※分析检测食品科学
2009, Vol. 30, No. 10261
白酒中甜蜜素检测方法的研究
臧光楼1，董明盛2,*
(1.宿迁市产品质量监督检验所，江苏 宿迁 223800；2.南京农业大学食品科技学院，江苏 南京 210095)摘 要：本实验采用高效液相色谱法(HPLC)检测白酒中甜蜜素含量，获得了空白白酒以及不同甜蜜素浓度酒样的高效液相色谱图。根据甜蜜素浓度和峰面积的线性关系建立了标准曲线，并求出回归方程：y＝0.0008x+0.0147(R2＝0.9991)；对比空白酒样和添加甜蜜素的酒样，差异明显，添加甜蜜素的酒样在7～8min时有明显的吸收峰，其中甜蜜素浓度为100μg/ml的酒样峰面积最大，随着甜蜜素浓度的减小，峰面积也逐渐减小；将不同甜蜜素浓度的酒样进行回收率和精密度分析，得回收率范围为97.04%～115%，经重复测定，得到RSD为4.1%，定性检测下限为1.5 μg/ml，定量检测下限为5.0μg/ml。关键词：甜蜜素；白酒；高效液相色谱法；检测
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) for Detection of Cyclamate in Liquor
ZANG Guang-lou1，DONG Ming-sheng2,*
(1. Suqian Product Quality Supervision and Testing Institute, Suqian 223800, China；2. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)
Abstract ：A HPLC method was developed for detect cyclamate content in liquor. The regression equation between peak area(y) and cyclamate concentration (x) was established as following: y = 0.0008x + 0.0147(R2 = 0.9991). The recovery rates cyclamateat the spiked amounts of 2 to 100 μg/ml ranged 97% to 115%, and the relative standard deviation (RSD) of 6 repeated detectionswas 4.1%. The limits of quantitative detection and quantitative detection were 1.5 μg/ml and 5.0 μg/ml, respectively.Key words：cyclamate；liquor；HPLC；detection
中图分类号：TS202.1 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)10-0261-04
甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)是我国广泛使用的甜味剂之一，已应用于食品加工业、制药业、农业等各领域。由于过多食用甜蜜素会对人体产生不良影响，因此在实际使用时需严格控制其添加量[1-3]。
目前甜蜜素的国家测定标准是GB/T5009.97，该标准是针对食品中甜蜜素的通用检测方法。由于检测时白酒中环己醇及环己基的类似物质可能与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，而被误认为是环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠的反应，造成酒中含有甜蜜素的假象，因此，国标对于甜蜜素的检测方法并不适用于白酒中甜蜜素的检测[4-5]。
有关白酒中甜蜜素的检测方法目前报道的只有液相色谱-质谱联用法，由于液相色谱-质谱联用设备昂贵，普及性并不高。液相色谱在一般的检验部门均有，但目前未见采用液相色谱法检测白酒中甜蜜素的报道[16-17]。
收稿日期：2009-02-01
基金项目：江苏省质量技术监督局资助项目(KJ083130)
本实验旨在研究采用液相色谱法检测白酒中甜蜜素的含量，以期为我国修订国家标准中酒类甜蜜素的检测方法提供参考。１1.1
材料与方法
材料与试剂
白酒样品为自配，是将无水乙醇溶液与水按50:50(V/V)配制而成。
甜蜜素标准品 美国Supelco公司；除甲醇为国产色谱纯外，其余均为国产分析纯试剂。1.2
仪器
电子分析天平 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；101-2A型电热鼓风干燥箱 南京市长江电器仪器
厂；HP1050高效液相色谱仪 惠普上海分析仪器有限公司。
作者简介：臧光楼(1966-)，男，硕士研究生，研究方向为食品微生物及生物技术。E-mail：[email protected]*E-mail
262 2009, Vol. 30, No. 10
1.31.3.1
方法
食品科学
研究碳酸氢钠用量对测定结果的影响。1.3.6
※分析检测
溶液配制1000 μg/ml甜蜜素标准储备液：精确称取100.0mg
衍生物的稳定性
按方法1.3.2和1.3.3中方法，将10μg/ml 甜蜜素标
环已基氨基磺酸钠，用白酒定容至100ml，配制成浓度
为1000 μg/ml的甜蜜素标准储备液。
系列浓度甜蜜素标准溶液：从1000 μg/ml的甜蜜素标准储备液中准确吸取2、5、10ml溶液，分别定容至100ml，配制成20、50、100 μg/ml的甜蜜素标准溶液；从100 μg/ml的甜蜜素标准溶液中准确吸取5、10ml溶液，分别定容至100ml，配制成5、10 μg/ml的甜蜜素标准溶液；从20 μg/ml的甜蜜素标准溶液中准确吸取10ml，定容至100ml，配制成2μg/ml的甜蜜素标准溶液。1.3.2
样品处理步骤
准确吸取适量样品溶液于分液漏斗中→加入2ml适当浓度的硫酸→加入5ml正己烷→加入适量次氯酸钠溶液(有效氯含量5%以上) →剧烈振荡后分层，除去水相→加入适量5%(W/V)的碳酸氢钠溶液→剧烈振荡，分层后除去水相→抽取有机层清液放入小试剂瓶中保存→贴好标签，放入冰箱待测。1.3.3
白酒中甜蜜素检测的液相色谱法
采用HP1050高效液相色谱仪检测白酒中的甜蜜素。具体操作条件为：ODS Hypersil色谱柱(125mm×4mm，5μm)；流动相：甲醇-水80:20(V/V)；流速：1.0ml/min；检测波长：314nm；进样量：10 μl；样品制备：样品按实验1.3.2中步骤处理后，用微孔过滤膜(0.45μm)过滤后供进样。1.3.4
空白白酒中甜蜜素含量测定
准确吸取10ml空白白酒样品于分液漏斗中，按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，得高效液相色谱图。1.3.5
样品处理关键步骤对甜蜜素检测的影响
准溶液经处理后的待测液于室温下放置。间隔一定时间(分别间隔0、1、4、6、8、12h)测定其峰面积，观察生成的N,N-二氯环己胺的稳定性。1.3.7
干扰实验
按方法1.3.2和1.3.3中方法，于10 μg/ml的甜蜜素
标准溶液中分别加入200μg/ml糖精钠、1000 μg/ml苯甲酸和山梨酸，测定这些干扰物质对甜蜜素测定的影响。1.3.8
甜蜜素标准曲线的绘制
将100、50、20、10、5、2μg/ml的甜蜜素标准溶液均按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，得相应谱图。以峰面积为横坐标，对应甜蜜素浓度为纵坐标作图，即得甜蜜素标准曲线。1.3.9
甜蜜素回收率计算及精密度实验
对100、50、20、10、5、2μg/ml不同浓度的甜蜜素酒样按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，对照甜蜜素标准曲线得各实测值，与加标值进行比较，即可进行回收率计算。
将10 μg/ml甜蜜素酒样按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，重复测定六次，求出精密度。1.3.10
检测下限的测定
取不含甜蜜素的白酒10ml作为空白试液，按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，重复实验10次，以空白结果标准偏差的3倍求得定性检测下限值，以空白结果标准偏差的l0倍求得定量检测下限值。２2.1
结果与分析
空白白酒的高效液相色谱图
1.3.5.1pH值的影响
准确吸取1.0ml 20μ g/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，分别加入2ml体积分数为10%、20%、30%、40%、50%、60%的硫酸，按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，研究不同浓度硫酸处理对测定结果的影响。1.3.5.2次氯酸钠用量的影响
准确吸取1.0ml 20 μg/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，加入2ml适量浓度硫酸后，再分别加入0.5、1、2、3ml次氯酸钠溶液，按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，研究不同用量次氯酸钠溶液处理对测定结果的影响。1.3.5.3
碳酸氢钠用量的影响
准确吸取1.0ml 20μ g/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，按1.3.2和1.3.3中方法对样品进行处理和测定，
峰高(V)
0.00060.00040.0002
00
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
时间(min)
图１ 空白白酒的高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of
blank liquor
从图1空白白酒(未加甜蜜素)的高效液相色谱图可以看出，除了在约2min处有溶剂峰以外，其他时间谱线基本在基线附近，图像平稳清晰，无其他峰的出现。由于甜蜜素的保留时间为7～8min，所以空白酒样不含
※分析检测
甜蜜素。2.22.2.1
食品科学
2009, Vol. 30, No. 10263
化，峰面积下降仅2.03%。显示其在室温下稳定，能满足分析要求。2.4
干扰实验
在测定条件下，于10μg/ml的甜蜜素标准溶液中加入各种干扰物质，测定结果表明，在相对标准偏差小于5%时，200μg/ml糖精钠、1000μg/ml苯甲酸和山梨酸均不干扰甜蜜素测定。2.5
5022280
6017828
浓度(μg/ml)
[**************]
[***********][***********]00
样品处理条件对检测白酒中甜蜜素含量的影响pH值的影响结果
甜蜜素在强酸条件下才能与次氯酸钠进行氯代反
应， 将环己基氨基磺酸钠变成N,N-二氯代环己基胺。采用硫酸调pH值，测定结果见表1。
表１ ｐＨ值对分析测定结果的影响
Table 1 Effects of pH value on detection of cyclamate硫酸浓度(%)峰面积
1011520
2016690
3012005
4016615
甜蜜素标准曲线的绘制
根据甜蜜素浓度和锋面积的线性关系，可以建立
注：硫酸添加量都为2ml。
y＝0.0008x＋0.0147R2＝0.9991
从表1可知， 加入2ml 50%硫酸时峰面积最大、灵敏度最高。故采用50%硫酸2ml 作为调节pH值的最佳量。2.2.2
次氯酸钠用量的影响结果
次氯酸钠在强酸条件下，才能将环己基氨基磺酸钠
峰面积
图２ 甜蜜素标准曲线图
Fig.2 Standard curve of cyclamate of HPLC detection
衍生为环己酰胺。因此次氯酸钠加入量直接影响衍生物的含量。加入量少，衍生不完全、测定结果偏低；加入量过大，会产生杂质峰。
表２ 次氯酸钠对分析测定结果的影响
Table 2 Effects of sodium hypochlorite dose on detection of
cyclamate
次氯酸钠加入量(ml)
峰面积
0.514508
1.016615
2.020872
3.017361
标准曲线，并求出回归方程为：y＝0.0008x+0.0147，R2＝0.9991。2.6
甜蜜素回收率及精密度实验结果
通过计算，得回收率范围为97.04%～115%。经重
表４ 回收率实验结果
Table 4 Recovery rate of cyclamate at different spiked amounts加标值(μg/ml)
100106.12106.12
5048.5297.04
2022.36111.8
109.8198.1
55.75115
22.04102
从表2可知，次氯酸钠加入量2.00ml较为合适，故采用次氯酸钠加入量为2.00ml。2.2.3
碳酸氢钠用量的影响结果
环己基氨基磺酸钠在强酸条件下与次氯酸钠反应生
实测值(μg /ml)回收率(%)
注：本底值为0μg/ml。
表５ 10μg/ml甜蜜素酒样重复六次测定结果
Ｔable 5 Six repeated detection results cyclamate content in
spiked liquor at 10 μg/ml
测定值(μg/ml)
9.82，10.05，9.90，9.85，9.88，9.96
平均值(μg/ml)
9.91
RSD(%)4.1
成N,N-二氯环己基胺，经正己烷萃取后，仍残留过量
的次氯酸钠。残留的次氯酸钠必须除去，否则会损害色谱柱。实验用5%(W/V)碳酸氢钠25ml洗涤1 次，可除去过量的次氯酸钠，或每次用20ml纯水洗涤3～4次，也可除去残留的次氯酸钠。故采用5%碳酸氢钠25ml，洗涤1次。
表３ N, N-二氯己胺稳定性实验(n＝3)
Table 3 Results of stability experiment of N,N-dichloro-cyclohexylamine
放置时间(h)峰面积
016250
116205
416100
616007
815980
1215920
复测定，得到RSD为4.1%。2.7
检测下限的测定
取不含甜蜜素的白酒10ml作为空白试液，采用高效液相色谱法测定其中甜蜜素含量，结果求得定性检测下限为1.5μg/ml，以空白结果标准偏差的l0倍求得定量检测下限为5.0μg/ml。３3.1
结 论
本方法采用氯代反应，在酸性条件下，把环已基
2.3衍生物的稳定性
由表3可知，在12h内N,N- 二氯环己胺基本无变
氨基磺酸钠转变成N,N-二氯代环已基胺，由于氨基没有
264 2009, Vol. 30, No. 10
食品科学
[3]
※分析检测
丢失，不会产生GB/T5009.97方法中有环己醇 、环已基类化合物引起的假阳性，因而结果的判定较为准确。3.2
白酒中有氨基酸营养成分，在样品处理条件下也
LYWDF. 关于出口食品中甜蜜素、糖精钠等的安全卫生问题[EB/OL].(2004-8-22) [2009-02-01]. http://bbs. foodmate.net/thread-11292-1-1.html.
[4][5][6][7][8][9][10][11][12][13][14][15]
李欣玉. 甜蜜素查验方法不适沱牌白酒质量可靠[EB/OL]. (2004-05-17) [2009-02-01]. www.people.com.cn.
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会吸收氯气发生氯代反应。随着次氯酸钠加入量增加，氨基酸峰和甜蜜素峰会增高，但当次氯酸钠溶液(有效氯含量5%以上)增加到2ml后，甜蜜素峰面积基本不变，因此选择次氯酸钠的加入量为2ml。50%(V/V)硫酸2ml作为调节pH值的最佳量，同时采用5%碳酸氢钠25ml洗涤1 次。结果显示其在室温下稳定，能满足分析要求，且不受糖精钠、苯甲酸和山梨酸的干扰。3.3
利用次氯酸钠将白酒中的甜蜜素转化为N,N-二氯代环已基胺，经正己烷萃取，用高效液相色谱法测定，线形范围宽，灵敏度、准确度及精密度均较高，能满足国家标准对甜蜜素检测的要求。3.4
通过实验得到该方法白酒中甜蜜素标准曲线方程为：y＝0.0008x+0.0147，R2＝0.9991。通过计算，得到回收率范围在97.04%～115%。经重复测定，得到RSD为4.1%。定性检测下限为1.5μg/ml，定量检测下限为5.0μg/ml。
参考文献：
[16]
[1][2]
食品添加剂环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)[EB/OL]. (2006-08-26)[2009-02-01]. http://www.cdfpm.cn/faic.cn/saf/saf.asp?id＝42.GB 2760—1996食品添加剂使用卫生标准[S].
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白酒中甜蜜素检测方法的研究
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(1.宿迁市产品质量监督检验所，江苏 宿迁 223800；2.南京农业大学食品科技学院，江苏 南京 210095)摘 要：本实验采用高效液相色谱法(HPLC)检测白酒中甜蜜素含量，获得了空白白酒以及不同甜蜜素浓度酒样的高效液相色谱图。根据甜蜜素浓度和峰面积的线性关系建立了标准曲线，并求出回归方程：y＝0.0008x+0.0147(R2＝0.9991)；对比空白酒样和添加甜蜜素的酒样，差异明显，添加甜蜜素的酒样在7～8min时有明显的吸收峰，其中甜蜜素浓度为100μg/ml的酒样峰面积最大，随着甜蜜素浓度的减小，峰面积也逐渐减小；将不同甜蜜素浓度的酒样进行回收率和精密度分析，得回收率范围为97.04%～115%，经重复测定，得到RSD为4.1%，定性检测下限为1.5 μg/ml，定量检测下限为5.0μg/ml。关键词：甜蜜素；白酒；高效液相色谱法；检测
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) for Detection of Cyclamate in Liquor
ZANG Guang-lou1，DONG Ming-sheng2,*
(1. Suqian Product Quality Supervision and Testing Institute, Suqian 223800, China；2. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)
Abstract ：A HPLC method was developed for detect cyclamate content in liquor. The regression equation between peak area(y) and cyclamate concentration (x) was established as following: y = 0.0008x + 0.0147(R2 = 0.9991). The recovery rates cyclamateat the spiked amounts of 2 to 100 μg/ml ranged 97% to 115%, and the relative standard deviation (RSD) of 6 repeated detectionswas 4.1%. The limits of quantitative detection and quantitative detection were 1.5 μg/ml and 5.0 μg/ml, respectively.Key words：cyclamate；liquor；HPLC；detection
中图分类号：TS202.1 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)10-0261-04
甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)是我国广泛使用的甜味剂之一，已应用于食品加工业、制药业、农业等各领域。由于过多食用甜蜜素会对人体产生不良影响，因此在实际使用时需严格控制其添加量[1-3]。
目前甜蜜素的国家测定标准是GB/T5009.97，该标准是针对食品中甜蜜素的通用检测方法。由于检测时白酒中环己醇及环己基的类似物质可能与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，而被误认为是环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠的反应，造成酒中含有甜蜜素的假象，因此，国标对于甜蜜素的检测方法并不适用于白酒中甜蜜素的检测[4-5]。
有关白酒中甜蜜素的检测方法目前报道的只有液相色谱-质谱联用法，由于液相色谱-质谱联用设备昂贵，普及性并不高。液相色谱在一般的检验部门均有，但目前未见采用液相色谱法检测白酒中甜蜜素的报道[16-17]。
收稿日期：2009-02-01
基金项目：江苏省质量技术监督局资助项目(KJ083130)
本实验旨在研究采用液相色谱法检测白酒中甜蜜素的含量，以期为我国修订国家标准中酒类甜蜜素的检测方法提供参考。１1.1
材料与方法
材料与试剂
白酒样品为自配，是将无水乙醇溶液与水按50:50(V/V)配制而成。
甜蜜素标准品 美国Supelco公司；除甲醇为国产色谱纯外，其余均为国产分析纯试剂。1.2
仪器
电子分析天平 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；101-2A型电热鼓风干燥箱 南京市长江电器仪器
厂；HP1050高效液相色谱仪 惠普上海分析仪器有限公司。
作者简介：臧光楼(1966-)，男，硕士研究生，研究方向为食品微生物及生物技术。E-mail：[email protected]*E-mail
262 2009, Vol. 30, No. 10
1.31.3.1
方法
食品科学
研究碳酸氢钠用量对测定结果的影响。1.3.6
※分析检测
溶液配制1000 μg/ml甜蜜素标准储备液：精确称取100.0mg
衍生物的稳定性
按方法1.3.2和1.3.3中方法，将10μg/ml 甜蜜素标
环已基氨基磺酸钠，用白酒定容至100ml，配制成浓度
为1000 μg/ml的甜蜜素标准储备液。
系列浓度甜蜜素标准溶液：从1000 μg/ml的甜蜜素标准储备液中准确吸取2、5、10ml溶液，分别定容至100ml，配制成20、50、100 μg/ml的甜蜜素标准溶液；从100 μg/ml的甜蜜素标准溶液中准确吸取5、10ml溶液，分别定容至100ml，配制成5、10 μg/ml的甜蜜素标准溶液；从20 μg/ml的甜蜜素标准溶液中准确吸取10ml，定容至100ml，配制成2μg/ml的甜蜜素标准溶液。1.3.2
样品处理步骤
准确吸取适量样品溶液于分液漏斗中→加入2ml适当浓度的硫酸→加入5ml正己烷→加入适量次氯酸钠溶液(有效氯含量5%以上) →剧烈振荡后分层，除去水相→加入适量5%(W/V)的碳酸氢钠溶液→剧烈振荡，分层后除去水相→抽取有机层清液放入小试剂瓶中保存→贴好标签，放入冰箱待测。1.3.3
白酒中甜蜜素检测的液相色谱法
采用HP1050高效液相色谱仪检测白酒中的甜蜜素。具体操作条件为：ODS Hypersil色谱柱(125mm×4mm，5μm)；流动相：甲醇-水80:20(V/V)；流速：1.0ml/min；检测波长：314nm；进样量：10 μl；样品制备：样品按实验1.3.2中步骤处理后，用微孔过滤膜(0.45μm)过滤后供进样。1.3.4
空白白酒中甜蜜素含量测定
准确吸取10ml空白白酒样品于分液漏斗中，按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，得高效液相色谱图。1.3.5
样品处理关键步骤对甜蜜素检测的影响
准溶液经处理后的待测液于室温下放置。间隔一定时间(分别间隔0、1、4、6、8、12h)测定其峰面积，观察生成的N,N-二氯环己胺的稳定性。1.3.7
干扰实验
按方法1.3.2和1.3.3中方法，于10 μg/ml的甜蜜素
标准溶液中分别加入200μg/ml糖精钠、1000 μg/ml苯甲酸和山梨酸，测定这些干扰物质对甜蜜素测定的影响。1.3.8
甜蜜素标准曲线的绘制
将100、50、20、10、5、2μg/ml的甜蜜素标准溶液均按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，得相应谱图。以峰面积为横坐标，对应甜蜜素浓度为纵坐标作图，即得甜蜜素标准曲线。1.3.9
甜蜜素回收率计算及精密度实验
对100、50、20、10、5、2μg/ml不同浓度的甜蜜素酒样按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，对照甜蜜素标准曲线得各实测值，与加标值进行比较，即可进行回收率计算。
将10 μg/ml甜蜜素酒样按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，重复测定六次，求出精密度。1.3.10
检测下限的测定
取不含甜蜜素的白酒10ml作为空白试液，按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，重复实验10次，以空白结果标准偏差的3倍求得定性检测下限值，以空白结果标准偏差的l0倍求得定量检测下限值。２2.1
结果与分析
空白白酒的高效液相色谱图
1.3.5.1pH值的影响
准确吸取1.0ml 20μ g/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，分别加入2ml体积分数为10%、20%、30%、40%、50%、60%的硫酸，按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，研究不同浓度硫酸处理对测定结果的影响。1.3.5.2次氯酸钠用量的影响
准确吸取1.0ml 20 μg/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，加入2ml适量浓度硫酸后，再分别加入0.5、1、2、3ml次氯酸钠溶液，按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，研究不同用量次氯酸钠溶液处理对测定结果的影响。1.3.5.3
碳酸氢钠用量的影响
准确吸取1.0ml 20μ g/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，按1.3.2和1.3.3中方法对样品进行处理和测定，
峰高(V)
0.00060.00040.0002
00
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
时间(min)
图１ 空白白酒的高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of
blank liquor
从图1空白白酒(未加甜蜜素)的高效液相色谱图可以看出，除了在约2min处有溶剂峰以外，其他时间谱线基本在基线附近，图像平稳清晰，无其他峰的出现。由于甜蜜素的保留时间为7～8min，所以空白酒样不含
※分析检测
甜蜜素。2.22.2.1
食品科学
2009, Vol. 30, No. 10263
化，峰面积下降仅2.03%。显示其在室温下稳定，能满足分析要求。2.4
干扰实验
在测定条件下，于10μg/ml的甜蜜素标准溶液中加入各种干扰物质，测定结果表明，在相对标准偏差小于5%时，200μg/ml糖精钠、1000μg/ml苯甲酸和山梨酸均不干扰甜蜜素测定。2.5
5022280
6017828
浓度(μg/ml)
[**************]
[***********][***********]00
样品处理条件对检测白酒中甜蜜素含量的影响pH值的影响结果
甜蜜素在强酸条件下才能与次氯酸钠进行氯代反
应， 将环己基氨基磺酸钠变成N,N-二氯代环己基胺。采用硫酸调pH值，测定结果见表1。
表１ ｐＨ值对分析测定结果的影响
Table 1 Effects of pH value on detection of cyclamate硫酸浓度(%)峰面积
1011520
2016690
3012005
4016615
甜蜜素标准曲线的绘制
根据甜蜜素浓度和锋面积的线性关系，可以建立
注：硫酸添加量都为2ml。
y＝0.0008x＋0.0147R2＝0.9991
从表1可知， 加入2ml 50%硫酸时峰面积最大、灵敏度最高。故采用50%硫酸2ml 作为调节pH值的最佳量。2.2.2
次氯酸钠用量的影响结果
次氯酸钠在强酸条件下，才能将环己基氨基磺酸钠
峰面积
图２ 甜蜜素标准曲线图
Fig.2 Standard curve of cyclamate of HPLC detection
衍生为环己酰胺。因此次氯酸钠加入量直接影响衍生物的含量。加入量少，衍生不完全、测定结果偏低；加入量过大，会产生杂质峰。
表２ 次氯酸钠对分析测定结果的影响
Table 2 Effects of sodium hypochlorite dose on detection of
cyclamate
次氯酸钠加入量(ml)
峰面积
0.514508
1.016615
2.020872
3.017361
标准曲线，并求出回归方程为：y＝0.0008x+0.0147，R2＝0.9991。2.6
甜蜜素回收率及精密度实验结果
通过计算，得回收率范围为97.04%～115%。经重
表４ 回收率实验结果
Table 4 Recovery rate of cyclamate at different spiked amounts加标值(μg/ml)
100106.12106.12
5048.5297.04
2022.36111.8
109.8198.1
55.75115
22.04102
从表2可知，次氯酸钠加入量2.00ml较为合适，故采用次氯酸钠加入量为2.00ml。2.2.3
碳酸氢钠用量的影响结果
环己基氨基磺酸钠在强酸条件下与次氯酸钠反应生
实测值(μg /ml)回收率(%)
注：本底值为0μg/ml。
表５ 10μg/ml甜蜜素酒样重复六次测定结果
Ｔable 5 Six repeated detection results cyclamate content in
spiked liquor at 10 μg/ml
测定值(μg/ml)
9.82，10.05，9.90，9.85，9.88，9.96
平均值(μg/ml)
9.91
RSD(%)4.1
成N,N-二氯环己基胺，经正己烷萃取后，仍残留过量
的次氯酸钠。残留的次氯酸钠必须除去，否则会损害色谱柱。实验用5%(W/V)碳酸氢钠25ml洗涤1 次，可除去过量的次氯酸钠，或每次用20ml纯水洗涤3～4次，也可除去残留的次氯酸钠。故采用5%碳酸氢钠25ml，洗涤1次。
表３ N, N-二氯己胺稳定性实验(n＝3)
Table 3 Results of stability experiment of N,N-dichloro-cyclohexylamine
放置时间(h)峰面积
016250
116205
416100
616007
815980
1215920
复测定，得到RSD为4.1%。2.7
检测下限的测定
取不含甜蜜素的白酒10ml作为空白试液，采用高效液相色谱法测定其中甜蜜素含量，结果求得定性检测下限为1.5μg/ml，以空白结果标准偏差的l0倍求得定量检测下限为5.0μg/ml。３3.1
结 论
本方法采用氯代反应，在酸性条件下，把环已基
2.3衍生物的稳定性
由表3可知，在12h内N,N- 二氯环己胺基本无变
氨基磺酸钠转变成N,N-二氯代环已基胺，由于氨基没有
264 2009, Vol. 30, No. 10
食品科学
[3]
※分析检测
丢失，不会产生GB/T5009.97方法中有环己醇 、环已基类化合物引起的假阳性，因而结果的判定较为准确。3.2
白酒中有氨基酸营养成分，在样品处理条件下也
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会吸收氯气发生氯代反应。随着次氯酸钠加入量增加，氨基酸峰和甜蜜素峰会增高，但当次氯酸钠溶液(有效氯含量5%以上)增加到2ml后，甜蜜素峰面积基本不变，因此选择次氯酸钠的加入量为2ml。50%(V/V)硫酸2ml作为调节pH值的最佳量，同时采用5%碳酸氢钠25ml洗涤1 次。结果显示其在室温下稳定，能满足分析要求，且不受糖精钠、苯甲酸和山梨酸的干扰。3.3
利用次氯酸钠将白酒中的甜蜜素转化为N,N-二氯代环已基胺，经正己烷萃取，用高效液相色谱法测定，线形范围宽，灵敏度、准确度及精密度均较高，能满足国家标准对甜蜜素检测的要求。3.4
通过实验得到该方法白酒中甜蜜素标准曲线方程为：y＝0.0008x+0.0147，R2＝0.9991。通过计算，得到回收率范围在97.04%～115%。经重复测定，得到RSD为4.1%。定性检测下限为1.5μg/ml，定量检测下限为5.0μg/ml。
参考文献：
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