2. 2. 5 回收率试验 精密量取鼻康复药液1m l , 薄荷脑对照品溶液(3. 25m l ・m in -1) 2m l 及樟脑内标
液1m l 置10m l 量瓶中, 用乙酸乙酯稀释至刻度, 摇匀。按上述测定条件, 取1Λl 注入气相色谱仪。结果回收率为97. 17%, R SD =2. 50%(n =5) 。
2. 2. 6 样品中薄荷脑含量测定 取3批不同批号鼻康复样品, 按上述条件对样品中薄荷脑含量进行测定, 色谱图见图5, 含量测定结果见表2
。
图4 冰片TL C 图谱
1-鼻康复滴剂供试品; 2-冰片对照品; 3-冰片阴性对照品
匀, 为内标液。精密量取薄荷脑对照品溶液1, 2, 3m l 分别置于10m l 量瓶中, 再精密量取内标液1m l , 分别加入以上3个量瓶中, 匀, 按上述测定条件, 3结果见表1。
表1 溶液浓度 V s ∶V 内
1∶1
2∶1
3∶1
校正因子(f i )
0. 91540. 90820. 90310. 92550. 92420. 90810. 90430. 92180. 9261
θx (f i )
%R SD
图5 鼻康复滴剂样品气相色谱图
1-溶剂峰; 2-樟脑峰; 3-薄荷脑峰; 4, 5, 6, -其它成分色谱峰
表2 样品中薄荷脑含量测定结果
0. 9152
1. 02
批号
[***********]
0. 59360. 62680. 6215
测得量 %
0. 58110. 59180. 60240. 62370. 62880. 63220. 60830. 62260. 5916
θx 0. 58010. 62750. 6312
0. 58980. 62780. 6150
1. 580. 512. 50
3 讨 论
3. 1 鼻康复滴剂以辛夷、苍耳子、薄荷脑为主要药
2. 2. 3 线性化范围试验 精密量取薄荷脑对照品
溶液(4. 06m g ・m l -1) 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0m l 分
别置10m l 量瓶中, 再分别精密加入樟脑内标液1. 0
各取1Λl 进样, 以m l , 加乙酸乙酯稀释至刻度, 摇匀。
上述色谱条件测定, 以薄荷脑对照品与樟脑内标物的峰面积比值为纵坐标, 薄荷脑量为横坐标, 计算得回归方程为Y =0. 10852+1. 6725X , r =0. 9994, 表明薄荷脑在0. 406～2. 030Λg 范围内呈线性关系。2. 2. 4 精密度试验 对同一批号样品按上述条件
θ=0. 6195%, R SD =2. 16%, (n 进行测定, 平均值x =6) 。
物, 因辛夷中含多种挥发油, 苍耳子中含苍耳子苷
等, 故对其进行定量获得标准品较难。而薄荷脑有对照品, 故选择测定本制剂中薄荷脑含量来控制其质量。
3. 2 内标物经反复筛选, 以樟脑为内标物比较合适, 樟脑先于薄荷脑出柱, 且与薄荷脑的分离度符合药典规定。
参考文献
12
沙世炎, 徐礼 编著. 中草药有效成分分析法(上册) . 北京:人民卫生出版社, 1982, 33:121.
伍朝 , 杨胜华, 吴苏澄, 等. 冰片及含冰片中成药的薄层层析
(收稿:1998205229) 鉴别. 中成药研究, 1987, (12) :30.
低分子肝素分子量及其分布的测定
范慧红 刘金秀 徐康森(北京100050中国药品生物制品检定所)
摘要 目的:建立一种低分子肝素分子量及其分布测定的质量控制方法。方法:采用高效凝胶渗透色谱法(H PGPC ) , 色谱柱为
Shodex A sah i pak GF -510HQ (7. 6mm ×300mm ) 或T SK G 3000S W xl (7. 8mm ×300mm ) , 理论塔板数以葡萄糖峰计算分别为15206和15731; 柱温35℃; 流速0. 5m l ・m in -1; 示差折光检测器和二极管阵列检测器联用, 检测波长为234nm 。结果:测得两
・332・Ch in P ha r m J , 1999M ay , V ol . 34N o . 5中国药学杂志1999年5月第34卷第5期
个低分子肝素样品的重均分子量和分子量分布。结论:H PGPC 具有简便、快速和重现性好等特点, 适合于该类药物的质量控制。
关键词 低分子肝素; 高效凝胶渗透色谱法; 分子量; 分子量分布
M ea sure m en t of m olecular we ight and m olecular we ight d istr ibution of low m olecular we ight hepar i n Fan H u ihong (Fan HH ) , L iu J inx iu (L iu JX ) , Xu Kangsen (Xu KS ) (N ational Institu te f or the Control of P har m a 2
. B eij ing , 100050) ceu tical and B iolog ical P rod ucts
ABSTRACT OBJECTI VE :To develop a m ethod fo r the quality contro l of low mo lecular w eigh t heparin . M ETHOD S :M o lec 2ular w eigh t and mo lecular w eigh t distributi on of LMW H w as deter m ined by h igh perfo r m ance gel per m eati on ch rom atography (H PGPC ) on Shodex A sah i pak GF -510HQ co lum n o r T SK G 3000S W xl co lum n at 35℃w ith 2. 5. 0) sodium sulfate as the mobile phase , It w as detecled by R I and UV detecto r at 234nm . T flow rate of w as 0. 5m l ・m in -1. RE 2SUL TS :T he mo lecular w eigh t and mo lecular w eigh t distributi tw o les . R SD w as less than 1%.CONCL USI ON :T he m ethod is si m p good
KEY WOR D S low w , PGPC , mo lecular w eigh t , mo lecular w eigh t distributi on
低分子肝素(low m o lecu lar w eigh t hep arin , 简称LMW H ) 是近十几年发展起来的新一代肝素类抗血栓药物, 其抗血栓作用优于肝素, 而抗凝血作用却低于肝素, 其具有生物利用度高, 体内半衰期长, 出血倾向小, 口服易吸收等特点, 目前已广泛用于临床。LMW H 是指一类产品, 由于LMW H 生产方法不同和生产原料的差异, 使得该类产品存在以下区别:分子量及其分布不同, FXa F IIa 值不同, 钠盐和钙盐的不同。LMW H 一般指重均分子量在8000以下, 低于8000的级分含量不得少于60%的糖胺聚
[1]
糖硫酸盐且FXa F IIa 不低于1. 5。分子量及其分布是LMW H 产品的重要质量控制指标。目前用于LMW H 分子量及其分布测定的方法有:粘度法, 凝胶色谱法, 聚丙烯酰胺凝胶电泳法, 13C 2NM R 和光散射法。其中高效凝胶渗透色谱法(H PGPC ) 具有简便、快速和重现性好等特点, 已开始用于多糖类药品的质量控制。本研究根据英国药典[1]和欧洲药典[2]的方法, 并结合有关文献[3～4], 通过实验建立了H PGPC 测定低分子肝素分子量及其分布, 获得了满意结果, 为该类药物质量控制提供依据。1 材料与方法1. 1 药品与试剂
药品:LMW H 标准对照品(EPCR S ) , 其数均分子量M na 为3700, 欧洲药典委员会生物标准品中心。低分子肝素样品分别为:德国基诺药厂(Kno ll ) 提供的肝素钠C livarin , 批号30901, 28101, 33801; 广东天普生物化学制药有限公司提供的低分子肝素钙, 批号J 970101, 970101A , 970101B 。试剂:叠氮化
中国药学杂志1999年5月第34卷第5期
钠(N aN 3) 为进口超纯试剂; 无水硫酸钠; 无水葡萄糖为国产分析纯试剂。1. 2 仪器
日本岛津L C -10A T 泵, R I -6A 示差折光检测器, SPD -M XA 二极管阵列检测器, CBM -10A 接口, D GU -4A 脱气装置, CTO -10A 恒温柱箱, CLA SS -L C 10系统软件和GPC 专用软件。M illi 2po re 超纯水器。1. 3 溶液的配制
流动相:配制2. 84%硫酸钠的水溶液(内含0. 02%N aN 3) , 以1m o l ・L -1硫酸调pH 为5. 0, 0. 45Λm 滤膜过滤。标准品溶液:称取EPCR S 10m g , 加流动相1m l 使其溶解。供试品溶液:称取LMW H 样品10m g , 加流动相1m l 使其溶解。1. 4 系统校正
首先将仪器按顺序连接, 色谱柱的出口接紫外检测器, 紫外检测器出口接示差折光检测器。然后按以下色谱条件进行系统校正。色谱柱为Shodex A sah i pak GF -510HQ (7. 6mm ×300mm ) 用于Kno ll 样品测定, T SK G 3000S W x l (7. 8mm ×300mm ) 用于广东天普样品测定, 理论塔板数以葡萄糖峰计算分别为15206和15731; 柱温35℃; 流速0. 5m l ・m in -1; 检测波长为234nm 。取标准品溶液25Λl 进样, 同时记录两检测器色谱图, 精确测出样品到达两检测器的时间差, 将两色谱图时间对准得到色谱柱的校正曲线, 校正中用的保留时间以示差折光检测器的保留时间为准。按以下公式计算:
(2) 6UV 234 (1) f =M na r =6R I r
Ch in P ha r m J , 1999M ay , V ol . 34N o . 5
・333・
M i =fR Ii UV 234i (3)
其中:6R I 和6UV 234分别为示差折光检测器
表1 LMW H 重均分子量及分子量分布. n =3
批号[**************]J 970101J 970101A 970101重均分子量±R SD 4525±0. 5%(4167) 4667±0. 5%(4275) 4735±0. 5%(4151) 4979±0. 2%4695±0. 1%4644±0. 2%
低于8000级分的含量(%) ±R SD
90. 8±0. 2%(93. 0)
(90. 6±0. 2%93. 0)
90. 2±0. 2%(94. 0)
87. 6±0. 1%87. 7±0. 1%88. 0±0. 1%
色谱图中有效峰的总面积和紫外检测器色谱图中有
效峰的总面积。M na 为EPCR S 的数均分子量3700; R Ii 和UV 234i 分别为i 时间点两检测器色谱图的峰高, M i 为i 时间点的分子量。
均匀选择5～7个M i 与对应的R ti 作线性回归, 得到分子量对数值与保留时间的线性方程, 确保相关系数r 大于0. 99。即获得色谱柱的校正曲线。1. 5 样品测定
供试品溶液25Λl 进样, 记录示差折光检测器色谱图, 按下式计算样品的重均分子量重均分子量。重均分子量=6R Ii 6R Ii (4) M i 本研究采用岛津GPC 其分布计算。2 结果与讨论
2. 1 标准对照品离得到示差折光检测器色谱图和紫外检测器色谱图。根据系统校正由色谱图中有效峰的总面积计算得到r 值分别为0. 1490(GF -510HQ 柱) 和0. 1629(T SK G 3000S W x l 柱) , f 值为24832和22713。校正曲线的线性回归方程的相关系数分别为0. 9975和0. 9958, 由此说明本研究所用的两色谱柱均适合LMW H 的分离。
2. 2 根据两供试品示差折光检测器色谱图, 由岛津GPC 专用软件计算得到两供试品重均分子量及其分布测定结果见表1。
2. 3 Kno ll 样品本研究方法测定结果与本品在德国测定的结果基本一致(如表1所示) , 说明本研究设
注:()内为德国测定结果
计的数据处理方法是合理的, 测定结果是可靠的。建议本研究方法可以作为低分子肝素分子量测定用的质量控制方法。
2. 4 由于EPCR S 对于分子量大于10000的肝素, , 日本等4]LMW H 活性[, 我们正在着手国内肝素分子量测定用标准品的研制工作, 准备建立一种只需单一检测器测定同时可以用普通GPC 软件进行数据处理的H PGPC , 这样可以拓宽检品范围, 节约检验费用, 方法也易于推广。3 结 论
本研究首次解决了LMW H 分子量及其分布测定数据处理的难题, 建立的H PGPC 具有简便、快速和重现性好等特点, 适于该类药品的质量控制。
参考文献
1234
英国药典1993年版增补本(1994) :1335. 欧洲药典1997年版:828.
N eilsen JH . A convenient m ethod fo r mo lecular m ass deter m i 2nati on of heparin . T h ro m b H ae m ost , 1992, 68(4) :478.
A hm ad A S , W alter J , Jean M , et a l . Feasibility study of heparin m ass calibrato r as a GPC calibrato r fo r heparins and low
. J P ha r m S ci , 1993, 83(2) :1994. mo leculo r w eigh t heparins
(收稿:1998212210)
・334・Ch in P ha r m J , 1999M ay , V ol . 34N o . 5
中国药学杂志1999年5月第34卷第5期
2. 2. 5 回收率试验 精密量取鼻康复药液1m l , 薄荷脑对照品溶液(3. 25m l ・m in -1) 2m l 及樟脑内标
液1m l 置10m l 量瓶中, 用乙酸乙酯稀释至刻度, 摇匀。按上述测定条件, 取1Λl 注入气相色谱仪。结果回收率为97. 17%, R SD =2. 50%(n =5) 。
2. 2. 6 样品中薄荷脑含量测定 取3批不同批号鼻康复样品, 按上述条件对样品中薄荷脑含量进行测定, 色谱图见图5, 含量测定结果见表2
。
图4 冰片TL C 图谱
1-鼻康复滴剂供试品; 2-冰片对照品; 3-冰片阴性对照品
匀, 为内标液。精密量取薄荷脑对照品溶液1, 2, 3m l 分别置于10m l 量瓶中, 再精密量取内标液1m l , 分别加入以上3个量瓶中, 匀, 按上述测定条件, 3结果见表1。
表1 溶液浓度 V s ∶V 内
1∶1
2∶1
3∶1
校正因子(f i )
0. 91540. 90820. 90310. 92550. 92420. 90810. 90430. 92180. 9261
θx (f i )
%R SD
图5 鼻康复滴剂样品气相色谱图
1-溶剂峰; 2-樟脑峰; 3-薄荷脑峰; 4, 5, 6, -其它成分色谱峰
表2 样品中薄荷脑含量测定结果
0. 9152
1. 02
批号
[***********]
0. 59360. 62680. 6215
测得量 %
0. 58110. 59180. 60240. 62370. 62880. 63220. 60830. 62260. 5916
θx 0. 58010. 62750. 6312
0. 58980. 62780. 6150
1. 580. 512. 50
3 讨 论
3. 1 鼻康复滴剂以辛夷、苍耳子、薄荷脑为主要药
2. 2. 3 线性化范围试验 精密量取薄荷脑对照品
溶液(4. 06m g ・m l -1) 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0m l 分
别置10m l 量瓶中, 再分别精密加入樟脑内标液1. 0
各取1Λl 进样, 以m l , 加乙酸乙酯稀释至刻度, 摇匀。
上述色谱条件测定, 以薄荷脑对照品与樟脑内标物的峰面积比值为纵坐标, 薄荷脑量为横坐标, 计算得回归方程为Y =0. 10852+1. 6725X , r =0. 9994, 表明薄荷脑在0. 406～2. 030Λg 范围内呈线性关系。2. 2. 4 精密度试验 对同一批号样品按上述条件
θ=0. 6195%, R SD =2. 16%, (n 进行测定, 平均值x =6) 。
物, 因辛夷中含多种挥发油, 苍耳子中含苍耳子苷
等, 故对其进行定量获得标准品较难。而薄荷脑有对照品, 故选择测定本制剂中薄荷脑含量来控制其质量。
3. 2 内标物经反复筛选, 以樟脑为内标物比较合适, 樟脑先于薄荷脑出柱, 且与薄荷脑的分离度符合药典规定。
参考文献
12
沙世炎, 徐礼 编著. 中草药有效成分分析法(上册) . 北京:人民卫生出版社, 1982, 33:121.
伍朝 , 杨胜华, 吴苏澄, 等. 冰片及含冰片中成药的薄层层析
(收稿:1998205229) 鉴别. 中成药研究, 1987, (12) :30.
低分子肝素分子量及其分布的测定
范慧红 刘金秀 徐康森(北京100050中国药品生物制品检定所)
摘要 目的:建立一种低分子肝素分子量及其分布测定的质量控制方法。方法:采用高效凝胶渗透色谱法(H PGPC ) , 色谱柱为
Shodex A sah i pak GF -510HQ (7. 6mm ×300mm ) 或T SK G 3000S W xl (7. 8mm ×300mm ) , 理论塔板数以葡萄糖峰计算分别为15206和15731; 柱温35℃; 流速0. 5m l ・m in -1; 示差折光检测器和二极管阵列检测器联用, 检测波长为234nm 。结果:测得两
・332・Ch in P ha r m J , 1999M ay , V ol . 34N o . 5中国药学杂志1999年5月第34卷第5期
个低分子肝素样品的重均分子量和分子量分布。结论:H PGPC 具有简便、快速和重现性好等特点, 适合于该类药物的质量控制。
关键词 低分子肝素; 高效凝胶渗透色谱法; 分子量; 分子量分布
M ea sure m en t of m olecular we ight and m olecular we ight d istr ibution of low m olecular we ight hepar i n Fan H u ihong (Fan HH ) , L iu J inx iu (L iu JX ) , Xu Kangsen (Xu KS ) (N ational Institu te f or the Control of P har m a 2
. B eij ing , 100050) ceu tical and B iolog ical P rod ucts
ABSTRACT OBJECTI VE :To develop a m ethod fo r the quality contro l of low mo lecular w eigh t heparin . M ETHOD S :M o lec 2ular w eigh t and mo lecular w eigh t distributi on of LMW H w as deter m ined by h igh perfo r m ance gel per m eati on ch rom atography (H PGPC ) on Shodex A sah i pak GF -510HQ co lum n o r T SK G 3000S W xl co lum n at 35℃w ith 2. 5. 0) sodium sulfate as the mobile phase , It w as detecled by R I and UV detecto r at 234nm . T flow rate of w as 0. 5m l ・m in -1. RE 2SUL TS :T he mo lecular w eigh t and mo lecular w eigh t distributi tw o les . R SD w as less than 1%.CONCL USI ON :T he m ethod is si m p good
KEY WOR D S low w , PGPC , mo lecular w eigh t , mo lecular w eigh t distributi on
低分子肝素(low m o lecu lar w eigh t hep arin , 简称LMW H ) 是近十几年发展起来的新一代肝素类抗血栓药物, 其抗血栓作用优于肝素, 而抗凝血作用却低于肝素, 其具有生物利用度高, 体内半衰期长, 出血倾向小, 口服易吸收等特点, 目前已广泛用于临床。LMW H 是指一类产品, 由于LMW H 生产方法不同和生产原料的差异, 使得该类产品存在以下区别:分子量及其分布不同, FXa F IIa 值不同, 钠盐和钙盐的不同。LMW H 一般指重均分子量在8000以下, 低于8000的级分含量不得少于60%的糖胺聚
[1]
糖硫酸盐且FXa F IIa 不低于1. 5。分子量及其分布是LMW H 产品的重要质量控制指标。目前用于LMW H 分子量及其分布测定的方法有:粘度法, 凝胶色谱法, 聚丙烯酰胺凝胶电泳法, 13C 2NM R 和光散射法。其中高效凝胶渗透色谱法(H PGPC ) 具有简便、快速和重现性好等特点, 已开始用于多糖类药品的质量控制。本研究根据英国药典[1]和欧洲药典[2]的方法, 并结合有关文献[3～4], 通过实验建立了H PGPC 测定低分子肝素分子量及其分布, 获得了满意结果, 为该类药物质量控制提供依据。1 材料与方法1. 1 药品与试剂
药品:LMW H 标准对照品(EPCR S ) , 其数均分子量M na 为3700, 欧洲药典委员会生物标准品中心。低分子肝素样品分别为:德国基诺药厂(Kno ll ) 提供的肝素钠C livarin , 批号30901, 28101, 33801; 广东天普生物化学制药有限公司提供的低分子肝素钙, 批号J 970101, 970101A , 970101B 。试剂:叠氮化
中国药学杂志1999年5月第34卷第5期
钠(N aN 3) 为进口超纯试剂; 无水硫酸钠; 无水葡萄糖为国产分析纯试剂。1. 2 仪器
日本岛津L C -10A T 泵, R I -6A 示差折光检测器, SPD -M XA 二极管阵列检测器, CBM -10A 接口, D GU -4A 脱气装置, CTO -10A 恒温柱箱, CLA SS -L C 10系统软件和GPC 专用软件。M illi 2po re 超纯水器。1. 3 溶液的配制
流动相:配制2. 84%硫酸钠的水溶液(内含0. 02%N aN 3) , 以1m o l ・L -1硫酸调pH 为5. 0, 0. 45Λm 滤膜过滤。标准品溶液:称取EPCR S 10m g , 加流动相1m l 使其溶解。供试品溶液:称取LMW H 样品10m g , 加流动相1m l 使其溶解。1. 4 系统校正
首先将仪器按顺序连接, 色谱柱的出口接紫外检测器, 紫外检测器出口接示差折光检测器。然后按以下色谱条件进行系统校正。色谱柱为Shodex A sah i pak GF -510HQ (7. 6mm ×300mm ) 用于Kno ll 样品测定, T SK G 3000S W x l (7. 8mm ×300mm ) 用于广东天普样品测定, 理论塔板数以葡萄糖峰计算分别为15206和15731; 柱温35℃; 流速0. 5m l ・m in -1; 检测波长为234nm 。取标准品溶液25Λl 进样, 同时记录两检测器色谱图, 精确测出样品到达两检测器的时间差, 将两色谱图时间对准得到色谱柱的校正曲线, 校正中用的保留时间以示差折光检测器的保留时间为准。按以下公式计算:
(2) 6UV 234 (1) f =M na r =6R I r
Ch in P ha r m J , 1999M ay , V ol . 34N o . 5
・333・
M i =fR Ii UV 234i (3)
其中:6R I 和6UV 234分别为示差折光检测器
表1 LMW H 重均分子量及分子量分布. n =3
批号[**************]J 970101J 970101A 970101重均分子量±R SD 4525±0. 5%(4167) 4667±0. 5%(4275) 4735±0. 5%(4151) 4979±0. 2%4695±0. 1%4644±0. 2%
低于8000级分的含量(%) ±R SD
90. 8±0. 2%(93. 0)
(90. 6±0. 2%93. 0)
90. 2±0. 2%(94. 0)
87. 6±0. 1%87. 7±0. 1%88. 0±0. 1%
色谱图中有效峰的总面积和紫外检测器色谱图中有
效峰的总面积。M na 为EPCR S 的数均分子量3700; R Ii 和UV 234i 分别为i 时间点两检测器色谱图的峰高, M i 为i 时间点的分子量。
均匀选择5～7个M i 与对应的R ti 作线性回归, 得到分子量对数值与保留时间的线性方程, 确保相关系数r 大于0. 99。即获得色谱柱的校正曲线。1. 5 样品测定
供试品溶液25Λl 进样, 记录示差折光检测器色谱图, 按下式计算样品的重均分子量重均分子量。重均分子量=6R Ii 6R Ii (4) M i 本研究采用岛津GPC 其分布计算。2 结果与讨论
2. 1 标准对照品离得到示差折光检测器色谱图和紫外检测器色谱图。根据系统校正由色谱图中有效峰的总面积计算得到r 值分别为0. 1490(GF -510HQ 柱) 和0. 1629(T SK G 3000S W x l 柱) , f 值为24832和22713。校正曲线的线性回归方程的相关系数分别为0. 9975和0. 9958, 由此说明本研究所用的两色谱柱均适合LMW H 的分离。
2. 2 根据两供试品示差折光检测器色谱图, 由岛津GPC 专用软件计算得到两供试品重均分子量及其分布测定结果见表1。
2. 3 Kno ll 样品本研究方法测定结果与本品在德国测定的结果基本一致(如表1所示) , 说明本研究设
注:()内为德国测定结果
计的数据处理方法是合理的, 测定结果是可靠的。建议本研究方法可以作为低分子肝素分子量测定用的质量控制方法。
2. 4 由于EPCR S 对于分子量大于10000的肝素, , 日本等4]LMW H 活性[, 我们正在着手国内肝素分子量测定用标准品的研制工作, 准备建立一种只需单一检测器测定同时可以用普通GPC 软件进行数据处理的H PGPC , 这样可以拓宽检品范围, 节约检验费用, 方法也易于推广。3 结 论
本研究首次解决了LMW H 分子量及其分布测定数据处理的难题, 建立的H PGPC 具有简便、快速和重现性好等特点, 适于该类药品的质量控制。
参考文献
1234
英国药典1993年版增补本(1994) :1335. 欧洲药典1997年版:828.
N eilsen JH . A convenient m ethod fo r mo lecular m ass deter m i 2nati on of heparin . T h ro m b H ae m ost , 1992, 68(4) :478.
A hm ad A S , W alter J , Jean M , et a l . Feasibility study of heparin m ass calibrato r as a GPC calibrato r fo r heparins and low
. J P ha r m S ci , 1993, 83(2) :1994. mo leculo r w eigh t heparins
(收稿:1998212210)
・334・Ch in P ha r m J , 1999M ay , V ol . 34N o . 5
中国药学杂志1999年5月第34卷第5期