咪唑的性质
名称：Imidazole ； 1,3-diazacyclopenta-2,4-diene
CAS 号：288-32-4
Compound ID：795
分子式： C3H4N2
分子量： 68.07726 [g/mol]
H-Bond Donor： 1
H-Bond Acceptor： 2
pKa ： 7.1
熔点： 90-91℃
密度：1.23 g/cm 3
外观：白色固体，或淡黄色固体
咪唑与不同二价阳离子结合力强弱：（括弧内是结合常数对数，该值越大结合力越强）
Ca 2+ (0.1); Mn 2+ (1.6); Fe 2+ (3.3); Co 2+ (2.4); Ni 2+ (2.9); Cu 2+ (4.2); Zn 2+ (2.0)
溶液配制：
咪唑的水溶性很好，可达500mg/ml，溶液澄清。可以用咪唑来配制缓冲液，其缓冲范围是pH6.2-7.8（25℃）。
稳定性及保存：
咪唑溶液很稳定，可以高温灭菌处理。2-8℃可保存两年。注意，应当避光保存。 注意：咪唑本身在紫外波段下有光吸收！
蛋白结晶用的缓冲液中是否应该除去咪唑？
问：过完Ni 亲和层析柱子之后，洗脱液（elute ）中250mM （或500mM 甚至1M ）的咪唑是否应该出去？
答：一般情况下，单纯过一个Ni 柱是不够的，即便是样品足够纯，最好还是走一个凝胶过滤层析（分子筛）。走分子筛的过程当中可以很方便将咪唑除去。如果咪唑对于你样品蛋白的稳定性和均一性很重要，则可以考虑保留一定浓度的咪唑，一般来说20mM - 200mM是比较合理的浓度范围。一些情况下，如果有咪唑存在，蛋白便不能结晶，这时就需要除去咪唑。咪唑与蛋白之间的关系不能一概而论，不能说一定是什么样的，要看是什么蛋白。例如，前面提到咪唑的合理浓度范围是20mM - 200mM，但Artem G. Evdokimov有一个晶体只能在0.6M 咪唑和乙酸缓冲液中长出来，晶体解析出来以后发现每个蛋白分子上结合了两个咪唑分子。
有些情况下，经Ni 柱纯化获得的蛋白样品除去咪唑后发生沉淀，可能的原因是一部分Ni 离子从柱子上脱离下来混在了样品当中。当咪唑被除去以后，Ni 便可以与蛋白上的His 标签结合造成蛋白质聚集。可以考虑利用螯合剂来除去那些多余的Ni 离子。
咪唑的性质
名称：Imidazole ； 1,3-diazacyclopenta-2,4-diene
CAS 号：288-32-4
Compound ID：795
分子式： C3H4N2
分子量： 68.07726 [g/mol]
H-Bond Donor： 1
H-Bond Acceptor： 2
pKa ： 7.1
熔点： 90-91℃
密度：1.23 g/cm 3
外观：白色固体，或淡黄色固体
咪唑与不同二价阳离子结合力强弱：（括弧内是结合常数对数，该值越大结合力越强）
Ca 2+ (0.1); Mn 2+ (1.6); Fe 2+ (3.3); Co 2+ (2.4); Ni 2+ (2.9); Cu 2+ (4.2); Zn 2+ (2.0)
溶液配制：
咪唑的水溶性很好，可达500mg/ml，溶液澄清。可以用咪唑来配制缓冲液，其缓冲范围是pH6.2-7.8（25℃）。
稳定性及保存：
咪唑溶液很稳定，可以高温灭菌处理。2-8℃可保存两年。注意，应当避光保存。 注意：咪唑本身在紫外波段下有光吸收！
蛋白结晶用的缓冲液中是否应该除去咪唑？
问：过完Ni 亲和层析柱子之后，洗脱液（elute ）中250mM （或500mM 甚至1M ）的咪唑是否应该出去？
答：一般情况下，单纯过一个Ni 柱是不够的，即便是样品足够纯，最好还是走一个凝胶过滤层析（分子筛）。走分子筛的过程当中可以很方便将咪唑除去。如果咪唑对于你样品蛋白的稳定性和均一性很重要，则可以考虑保留一定浓度的咪唑，一般来说20mM - 200mM是比较合理的浓度范围。一些情况下，如果有咪唑存在，蛋白便不能结晶，这时就需要除去咪唑。咪唑与蛋白之间的关系不能一概而论，不能说一定是什么样的，要看是什么蛋白。例如，前面提到咪唑的合理浓度范围是20mM - 200mM，但Artem G. Evdokimov有一个晶体只能在0.6M 咪唑和乙酸缓冲液中长出来，晶体解析出来以后发现每个蛋白分子上结合了两个咪唑分子。
有些情况下，经Ni 柱纯化获得的蛋白样品除去咪唑后发生沉淀，可能的原因是一部分Ni 离子从柱子上脱离下来混在了样品当中。当咪唑被除去以后，Ni 便可以与蛋白上的His 标签结合造成蛋白质聚集。可以考虑利用螯合剂来除去那些多余的Ni 离子。