・４６１１・
・论著・
双歧三联活菌对硫代乙酰胺所致肝纤维化大鼠的预防作用及其机制的研究
史丹鹤 张海燕 刘立新
【摘要】 目的 明确双歧三联活菌对硫代乙酰胺（ＴＡＡ）诱导的大鼠肝纤维化形成是否具有预防作用，
并探讨可能机制。方法 将３０只ＳＤ大鼠随机分为正常对照组、模型组、预防组，每组１０只。采用ＴＡＡ皮下注射制备肝纤维化模型，预防组在此基础上同时给予双歧三联活菌制剂灌胃。检测内毒素、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、天门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和丙二醛（ＭＤＡ）。ＨＥ染色、天狼猩红染色观察肝组织形态学改变及胶原纤维沉积状况，免疫组织化学染色检测肝组织内毒素受体ＣＤ１４的表达。结果 模型组肝损伤最重、胶原面积百分比明显高于正常对照组和预防组（Ｐ均＜０畅０１）。与模型组比较，预防组内毒素、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ和ＭＤＡ水平均明显降低（Ｐ均＜０畅０５），肝组织ＣＤ１４阳性细胞表达明显减少（Ｐ＜０畅０５）。结论 双歧三联活菌可以预防ＴＡＡ诱导的大鼠肝纤维化的形成，机制可能与其减轻肠源性内毒素血症，下调肝组织ＣＤ１４的表达，减弱内毒素介导的继发性肝损伤有关。
【关键词】 肝硬化； 内毒素血症； 抗原，ＣＤ１４
ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＢｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ唱ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｒａｔｓ ＳＨＩＤａｎ唱ｈｅ，ＺＨＡＮＧＨａｉ唱ｙａｎ，ＬＩＵＬｉ唱ｘｉｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＲｅｓｅａｒｃｈ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ０３０００１，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬＩＵＬｉ唱ｘｉｎ，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｘｉｎｌｉｕ６＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＢｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｏｎｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ（ＴＡＡ）ｉｎｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｉｒｔｙｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓ（１０ｒａｔｓｆｏｒｅａｃｈｇｒｏｕｐ）：ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｍｏｄｅｌｏｆｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｒａｔｓｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｔｈｅｍｏｓｔｓｅｒｉｏｕｓｆｏｒｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓｏｆｃｏｌｌａｇｅｎｆｉｂｅｒａｒｅａｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｂｙｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｆＴＡＡ，ａｎｄｇｉｖｅｎＢｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｂｙｇａｓｔｒｉｃｐｅｒｆｕｓｉｏｎｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙａｓｐｒｅｖｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｐｌａｓｍａｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｈｅｐａｔｉｃｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｄｅｇｒｅｅｏｆｌｉｖｅｒｄａｍａｇｅｈｉｇｈｅｒｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｔｈａｎｉｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｏｒｐｒｅｖｅｎｔｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０畅０１）．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐｌａｓｍａｅｎｄｏｔｏｘｉｎ，ａｌａｎｉｎｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＬＴ），ａｓｐａｒｔａｔｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＳＴ），ｌａｃｔｉｃｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ），ｍａｌｏｎ唱ｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＤ１４ｉｎｌｉｖｅｒｏｆｐｒｅｖｅｎｔｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０畅０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｂｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｃｏｕｌｄｐｒｅｖｅｎｔｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｔｏｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔ．ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｍａｙｂｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈａｔＢｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｒｅｌｉｅｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａａｎｄｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＣＤ１４ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｏｓｔｏｐｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙｆｒｏｍｅｎｄｏｔｏｘｉｎ．
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 Ｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓ； Ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ； Ａｎｔｉｇｅｎｓ，ＣＤ１４
近年来，肝病与肠源性内毒素血症（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｅｎｄｏ唱ｔｏｘｅｍｉａ，ＩＥＴＭ）的关系日益受到重视。ＩＥＴＭ介导的继发性肝损伤，在肝病的发生发展过程中有重要影响，有
［１］
报道指出ＩＥＴＭ可能参与促进肝纤维化发展的过程。ＣＤ１４是一种内毒素受体，在介导内毒素信号转导、激活库普弗细胞导致肝损伤的过程中起至关重要的作用。双歧三联活菌是临床常用的微生态制剂，可有效
ＤＯＩ：１０畅３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４唱０７８５．２０１２．１６．０１５中心
通讯作者：刘立新，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｘｉｎｌｉｕ６＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
降低血浆内毒素水平，目前已知其作用机制主要与补
充肠道优势菌、重建肠道微生态平衡及恢复肠黏膜屏
［２唱３］
障等有关；关于其对ＣＤ１４的表达是否有影响，报道甚少。为此，本研究在硫代乙酰胺（ＴＡＡ）诱导大鼠肝纤维化的同时给予双歧三联活菌，通过观察血浆内毒素、ＣＤ１４等指标变化，明确双歧三联活菌能否预防肝纤维化的发生，并探讨其机制。
材料与方法
一、实验材料
正常清洁级ＳＤ大鼠３０只，雄性，体重２４０～２９０ｇ，
作者单位：０３０００１ 太原，山西医科大学第一医院消化科科研实验
・４６１２・由北京维通利华实验动物技术有限公司提供；ＴＡＡ由
成都科龙化工试剂厂生产；双歧杆菌三联活菌胶囊
７
检验，均以Ｐ＜０畅０５为差异有统计学意义。
结 果
１．一般情况：正常对照组与预防用药组大鼠精神良好，被毛光滑，体重增长平稳；模型组大鼠饮食及活动减少、粪质稀薄，被毛蓬乱无光泽，体重增长缓慢。
２．血液指标检测结果（表１）：与正常对照组比较，模型组ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＭＤＡ与内毒素水平均明显升高（Ｐ＜０畅０５）；与模型组比较，预防组上述指标均明显降低（Ｐ＜０畅０５）。
３．肝组织病理学观察（图１，２）：光镜下正常对照组肝细胞形态正常，肝小叶结构完整，仅血管壁周围分布少量胶原纤维。模型组肝细胞肿胀变性，伴炎细胞浸润，胶原纤维大量增生见于汇管区，并向肝小叶内延伸。预防组肝细胞形态大致正常，少量炎性细胞浸润，纤维组织轻度增生。胶原纤维面积百分比：模型组［１畅２１％（０畅７１％）］明显高于正常对照组［０畅０６％（０畅０５％）］和预防组［０畅１８％（０畅０８％）］，差异有统计学意义（Ｐ均＜０畅０１）。
４．各组大鼠肝组织ＣＤ１４表达比较（图３）：光镜下
３
正常对照组大鼠肝组织未见明显阳性细胞［０畅１５×１０
３
（０畅１３×１０）］。模型组肝窦阳性细胞增多，尤其在血管周围及纤维间隔内阳性细胞呈灶型聚集［２６畅８７×３３１０（１５畅６１×１０）］，显著高于正常对照组（Ｐ＜０畅０５）。与模型组比较，预防组肝组织阳性细胞表达［０畅１８×３３１０（０畅１２×１０）］明显减少（Ｐ＜０畅０５）。
讨 论
肝硬化患者中，普遍存在不同程度的肠道微生态
［４］
失衡。肠道菌群失调，肝功能损伤、肠道屏障结构破坏等原因致使内毒素产生与吸收增多，最终形成ＩＥＴＭ。ＴＡＡ诱导肝纤维化动物模型在引起肝损伤的同时可出现ＩＥＴＭ，更能反映人类肝损伤的实际情［５］
况。因此，本研究采用ＴＡＡ诱导肝纤维化，病理组织学证实模型组肝纤维化模型构建成功，且内毒素升高，表明同时伴有ＩＥＴＭ的形成。
双歧三联活菌制剂含有的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌
［６］
和粪链球菌是人肠道内重要的生理性细菌，在代谢过程中产生酸性物质，降低肠道ｐＨ值，扶持厌氧菌的
（２１０ｍｇ／粒，每粒活菌数不低于１畅０×１０ｃｆｕ）由上海信谊药厂有限公司生产；血液细菌内毒素定量检测鲎试剂盒购自广东湛江博康海洋生物有限公司；ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ和ＭＤＡ试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；苦味酸唱天狼猩红染色所用天狼猩红为美国Ｓｉｇ唱ｍａ公司产品；ＣＤ１４兔多克隆抗体为武汉博士德产品；免疫组化用抗兔二抗ＰＶ唱９００１、ＤＡＢ显色试剂盒均购自北京中杉金桥公司。
二、模型分组与处理
按照随机化原则分为３组，每组１０只。正常对照组（Ｎ）：未做任何处理，自由喂养；模型组（Ｔ）：ＴＡＡ皮下注射１００ｍｇ／ｋｇ，３次／周，持续７周，诱导肝纤维化模型；预防组（Ｐ）：ＴＡＡ皮下注射同前，同时给予２ｍｌ双歧三联活菌悬液（含７０ｍｇ活菌制剂）灌胃，１次／ｄ，持续７周。３０只大鼠均于７周末禁食１２ｈ后乙醚麻醉，采集肝组织，无菌、无热源条件下腹主动脉取血。
三、检测方法
１．血液指标检测：鲎试剂动态浊度法检测血浆内毒素水平，分别检测ＡＬＴ、ＡＳＴ（赖氏法）、ＬＤＨ、ＭＤＡ（硫代巴比妥法）水平。
２．肝组织ＨＥ染色及苦味酸唱天狼猩红染色：切片脱蜡水化，０畅１％饱和苦味酸唱天狼猩红溶液染色后光镜下观察胶原纤维呈红色。采用Ｉｍａｇｅ唱ＰｒｏＰｌｕｓ６畅０软件测定胶原纤维面积百分比（胶原纤维面积／统计场面积×１００％）。
３．肝组织ＣＤ１４的免疫组织化疗检测（ＰＶ二步法）：切片脱蜡水化，枸橼酸盐高压热修复，一抗１∶２００稀释，４℃过夜，二抗孵育，ＤＡＢ显色，苏木素复染。ＰＢＳ替代一抗作为阴性对照。采用Ｉｍａｇｅ唱ＰｒｏＰｌｕｓ６畅０软件测定棕黄色阳性表达颗粒的累积光密度值（ＩＯＤ）。
四、统计学分析采用ＳＰＳＳ１６．０统计软件分析，资料符合正态分布，相关数据以均数±标准差（ｘ珋±ｓ）表示，采用单因素方差分析，两组间比较方差齐时用ＳＮＫ唱ｑ检验，方差不齐时用Ｄｕｎｎｅｔｔ′ｓＴ３检验；资料不符合正态分布，相关数据以中位数（四分位数间距）表示，采用非参数检验Ｋｒｕｓｋａｌ唱Ｗａｌｌｉ法分析，两组间比较采用以Ｂｏｎｆｅｒｏｎｉ法
组别正常对照组模型组预防组
只数１０１０１０
ＡＬＴ（Ｕ／Ｌ）５畅９８±２畅８０１２畅６０±２畅７７ａ６畅９８±３畅４０ｂ
ＡＳＴ（Ｕ／Ｌ）１３畅８０±２畅７３２１畅８３±２畅４１ａ１６畅６５±１畅５５ｂ
表１ 各组大鼠ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＭＤＡ与内毒素分析结果（ｘ珋±ｓ）
ＬＤＨ（Ｕ／Ｌ）２５９６畅８９±５３３畅７５３９８２畅３８±８１３畅９０ａ３３２１畅２４±６３３畅３６ｂ
ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／ｍｌ）２畅８３±０畅５７５畅０３±０畅７６ａ３畅５５±０畅５７ｂ
内毒素（ＥＵ／ｍｌ）０畅０７±０畅０３０畅２５±０畅１２ａ０畅１０±０畅０３ｂ
注：与正常对照组比较，ａＰ＜０畅０５；与模型组比较，ｂＰ＜０畅０５
・４６１３・
生长。同时嗜酸乳杆菌能黏附到人肠黏膜细胞，巩固肠道的生物屏障。此外，双歧杆菌可提高ＩｇＡ分泌，增强肠道抗感染能力。基于以上作用，本研究采用双歧三联活菌能有效抑制ＴＡＡ诱导的肝纤维化过程中内毒素的增高，减轻ＩＥＴＭ。
库普弗细胞（ＫＣ）是肝内定居的巨噬细胞，在内毒
［７］
素血症介导的肝损伤中起重要作用。内毒素激活ＫＣ，促使其合成及分泌大量炎症介质和细胞因子，导致肝脏炎症性损伤、肝组织缺血缺氧和脂质过氧化损伤。在此过程中，ＣＤ１４是介导内毒素激活ＫＣ的主要受体，对内毒素有高亲和力。正常情况下，肝组织ＣＤ１４的表达较弱，在内毒素血症动物模型中ＫＣ表面ＣＤ１４表达明显增高，参与内毒素清除的清道夫受体表达明显下降，因此造成ＫＣ的防御作用减弱，致肝损伤作用增［８］
强。文献报道，内毒素血症形成过程中，受内毒素刺激，ＣＤ１４的表达明显上调，且随内毒素水平的增高，ＣＤ１４的表达亦随之上调，两者呈一定的剂量依赖关［９唱１０］系。与相关报道相符，本研究表明正常大鼠肝组织仅有少量ＣＤ１４表达，在模型组ＴＡＡ诱导的ＩＥＴＭ形成后，ＣＤ１４阳性细胞在窦周明显增多。由此可知，内毒素通过激活ＫＣ介导的继发性肝损伤，ＣＤ１４起至关重要的作用，且ＩＥＴＭ形成后，内毒素可刺激ＣＤ１４表达明显上调。
本研究结果显示预防组同时应用双歧三联活菌，肝组织ＣＤ１４的表达较弱，作用机制可能为益生菌减轻ＩＥＴＭ，因此内毒素对ＣＤ１４刺激减弱，从而下调ＣＤ１４的表达。有文献报道，益生菌可减轻血浆炎性细胞因
［１１］
子水平，从而减弱ＩＥＴＭ对肝脏的损害，此作用是否是通过ＣＤ１４的表达下调起作用，尚不明确。我们推测益生菌减轻炎性细胞因子水平可能与其下调ＣＤ１４表达有关，待进一步研究证实。
模型组ＡＬＴ、ＡＳＴ升高，提示存在肝组织的持续性损伤，致肝细胞变性坏死、膜通透性增强。内毒素介导释放的一些细胞因子可使肝内微血管收缩，引起肝脏微循环障碍导致缺血、缺氧性肝损伤。ＬＤＨ存在于多组织器官，各种组织损伤ＬＤＨ可升高，其特异性差，但是敏感性较高。尤其在缺血性肝病中，ＬＤＨ较ＡＬＴ升
［１２］
高更为明显，是缺血性肝病的敏感指标。应用双歧
・４６１４・症．中华消化杂志，２００５，２５：３９８唱４００．
［２］ ＺｈａｏＨＹ，ＷａｎｇＨＪ，ＬｕＺ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈ［３］ 孙秀凤，单若冰．梗阻性黄疸与细菌／内毒素移位的关系及微生态
制剂干预．中国微生态学杂志，２００８，２０：９５唱９６．
［４］ ＧｕｅｒｒｅｒｏＨｅｒｎáｎｄｅｚＩ，ＴｏｒｒｅＤｅｌｇａｄｉｌｌｏＡ，ＶａｒｇａｓＶｏｒａｃｋｏｖａＦ，ｅｔａｌ．
１２０唱１２４．
Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｆｌｏｒａ，ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ，ａｎｄｃｉｒｒｈｏｓｉｓ．ＡｎｎＨｅｐａｔｏｌ，２００８，７：ｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓ．ＣｈｉｎＪＤｉｇＤｉｓ，２００４，５：６４唱６７．
三联活菌后，内毒素的降低，ＣＤ１４表达下调，减弱了内
毒素及其介导的细胞因子对肝组织的进一步损伤，因此上述酶学指标均较模型组显著降低。
ＩＥＴＭ形成后，引起的脂质过氧化损伤是慢性肝病发展至肝纤维化的重要因素之一。脂质过氧化的最终产物ＭＤＡ，可以间接反映自由基的形成、脂质过氧化程度和细胞损伤的程度。本研究预防组与模型组比较ＭＤＡ显著降低，可能与双歧三联活菌减轻ＩＥＴＭ，下调ＣＤ１４的表达，减轻内毒素介导的脂质过氧化性肝损伤有关。
病理组织学显示预防组肝细胞形态大致正常，肝小叶结构较完整，胶原纤维面积百分比显著低于模型组（Ｐ＜０畅０１），表明预防组肝纤维化程度较低，甚至并未形成肝纤维化。可见，双歧三联活菌制剂在一定程度上能够预防肝纤维化的形成，推测与以下作用有关：（１）补充肠道益生菌，维持微生态平衡，巩固肠黏膜屏障，从而降低内毒素的产生与吸收，减轻ＩＥＴＭ。（２）内毒素水平的降低，使肝组织脂质过氧化损伤减轻，肝脏微循环障碍得到改善，避免肝脏的持续性损伤。（３）ＣＤ１４表达下调，减弱了内毒素对ＫＣ的作用，进而削弱内毒素介导的继发性肝损伤。
参 考 文 献
［１］ 刘伟，蒋义斌，钟良，等．慢性肝病小肠细菌过度生长与内毒素血
［５］ 刘立新，韩德五，任大宾．肠源性内毒素血症在硫代乙酰胺所致肝
损伤发病中的作用．中华肝脏病杂志，２０００，８：１７４唱１７５．
［６］ ＬａｔａＪ，ＪｕｒａｎｋｏｖａＪ，ＫｏｐａｃｏｖａＭ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｉｎｈｅｐａｔｐｌｏｇｙ．Ｗｏｒｌｄ［７］ ＣｅｓａｒｏＣ，ＴｉｓｏＡ，ＰｒｅｔｅＡＤ．Ｇｕｔｍｉｃｒｏｂｉｏｔａａｎｄｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｉｎｃｈｒｏｎｉｃ［８］ ＪｉａｎｇＪ，ＸｉｅＧ，ＣｈｅｎＹ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｒａ唱ｈｅｐａｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｃａｖｅｎｇｅｒｒｅ唱
ｃｅｐｔｏｒａｎｄＣＤ１４ａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｌｏｃａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅ唱［９］ ＤｏｂｒｏｖｏｌｓｋａｉａＭＡ，ＶｏｇｅｌＳＮ．ＴｏｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｓＣＤ１４ａｎｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅ［１０］ 冯俊明，刘友生，史景泉，等．ＣＤ１４表达及其在库普弗细胞激活中
的意义．中华烧伤杂志，２００２，１８：１０７唱１１０．
［１１］ 黄培宁，邓有辉．微生态制剂对慢性肝衰竭患者肠道菌群、血浆内
毒素及细胞因子的影响．中华医院感染学杂志，２０１１，２１：３７９８唱３８００．
［１２］ ＫｏｔｏｈＫ，ＥｎｊｏｊｉＭ，ＫａｔｏＭ，ｅｔａｌ．Ａｎｅｗｐａｒａｍｅｔｅｒｕｓｉｎｇｓｅｒｕｍｌａｃｔａｔｅ
ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｎｄａｌａｎｉｎｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｌｅｖｅｌｉｓｕｓｅｆｕｌｆｏｒｐｒｅｄｉｃ唱ｔｉｎｇｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓａｔａｎｅａｒｌｙｓｔａｇｅｏｆａｃｕｔｅｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙ：Ａｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄ．ＣｏｍｐＨｅｐａｔｏｌ，２００８，７：６．
（收稿日期：２０１２唱０３唱２９）
ａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｄｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｂｙＬＰＳ．ＭｉｃｒｏｂｅｓＩｎｆｅｃｔ，２００２，４：９０３唱９１４．ｓｐｏｎｓｅｓｉｎｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａｉｎｍｉｃｅ．Ｓｈｏｃｋ，２００１，１６：７５唱８０．ｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓ．ＤｉｇＬｉｖＤｉｓ，２０１０，４３：４３１唱４３８．ＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１１，１７：２８９０唱２８９６．
（本文编辑：马超）
双歧三联活菌对硫代乙酰胺所致肝纤维化大鼠的预防作用及其机制的研究［Ｊ／ＣＤ］．中华临床医师杂志：电子版，２０１２，６ 史丹鹤，张海燕，刘立新．（１６）：４６１１唱４６１４．
・４６１１・
・论著・
双歧三联活菌对硫代乙酰胺所致肝纤维化大鼠的预防作用及其机制的研究
史丹鹤 张海燕 刘立新
【摘要】 目的 明确双歧三联活菌对硫代乙酰胺（ＴＡＡ）诱导的大鼠肝纤维化形成是否具有预防作用，
并探讨可能机制。方法 将３０只ＳＤ大鼠随机分为正常对照组、模型组、预防组，每组１０只。采用ＴＡＡ皮下注射制备肝纤维化模型，预防组在此基础上同时给予双歧三联活菌制剂灌胃。检测内毒素、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、天门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和丙二醛（ＭＤＡ）。ＨＥ染色、天狼猩红染色观察肝组织形态学改变及胶原纤维沉积状况，免疫组织化学染色检测肝组织内毒素受体ＣＤ１４的表达。结果 模型组肝损伤最重、胶原面积百分比明显高于正常对照组和预防组（Ｐ均＜０畅０１）。与模型组比较，预防组内毒素、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ和ＭＤＡ水平均明显降低（Ｐ均＜０畅０５），肝组织ＣＤ１４阳性细胞表达明显减少（Ｐ＜０畅０５）。结论 双歧三联活菌可以预防ＴＡＡ诱导的大鼠肝纤维化的形成，机制可能与其减轻肠源性内毒素血症，下调肝组织ＣＤ１４的表达，减弱内毒素介导的继发性肝损伤有关。
【关键词】 肝硬化； 内毒素血症； 抗原，ＣＤ１４
ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＢｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ唱ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｒａｔｓ ＳＨＩＤａｎ唱ｈｅ，ＺＨＡＮＧＨａｉ唱ｙａｎ，ＬＩＵＬｉ唱ｘｉｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＲｅｓｅａｒｃｈ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ０３０００１，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬＩＵＬｉ唱ｘｉｎ，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｘｉｎｌｉｕ６＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＢｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｏｎｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ（ＴＡＡ）ｉｎｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｉｒｔｙｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓ（１０ｒａｔｓｆｏｒｅａｃｈｇｒｏｕｐ）：ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｍｏｄｅｌｏｆｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｒａｔｓｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｔｈｅｍｏｓｔｓｅｒｉｏｕｓｆｏｒｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓｏｆｃｏｌｌａｇｅｎｆｉｂｅｒａｒｅａｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｂｙｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｆＴＡＡ，ａｎｄｇｉｖｅｎＢｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｂｙｇａｓｔｒｉｃｐｅｒｆｕｓｉｏｎｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙａｓｐｒｅｖｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｐｌａｓｍａｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｈｅｐａｔｉｃｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｄｅｇｒｅｅｏｆｌｉｖｅｒｄａｍａｇｅｈｉｇｈｅｒｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｔｈａｎｉｎｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｏｒｐｒｅｖｅｎｔｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０畅０１）．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐｌａｓｍａｅｎｄｏｔｏｘｉｎ，ａｌａｎｉｎｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＬＴ），ａｓｐａｒｔａｔｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＳＴ），ｌａｃｔｉｃｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ），ｍａｌｏｎ唱ｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＤ１４ｉｎｌｉｖｅｒｏｆｐｒｅｖｅｎｔｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０畅０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｂｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｃｏｕｌｄｐｒｅｖｅｎｔｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｔｏｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔ．ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｍａｙｂｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈａｔＢｉｆｉｄｔｒｉｐｌｅｖｉａｂｌｅｒｅｌｉｅｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａａｎｄｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＣＤ１４ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｏｓｔｏｐｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙｆｒｏｍｅｎｄｏｔｏｘｉｎ．
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 Ｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓ； Ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ； Ａｎｔｉｇｅｎｓ，ＣＤ１４
近年来，肝病与肠源性内毒素血症（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｅｎｄｏ唱ｔｏｘｅｍｉａ，ＩＥＴＭ）的关系日益受到重视。ＩＥＴＭ介导的继发性肝损伤，在肝病的发生发展过程中有重要影响，有
［１］
报道指出ＩＥＴＭ可能参与促进肝纤维化发展的过程。ＣＤ１４是一种内毒素受体，在介导内毒素信号转导、激活库普弗细胞导致肝损伤的过程中起至关重要的作用。双歧三联活菌是临床常用的微生态制剂，可有效
ＤＯＩ：１０畅３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４唱０７８５．２０１２．１６．０１５中心
通讯作者：刘立新，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｘｉｎｌｉｕ６＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
降低血浆内毒素水平，目前已知其作用机制主要与补
充肠道优势菌、重建肠道微生态平衡及恢复肠黏膜屏
［２唱３］
障等有关；关于其对ＣＤ１４的表达是否有影响，报道甚少。为此，本研究在硫代乙酰胺（ＴＡＡ）诱导大鼠肝纤维化的同时给予双歧三联活菌，通过观察血浆内毒素、ＣＤ１４等指标变化，明确双歧三联活菌能否预防肝纤维化的发生，并探讨其机制。
材料与方法
一、实验材料
正常清洁级ＳＤ大鼠３０只，雄性，体重２４０～２９０ｇ，
作者单位：０３０００１ 太原，山西医科大学第一医院消化科科研实验
・４６１２・由北京维通利华实验动物技术有限公司提供；ＴＡＡ由
成都科龙化工试剂厂生产；双歧杆菌三联活菌胶囊
７
检验，均以Ｐ＜０畅０５为差异有统计学意义。
结 果
１．一般情况：正常对照组与预防用药组大鼠精神良好，被毛光滑，体重增长平稳；模型组大鼠饮食及活动减少、粪质稀薄，被毛蓬乱无光泽，体重增长缓慢。
２．血液指标检测结果（表１）：与正常对照组比较，模型组ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＭＤＡ与内毒素水平均明显升高（Ｐ＜０畅０５）；与模型组比较，预防组上述指标均明显降低（Ｐ＜０畅０５）。
３．肝组织病理学观察（图１，２）：光镜下正常对照组肝细胞形态正常，肝小叶结构完整，仅血管壁周围分布少量胶原纤维。模型组肝细胞肿胀变性，伴炎细胞浸润，胶原纤维大量增生见于汇管区，并向肝小叶内延伸。预防组肝细胞形态大致正常，少量炎性细胞浸润，纤维组织轻度增生。胶原纤维面积百分比：模型组［１畅２１％（０畅７１％）］明显高于正常对照组［０畅０６％（０畅０５％）］和预防组［０畅１８％（０畅０８％）］，差异有统计学意义（Ｐ均＜０畅０１）。
４．各组大鼠肝组织ＣＤ１４表达比较（图３）：光镜下
３
正常对照组大鼠肝组织未见明显阳性细胞［０畅１５×１０
３
（０畅１３×１０）］。模型组肝窦阳性细胞增多，尤其在血管周围及纤维间隔内阳性细胞呈灶型聚集［２６畅８７×３３１０（１５畅６１×１０）］，显著高于正常对照组（Ｐ＜０畅０５）。与模型组比较，预防组肝组织阳性细胞表达［０畅１８×３３１０（０畅１２×１０）］明显减少（Ｐ＜０畅０５）。
讨 论
肝硬化患者中，普遍存在不同程度的肠道微生态
［４］
失衡。肠道菌群失调，肝功能损伤、肠道屏障结构破坏等原因致使内毒素产生与吸收增多，最终形成ＩＥＴＭ。ＴＡＡ诱导肝纤维化动物模型在引起肝损伤的同时可出现ＩＥＴＭ，更能反映人类肝损伤的实际情［５］
况。因此，本研究采用ＴＡＡ诱导肝纤维化，病理组织学证实模型组肝纤维化模型构建成功，且内毒素升高，表明同时伴有ＩＥＴＭ的形成。
双歧三联活菌制剂含有的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌
［６］
和粪链球菌是人肠道内重要的生理性细菌，在代谢过程中产生酸性物质，降低肠道ｐＨ值，扶持厌氧菌的
（２１０ｍｇ／粒，每粒活菌数不低于１畅０×１０ｃｆｕ）由上海信谊药厂有限公司生产；血液细菌内毒素定量检测鲎试剂盒购自广东湛江博康海洋生物有限公司；ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ和ＭＤＡ试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；苦味酸唱天狼猩红染色所用天狼猩红为美国Ｓｉｇ唱ｍａ公司产品；ＣＤ１４兔多克隆抗体为武汉博士德产品；免疫组化用抗兔二抗ＰＶ唱９００１、ＤＡＢ显色试剂盒均购自北京中杉金桥公司。
二、模型分组与处理
按照随机化原则分为３组，每组１０只。正常对照组（Ｎ）：未做任何处理，自由喂养；模型组（Ｔ）：ＴＡＡ皮下注射１００ｍｇ／ｋｇ，３次／周，持续７周，诱导肝纤维化模型；预防组（Ｐ）：ＴＡＡ皮下注射同前，同时给予２ｍｌ双歧三联活菌悬液（含７０ｍｇ活菌制剂）灌胃，１次／ｄ，持续７周。３０只大鼠均于７周末禁食１２ｈ后乙醚麻醉，采集肝组织，无菌、无热源条件下腹主动脉取血。
三、检测方法
１．血液指标检测：鲎试剂动态浊度法检测血浆内毒素水平，分别检测ＡＬＴ、ＡＳＴ（赖氏法）、ＬＤＨ、ＭＤＡ（硫代巴比妥法）水平。
２．肝组织ＨＥ染色及苦味酸唱天狼猩红染色：切片脱蜡水化，０畅１％饱和苦味酸唱天狼猩红溶液染色后光镜下观察胶原纤维呈红色。采用Ｉｍａｇｅ唱ＰｒｏＰｌｕｓ６畅０软件测定胶原纤维面积百分比（胶原纤维面积／统计场面积×１００％）。
３．肝组织ＣＤ１４的免疫组织化疗检测（ＰＶ二步法）：切片脱蜡水化，枸橼酸盐高压热修复，一抗１∶２００稀释，４℃过夜，二抗孵育，ＤＡＢ显色，苏木素复染。ＰＢＳ替代一抗作为阴性对照。采用Ｉｍａｇｅ唱ＰｒｏＰｌｕｓ６畅０软件测定棕黄色阳性表达颗粒的累积光密度值（ＩＯＤ）。
四、统计学分析采用ＳＰＳＳ１６．０统计软件分析，资料符合正态分布，相关数据以均数±标准差（ｘ珋±ｓ）表示，采用单因素方差分析，两组间比较方差齐时用ＳＮＫ唱ｑ检验，方差不齐时用Ｄｕｎｎｅｔｔ′ｓＴ３检验；资料不符合正态分布，相关数据以中位数（四分位数间距）表示，采用非参数检验Ｋｒｕｓｋａｌ唱Ｗａｌｌｉ法分析，两组间比较采用以Ｂｏｎｆｅｒｏｎｉ法
组别正常对照组模型组预防组
只数１０１０１０
ＡＬＴ（Ｕ／Ｌ）５畅９８±２畅８０１２畅６０±２畅７７ａ６畅９８±３畅４０ｂ
ＡＳＴ（Ｕ／Ｌ）１３畅８０±２畅７３２１畅８３±２畅４１ａ１６畅６５±１畅５５ｂ
表１ 各组大鼠ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＭＤＡ与内毒素分析结果（ｘ珋±ｓ）
ＬＤＨ（Ｕ／Ｌ）２５９６畅８９±５３３畅７５３９８２畅３８±８１３畅９０ａ３３２１畅２４±６３３畅３６ｂ
ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／ｍｌ）２畅８３±０畅５７５畅０３±０畅７６ａ３畅５５±０畅５７ｂ
内毒素（ＥＵ／ｍｌ）０畅０７±０畅０３０畅２５±０畅１２ａ０畅１０±０畅０３ｂ
注：与正常对照组比较，ａＰ＜０畅０５；与模型组比较，ｂＰ＜０畅０５
・４６１３・
生长。同时嗜酸乳杆菌能黏附到人肠黏膜细胞，巩固肠道的生物屏障。此外，双歧杆菌可提高ＩｇＡ分泌，增强肠道抗感染能力。基于以上作用，本研究采用双歧三联活菌能有效抑制ＴＡＡ诱导的肝纤维化过程中内毒素的增高，减轻ＩＥＴＭ。
库普弗细胞（ＫＣ）是肝内定居的巨噬细胞，在内毒
［７］
素血症介导的肝损伤中起重要作用。内毒素激活ＫＣ，促使其合成及分泌大量炎症介质和细胞因子，导致肝脏炎症性损伤、肝组织缺血缺氧和脂质过氧化损伤。在此过程中，ＣＤ１４是介导内毒素激活ＫＣ的主要受体，对内毒素有高亲和力。正常情况下，肝组织ＣＤ１４的表达较弱，在内毒素血症动物模型中ＫＣ表面ＣＤ１４表达明显增高，参与内毒素清除的清道夫受体表达明显下降，因此造成ＫＣ的防御作用减弱，致肝损伤作用增［８］
强。文献报道，内毒素血症形成过程中，受内毒素刺激，ＣＤ１４的表达明显上调，且随内毒素水平的增高，ＣＤ１４的表达亦随之上调，两者呈一定的剂量依赖关［９唱１０］系。与相关报道相符，本研究表明正常大鼠肝组织仅有少量ＣＤ１４表达，在模型组ＴＡＡ诱导的ＩＥＴＭ形成后，ＣＤ１４阳性细胞在窦周明显增多。由此可知，内毒素通过激活ＫＣ介导的继发性肝损伤，ＣＤ１４起至关重要的作用，且ＩＥＴＭ形成后，内毒素可刺激ＣＤ１４表达明显上调。
本研究结果显示预防组同时应用双歧三联活菌，肝组织ＣＤ１４的表达较弱，作用机制可能为益生菌减轻ＩＥＴＭ，因此内毒素对ＣＤ１４刺激减弱，从而下调ＣＤ１４的表达。有文献报道，益生菌可减轻血浆炎性细胞因
［１１］
子水平，从而减弱ＩＥＴＭ对肝脏的损害，此作用是否是通过ＣＤ１４的表达下调起作用，尚不明确。我们推测益生菌减轻炎性细胞因子水平可能与其下调ＣＤ１４表达有关，待进一步研究证实。
模型组ＡＬＴ、ＡＳＴ升高，提示存在肝组织的持续性损伤，致肝细胞变性坏死、膜通透性增强。内毒素介导释放的一些细胞因子可使肝内微血管收缩，引起肝脏微循环障碍导致缺血、缺氧性肝损伤。ＬＤＨ存在于多组织器官，各种组织损伤ＬＤＨ可升高，其特异性差，但是敏感性较高。尤其在缺血性肝病中，ＬＤＨ较ＡＬＴ升
［１２］
高更为明显，是缺血性肝病的敏感指标。应用双歧
・４６１４・症．中华消化杂志，２００５，２５：３９８唱４００．
［２］ ＺｈａｏＨＹ，ＷａｎｇＨＪ，ＬｕＺ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈ［３］ 孙秀凤，单若冰．梗阻性黄疸与细菌／内毒素移位的关系及微生态
制剂干预．中国微生态学杂志，２００８，２０：９５唱９６．
［４］ ＧｕｅｒｒｅｒｏＨｅｒｎáｎｄｅｚＩ，ＴｏｒｒｅＤｅｌｇａｄｉｌｌｏＡ，ＶａｒｇａｓＶｏｒａｃｋｏｖａＦ，ｅｔａｌ．
１２０唱１２４．
Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｆｌｏｒａ，ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ，ａｎｄｃｉｒｒｈｏｓｉｓ．ＡｎｎＨｅｐａｔｏｌ，２００８，７：ｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓ．ＣｈｉｎＪＤｉｇＤｉｓ，２００４，５：６４唱６７．
三联活菌后，内毒素的降低，ＣＤ１４表达下调，减弱了内
毒素及其介导的细胞因子对肝组织的进一步损伤，因此上述酶学指标均较模型组显著降低。
ＩＥＴＭ形成后，引起的脂质过氧化损伤是慢性肝病发展至肝纤维化的重要因素之一。脂质过氧化的最终产物ＭＤＡ，可以间接反映自由基的形成、脂质过氧化程度和细胞损伤的程度。本研究预防组与模型组比较ＭＤＡ显著降低，可能与双歧三联活菌减轻ＩＥＴＭ，下调ＣＤ１４的表达，减轻内毒素介导的脂质过氧化性肝损伤有关。
病理组织学显示预防组肝细胞形态大致正常，肝小叶结构较完整，胶原纤维面积百分比显著低于模型组（Ｐ＜０畅０１），表明预防组肝纤维化程度较低，甚至并未形成肝纤维化。可见，双歧三联活菌制剂在一定程度上能够预防肝纤维化的形成，推测与以下作用有关：（１）补充肠道益生菌，维持微生态平衡，巩固肠黏膜屏障，从而降低内毒素的产生与吸收，减轻ＩＥＴＭ。（２）内毒素水平的降低，使肝组织脂质过氧化损伤减轻，肝脏微循环障碍得到改善，避免肝脏的持续性损伤。（３）ＣＤ１４表达下调，减弱了内毒素对ＫＣ的作用，进而削弱内毒素介导的继发性肝损伤。
参 考 文 献
［１］ 刘伟，蒋义斌，钟良，等．慢性肝病小肠细菌过度生长与内毒素血
［５］ 刘立新，韩德五，任大宾．肠源性内毒素血症在硫代乙酰胺所致肝
损伤发病中的作用．中华肝脏病杂志，２０００，８：１７４唱１７５．
［６］ ＬａｔａＪ，ＪｕｒａｎｋｏｖａＪ，ＫｏｐａｃｏｖａＭ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｉｎｈｅｐａｔｐｌｏｇｙ．Ｗｏｒｌｄ［７］ ＣｅｓａｒｏＣ，ＴｉｓｏＡ，ＰｒｅｔｅＡＤ．Ｇｕｔｍｉｃｒｏｂｉｏｔａａｎｄｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｉｎｃｈｒｏｎｉｃ［８］ ＪｉａｎｇＪ，ＸｉｅＧ，ＣｈｅｎＹ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｒａ唱ｈｅｐａｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｃａｖｅｎｇｅｒｒｅ唱
ｃｅｐｔｏｒａｎｄＣＤ１４ａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｌｏｃａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅ唱［９］ ＤｏｂｒｏｖｏｌｓｋａｉａＭＡ，ＶｏｇｅｌＳＮ．ＴｏｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｓＣＤ１４ａｎｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅ［１０］ 冯俊明，刘友生，史景泉，等．ＣＤ１４表达及其在库普弗细胞激活中
的意义．中华烧伤杂志，２００２，１８：１０７唱１１０．
［１１］ 黄培宁，邓有辉．微生态制剂对慢性肝衰竭患者肠道菌群、血浆内
毒素及细胞因子的影响．中华医院感染学杂志，２０１１，２１：３７９８唱３８００．
［１２］ ＫｏｔｏｈＫ，ＥｎｊｏｊｉＭ，ＫａｔｏＭ，ｅｔａｌ．Ａｎｅｗｐａｒａｍｅｔｅｒｕｓｉｎｇｓｅｒｕｍｌａｃｔａｔｅ
ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｎｄａｌａｎｉｎｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｌｅｖｅｌｉｓｕｓｅｆｕｌｆｏｒｐｒｅｄｉｃ唱ｔｉｎｇｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓａｔａｎｅａｒｌｙｓｔａｇｅｏｆａｃｕｔｅｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙ：Ａｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄ．ＣｏｍｐＨｅｐａｔｏｌ，２００８，７：６．
（收稿日期：２０１２唱０３唱２９）
ａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｄｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｂｙＬＰＳ．ＭｉｃｒｏｂｅｓＩｎｆｅｃｔ，２００２，４：９０３唱９１４．ｓｐｏｎｓｅｓｉｎｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａｉｎｍｉｃｅ．Ｓｈｏｃｋ，２００１，１６：７５唱８０．ｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓ．ＤｉｇＬｉｖＤｉｓ，２０１０，４３：４３１唱４３８．ＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１１，１７：２８９０唱２８９６．
（本文编辑：马超）
双歧三联活菌对硫代乙酰胺所致肝纤维化大鼠的预防作用及其机制的研究［Ｊ／ＣＤ］．中华临床医师杂志：电子版，２０１２，６ 史丹鹤，张海燕，刘立新．（１６）：４６１１唱４６１４．