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,JournalofClinicalEmerencCallAr2011,Vol12No2支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群对肺部病变的诊断价值
郑玉兰1 李向阳1 黄远东1 莫扬1 李光元1 曹锋生1
摘要]探讨支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群对肺部病变的诊断价值。方法:用流式细胞仪对31 [ 目的:
例肺癌和2及外周血作T淋巴细胞亚群分析。结果:中央型肺2例肺良性病变的患者支气管肺泡灌洗液(BALF)));癌组B周围型ALFCD3+CD4+(46.19±12.70%、CD3+CD8+(53.40±12.20%和CD4+/CD8+(0.97±0.48)
));肺癌组B肺良ALFCD3+CD4+(41.58±10.39%、CD3+CD8+(58.16±10.46%和CD4+/CD8+(0.77±0.33) 。前性病变组BALFCD3+CD4+(63.50±7.56)%、CD3+CD8+(32.78±7.07)%和CD4+/CD8+(2.15±0.64)
两组比较P>0.差异无统计学意义,前两组与肺良性病变组比较P<0.差异有统计学意义;肺癌组患者外05,05,周血T淋巴细胞各亚群与肺良性病变组比较P>0.差异无统计学意义。结论:支气管肺泡灌洗液T淋巴细05,胞亚群的改变对肺部疾病的鉴别诊断有重要意义,是诊断肺部良恶性病变有效辅助方法。
[关键词]流式细胞仪;肺部病变T淋巴细胞亚群; 支气管肺泡灌洗液;
()中图分类号]文献标志码]文章编号]446.1 [0095918201102011802 [ R A [ 1---
支气管肺泡灌洗液检查可以直接获取下呼吸道及肺泡上皮表面衬液,对其所含的淋巴细胞亚群进行测定。该方法以免疫荧光标记的单克隆抗体能够快速准确地测定T细胞表面不同分化抗原的表达,克服了免疫组化法的缺陷。本研究对31例肺癌和22例肺良性病变的患者支气管肺泡灌洗液淋巴细胞亚群行流式细胞仪分析,探讨其对肺部良、恶性疾病的鉴别诊断价值。1 材料和方法1.1 材料与仪器
//CD4FITCCD8PECD3PerCP三色抗体及同型对照、溶血素、荧光校准微球均购自美国Bec-(公司;tonickinsonBD)BDFACSCalibur流式细-D 胞仪。
1.2 方法1.2.1 研究对象 53例BALF标本均来自本院门诊或住院患者。肺癌组共3均经病理或随访1例,证实,男2女1年龄3平均年龄1例,0例,1~77岁,()岁;其中中央型2周围型153.4±14.00例,1例。良性病变组共2男1女8例,年龄22例,4例,8~70岁,平均年龄(岁;其中肺结核146.8±11.6)2例,经刷片找抗酸杆菌或诊断性治疗确诊;肺炎7例,经抗生素治疗1支气管扩张35~30d内病灶吸收;例,经CT证实。均按质控要求抽静脉血检测。1.2.2 BALF获取 采用OlmusBF1T240型--yp电子支气管镜,常规检查气道后,于刷检和活检前行病变相应肺段支气管肺泡灌洗,将支气管前端嵌入段或亚段支气管开口处,经支气管镜每次推注生,,,理盐水2总量约1回收量约40~50ml00ml0ml30min内送检。
12
1.2.3 BALF样品的制备 取新鲜BALF10mL,
经尼龙布过滤,400×g离心10min去上清,PBS洗
6/涤2次,充分混匀B每管以2×1ALF,0ml细胞数//于流式上样管加入CD4FITCCD8PECD3Per-
,,室温避光孵育2加1∶9CP荧光抗体20μl0min,配制的溶血素2m避光8mlin,200×g离心
,倒掉上清液,加入P5min,BS缓冲液2ml200×g离心5m去上清,加0.in,5mlPBS缓冲液重悬细
胞。同时做同型对照。
1.2.4 流式细胞仪测定 以荧光微球校准仪器光路,采用celluestro软件获取与分析数据。建立 qp
////FSCSSC,SSCCD3、CD4CD3、CD8CD3荧光点),图,以C每管获取l万个细胞,D3细胞群圈门(R1根据同型对照设十字门分析T淋巴细胞表面++++
和C抗原的表达情况。CD3CD4D3CD81.3 统计学处理
珚±数据以q检验判定,所得数以xs表示。2 结果
结果见表1、2。表1显示肺良性病变患者
+++
/比值BALF以CD3CD4+细胞为主,CD4CD8
+
明显高于肺癌组。表2显示不同病因外周血CD3
++++
/细胞比例,细胞比例和CCD4CD3CD8D4+
)。差异无统计学意义(CD8P>0.05
3 讨论
流式细胞仪较免疫组化法测定结果更为准确:流式细胞仪对荧光信号的分辨率是肉眼难以比拟
,的,当样品中淋巴细胞数目较少时(荧光镜<5%)检无法准确分辨出微弱的阳性细胞,而流式细胞仪
可对仅有1%的淋巴细胞进行准确的表型分析。最为重要的是,免疫镜检法只能对单一抗原进行分析,而流式细胞仪可同时对不同波长的多标抗体进行分析,大大提高了检测的准确性。流式细胞仪可快速分析大量细胞,故灵敏度较细胞学和组织学检
1〕
。查高〔由于支气管肺泡灌洗获得病理细胞的范
)襄阳市中心医院呼吸内科(湖北襄阳,441021
襄阳市中心医院重症医学科
:通信作者:曹锋生(Emailnetzhenulan203.studenti@s-gy
na.com)
临床急诊杂志2011年4月第12卷第2期
·119·
癌患者局部肺组织自身免疫功能下降,而早中期全
身免疫功能下降不明显,其可能机制为恶性肿瘤细局部分泌免疫抑制因子增多致使肿瘤胞负荷增加,
++、细胞得以快速生长。良性病变组C比D4CD8值明显高于肿瘤组,大于正常人(比值为1.7~
),说明良性病变患者病变部位处于免疫激活状2.0
++
/态,的比值对于维持免疫功能至关重CD4CD8
要,对于良恶性的鉴别诊断及治疗有一定价值。恶
表1 肺癌组和良性病变组BALFT淋巴细胞亚群分布
珚x±s组别
例数
CD3+CD4/%
+
CD3+CD8/%
+
CD4+/CD80.480.33
+
中央型肺癌20周围型肺癌11良性病变22
46.19±12.7041.58±10.3963.50±7.56
1)
53.40±12.2058.16±10.4632.78±7.07
0.97±
1)
0.77±
1)
2.15±0.64
05 与良性病变组比较,P<0.
表2 肺癌组和良性病变组外周血T淋巴细胞亚群分布珚x±s组别
例数
CD3+CD4+/%69.68±6.6767.33±6.6664.56±6.68
CD3+CD8+/%30.32±5.2832.68±6.6635.45±6.78
CD4+/CD8+2.39±0.602.18±0.691.91±0.55
性肿瘤患者应放化疗同时辅以免疫调节治疗,从而
提高患者的细胞免疫功能,更有利于延长患者的生
〕4-5
。尽管从统计学上看出存期并改善生活质量〔
良性和恶性BALF的T细胞亚群测定值有显著差
异性,在某种意义上起到“液相活检”的作用,但也有部分病例的测定值有重叠现象,这反映机体免疫功能的复杂性。因此T细胞亚群测定还应当结合临床、细胞学及染色体等检查做出客观的诊断。参考文献
[]A1RAIT,YASADA Y,TAKAYA T,etal.Alication pp
oftelomeraseavtivitforscreeninoflunrimar yggpy
[],cancerinbronchoalveolarlavaefluidJ.OncolRe - gp1998,5:405-408.
[]S2IGSTADE,DONG H P,NIELSENS,etal.Quanti -
tativeanalsisofinterinexressionineffusionsusin ygpg
]flowctometricimmunohenotinJ.DianCto -ypypg[gy,athol2005,33:325-331.p
[]CHE,3N Y Q,SHIHZ,QIN XIetal.CD4+CD25+
reulatorTlmhoctesinmalinantleuraleffu -gyypygp
[],sionJ.AmJResirCritCareMed2005,172:1434 p-1439.
[]D4ALBETH N,LEEYC.Lmhoctesindisleural -ypyp[],easeJ.CurroinPulm Med2005,11:334-339. p[5]AHMEDS,SHAHIDR K,RIMAWIR,etalMali -
antleuraleffusionsinlmhoroliferativedisorders gpypp[],J.LeukLmhoma2005,46:1039-1044. yp
()收稿日期:20101207--
中央型肺癌20周围型肺癌11良性病变22
围较活检和刷检大,可弥补活检和刷检不足,提高
诊断率,尤其对周围型肺癌诊断价值更大。BALF中淋巴细胞亚群检测的临床意义:T淋巴细胞是具有多功能的细胞群体,在细胞免疫过程中,各T淋巴细胞亚群相互作用对维持机体免疫功
+能稳定发挥极其重要的作用。C细胞可分泌D4
具有辅助性及诱导性的TIL2、IFN等细胞因子,-2〕+
;细胞功能,发挥抗炎抗肿瘤作用〔细胞抑制CD8
3〕
。表机体的免疫功能,有利于肿瘤在宿主的转移〔
中结果表明,多种肺部疾病表现出肺局部免疫功能++/的变化,肺部恶性肿瘤患者BALF中CD4CD8
++
/下降,而外周血C下降不明显,说明肺D4CD8
声 明
扰乱了学风。敬请作者遵守有关规定,凡来稿在接到本刊回执后3 近来本刊发现部分作者一稿两投,
个月内未收到稿件通知者,系仍在审阅研究中,作者如欲投他刊,请来信与本刊联系。今后本刊再发现一稿两投现象,将对作者作出严肃处理。特此声明。
《临床急诊杂志》编辑部
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,JournalofClinicalEmerencCallAr2011,Vol12No2支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群对肺部病变的诊断价值
郑玉兰1 李向阳1 黄远东1 莫扬1 李光元1 曹锋生1
摘要]探讨支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群对肺部病变的诊断价值。方法:用流式细胞仪对31 [ 目的:
例肺癌和2及外周血作T淋巴细胞亚群分析。结果:中央型肺2例肺良性病变的患者支气管肺泡灌洗液(BALF)));癌组B周围型ALFCD3+CD4+(46.19±12.70%、CD3+CD8+(53.40±12.20%和CD4+/CD8+(0.97±0.48)
));肺癌组B肺良ALFCD3+CD4+(41.58±10.39%、CD3+CD8+(58.16±10.46%和CD4+/CD8+(0.77±0.33) 。前性病变组BALFCD3+CD4+(63.50±7.56)%、CD3+CD8+(32.78±7.07)%和CD4+/CD8+(2.15±0.64)
两组比较P>0.差异无统计学意义,前两组与肺良性病变组比较P<0.差异有统计学意义;肺癌组患者外05,05,周血T淋巴细胞各亚群与肺良性病变组比较P>0.差异无统计学意义。结论:支气管肺泡灌洗液T淋巴细05,胞亚群的改变对肺部疾病的鉴别诊断有重要意义,是诊断肺部良恶性病变有效辅助方法。
[关键词]流式细胞仪;肺部病变T淋巴细胞亚群; 支气管肺泡灌洗液;
()中图分类号]文献标志码]文章编号]446.1 [0095918201102011802 [ R A [ 1---
支气管肺泡灌洗液检查可以直接获取下呼吸道及肺泡上皮表面衬液,对其所含的淋巴细胞亚群进行测定。该方法以免疫荧光标记的单克隆抗体能够快速准确地测定T细胞表面不同分化抗原的表达,克服了免疫组化法的缺陷。本研究对31例肺癌和22例肺良性病变的患者支气管肺泡灌洗液淋巴细胞亚群行流式细胞仪分析,探讨其对肺部良、恶性疾病的鉴别诊断价值。1 材料和方法1.1 材料与仪器
//CD4FITCCD8PECD3PerCP三色抗体及同型对照、溶血素、荧光校准微球均购自美国Bec-(公司;tonickinsonBD)BDFACSCalibur流式细-D 胞仪。
1.2 方法1.2.1 研究对象 53例BALF标本均来自本院门诊或住院患者。肺癌组共3均经病理或随访1例,证实,男2女1年龄3平均年龄1例,0例,1~77岁,()岁;其中中央型2周围型153.4±14.00例,1例。良性病变组共2男1女8例,年龄22例,4例,8~70岁,平均年龄(岁;其中肺结核146.8±11.6)2例,经刷片找抗酸杆菌或诊断性治疗确诊;肺炎7例,经抗生素治疗1支气管扩张35~30d内病灶吸收;例,经CT证实。均按质控要求抽静脉血检测。1.2.2 BALF获取 采用OlmusBF1T240型--yp电子支气管镜,常规检查气道后,于刷检和活检前行病变相应肺段支气管肺泡灌洗,将支气管前端嵌入段或亚段支气管开口处,经支气管镜每次推注生,,,理盐水2总量约1回收量约40~50ml00ml0ml30min内送检。
12
1.2.3 BALF样品的制备 取新鲜BALF10mL,
经尼龙布过滤,400×g离心10min去上清,PBS洗
6/涤2次,充分混匀B每管以2×1ALF,0ml细胞数//于流式上样管加入CD4FITCCD8PECD3Per-
,,室温避光孵育2加1∶9CP荧光抗体20μl0min,配制的溶血素2m避光8mlin,200×g离心
,倒掉上清液,加入P5min,BS缓冲液2ml200×g离心5m去上清,加0.in,5mlPBS缓冲液重悬细
胞。同时做同型对照。
1.2.4 流式细胞仪测定 以荧光微球校准仪器光路,采用celluestro软件获取与分析数据。建立 qp
////FSCSSC,SSCCD3、CD4CD3、CD8CD3荧光点),图,以C每管获取l万个细胞,D3细胞群圈门(R1根据同型对照设十字门分析T淋巴细胞表面++++
和C抗原的表达情况。CD3CD4D3CD81.3 统计学处理
珚±数据以q检验判定,所得数以xs表示。2 结果
结果见表1、2。表1显示肺良性病变患者
+++
/比值BALF以CD3CD4+细胞为主,CD4CD8
+
明显高于肺癌组。表2显示不同病因外周血CD3
++++
/细胞比例,细胞比例和CCD4CD3CD8D4+
)。差异无统计学意义(CD8P>0.05
3 讨论
流式细胞仪较免疫组化法测定结果更为准确:流式细胞仪对荧光信号的分辨率是肉眼难以比拟
,的,当样品中淋巴细胞数目较少时(荧光镜<5%)检无法准确分辨出微弱的阳性细胞,而流式细胞仪
可对仅有1%的淋巴细胞进行准确的表型分析。最为重要的是,免疫镜检法只能对单一抗原进行分析,而流式细胞仪可同时对不同波长的多标抗体进行分析,大大提高了检测的准确性。流式细胞仪可快速分析大量细胞,故灵敏度较细胞学和组织学检
1〕
。查高〔由于支气管肺泡灌洗获得病理细胞的范
)襄阳市中心医院呼吸内科(湖北襄阳,441021
襄阳市中心医院重症医学科
:通信作者:曹锋生(Emailnetzhenulan203.studenti@s-gy
na.com)
临床急诊杂志2011年4月第12卷第2期
·119·
癌患者局部肺组织自身免疫功能下降,而早中期全
身免疫功能下降不明显,其可能机制为恶性肿瘤细局部分泌免疫抑制因子增多致使肿瘤胞负荷增加,
++、细胞得以快速生长。良性病变组C比D4CD8值明显高于肿瘤组,大于正常人(比值为1.7~
),说明良性病变患者病变部位处于免疫激活状2.0
++
/态,的比值对于维持免疫功能至关重CD4CD8
要,对于良恶性的鉴别诊断及治疗有一定价值。恶
表1 肺癌组和良性病变组BALFT淋巴细胞亚群分布
珚x±s组别
例数
CD3+CD4/%
+
CD3+CD8/%
+
CD4+/CD80.480.33
+
中央型肺癌20周围型肺癌11良性病变22
46.19±12.7041.58±10.3963.50±7.56
1)
53.40±12.2058.16±10.4632.78±7.07
0.97±
1)
0.77±
1)
2.15±0.64
05 与良性病变组比较,P<0.
表2 肺癌组和良性病变组外周血T淋巴细胞亚群分布珚x±s组别
例数
CD3+CD4+/%69.68±6.6767.33±6.6664.56±6.68
CD3+CD8+/%30.32±5.2832.68±6.6635.45±6.78
CD4+/CD8+2.39±0.602.18±0.691.91±0.55
性肿瘤患者应放化疗同时辅以免疫调节治疗,从而
提高患者的细胞免疫功能,更有利于延长患者的生
〕4-5
。尽管从统计学上看出存期并改善生活质量〔
良性和恶性BALF的T细胞亚群测定值有显著差
异性,在某种意义上起到“液相活检”的作用,但也有部分病例的测定值有重叠现象,这反映机体免疫功能的复杂性。因此T细胞亚群测定还应当结合临床、细胞学及染色体等检查做出客观的诊断。参考文献
[]A1RAIT,YASADA Y,TAKAYA T,etal.Alication pp
oftelomeraseavtivitforscreeninoflunrimar yggpy
[],cancerinbronchoalveolarlavaefluidJ.OncolRe - gp1998,5:405-408.
[]S2IGSTADE,DONG H P,NIELSENS,etal.Quanti -
tativeanalsisofinterinexressionineffusionsusin ygpg
]flowctometricimmunohenotinJ.DianCto -ypypg[gy,athol2005,33:325-331.p
[]CHE,3N Y Q,SHIHZ,QIN XIetal.CD4+CD25+
reulatorTlmhoctesinmalinantleuraleffu -gyypygp
[],sionJ.AmJResirCritCareMed2005,172:1434 p-1439.
[]D4ALBETH N,LEEYC.Lmhoctesindisleural -ypyp[],easeJ.CurroinPulm Med2005,11:334-339. p[5]AHMEDS,SHAHIDR K,RIMAWIR,etalMali -
antleuraleffusionsinlmhoroliferativedisorders gpypp[],J.LeukLmhoma2005,46:1039-1044. yp
()收稿日期:20101207--
中央型肺癌20周围型肺癌11良性病变22
围较活检和刷检大,可弥补活检和刷检不足,提高
诊断率,尤其对周围型肺癌诊断价值更大。BALF中淋巴细胞亚群检测的临床意义:T淋巴细胞是具有多功能的细胞群体,在细胞免疫过程中,各T淋巴细胞亚群相互作用对维持机体免疫功
+能稳定发挥极其重要的作用。C细胞可分泌D4
具有辅助性及诱导性的TIL2、IFN等细胞因子,-2〕+
;细胞功能,发挥抗炎抗肿瘤作用〔细胞抑制CD8
3〕
。表机体的免疫功能,有利于肿瘤在宿主的转移〔
中结果表明,多种肺部疾病表现出肺局部免疫功能++/的变化,肺部恶性肿瘤患者BALF中CD4CD8
++
/下降,而外周血C下降不明显,说明肺D4CD8
声 明
扰乱了学风。敬请作者遵守有关规定,凡来稿在接到本刊回执后3 近来本刊发现部分作者一稿两投,
个月内未收到稿件通知者,系仍在审阅研究中,作者如欲投他刊,请来信与本刊联系。今后本刊再发现一稿两投现象,将对作者作出严肃处理。特此声明。
《临床急诊杂志》编辑部