金线莲组织培养增殖培养基的筛选

安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2009,37(4):1475-1476责任编辑　王淼　责任校对　刘祖尚

金线莲组织培养增殖培养基的筛选

刘伟,王牛柱　(文山师范高等专科学校生化系,云南文山663000)

摘要　[目的]筛选最佳的金线莲增殖培养基。[方法]以金线莲组培苗的茎段和顶芽为外植体进行增殖培养,在光照时间12h/d,光照强度1200lx,温度(25±2)℃,pH值为5.8培养条件下比较不同基本培养基、细胞分裂素、生长素、影响。[结果]通过对不同培养基的培养效果进行对比分析后筛选出适宜的培养基分别是:+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+NAA0.2mg/L+62BA2mg/L;壮苗培养基为MS+琼脂7g/L+蔗糖25+蛋白胨2++香蕉100g/L+活性炭1g/L和1/2MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨2g/L+香蕉100g/L+]香蕉、蛋白胨、花宝一号、活性炭等添加物能显著地促进金线莲外植体的分化与生长。关键词　金线莲;组织培养;培养基筛选

+

中图分类号　S722.37　　文献标识码　A　　文章编号--ScreeningonMultiplicationMediumofTrghih

LIUWeietal　(BiochemistryWenshan,Yunnan663000)

Abstract　[Objective]medtooptimultiplicationmediumoftissuecultureforAnoectochusroxburghih.[Method]ThestemsegmentthecultureseedlingsofA.roxburghihweretakenastheexplantformultiplicationculturetocom2parethebasicculturemedium,cytokinin,growthhormone,supplementmatteronthegrowthofA.rox2burghihunderaslighttimeof12h/d,lightintensityof1200lxandtemperatureof(25±2)℃andpHof5.8.[Re2sult]Aftertheanalysisonthecultureeffectofdifferentmedia,thescreenedoptimummediawereasfollows:theoptimumformulaforbuddingmultiplicationwasMS+agar7g/L+sucrose25g/L+NAA0.2mg/L+62BA2mg/L;thestrongsproutmediawereMS+agar7g/L+sucrose25g/L+proteinpeptone2g/L+HuabaoNo.13g/L+banana100g/L+activatedcharcoal1g/Land1/2MS+agar7g/L+sucrose25g/L+proteinpeptone2g/L+banana100g/L+activatedcharcoal1g/L.[Conclusion]Thesupplementmattersuchaspotato,banana,proteinpeptone,HuabaoNo.1andactivatedcharcoalcouldimprovethedifferentiationandgrowthofA.roxburghihexplant.Keywords　Anoectochusroxburghih;Tissueculture;Mediumscreening

　　金线莲(Anoectochilusroxburghit)又叫花叶开唇兰,是兰科开唇兰属多年生草本植物。在我国主要分布于广西、福建、台湾、浙江、江西、云南、贵州等地

[1]

参”等美称

[3-4]

。近年来市场需求量猛增,需求量远远大于

供应量,据调查金线莲鲜草达60～80元/kg,干草达1500～

2000元/kg。利用组培技术快速繁殖种苗,对金线莲的开

[5]

。金线莲生长于海拔

300～1200m的山地林下阴湿处,生态环境条件独特,自然发利用和野生资源保护具有很高的经济价值和现实意义,但是金线莲在组培过程中存在瓶苗弱小、增殖速度过慢的缺点,为了加快组织培养的速度,扩大组培苗产量,降低生产成本,笔者从影响组培苗增殖的多个方面进行对比,以期筛选出最优的金线莲增殖培养基。

繁殖率低,生长缓慢,加上人为的大量采挖及自然环境的严重破坏,使得其野生资源日渐枯竭

[2]

。金线莲有着很高的药

用价值,对膀胱炎、糖尿病、血尿、风湿性关节炎、肿瘤等疑难病症有着很好的疗效,素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人

表1　金线莲增殖培养的培养基

Table1　CulturemediumusedinthemultiplicationcultureofAnoectochusroxburghih

培养基号

No.[***********][1**********]基本培养基

Basicculturemedi2MSMSMSMSMSMSMSMSMS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MSMS6-BAmg/L0.1.2.0.0.0.500555

NAAmg/L0.0.0.0.0.0.222125

蛋白胨∥g/L花宝1号∥g/L马铃薯∥g/L

Peptone

HyponexNo.1

Potato

香蕉∥g/L活性炭∥g/L

Banana

Activecarbon

1.2.5.2.2.2.2.2.2.2.2.2.2.[1**********]001.3.5.1.1.1.1.1.1.000000000

100.050.0

100.50.100.100.100.100.0000001.2.5.1.00001　材料与方法

作者简介　刘伟(1977-),男,湖南祁东人,硕士,讲师,从事植物资源育

种及开发利用的研究。

收稿日期　2008211220

1.1　试验材料　试验材料用文山师范高等专科学校组培室

培养出来的组培苗,取其带节茎段和顶芽作为外植体。

・1476・　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009年

1.2　试验方法　在基本培养基上添加不同浓度的细胞分裂等能显著地促进外植体的分化、生长,其中以1/2MS+蔗糖

25g/L+琼脂粉7g/L+蛋白胨2g/L+花宝一号3g/L+香

素、生长素和添加物,共20个处理(表1),所有的培养基中琼脂粉的浓度为7g/L,糖的浓度为25g/L。从无菌苗上切取带

1～2个节的茎段和顶芽接种于各种不同的培养基上,每个处

蕉100g/L;1/2MS+蔗糖25g/L+琼脂粉7g/L+蛋白胨

2g/L+花宝一号3g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L;1/2MS+蔗糖25g/L+琼脂粉7g/L+蛋白胨2g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L3组培养基生长最好。

2.3　将外植体接种到19

理接种5瓶,每瓶5个材料,记录每个外植体生长的芽数、芽高、芽茎及生根情况。40d后观察并记录试验结果。

1.3　培养条件　光照时间12h/d,光照强度1200lx,温度(25±2)℃,pH值5.8。2　结果与分析

2.1　不同激素浓度对茎段生长的影响　无菌外植体的茎节

和20号培养基上,40,不同激素组合的

,的比基本培养基为1/2MS的对,而对顶芽诱导产生新芽体的在比较20种培养基诱导茎段、顶芽增殖能力后,可知MS为基本培养基效果较佳。

表4　不同基本培养基对幼苗生长的影响

Table4　Theeffectofdifferentbasicculturemediumonthegrowthof

seedlings

段和顶芽接种到不同激素及配比培养基中,40d后观察到的现象见表2。

通过平时的观察可知,7d气生根长出,14d,2多高,增殖系数为2.2;其次是1和2号,增殖系数为2.0,但是芽体只有

1cm高,其他4个组合的增殖系数分别是1.9、1.6、1.6、1.5。

试验表明,芽体的增殖与BA、NAA浓度有密切关系,一定量的BA、NAA对茎段和顶芽有促进分化和增殖的作用。

表2　不同激素浓度对增殖的影响

Table2　Theeffectofdifferenthormoneconcentrationsonthemultipli2

cation

培养

基号

No.19Inoculation

added

quantity

plants

252接种数新增株数生根状况增殖系数生长状况株高∥cm

Newly

根短0.08RootageMultiplicationGrowthPlantheightstatuscoefficientstatusincrement

粗

2.73　结论讨论

(1)试验通过对不同培养基的培养效果进行对比分析后

培养接种数新增株数生根状况增殖系数生长状况株高∥cm

wly

基号InoculationNeRootageMultiplicationGrowthPlantheight

added

No.123456

quantity[1**********]0

[1**********]2

status

coefficient1.041.302.401.201.201.20

status

increment1.51.02.02.51.62.1

得出最优的培养基分别是:增殖最佳配方为MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+NAA0.2mg/L+62BA2mg/L;壮苗培养基为

MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨2g/L+花宝1号3g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L和1/2MS+琼脂7g/L+

无根

无根气生根气生根气生根气生根　较细　粗　粗　较粗　细　细

蔗糖25g/L+蛋白胨2g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L。

(2)在不同基本培养基中添加不同的激素、改变激素的

浓度配比,对诱导金线莲外植体出芽率有不同的效果,在一定范围内62BA/NAA激素比例越高,越有利于芽分化;在添加62BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的MS培养基中,新增株数高达60;而在62BA、NAA低浓度和没有加激素的MS培养基中,金线莲增殖很少甚至不增殖。但是在没有激素的培养基中,茎增粗明显,展开叶片多,这可能是加入激素后,外植体从培养基上吸收的养料主要用来分化形成幼苗,因此有激素的培养基上长出的苗较弱小;而在没有激素的培养基中,有活性炭的组合比没有活性炭的组合生长要好,说明活性炭对金线莲的增粗有一定的促进作用。参考文献

[1]蔡文燕,肖华山,范秀珍,等.金线莲研究进展[J].亚热带植物科学,

2003,32(3):68-72.

[2]王雅英,林荣耀,杨忠耿,等.金线莲快速繁殖及促根壮苗试验[J].亚热

带植物科学,2005,34(3):40-42.

[3]刘贤旺,黄慧莲,袁勇.金线莲的研究进展[J].江西中医学院学报,1999

(4):188-189.

[4]段玉云,曾黎琼,程在全.台湾金线莲的组织培养与快速繁殖[J].植物

生理学通讯,2005,41(2):198.

[5]高燕等,白燕冰,赵云翔.金线莲组织培养几种培养基的筛选[J].热带

农业科技,2004,27(3):12-14.

2.2　不同添加物对茎段培养的影响　将无菌外植体的茎节

段和顶芽接种到只加有添加物的培养基中,40d后得到结果见表3。

表3　不同添加物对幼苗生长的影响

Table3　Theeffectofdifferentadditiveonthegrowthofseedlings

培养基号

No.[***********]718

Inoculation

added

quantity

206

[***********]2020

[1**********]4

接种数新增株数生根状况增殖系数生长状况株高∥cm

Newly

根长有根有根有根有根无根根短根短根短根短根短根短

0.300.240.3200.320.320.40000.160.100.20

RootageMultiplicationGrowthPlantheightstatuscoefficientstatusincrement

粗

粗粗粗较粗粗较粗粗粗较粗粗粗

2.63.02.52.52.32.12.62.02.12.62.32.0

　　结果表明,添加马铃薯、香蕉、蛋白胨、花宝一号、活性炭

安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2009,37(4):1475-1476责任编辑　王淼　责任校对　刘祖尚

金线莲组织培养增殖培养基的筛选

刘伟,王牛柱　(文山师范高等专科学校生化系,云南文山663000)

摘要　[目的]筛选最佳的金线莲增殖培养基。[方法]以金线莲组培苗的茎段和顶芽为外植体进行增殖培养,在光照时间12h/d,光照强度1200lx,温度(25±2)℃,pH值为5.8培养条件下比较不同基本培养基、细胞分裂素、生长素、影响。[结果]通过对不同培养基的培养效果进行对比分析后筛选出适宜的培养基分别是:+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+NAA0.2mg/L+62BA2mg/L;壮苗培养基为MS+琼脂7g/L+蔗糖25+蛋白胨2++香蕉100g/L+活性炭1g/L和1/2MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨2g/L+香蕉100g/L+]香蕉、蛋白胨、花宝一号、活性炭等添加物能显著地促进金线莲外植体的分化与生长。关键词　金线莲;组织培养;培养基筛选

+

中图分类号　S722.37　　文献标识码　A　　文章编号--ScreeningonMultiplicationMediumofTrghih

LIUWeietal　(BiochemistryWenshan,Yunnan663000)

Abstract　[Objective]medtooptimultiplicationmediumoftissuecultureforAnoectochusroxburghih.[Method]ThestemsegmentthecultureseedlingsofA.roxburghihweretakenastheexplantformultiplicationculturetocom2parethebasicculturemedium,cytokinin,growthhormone,supplementmatteronthegrowthofA.rox2burghihunderaslighttimeof12h/d,lightintensityof1200lxandtemperatureof(25±2)℃andpHof5.8.[Re2sult]Aftertheanalysisonthecultureeffectofdifferentmedia,thescreenedoptimummediawereasfollows:theoptimumformulaforbuddingmultiplicationwasMS+agar7g/L+sucrose25g/L+NAA0.2mg/L+62BA2mg/L;thestrongsproutmediawereMS+agar7g/L+sucrose25g/L+proteinpeptone2g/L+HuabaoNo.13g/L+banana100g/L+activatedcharcoal1g/Land1/2MS+agar7g/L+sucrose25g/L+proteinpeptone2g/L+banana100g/L+activatedcharcoal1g/L.[Conclusion]Thesupplementmattersuchaspotato,banana,proteinpeptone,HuabaoNo.1andactivatedcharcoalcouldimprovethedifferentiationandgrowthofA.roxburghihexplant.Keywords　Anoectochusroxburghih;Tissueculture;Mediumscreening

　　金线莲(Anoectochilusroxburghit)又叫花叶开唇兰,是兰科开唇兰属多年生草本植物。在我国主要分布于广西、福建、台湾、浙江、江西、云南、贵州等地

[1]

参”等美称

[3-4]

。近年来市场需求量猛增,需求量远远大于

供应量,据调查金线莲鲜草达60～80元/kg,干草达1500～

2000元/kg。利用组培技术快速繁殖种苗,对金线莲的开

[5]

。金线莲生长于海拔

300～1200m的山地林下阴湿处,生态环境条件独特,自然发利用和野生资源保护具有很高的经济价值和现实意义,但是金线莲在组培过程中存在瓶苗弱小、增殖速度过慢的缺点,为了加快组织培养的速度,扩大组培苗产量,降低生产成本,笔者从影响组培苗增殖的多个方面进行对比,以期筛选出最优的金线莲增殖培养基。

繁殖率低,生长缓慢,加上人为的大量采挖及自然环境的严重破坏,使得其野生资源日渐枯竭

[2]

。金线莲有着很高的药

用价值,对膀胱炎、糖尿病、血尿、风湿性关节炎、肿瘤等疑难病症有着很好的疗效,素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人

表1　金线莲增殖培养的培养基

Table1　CulturemediumusedinthemultiplicationcultureofAnoectochusroxburghih

培养基号

No.[***********][1**********]基本培养基

Basicculturemedi2MSMSMSMSMSMSMSMSMS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MS1/2MSMS6-BAmg/L0.1.2.0.0.0.500555

NAAmg/L0.0.0.0.0.0.222125

蛋白胨∥g/L花宝1号∥g/L马铃薯∥g/L

Peptone

HyponexNo.1

Potato

香蕉∥g/L活性炭∥g/L

Banana

Activecarbon

1.2.5.2.2.2.2.2.2.2.2.2.2.[1**********]001.3.5.1.1.1.1.1.1.000000000

100.050.0

100.50.100.100.100.100.0000001.2.5.1.00001　材料与方法

作者简介　刘伟(1977-),男,湖南祁东人,硕士,讲师,从事植物资源育

种及开发利用的研究。

收稿日期　2008211220

1.1　试验材料　试验材料用文山师范高等专科学校组培室

培养出来的组培苗,取其带节茎段和顶芽作为外植体。

・1476・　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009年

1.2　试验方法　在基本培养基上添加不同浓度的细胞分裂等能显著地促进外植体的分化、生长,其中以1/2MS+蔗糖

25g/L+琼脂粉7g/L+蛋白胨2g/L+花宝一号3g/L+香

素、生长素和添加物,共20个处理(表1),所有的培养基中琼脂粉的浓度为7g/L,糖的浓度为25g/L。从无菌苗上切取带

1～2个节的茎段和顶芽接种于各种不同的培养基上,每个处

蕉100g/L;1/2MS+蔗糖25g/L+琼脂粉7g/L+蛋白胨

2g/L+花宝一号3g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L;1/2MS+蔗糖25g/L+琼脂粉7g/L+蛋白胨2g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L3组培养基生长最好。

2.3　将外植体接种到19

理接种5瓶,每瓶5个材料,记录每个外植体生长的芽数、芽高、芽茎及生根情况。40d后观察并记录试验结果。

1.3　培养条件　光照时间12h/d,光照强度1200lx,温度(25±2)℃,pH值5.8。2　结果与分析

2.1　不同激素浓度对茎段生长的影响　无菌外植体的茎节

和20号培养基上,40,不同激素组合的

,的比基本培养基为1/2MS的对,而对顶芽诱导产生新芽体的在比较20种培养基诱导茎段、顶芽增殖能力后,可知MS为基本培养基效果较佳。

表4　不同基本培养基对幼苗生长的影响

Table4　Theeffectofdifferentbasicculturemediumonthegrowthof

seedlings

段和顶芽接种到不同激素及配比培养基中,40d后观察到的现象见表2。

通过平时的观察可知,7d气生根长出,14d,2多高,增殖系数为2.2;其次是1和2号,增殖系数为2.0,但是芽体只有

1cm高,其他4个组合的增殖系数分别是1.9、1.6、1.6、1.5。

试验表明,芽体的增殖与BA、NAA浓度有密切关系,一定量的BA、NAA对茎段和顶芽有促进分化和增殖的作用。

表2　不同激素浓度对增殖的影响

Table2　Theeffectofdifferenthormoneconcentrationsonthemultipli2

cation

培养

基号

No.19Inoculation

added

quantity

plants

252接种数新增株数生根状况增殖系数生长状况株高∥cm

Newly

根短0.08RootageMultiplicationGrowthPlantheightstatuscoefficientstatusincrement

粗

2.73　结论讨论

(1)试验通过对不同培养基的培养效果进行对比分析后

培养接种数新增株数生根状况增殖系数生长状况株高∥cm

wly

基号InoculationNeRootageMultiplicationGrowthPlantheight

added

No.123456

quantity[1**********]0

[1**********]2

status

coefficient1.041.302.401.201.201.20

status

increment1.51.02.02.51.62.1

得出最优的培养基分别是:增殖最佳配方为MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+NAA0.2mg/L+62BA2mg/L;壮苗培养基为

MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨2g/L+花宝1号3g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L和1/2MS+琼脂7g/L+

无根

无根气生根气生根气生根气生根　较细　粗　粗　较粗　细　细

蔗糖25g/L+蛋白胨2g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L。

(2)在不同基本培养基中添加不同的激素、改变激素的

浓度配比,对诱导金线莲外植体出芽率有不同的效果,在一定范围内62BA/NAA激素比例越高,越有利于芽分化;在添加62BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L的MS培养基中,新增株数高达60;而在62BA、NAA低浓度和没有加激素的MS培养基中,金线莲增殖很少甚至不增殖。但是在没有激素的培养基中,茎增粗明显,展开叶片多,这可能是加入激素后,外植体从培养基上吸收的养料主要用来分化形成幼苗,因此有激素的培养基上长出的苗较弱小;而在没有激素的培养基中,有活性炭的组合比没有活性炭的组合生长要好,说明活性炭对金线莲的增粗有一定的促进作用。参考文献

[1]蔡文燕,肖华山,范秀珍,等.金线莲研究进展[J].亚热带植物科学,

2003,32(3):68-72.

[2]王雅英,林荣耀,杨忠耿,等.金线莲快速繁殖及促根壮苗试验[J].亚热

带植物科学,2005,34(3):40-42.

[3]刘贤旺,黄慧莲,袁勇.金线莲的研究进展[J].江西中医学院学报,1999

(4):188-189.

[4]段玉云,曾黎琼,程在全.台湾金线莲的组织培养与快速繁殖[J].植物

生理学通讯,2005,41(2):198.

[5]高燕等,白燕冰,赵云翔.金线莲组织培养几种培养基的筛选[J].热带

农业科技,2004,27(3):12-14.

2.2　不同添加物对茎段培养的影响　将无菌外植体的茎节

段和顶芽接种到只加有添加物的培养基中,40d后得到结果见表3。

表3　不同添加物对幼苗生长的影响

Table3　Theeffectofdifferentadditiveonthegrowthofseedlings

培养基号

No.[***********]718

Inoculation

added

quantity

206

[***********]2020

[1**********]4

接种数新增株数生根状况增殖系数生长状况株高∥cm

Newly

根长有根有根有根有根无根根短根短根短根短根短根短

0.300.240.3200.320.320.40000.160.100.20

RootageMultiplicationGrowthPlantheightstatuscoefficientstatusincrement

粗

粗粗粗较粗粗较粗粗粗较粗粗粗

2.63.02.52.52.32.12.62.02.12.62.32.0

　　结果表明,添加马铃薯、香蕉、蛋白胨、花宝一号、活性炭


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