脯氨酸含量测定方法

脯氨酸含量的测定

1．标准曲线制作

（1）取7支具塞刻度试管按表1加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min 。 （2）取出冷却后向各管加入5ml 甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以“0”管为对照在波长520nm 下比色。

表1 各试管中试剂加入量(ml)

管号 标准脯氨酸 H 2O 2 冰乙酸 显色液

0 0 2.0 2.0 2.0

1 0.2 1.8 2.0 2.0

2 0.4 1.6 2.0 2.0

3 0.8 1.2 2.0 2.0

4 1.2 0.8 2.0 2.0

5 1.6 0.4 2.0 2.0

6 2.0 0 2.0 2.0

（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。 测定：0.3克叶片，加入5毫升磺基水杨酸，加盖，沸水浴10分钟，过滤，吸取滤液2毫升（同时作空白，吸取2毫升蒸馏水）、2毫升冰醋酸和3毫升酸性茚三酮，沸水浴40分钟，冷却，加入5毫升甲苯，充分振荡，静止分层，取上层甲苯溶液于比色皿中，520纳米下比色。

结果计算：脯氨酸含量（μg/g鲜重）=C×V/a/W C:提取液中脯氨酸含量 V ：提取液总体积

a:测定时所吸取的提取液的体积 w:样品重

脯氨酸含量的测定

1．标准曲线制作

（1）取7支具塞刻度试管按表1加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min 。 （2）取出冷却后向各管加入5ml 甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以“0”管为对照在波长520nm 下比色。

表1 各试管中试剂加入量(ml)

管号 标准脯氨酸 H 2O 2 冰乙酸 显色液

0 0 2.0 2.0 2.0

1 0.2 1.8 2.0 2.0

2 0.4 1.6 2.0 2.0

3 0.8 1.2 2.0 2.0

4 1.2 0.8 2.0 2.0

5 1.6 0.4 2.0 2.0

6 2.0 0 2.0 2.0

（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。 测定：0.3克叶片，加入5毫升磺基水杨酸，加盖，沸水浴10分钟，过滤，吸取滤液2毫升（同时作空白，吸取2毫升蒸馏水）、2毫升冰醋酸和3毫升酸性茚三酮，沸水浴40分钟，冷却，加入5毫升甲苯，充分振荡，静止分层，取上层甲苯溶液于比色皿中，520纳米下比色。

结果计算：脯氨酸含量（μg/g鲜重）=C×V/a/W C:提取液中脯氨酸含量 V ：提取液总体积

a:测定时所吸取的提取液的体积 w:样品重


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