨髓瘤细胞分泌的MIP-1α减少;②多发性骨髓瘤细胞减少，MIP-1α水平下降，阻断由MIP-1α促进多发性骨髓瘤进展的自分泌和旁分泌途径。动态监测骨髓MIP-1α可反映近期疗效。治疗前
MIP-1α水平与近期疗效不相关，说明治疗前MIP-1α水平不能反映近期疗效。
骨髓MIP-1α水平与红细胞计数呈负相关，这与Moller 等[9]学者报道相一致，其机制是因为骨髓CD34+红系祖细胞表达CCR1受体，MIP-1α与CCR1受体结合后抑制红系形成[9]。MIP-1α水平与白蛋白呈负相关， 白蛋白作为负性急性期蛋白，其血清浓度与骨髓瘤细胞生长因子白介素-6的活性、患者的体能状态呈负相关。而多
发性骨髓瘤骨病是影响病人体能状态的主要因素，进一步验证
MIP-1α与骨病相关。血β2-微球蛋白主要是由B 细胞系、单核细胞系等表达，在多发性骨髓瘤时β2-微球蛋白大量合成并进入血液循环，能较好地反映体内瘤负荷;DS 分期系统是最常用的分期系统，该系统侧重评估患者的总体瘤负荷。MIP-1α与β2-微球蛋白、
Durie-Salmon 分期相关，从而可推测MIP-1α能反映体内瘤负荷，但多元直线回归分析发现Durie-Salmon 分期未进入回归模型。
大部分多发性骨髓瘤患者骨髓MIP-1α水平增高，MIP-1α在多发性骨髓瘤发病机制中可能起重要作用，这值得进一步研究。
【参考文献】
HASHIMOTO T,ABE M,OSHIMA T,et al. Ability of myeloma cells to secrete macrophage inflammatory protein (MIP)-1 alpha and MIP-1 beta correlates with lytic bone lesions in patients with multiple myeloma[J]. Br J Haematol, 2004 ,125(1):38-41.
LENTZSCH S,GRIES M, JANZ M, et al. macrophage inflammatory protein-1α triggers migration and signaling cascades
mediating survival and proliferation in multiple myeloma cells[J].Blood, 2003, 101(9):3568-3573.
张之南, 沈 悌. 血液病诊断及疗效标准[M].2版. 北京:科学出版社，1998：373-379.
MICHAEL G. ALEXANDRAKIS A, FREDA H, et al. Evaluation of bone disease in multiple myeloma: a correlation between biochemical markers of bone metabolism and other linical
parameters in untreated multiple myeloma patients[J].Clinic Chim Acta, 2002, 325(1-2): 51-57.
OYAJOBI B O,FRANCHIN G,WILLIAS P J,et al. Dual effects of macrophage inflammatory protein-1alpha on osteolysis and tumor burden in the murine 5TGM1 model of myeloma bone
disease[J].Blood, 2003, 102(1):311-319.
ABE M, HIURA K, WILDE J, et al. Role for macrophage inflammatory protein (MIP)-1alpha and MIP-1beta in the
development of osteolytic lesions in multiple myeloma[J]. Blood,2002,100(6):2195-2202.
UNEDA S, HATA H, MATSUNO F,et al. Macrophage inflammatory protein-1 alpha is produced by human multiple myeloma (MM) cells and its expression correlates with bone lesions in patients with MM[J].Br J Haematol, 2003 , 120(1):53-55.
TERPOS E,POLITOU M,VINIOU N,et al. Significance of macrophage inflammatory protein-1 alpha (MIP-1alpha) in
multiple myeloma[J]. Leuk Lymphoma, 2005,46(12):1699-1707. MOLLER C, STROMBERG T, JUREMAM M, et al.Expression and function of chemokine receptors in human multiple
myeloma[J].Leuke,2003,17(1):203-210.
OBA Y, LEE J W, EHRLICH L A, et al. MIP-1alpha utilizes both CCR1 and CCR5 to induce osteoclast formation and increase adhesion of myeloma cells to marrow stromal cells[J]. Exp Hematol, 2005,33(3):272-278.