一、选择题
1、 植物组织培养成功与否，一方面取决于 培养材料本身 的性质；另一方面取决
于培养基的 种类 和 成分 。
2、 植物组织培养技术的三大难题分别为 褐变 、 污染 和 玻璃化 。
3、 病毒在植物体内的运转方式有 短距离运转 和 长距离运转 两种，
前者经过 细胞间的胞间连丝 向邻近细胞中扩散，速度很慢。后者通过寄主植物
韧皮部的疏导组织 随着营养输送进行转移，速度很快。
4、 悬浮培养的材料必须达到 悬浮培养物质分散性多 、细胞团较小均一性好，细
胞形状和细胞团大小大致相同 和 生长迅速 等三个要求。
5、 原生质体的融合可实现__体细胞__的杂交，其融合的方式分为___自发融合___和
__诱导融合__两类。
6、 从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生 单倍体 植株，胚培养通常
产生 二倍体 植株， 胚乳培养 通常产生三倍体植株。
7、具有防止褐变作用的维生素是___Vit.c___。
二、单项选择题（本大题共10小题，每小题1分，共10分）在每小题列出的四个选
项中只有一个选项是符合题目要求的，请将正确选项前的字母填在题前的括号内。
1、( C )可作为植物外植体的表面消毒剂是 。
A. 漂白粉和水 B. 次氯酸钠溶液和聚乙二醇 C. 氯化汞和新洁尔灭D.酒精和氯化钠
2、( B ）大多数植物组织培养最适温度一般为 ℃。
A.37±1℃ B.26±2℃ C.16±2℃ D.4±2℃
3、( A )在适宜的培养条件下，还可使愈伤组织长期传代生存下去，这种培养称为。
A. 继代培养 B. 再分化培养 C.胚状体培养 D. 驯化
4、( C )下列有关细胞全能性的含义，正确的是 。
A、每个生物体内的所有细胞都具有相同的功能
B、生物体内的任何一个细胞可以完成该个体的全部功能
C、生物体的每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能
D、生物体的每个细胞都经过产生、分裂、分化、生长、衰老、死亡的全过程
5、( D )下列不属于活性炭在组织培养中的作用是_________。
A、吸附有毒物质
B、减少褐变，防止玻璃化
C、创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长
D、增加培养基中的养分
6、( A )下列那种不是无性繁殖的器官_________。
A、种子 B、枝条 C、块茎 D、块根
7、 ( B )下列技术培育出的新个体中，遗传物质只来源于一个亲本的是 。
①细胞组织培养 ②细胞融合 ③扦插 ④诱导产生多倍体 ⑤杂交育种 ⑥转基因工程
A、①④ B、①③ C、②④ D、⑤⑥
8、( D )在下列选项中，不需要采用植物组织培养技术的是 。
A、利用基因工程培育抗棉铃虫的棉花植株
B、利用细胞工程技术培养“番茄一马铃薯”杂种植株
C、利用花药离体培养得到单倍体植株
D、利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗，得到染色体数目加倍的植株
9、( B ) 植物离体保存的主要步骤是 。
①离体培养物的保存 ②离体培养与祛除病原物 ③种质离体收集 ④遗传稳定性鉴定
A、①②③④ B、③②①④ C、②④①③ D、①②④③
10、 ( C ) 原生质体纯化步骤大致有如下几步 。
①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一
般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。
②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再
次离心，去上清液，如此重复三次。
③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块
和筛管、导管等杂质，收集滤液。
④用培养基清洗一次，最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。一般原生质体
的培养密度为104～106／ml。
A、①②③④ B、③②①④ C、③①②④ D、②③①④
三、判断题（对的打“√”，错的打“×”，并改正；每小题2分，共10分。）
1、（√ ）胚状体的维管组织与母体结构和外植体的维管组织一般没有联系。
2、（× ）培养基当中生长素与细胞分裂素的比例高时，仅形成愈伤组织。
3、（√ ）花药和花粉培养可获得单倍体植株。
4、（×）蔗糖可作为渗透性冰冻保护剂。
5、（×）一方亲本的细胞核和细胞质分另一方亲本的少量核物质和全部细胞质融合 叫细胞质杂交 。
四、名词解释（每小题3分，共15分）
1、脱分化:是指已分化的组织（细胞分裂已停止）在适当的培养条件下恢复细胞分裂活性，从已分化的成熟状态转变为分生状态，也就是由有结构和功能的组织转化为无 结构和特定功能的细胞团。
2、愈伤组织:植物各器官的外植体在离体的条件下，经细胞脱分化等一系列过程改变了它们原有的特性而形成的一种能迅速增殖的不特定结构和功能的细胞团，称为愈伤组织。
在人工培养基上从外植体诱导形成的一团无序生长的薄壁细胞。
3、人工种子:通过植物组织培养的方法获得的具有正常发育能力的材料，外面还包被特定的物质，在适宜条件下可以发芽成苗的植物幼体。
4、植物快速繁殖:利用离体培养技术，将来自优良植株的器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法（技术）称快速繁殖（无性繁殖或微繁），由于这种繁殖方式繁殖数量大、速度快，因此也称离体快速无性繁殖。
5、连续培养:是利用特别的培养容器进行大规模细胞培养的一种方式。连续培养过程中，不断注入新鲜培养基，排掉等体积的用过的培养基，培养液中的营养物质得到不断补充。Continuous Culture 对于植物细胞代谢调节的研究，决定各个生长限制因子对细胞生长的影响，以及次生物质的大量生产都有一定意义。
五、简答题（共30 分）
（一）、某培养基的配方是MS＋BA 1.5 mg/L＋NAA2.5 mg/L＋IBA 1.0 mg/L+ 2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素50倍，微量元素100倍，铁盐20倍，有机物100倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.5mg/ml，IBA母液浓度0.2mg/ml。要配制800ml该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）（12分）
（二）、如何减轻试管苗玻璃化现象？（10分）
（1）利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。或提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。
（2）适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度。或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。
（3）增加自然光照。 因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。
（4）改善培养器皿的气体交换状态封口膜
（5）在培养基中添加其他物质。如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。
（三）、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？（8分）
生长开始的季节采样：较幼嫩的材料
消毒：自来水较长时间冲洗+70%酒精浸泡植物种+无菌水冲洗2~3次+2%~10%NaClO（0.1%HgCl2）12min+无菌水冲洗3次。
接种环节：接种室的消毒、外植体的接种
外植体的接种程序。注意（防止交叉污染）：
①无菌滤纸上切除材料
②刀和镊子等接种工具使用一次应放入70%（或95%）酒精中浸泡，然后灼烧放晾备用 具体操作：①左手拿三角瓶或果酱瓶，用右手轻轻取下封口膜或盖子
②将三角瓶或果酱瓶的口靠近酒精灯火焰，瓶口稍微倾斜，这样瓶口外部在火焰上旋转灼烧数秒钟，后用镊子将外植体送入瓶中。
六、论述题（共15分）
为什么茎尖培养可获得无特定病毒植株？怎样获得无特定病毒的试管苗？获得的无病毒苗用一种方法鉴定其真的无特定病毒的植株？
植物脱毒（virus elimination）：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中浸染的病毒，生产健康的繁殖材料。
茎尖培养可以获得无特定病毒植株的原因：
病毒运转速度慢，加上茎尖分生组织没有维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长点的病毒数量极少，几乎检测不出。
鉴定方法：指示植物法
概念：有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特有的病斑，把这种植物称为病毒敏感植物或指示植物。
每种病毒都有自已的敏感植物
如：马铃薯病毒的敏感植物有千日红、黄花烟、毛叶曼陀罗；大蒜病毒的敏感植物有黎、千日红；大丽花病毒的敏感植物为：矮牵牛、黄瓜；菊花病毒：矮牵牛、豇豆 。
一、选择题
1、 植物组织培养成功与否，一方面取决于 培养材料本身 的性质；另一方面取决
于培养基的 种类 和 成分 。
2、 植物组织培养技术的三大难题分别为 褐变 、 污染 和 玻璃化 。
3、 病毒在植物体内的运转方式有 短距离运转 和 长距离运转 两种，
前者经过 细胞间的胞间连丝 向邻近细胞中扩散，速度很慢。后者通过寄主植物
韧皮部的疏导组织 随着营养输送进行转移，速度很快。
4、 悬浮培养的材料必须达到 悬浮培养物质分散性多 、细胞团较小均一性好，细
胞形状和细胞团大小大致相同 和 生长迅速 等三个要求。
5、 原生质体的融合可实现__体细胞__的杂交，其融合的方式分为___自发融合___和
__诱导融合__两类。
6、 从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生 单倍体 植株，胚培养通常
产生 二倍体 植株， 胚乳培养 通常产生三倍体植株。
7、具有防止褐变作用的维生素是___Vit.c___。
二、单项选择题（本大题共10小题，每小题1分，共10分）在每小题列出的四个选
项中只有一个选项是符合题目要求的，请将正确选项前的字母填在题前的括号内。
1、( C )可作为植物外植体的表面消毒剂是 。
A. 漂白粉和水 B. 次氯酸钠溶液和聚乙二醇 C. 氯化汞和新洁尔灭D.酒精和氯化钠
2、( B ）大多数植物组织培养最适温度一般为 ℃。
A.37±1℃ B.26±2℃ C.16±2℃ D.4±2℃
3、( A )在适宜的培养条件下，还可使愈伤组织长期传代生存下去，这种培养称为。
A. 继代培养 B. 再分化培养 C.胚状体培养 D. 驯化
4、( C )下列有关细胞全能性的含义，正确的是 。
A、每个生物体内的所有细胞都具有相同的功能
B、生物体内的任何一个细胞可以完成该个体的全部功能
C、生物体的每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能
D、生物体的每个细胞都经过产生、分裂、分化、生长、衰老、死亡的全过程
5、( D )下列不属于活性炭在组织培养中的作用是_________。
A、吸附有毒物质
B、减少褐变，防止玻璃化
C、创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长
D、增加培养基中的养分
6、( A )下列那种不是无性繁殖的器官_________。
A、种子 B、枝条 C、块茎 D、块根
7、 ( B )下列技术培育出的新个体中，遗传物质只来源于一个亲本的是 。
①细胞组织培养 ②细胞融合 ③扦插 ④诱导产生多倍体 ⑤杂交育种 ⑥转基因工程
A、①④ B、①③ C、②④ D、⑤⑥
8、( D )在下列选项中，不需要采用植物组织培养技术的是 。
A、利用基因工程培育抗棉铃虫的棉花植株
B、利用细胞工程技术培养“番茄一马铃薯”杂种植株
C、利用花药离体培养得到单倍体植株
D、利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗，得到染色体数目加倍的植株
9、( B ) 植物离体保存的主要步骤是 。
①离体培养物的保存 ②离体培养与祛除病原物 ③种质离体收集 ④遗传稳定性鉴定
A、①②③④ B、③②①④ C、②④①③ D、①②④③
10、 ( C ) 原生质体纯化步骤大致有如下几步 。
①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一
般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。
②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再
次离心，去上清液，如此重复三次。
③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块
和筛管、导管等杂质，收集滤液。
④用培养基清洗一次，最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。一般原生质体
的培养密度为104～106／ml。
A、①②③④ B、③②①④ C、③①②④ D、②③①④
三、判断题（对的打“√”，错的打“×”，并改正；每小题2分，共10分。）
1、（√ ）胚状体的维管组织与母体结构和外植体的维管组织一般没有联系。
2、（× ）培养基当中生长素与细胞分裂素的比例高时，仅形成愈伤组织。
3、（√ ）花药和花粉培养可获得单倍体植株。
4、（×）蔗糖可作为渗透性冰冻保护剂。
5、（×）一方亲本的细胞核和细胞质分另一方亲本的少量核物质和全部细胞质融合 叫细胞质杂交 。
四、名词解释（每小题3分，共15分）
1、脱分化:是指已分化的组织（细胞分裂已停止）在适当的培养条件下恢复细胞分裂活性，从已分化的成熟状态转变为分生状态，也就是由有结构和功能的组织转化为无 结构和特定功能的细胞团。
2、愈伤组织:植物各器官的外植体在离体的条件下，经细胞脱分化等一系列过程改变了它们原有的特性而形成的一种能迅速增殖的不特定结构和功能的细胞团，称为愈伤组织。
在人工培养基上从外植体诱导形成的一团无序生长的薄壁细胞。
3、人工种子:通过植物组织培养的方法获得的具有正常发育能力的材料，外面还包被特定的物质，在适宜条件下可以发芽成苗的植物幼体。
4、植物快速繁殖:利用离体培养技术，将来自优良植株的器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法（技术）称快速繁殖（无性繁殖或微繁），由于这种繁殖方式繁殖数量大、速度快，因此也称离体快速无性繁殖。
5、连续培养:是利用特别的培养容器进行大规模细胞培养的一种方式。连续培养过程中，不断注入新鲜培养基，排掉等体积的用过的培养基，培养液中的营养物质得到不断补充。Continuous Culture 对于植物细胞代谢调节的研究，决定各个生长限制因子对细胞生长的影响，以及次生物质的大量生产都有一定意义。
五、简答题（共30 分）
（一）、某培养基的配方是MS＋BA 1.5 mg/L＋NAA2.5 mg/L＋IBA 1.0 mg/L+ 2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素50倍，微量元素100倍，铁盐20倍，有机物100倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.5mg/ml，IBA母液浓度0.2mg/ml。要配制800ml该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）（12分）
（二）、如何减轻试管苗玻璃化现象？（10分）
（1）利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。或提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。
（2）适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度。或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。
（3）增加自然光照。 因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。
（4）改善培养器皿的气体交换状态封口膜
（5）在培养基中添加其他物质。如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。
（三）、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？（8分）
生长开始的季节采样：较幼嫩的材料
消毒：自来水较长时间冲洗+70%酒精浸泡植物种+无菌水冲洗2~3次+2%~10%NaClO（0.1%HgCl2）12min+无菌水冲洗3次。
接种环节：接种室的消毒、外植体的接种
外植体的接种程序。注意（防止交叉污染）：
①无菌滤纸上切除材料
②刀和镊子等接种工具使用一次应放入70%（或95%）酒精中浸泡，然后灼烧放晾备用 具体操作：①左手拿三角瓶或果酱瓶，用右手轻轻取下封口膜或盖子
②将三角瓶或果酱瓶的口靠近酒精灯火焰，瓶口稍微倾斜，这样瓶口外部在火焰上旋转灼烧数秒钟，后用镊子将外植体送入瓶中。
六、论述题（共15分）
为什么茎尖培养可获得无特定病毒植株？怎样获得无特定病毒的试管苗？获得的无病毒苗用一种方法鉴定其真的无特定病毒的植株？
植物脱毒（virus elimination）：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中浸染的病毒，生产健康的繁殖材料。
茎尖培养可以获得无特定病毒植株的原因：
病毒运转速度慢，加上茎尖分生组织没有维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长点的病毒数量极少，几乎检测不出。
鉴定方法：指示植物法
概念：有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特有的病斑，把这种植物称为病毒敏感植物或指示植物。
每种病毒都有自已的敏感植物
如：马铃薯病毒的敏感植物有千日红、黄花烟、毛叶曼陀罗；大蒜病毒的敏感植物有黎、千日红；大丽花病毒的敏感植物为：矮牵牛、黄瓜；菊花病毒：矮牵牛、豇豆 。