叶片横切的程序
石蜡包埋:
第一天下午6点冷水浸泡材料。 第二天10点30用开水煮22分钟,冷却,11点25固定。固定液:50%乙醇60毫升+甲醛3.7毫升+冰醋酸4毫升。 第三天上午8点05水洗后放入75%乙醇中脱水;8点35换95%乙醇;9点03换纯乙醇;9点21换第二次纯乙醇;9点45换1/2二甲苯+1/2纯乙醇;10点45换纯二甲苯;12点加石蜡放入35℃烘箱中;6点再加石蜡;10点30第二次加石蜡。 第四天上午8点升温至60℃;至60℃后换烧杯蒸发2小时;再换60℃的液体纯石蜡(用电炉融化后过滤;预先放入烘箱中达60℃);3-4个小时再换第二次液体纯石蜡;第三次等。最后包埋,将处理好的材料放入包埋盒中,等石蜡凝固后,再放到水槽里冲洗,以免包埋好的石蜡进水,切片时容易碎。
切片:
将包埋好的石蜡切成小块,粘在小木块上,放入石蜡切片机上切。取一载玻片,在载玻片上滴一滴粘片剂,用手摸匀,再在其上滴一滴水。将切好的石蜡片(超薄),放入有水的载波片上,放在电炉上微烤,直至石蜡片完全舒展,平铺在载玻片上。
镜鉴:将作好的石蜡片子,放在显微镜下观察,如果叶片的上下表皮完好或撕裂程度不大,贴好标签,放好待用。
封片:
纯二甲苯(2小时40℃,在烘箱中进行)→1/2二甲苯+1/2纯乙醇→纯乙醇→75%乙醇→水→番红(1%的乙醇50%)1.5-2小时→水→龙胆紫(1%)2分钟→大盆水洗→75%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇→1/2二甲苯+1/2纯乙醇→纯二甲苯→纯二甲苯→中性树胶封片。
注意:第一步的纯二甲苯脱石蜡应2小时以上,(温度40℃放入烘箱中);再番红染色液中停留2小时,如新鲜番红染色液1.5小时也可。其余各缸3-5分钟,每缸只能放8-9个片子。
明胶粘片剂:
明胶(粉末)1g
蒸馏水100ml
石炭酸2g
甘油15ml
先将粉末状的明胶徐徐溶入微温(36℃)的100g蒸馏水中,待全部溶解以后,再加入2g石炭酸的结晶与15ml甘油,搅拌使完全溶解,然后过滤,储存于有玻
璃塞的瓶子中待用。
外稃表皮的实验方法
新鲜叶片自FAA中取出,蒸馏水冲洗,置入铬酸(10%)-硝酸(10%)溶液(1:1)40℃温箱中处理0.5-4小时,待叶肉组织和上下表皮开始分离时,将材料取出用水洗净,移至50%酒精中备用。制片时,将材料置于载玻片上,用刀片和针尖轻轻刮去叶肉组织,将表皮用1%番红酒精溶液染色约0.5-3分钟后,制成永久玻片。外稃处理方法同叶片。
叶片横切的程序
石蜡包埋:
第一天下午6点冷水浸泡材料。 第二天10点30用开水煮22分钟,冷却,11点25固定。固定液:50%乙醇60毫升+甲醛3.7毫升+冰醋酸4毫升。 第三天上午8点05水洗后放入75%乙醇中脱水;8点35换95%乙醇;9点03换纯乙醇;9点21换第二次纯乙醇;9点45换1/2二甲苯+1/2纯乙醇;10点45换纯二甲苯;12点加石蜡放入35℃烘箱中;6点再加石蜡;10点30第二次加石蜡。 第四天上午8点升温至60℃;至60℃后换烧杯蒸发2小时;再换60℃的液体纯石蜡(用电炉融化后过滤;预先放入烘箱中达60℃);3-4个小时再换第二次液体纯石蜡;第三次等。最后包埋,将处理好的材料放入包埋盒中,等石蜡凝固后,再放到水槽里冲洗,以免包埋好的石蜡进水,切片时容易碎。
切片:
将包埋好的石蜡切成小块,粘在小木块上,放入石蜡切片机上切。取一载玻片,在载玻片上滴一滴粘片剂,用手摸匀,再在其上滴一滴水。将切好的石蜡片(超薄),放入有水的载波片上,放在电炉上微烤,直至石蜡片完全舒展,平铺在载玻片上。
镜鉴:将作好的石蜡片子,放在显微镜下观察,如果叶片的上下表皮完好或撕裂程度不大,贴好标签,放好待用。
封片:
纯二甲苯(2小时40℃,在烘箱中进行)→1/2二甲苯+1/2纯乙醇→纯乙醇→75%乙醇→水→番红(1%的乙醇50%)1.5-2小时→水→龙胆紫(1%)2分钟→大盆水洗→75%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇→1/2二甲苯+1/2纯乙醇→纯二甲苯→纯二甲苯→中性树胶封片。
注意:第一步的纯二甲苯脱石蜡应2小时以上,(温度40℃放入烘箱中);再番红染色液中停留2小时,如新鲜番红染色液1.5小时也可。其余各缸3-5分钟,每缸只能放8-9个片子。
明胶粘片剂:
明胶(粉末)1g
蒸馏水100ml
石炭酸2g
甘油15ml
先将粉末状的明胶徐徐溶入微温(36℃)的100g蒸馏水中,待全部溶解以后,再加入2g石炭酸的结晶与15ml甘油,搅拌使完全溶解,然后过滤,储存于有玻
璃塞的瓶子中待用。
外稃表皮的实验方法
新鲜叶片自FAA中取出,蒸馏水冲洗,置入铬酸(10%)-硝酸(10%)溶液(1:1)40℃温箱中处理0.5-4小时,待叶肉组织和上下表皮开始分离时,将材料取出用水洗净,移至50%酒精中备用。制片时,将材料置于载玻片上,用刀片和针尖轻轻刮去叶肉组织,将表皮用1%番红酒精溶液染色约0.5-3分钟后,制成永久玻片。外稃处理方法同叶片。