2008年5月第5卷第15期
・基础研究・
蝉蜕的抗惊厥作用
安磊
(焦作市第二人民医院药剂科,河南焦作467000)
【摘要】目的:研究蝉蜕的抗惊厥活性。。方法:依次采用95%乙醇和水对蝉蜕进行提取,分别制备蝉蜕醇提物和水提物;然后采用戊四唑(PTZ)致小鼠惊厥模型对蝉蜕醇提物和水提物的抗惊厥活性进行考察。结果:蝉蜕醇提物对小
鼠的惊厥发生率无影响。在4、8g/ks时可明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期,并延长惊厥小鼠的死亡时间,降低死亡率。蝉蜕水提物4、8g/kg能显著降低小鼠惊厥发生率,且明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期,延长惊厥小鼠的死亡时间,降低死亡率。作用强于蝉蜕醇提物实验组,但弱于苯巴比妥钠实验组。结论:蝉蜕醇提物和水提物均有抗惊厥作用,其中水提物的直接抑制作用显著,且抗惊厥作用强度明显强于醇提物。【关键词】蝉蜕;抗惊厥【中图分类号】R971+6【文献标识码1B【文章编号】1673—7210(2008)05(c)一035—02Anticonvulsantactivitvof
ANLei
Periostracum
Cicadae
467000,China)
ex・
(Department
of
Pharmacy,,11leSecondPeople"sHospitalofJiaozuo,Jiaozuo
anticonvulsant
[Abstract]Objective:Tostudythe
tractionofPeriostracumtlle
no
activityofPeriostracumCicadae.Methods:Thealcoholandwater
water
Cicadae(PC)werepreparedbyalcoholand
in
mice.Butit
respectively.Andtheanticonvulsantactivityof
alcoholextractionshowed
alcoholandwaterextractionwereobservedinmicewithP1【Z—induced
effect
on
seizures.Results:The
seizurerate
prolongedremarkablytheincubationperiodofseizuresandthedying-timeof
at
mice诵tllPFZ-induced
seizures
andreducedmortality
4
g/ksand8g/kg.7111ewaterextraction,4g/kgand8s/ks,in-
hibitedremarkablythePTZ-inducedseizuresinmice,andprolongedremarkablytheincubationperiodofseizuresandthedying—timeof
mice
withseizures,reducingmortality
as
well.Conclusion:ThealcoholandwaterextractionofPCboth
haveanticonvulsantactivities.Betweenthem,thewaterextractionplaytheroledirectly,anditsanticonvulsantactivityis
stronger
thantheother’s.
[Keywords]PeriostracumCicadae;Anticonvulsant
蝉蜕fPeriostracumCicadae)为蝉科昆虫黑蚱Cryptotym.
panapustulata
1.2蝉蜕提取物的制备
Fabricius的若虫羽化时脱落的皮壳。具有散取蝉蜕的干燥粗粉1000g,用2000ml95%乙醇加热
风、解痉之功效,用于风热感冒、惊风抽搐。在中医辨证用方中配蝉蜕治疗各型癫痫,尤其是外伤性癫痫的早期治疗中,控制惊厥效果颇佳口1。现代药理实验证明,蝉蜕醇提物能延长士的宁所致惊厥的潜伏期,并延长惊厥动物的存活期,降低死亡率回。而蝉蜕中主要成分为水溶性氨基酸、多糖类及多种微量元素[3-03.其脂溶性成分较少。发挥着抗氧化、抗炎等作用川。为考察其水溶性组分的抗惊厥作用,本实验研究了蝉蜕水提物对化学物质所致小鼠惊厥的影响。
回流3次,每次2h,将乙醇提取液除去溶剂后。得蝉蜕醇提物23g;将药渣加10倍量水煎煮提取3次,每次0.5h。将水,提取液水浴加热浓缩至流浸膏,于35℃真空干燥2h。得蝉蜕水提物97g。临用前分别将蝉蜕醇提物用30%聚乙二醇均匀悬浮、蝉蜕水提物用水配制成所需浓度。1.3抗惊厥作用研究圈
研究蝉蜕醇提物和水提物对Iyllz致小鼠惊厥的影响.取小鼠120只,随机分为8组,每组15只。第1组腹腔注射(咖)生理盐水,第2组苯巴比妥钠50rag/ks,/p,第3,4,5组分别应用蝉蜕醇提物2,4,8g/kg,ip,第6,7,8组分别应用蝉蜕水提物2,4,8g/ks,fp,各组注射容积均为0.1ml/10g。给药
30
1材料与方法
1.1材料
1410D一2E真空干燥箱,美国SHELNB;戊四唑(PTZ),Sigma公司;苯巴比妥钠,上海新亚药业有限公司,批号:020608;本实验所用化学试剂均为分析纯。
实验用药材为2007年9月购于开封市药材公司,经河南大学药学院生药教研室鉴定为节肢动物门蝉科昆虫黑蚱
CryptotyrapanapustulataFabricius的若虫羽化时脱落的皮壳,
min后,给小鼠PTZ100mg/kg诱发惊厥,fp,观察30
lllin,
记录小鼠阵发性惊厥的发生率、发生惊厥的潜伏期、死亡时间和死亡率。
阵挛性惊厥以小鼠前肢阵挛为指标,发生惊厥的潜伏期
为从给PTZ开始到小鼠第一次出现阵挛性惊厥的时间.死亡
时间为从给PTZ开始到死亡的时间。1.4统计分析
结果均以@虹)表示,组间进行t检验分析,SPSSll.0自动处理。
健康昆明种小鼠,雌雄兼有,体重18—22g.由河南省医学实验动物中心提供。
【作者简介】安磊(1972一),男,汉族,河南焦作人,现任焦作市第二人民医院药剂科主管药师,主要从事天然物活性成分的研究与开发。
CHINAMEDICALHERALD巾国医药写报35
・基础研究・
2结果
2008年5月第4卷第15期
鉴于其水提物的抗惊厥作用明显强于醇提物.有理由推测其抗惊厥活性成分为水溶性成分。醇提物也是由于含有少量的水溶性活性成分而显示一定的抗惊厥作用。
另外,与蝉蜕具有相同功效的天麻(息风止痉之功效)的抗惊厥作用有待较详细而深入地研究和报道.天麻对实验性癫痫的治疗机制与调整中枢不同部位儿茶酚胺的代谢有关191。蝉蜕的作用机制是否与天麻相似.尚有待进一步研究。
f参考文献】
【1】杨林,陈世国,颜永书.大剂量蝉蜕在临床应用中的体会叨.中医药研
究,1996,(4):57—58.
蝉蜕醇提物的三个剂量组对小鼠的惊厥发生率均无影
响,在4、8s/ks时可明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期。并延长惊厥小鼠的死亡时间,降低死亡率。蝉蜕水提物4、8g/kg能显著降低小鼠惊厥发生率。但不如苯巴比妥钠的作用强:蝉蜕水提物4、8#kg时还明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期.并延长惊厥小鼠的死亡时间,降低死亡率.这些效应随着剂量的增强而增强,且均强于蝉蜕醇提物实验组.但弱于苯巴比妥钠实验组。见表1。
表1蝉蜕醇提物和水提物对PTz致小鼠惊厥的影响(i蜘)
剂量惊厥发生率潜伏期死亡时间死亡率
组别、
f型蛐丝)i生i尘f丝!
生理盐水一100.0012±625±793.33苯巴比妥钠蝉蜕醇提物
0.05248
40.00100.00100.00
100.00100.00
【2】吴葆金.蝉蜕醇提物中枢药理作用的研究叨.中草药,1986,17(11):21-23.【3】袁伯勇.蝉蜕中氨基酸及微量元素的分析叨.中国中药杂志,1990,15
(12):35-36.
【4】崔国印,周成明,王兴成.蛤蚧、斑蝥、僵蚕和蝉蜕微量元素分析初报
17±7・+12±713±3"14±6"13±914±5"15±8}+
46±6”
24+5
13.3393.33
硼.中药材,1991,14(2):14—16.
【5】黄金城,杨其蕴,梁诗.蝉蜕制备盐酸氨基葡萄糖的研究【J】.天然产物
研究与开发,1993,5(3):28-29.
【6】杨其蕴,黄金城,何蔚币.蝉蜕的甲壳质和壳聚糖的研究[J】.中国中药
杂志,1994,19(6):360—361.
【7】XuMZ。LeeWS,HanJM,etnf.Antioxidamandanti-inflanmmtory
ties
activi・
26±7*86.6729±4}426±829±8・‘31±5・十
73.3386.6773.3353.33
蝉蜕水提物248
86.6780.00
ofN-acetyldopaminedimmersfromPefiostracum
Cicadae叫.Bioorg
与生理盐水组比较,+P<O.05,}+P<O.Ol
Med
Chem,2006,14(23):7826-7834.
【8】徐淑云.药理实验方法学【M】.第2版.北京:人民卫生出版社,1991.
3讨论
蝉蜕醇提物和水提物均有抗惊厥作用.其中水提物的直接抑制作用显著(降低小鼠惊厥发生率),且抗惊厥作用强度明显强于醇提物。由于蝉蜕中脂溶性成分较少,且未见报道其脂溶性成分具有抗惊厥活性,而蝉蜕的水溶性成分较多,
676_677.
【9】ojemellnLM,NelsonWL,ShinDS,et以.Tiannla,强ancientChinese
herb,offers
newoptions
forthetreatmentof
epilepsy
andothereondi-
tions[J].EpilepsyBehav,2006,8(2):376-383.
(收稿日期:2008—04—29)
(上接第19页)
8
1.6统计学方法
采用t检验。2结果
结果见表1。
表1四逆散对失眠大鼠睡眠时相的影响(i蜘,min)
h内记录EEG和EMG的信号。描记时间为9:30—17:30,分
析比较大鼠在电刺激前、刺激后及给药后不同时期的脑电变化特征。
与刺激前比较,}+P<0.05;与刺激后比较,”P<O.01,愀O.05
从表1可知,电刺激后的大鼠的W、SWSl、SWS2、REMS
时相。其中SWS对机体的发育和疲劳的恢复起着重要的作用,REMS则与脑发育和智力的发达关系密切。通过对失眠大鼠EEG的描记与分析,表明四逆散水煎液可延长失眠大鼠的总睡眠时间(TST),其中使SWS:和REMS的延长都具有显著性的差异,并使觉醒时间(W)明显减少。实验结果表明,四逆散具有较好地改善睡眠作用。
[参考文献】
【1】谢兆丰.失眠从气论证叨.中医杂志,1988,29(11):28.
、
和TST与电刺激前相比均具有显著性差异,表明失眠模型制
作成功。给予四逆散水煎液后,可显著减少失眠大鼠的W(P<0.01),延长TST的作用明显(P<O.01),主要表现为延长SWS2(P<0.01)和REMS(P<O.05),可使SWS2延长至接近正常,对SWS。没有明显作用。3讨论
四逆散在中医临床上主要用来治疗肝郁脾虚型失眠。近几年来有关四逆散或四逆散加减治疗失眠的临床报道不断增多【4’51。但是,有关四逆散对失眠大鼠睡眠时相影响的实验研究的报道还未见到。
大鼠觉醒一睡眠周期分为:觉醒(Wake)、慢波睡眠I期(SWS。)、慢波睡眠Ⅱ期(sws2)、和快动眼睡眠(REMS)四个
【2】王永炎.中医内科学[M】上海:上海科学技术出版社,2000.132—136.
【3】李耀林.四逆散加减治疗失眠43例卧广西中医学院学报,2005,8(2):47.【4】韩运才.四逆散及其临床应用咖.内江科技,2005,1:13.
【5】薛汉荣.冷天文.黄连温胆汤合四逆散治疗失眠30例临床观察m.江
西中医药,2005.3(3):35.
(收稿日期:2008—04—02)
36巾国医药导报CHINAMEDICALHERALD
2008年5月第5卷第15期
・基础研究・
蝉蜕的抗惊厥作用
安磊
(焦作市第二人民医院药剂科,河南焦作467000)
【摘要】目的:研究蝉蜕的抗惊厥活性。。方法:依次采用95%乙醇和水对蝉蜕进行提取,分别制备蝉蜕醇提物和水提物;然后采用戊四唑(PTZ)致小鼠惊厥模型对蝉蜕醇提物和水提物的抗惊厥活性进行考察。结果:蝉蜕醇提物对小
鼠的惊厥发生率无影响。在4、8g/ks时可明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期,并延长惊厥小鼠的死亡时间,降低死亡率。蝉蜕水提物4、8g/kg能显著降低小鼠惊厥发生率,且明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期,延长惊厥小鼠的死亡时间,降低死亡率。作用强于蝉蜕醇提物实验组,但弱于苯巴比妥钠实验组。结论:蝉蜕醇提物和水提物均有抗惊厥作用,其中水提物的直接抑制作用显著,且抗惊厥作用强度明显强于醇提物。【关键词】蝉蜕;抗惊厥【中图分类号】R971+6【文献标识码1B【文章编号】1673—7210(2008)05(c)一035—02Anticonvulsantactivitvof
ANLei
Periostracum
Cicadae
467000,China)
ex・
(Department
of
Pharmacy,,11leSecondPeople"sHospitalofJiaozuo,Jiaozuo
anticonvulsant
[Abstract]Objective:Tostudythe
tractionofPeriostracumtlle
no
activityofPeriostracumCicadae.Methods:Thealcoholandwater
water
Cicadae(PC)werepreparedbyalcoholand
in
mice.Butit
respectively.Andtheanticonvulsantactivityof
alcoholextractionshowed
alcoholandwaterextractionwereobservedinmicewithP1【Z—induced
effect
on
seizures.Results:The
seizurerate
prolongedremarkablytheincubationperiodofseizuresandthedying-timeof
at
mice诵tllPFZ-induced
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andreducedmortality
4
g/ksand8g/kg.7111ewaterextraction,4g/kgand8s/ks,in-
hibitedremarkablythePTZ-inducedseizuresinmice,andprolongedremarkablytheincubationperiodofseizuresandthedying—timeof
mice
withseizures,reducingmortality
as
well.Conclusion:ThealcoholandwaterextractionofPCboth
haveanticonvulsantactivities.Betweenthem,thewaterextractionplaytheroledirectly,anditsanticonvulsantactivityis
stronger
thantheother’s.
[Keywords]PeriostracumCicadae;Anticonvulsant
蝉蜕fPeriostracumCicadae)为蝉科昆虫黑蚱Cryptotym.
panapustulata
1.2蝉蜕提取物的制备
Fabricius的若虫羽化时脱落的皮壳。具有散取蝉蜕的干燥粗粉1000g,用2000ml95%乙醇加热
风、解痉之功效,用于风热感冒、惊风抽搐。在中医辨证用方中配蝉蜕治疗各型癫痫,尤其是外伤性癫痫的早期治疗中,控制惊厥效果颇佳口1。现代药理实验证明,蝉蜕醇提物能延长士的宁所致惊厥的潜伏期,并延长惊厥动物的存活期,降低死亡率回。而蝉蜕中主要成分为水溶性氨基酸、多糖类及多种微量元素[3-03.其脂溶性成分较少。发挥着抗氧化、抗炎等作用川。为考察其水溶性组分的抗惊厥作用,本实验研究了蝉蜕水提物对化学物质所致小鼠惊厥的影响。
回流3次,每次2h,将乙醇提取液除去溶剂后。得蝉蜕醇提物23g;将药渣加10倍量水煎煮提取3次,每次0.5h。将水,提取液水浴加热浓缩至流浸膏,于35℃真空干燥2h。得蝉蜕水提物97g。临用前分别将蝉蜕醇提物用30%聚乙二醇均匀悬浮、蝉蜕水提物用水配制成所需浓度。1.3抗惊厥作用研究圈
研究蝉蜕醇提物和水提物对Iyllz致小鼠惊厥的影响.取小鼠120只,随机分为8组,每组15只。第1组腹腔注射(咖)生理盐水,第2组苯巴比妥钠50rag/ks,/p,第3,4,5组分别应用蝉蜕醇提物2,4,8g/kg,ip,第6,7,8组分别应用蝉蜕水提物2,4,8g/ks,fp,各组注射容积均为0.1ml/10g。给药
30
1材料与方法
1.1材料
1410D一2E真空干燥箱,美国SHELNB;戊四唑(PTZ),Sigma公司;苯巴比妥钠,上海新亚药业有限公司,批号:020608;本实验所用化学试剂均为分析纯。
实验用药材为2007年9月购于开封市药材公司,经河南大学药学院生药教研室鉴定为节肢动物门蝉科昆虫黑蚱
CryptotyrapanapustulataFabricius的若虫羽化时脱落的皮壳,
min后,给小鼠PTZ100mg/kg诱发惊厥,fp,观察30
lllin,
记录小鼠阵发性惊厥的发生率、发生惊厥的潜伏期、死亡时间和死亡率。
阵挛性惊厥以小鼠前肢阵挛为指标,发生惊厥的潜伏期
为从给PTZ开始到小鼠第一次出现阵挛性惊厥的时间.死亡
时间为从给PTZ开始到死亡的时间。1.4统计分析
结果均以@虹)表示,组间进行t检验分析,SPSSll.0自动处理。
健康昆明种小鼠,雌雄兼有,体重18—22g.由河南省医学实验动物中心提供。
【作者简介】安磊(1972一),男,汉族,河南焦作人,现任焦作市第二人民医院药剂科主管药师,主要从事天然物活性成分的研究与开发。
CHINAMEDICALHERALD巾国医药写报35
・基础研究・
2结果
2008年5月第4卷第15期
鉴于其水提物的抗惊厥作用明显强于醇提物.有理由推测其抗惊厥活性成分为水溶性成分。醇提物也是由于含有少量的水溶性活性成分而显示一定的抗惊厥作用。
另外,与蝉蜕具有相同功效的天麻(息风止痉之功效)的抗惊厥作用有待较详细而深入地研究和报道.天麻对实验性癫痫的治疗机制与调整中枢不同部位儿茶酚胺的代谢有关191。蝉蜕的作用机制是否与天麻相似.尚有待进一步研究。
f参考文献】
【1】杨林,陈世国,颜永书.大剂量蝉蜕在临床应用中的体会叨.中医药研
究,1996,(4):57—58.
蝉蜕醇提物的三个剂量组对小鼠的惊厥发生率均无影
响,在4、8s/ks时可明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期。并延长惊厥小鼠的死亡时间,降低死亡率。蝉蜕水提物4、8g/kg能显著降低小鼠惊厥发生率。但不如苯巴比妥钠的作用强:蝉蜕水提物4、8#kg时还明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期.并延长惊厥小鼠的死亡时间,降低死亡率.这些效应随着剂量的增强而增强,且均强于蝉蜕醇提物实验组.但弱于苯巴比妥钠实验组。见表1。
表1蝉蜕醇提物和水提物对PTz致小鼠惊厥的影响(i蜘)
剂量惊厥发生率潜伏期死亡时间死亡率
组别、
f型蛐丝)i生i尘f丝!
生理盐水一100.0012±625±793.33苯巴比妥钠蝉蜕醇提物
0.05248
40.00100.00100.00
100.00100.00
【2】吴葆金.蝉蜕醇提物中枢药理作用的研究叨.中草药,1986,17(11):21-23.【3】袁伯勇.蝉蜕中氨基酸及微量元素的分析叨.中国中药杂志,1990,15
(12):35-36.
【4】崔国印,周成明,王兴成.蛤蚧、斑蝥、僵蚕和蝉蜕微量元素分析初报
17±7・+12±713±3"14±6"13±914±5"15±8}+
46±6”
24+5
13.3393.33
硼.中药材,1991,14(2):14—16.
【5】黄金城,杨其蕴,梁诗.蝉蜕制备盐酸氨基葡萄糖的研究【J】.天然产物
研究与开发,1993,5(3):28-29.
【6】杨其蕴,黄金城,何蔚币.蝉蜕的甲壳质和壳聚糖的研究[J】.中国中药
杂志,1994,19(6):360—361.
【7】XuMZ。LeeWS,HanJM,etnf.Antioxidamandanti-inflanmmtory
ties
activi・
26±7*86.6729±4}426±829±8・‘31±5・十
73.3386.6773.3353.33
蝉蜕水提物248
86.6780.00
ofN-acetyldopaminedimmersfromPefiostracum
Cicadae叫.Bioorg
与生理盐水组比较,+P<O.05,}+P<O.Ol
Med
Chem,2006,14(23):7826-7834.
【8】徐淑云.药理实验方法学【M】.第2版.北京:人民卫生出版社,1991.
3讨论
蝉蜕醇提物和水提物均有抗惊厥作用.其中水提物的直接抑制作用显著(降低小鼠惊厥发生率),且抗惊厥作用强度明显强于醇提物。由于蝉蜕中脂溶性成分较少,且未见报道其脂溶性成分具有抗惊厥活性,而蝉蜕的水溶性成分较多,
676_677.
【9】ojemellnLM,NelsonWL,ShinDS,et以.Tiannla,强ancientChinese
herb,offers
newoptions
forthetreatmentof
epilepsy
andothereondi-
tions[J].EpilepsyBehav,2006,8(2):376-383.
(收稿日期:2008—04—29)
(上接第19页)
8
1.6统计学方法
采用t检验。2结果
结果见表1。
表1四逆散对失眠大鼠睡眠时相的影响(i蜘,min)
h内记录EEG和EMG的信号。描记时间为9:30—17:30,分
析比较大鼠在电刺激前、刺激后及给药后不同时期的脑电变化特征。
与刺激前比较,}+P<0.05;与刺激后比较,”P<O.01,愀O.05
从表1可知,电刺激后的大鼠的W、SWSl、SWS2、REMS
时相。其中SWS对机体的发育和疲劳的恢复起着重要的作用,REMS则与脑发育和智力的发达关系密切。通过对失眠大鼠EEG的描记与分析,表明四逆散水煎液可延长失眠大鼠的总睡眠时间(TST),其中使SWS:和REMS的延长都具有显著性的差异,并使觉醒时间(W)明显减少。实验结果表明,四逆散具有较好地改善睡眠作用。
[参考文献】
【1】谢兆丰.失眠从气论证叨.中医杂志,1988,29(11):28.
、
和TST与电刺激前相比均具有显著性差异,表明失眠模型制
作成功。给予四逆散水煎液后,可显著减少失眠大鼠的W(P<0.01),延长TST的作用明显(P<O.01),主要表现为延长SWS2(P<0.01)和REMS(P<O.05),可使SWS2延长至接近正常,对SWS。没有明显作用。3讨论
四逆散在中医临床上主要用来治疗肝郁脾虚型失眠。近几年来有关四逆散或四逆散加减治疗失眠的临床报道不断增多【4’51。但是,有关四逆散对失眠大鼠睡眠时相影响的实验研究的报道还未见到。
大鼠觉醒一睡眠周期分为:觉醒(Wake)、慢波睡眠I期(SWS。)、慢波睡眠Ⅱ期(sws2)、和快动眼睡眠(REMS)四个
【2】王永炎.中医内科学[M】上海:上海科学技术出版社,2000.132—136.
【3】李耀林.四逆散加减治疗失眠43例卧广西中医学院学报,2005,8(2):47.【4】韩运才.四逆散及其临床应用咖.内江科技,2005,1:13.
【5】薛汉荣.冷天文.黄连温胆汤合四逆散治疗失眠30例临床观察m.江
西中医药,2005.3(3):35.
(收稿日期:2008—04—02)
36巾国医药导报CHINAMEDICALHERALD