第３第９期 光谱学与光谱分析３卷，
年２０１３９月 ＳｅｃｔｒｏｓｃｏｎｄＳｅｃｔｒａｌＡｎａｌｓｉｓｐｐｙａｐｙＶｏｌ．３３，Ｎｏ．９，２４８８２４９１ｐｐ
，Ｓｅｔｅｍｂｅｒ２０１３ ｐ
３
纤维素１犆同位素示踪法研究纤维素与木素连接方式
向松明１，谢益民，杨海涛，姚 兰
湖北工业大学制浆造纸工程研究所，湖北武汉 ４３００６８
摘 要 为了阐明裸子植物中纤维素与木素之间的连接方式，从多糖的角度分析糖单元与木素苯丙烷结构
１３
单元之间的共价键连接方式，合成了带６Ｃ标记的纤维素前驱物尿苷二磷酸葡萄糖，并将其与ＰＡＬ酶的
葡萄糖苷一起投入生长中的银杏植物体内。碳１抑制剂ＡＯＰＰ及外源性木素前驱物松柏醇Ｄ３丰度检测得β
３知纤维素在细胞壁的沉积主要是从在初生壁开始，高分辨率固体核磁１ＣＮＭＲ分析证实了纤维素６位碳与
木素以苯甲醚键等方式连接。
１３
／关键词 纤维素；碳水化合物复合体Ｃ标记；ＣＰＭＡＳＮＭＲ；木素
：／（）中图分类号：ＴＳ７１＋１ 文献标识码：Ａ 犇犗犐１０．３９６４．ｉｓｓｎ．１００００５９３２０１３０９２４８８０４ｊ
醚键、苯甲酯键及缩醛键的连接，其中苯甲醚键可能是主要
引 言
证明了植物原料和未漂纸浆中相当 大量的实验研究
大的一部分木素与半纤维素和纤维素通过化学键结合，并以，木素—碳水化合物复合体（ｌｉｎｉｎｃａｒｂｏｈｄｒａｔｅｃｏｍｌｅｘｅｓｇｙｐ的形式存在于植物纤维的细胞壁中，尤其是ＬＣＣ）ＬＣＣ结构（
的存在阻碍了木素的脱除，使得制浆和漂白过苯甲醚键型）
［］
程中消耗大量的化学药品和能源。Ｋａｒｌｓｓｏｎ等５利用分子排
［１４］
的连接方式。但是对于此键的形成机理、比例、构成糖的种类和成键的位置还缺乏深入的研究。
３
实验采用稳定性同位素１Ｃ标记技术，合成Ｃ６位上带碳
［１３标记的纤维素前驱物尿苷二磷酸葡萄糖（ＵＤＰｌｕｃｏｓｅ６ｇ１３
），并将其与苯丙氨酸解氨酶的抑制剂ＡＯＣ］ＰＰ及外源性葡萄糖苷一起投入到银杏植物体内，木素前驱物松柏醇Ｄβ
１３
从而实现ＬＣＣ中聚葡萄糖部分上ＣＣ标记。利用６位的
３ＧＶＩＩｓｏＰｒｉｍｅＣ的丰度，从Ⅱ气质稳定同位素质谱仪检测１
而了解细胞壁中纤维素的沉积规律，同时确定同位素丰度比３
／较高的部位，作为提取ＬＣＣ的样品。并用固体ＣＰＭＡＳ１Ｃ
ＮＭＲ检测分析新生木质部组织，从而获得纤维素与木素的
阻色谱法证明松树硫酸盐浆中有稳定的木素纤维素化学键
［］存在。之后，Ｍ聚糖复合体的网ａｒｔｉｎＬａｗｏｋｏ６研究了木素
状结构，采用新方法从未漂硫酸盐针叶木浆中提取出了大量有代表性的ＬＣＣ，发现硫酸盐浆中至少有９０％的残余木素与碳水化合物以化学键相连，而且证实ＬＣＣ的连接中有９２％是木素与木聚糖、葡甘露聚糖间的连接，只有少部分约８％是木素与纤维素之间的连接。Ｋａｔｓｕｍａｔａ等
［７］
连接信息，以及ＬＣ键中糖的种类和糖环上碳原子的位置。
１ 实验部分
３１３
尿苷二磷酸葡萄糖１１ １犆标记的纤维素前驱物—（６犆）
研究了针叶
的合成
］根据已知文献［所介绍的方法按图１所示的路线合成８
１３
纤维素的前驱物—（尿苷二磷酸葡萄糖。６Ｃ）
木和非针叶木植物细胞壁中纤维素与木素间的连接，研究发现在针叶木中一半以上的纤维素与木素相连接，在非针叶木中只有六分之一的纤维素与木素间有连接，而且通过扫描电
４］
子显微镜可以观察到木素与纤维素的连接位置。范建云等［
利用经过润胀处理的微晶纤维素，在酶（葡萄糖甙酶、葡萄β
３糖氧化酶及辣根过氧化物酶）的存在下与带１Ｃ标记松柏醇
１２ 纤维素前驱物在银杏植物中的投入方法
选用３～４年生的银杏植株作为接受纤维素前驱物的植
物试样，银杏能在水的浸泡中存活二个月以上，不影响其代谢。六月初，将购买的银杏截成３０ｃｍ左右长度，保留２０～
１３
尿苷二磷酸３０片叶子，浸泡在配置的溶液中，溶液由（６Ｃ）
葡萄糖甙发生聚和反应得到木素纤维素复合体（ｄｅｈｄｒｏｙ，ＤＨ，用高分辨ＰＣＣ）ｅｎａｔｉｏｎｐｏｌｍｅｒｃｅｌｌｕｌｏｓｅｃｏｍｌｅｘｅｓｇｙｐ
３
／ＭＡ率的ＣＰＳ１ＣＮＭＲ分析发现木素与纤维素之间有苯甲
２０１３０１１０，修订日期：２０１３０４０８ 收稿日期：
）资助３１０７０５２１，３０９０１１４０ 基金项目：国家自然科学基金项目（
：Ｍ１９８８年生，湖北工业大学硕士研究生 ｅｍａｉｌｉｎｉａ０１０６＠１６３．ｃｏｍ 作者简介：向松明，女，ｇｊ
：ｍａｉｌｃｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎｍｘｉｅ通讯联系人 ｅ＠ｓｐｐｙ
１３
（犉犻１ 犛狀狋犺犲狊犻狊狅犳狌狉犻犱犻狀犲犱犻犺狅狊犺狅６犆）犾狌犮狅狊犲犵狔狆狆犵
（葡萄糖、松柏醇葡萄糖苷、ＡＯＰＰ［４００ｍ００ｍ０）ｇ＋４ｇ＋９
－１
·（］组成，植物在人工培养箱中培养３ｍ２００ｍＬ）０天，温ｇ度为２５℃，湿度为５０％。
３３
，１多点校正，获得样品的Ｃ同位素值１Ｃ（ＶＰＤＢ）Ｃ（％）＝３３
）／（），ＣＲｒ＋１０００ＲｒＣＲｒ＋１０００Ｒｒ＋１０００１００（δ１δ１３１２３／Ｒｒ表示ＶＰＤＢ标样中１ＣＣ＝０．０１１２３７２，Ｃ为测定的δ１
１３ 银杏粉末的制备
银杏植物培养一个月后，取出剥皮，晾干，用冷冻切片机分别取０．３，０．３５，０．４ｍｍ厚度的新生木质部，分别磨成／过１苯混合液（和热水脱脂处００目的粉末，并用乙醇１２，φ）理。
１４ 犔犆犆的制备
将上述银杏粉末在真空干燥器中用五氧化二磷干燥１周，直到五氧化二磷不吸水为止，用水冷式振动球磨处理７２，然后采用Ｂｒｋｍａｎ的方法提取ＬＣＣ。ｈｊ乙醇纤维素制备１５ 硝酸
］按文献［制取硝酸乙醇纤维素。９１６ 碳１３丰度检测
用锡舟包约０经过干燥分．１ｍＯｇ样品，燃烧生成的Ｃ２，离后进入质谱仪测定Ｃ同位素。元素分析仪为德国Ｅｌｅｍｅｎｔａｒ公司生产的ＶａｒｉｏＰＹＲＯｃｕｂｅ型，选择ＣＮ模式，ＣｕＯ作
为氧化剂，燃烧温度为９质谱仪为２０℃，还原温度为６００℃；Ｉｓｏｒｉｍｅ公司的Ｉｓｏｒｉｍｅ１００型。利用国际标样ＩＡＥＡＣＨ３，ｐｐＩＡＥＡ６０１和工作标样磺胺多点校正，获得样品的Ｃ同位素
３值，再计算得到样品１Ｃ丰度。３１７ 高分辨率固体核磁１犆犖犕犚测试
［２］
。如表１所示，取离形成层不同距离的碳同位素值（ＶＰＤＢ）新生木质部层做碳１３丰度检测，与空白样对比，每一层的
１３
值都有明显增加，ＸＣ（ＶＰＤＢ）ｌｅｍ１增加的幅度最大，ｙ
３１３
尿苷二磷酸葡萄糖在植物体Ｃ提高了１１．８１，表明（６Ｃ）δ１
内被有效代谢，并聚合为纤维素高分子，不影响植物生长，
而且使生成的纤维素被碳１３同位素成功标记，Ｘｌｅｍ１标ｙ记的效果最好，说明在细胞壁发育的初期，即初生壁形成的时期，纤维素前驱物被吸收和转化为纤维素的速度最快。从表２中ＬＣＣ碳１３丰度检测的结果所示，得到了带碳１３标记的ＬＣＣ，ＬＣＣ１的标记效果最好，可以用于ＬＣＣ的结构分析，ＬＣＣ的碳１３同位素丰度与木质部组织的变化一致。表３是对提取的硝酸乙醇纤维素做碳１３丰度检测，取不同厚度层的纤维素的检测结果与空白组相比，丰度值都有明显的增
３
犜犪犫犾犲１ １犆犃犫狌狀犱犪狀犮犲犻狀狓犾犲犿狅犳犻狀犽狅狔犵犵
Ｎａｍｅｌｅｍｃｏｎｔ．ＸｙＸｌｅｍ１ｙＸｌｅｍ２ｙＸｌｅｍ３ｙ
１３
Ｃ（ＶＰＤＢ）－２７．１８－１５．３７－１９．４８－２５．０７
１３
Ｃ％
１．０８１４１．０９４３１．０８９８１．０８３７
采用带固体探头的瑞士ＢＲＵＫＥＲ公司ＡＶＡＮＣＥⅢ
４００ＭＨｚ宽腔固体核磁共振谱仪，并用常规交叉极化（ＣＰ）
３
）和魔角旋转（法在１ＭＡＳ００．６ＭＨｚ下对样品进行１Ｃ连续３
扫描得到１ＣＮＭＲ。实验条件为：温度２５℃，３ｍｓ接触时
；注：ｘｌｅｍｃｏｎｔ．ｗａｓｎａｔｕｒｅｎｅｗｌｆｏｒｍｅｄｘｌｅｍｏｆｇｉｎｋｏｘｌｅｍ１，ｙｙｙｇｙ
ｘｌｅｍ２ａｎｄｘｌｅｍ３ｗｅｒｅｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｈｅｘｌｅｍｄｉｓｔａｎｃｅｄｆｒｏｍｙｙｐｙｔｙｃａｍｂｉｕｍ００．３，０．３～０．６５，０．６５～１．０５ｍｍ
３
犜犪犫犾犲２ １犆犃犫狌狀犱犪狀犮犲狅犳犔犆犆犻狀狓犾犲犿狅犳犵犻狀犽狅狔犵
，脉冲迟滞３ｓ，每间，０．０５ｓ接受时间，脉冲宽度为３５ｋＨｚ个样品进行约５０００次扫描。
ＮａｍｅＬＣＣｃｏｎｔ．ＬＣＣ１ＬＣＣ２ＬＣＣ３
１３
Ｃ（ＶＰＤＢ）－２６．４０－１１．０８－２０．０８－２４．８８
１３
Ｃ％
１．０８２２１．０９９１１．０８９２１．０８３９
２ 结果与讨论
２１ 碳１３丰度检测
利用国际标样ＩＡＥＡＣＨ３，ＩＡＥＡ６０１和工作标样磺胺
注：ＬＣＣ１，ＬＣＣ２，ＬＣＣ３ｗｅｒｅｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｆｒｏｍｘｌｅｍ１，ｘｌｅｍ２，ｐｙｙｙ
ｘｌｅｍ３ｙ
加，以Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ１的丰度值增加的最明显，结果表明纤维素
前驱物（６１３
Ｃ）尿苷二磷酸葡萄糖在植物体内代谢成了带碳１３标记的纤维素，同时也证实了（６１３
Ｃ）
尿苷二磷酸葡萄糖为纤维素的前驱物。
犜犪犫犾犲３ １３
犆犃犫狌狀犱犪狀犮犲狅犳犆犲犾犾狌犾狅狊犲犻狀狓狔犾犲犿狅犳犵犻狀犽犵
狅Ｎａｍｅ１３
Ｃ（ＶＰＤＢ）１３
Ｃ％
Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｃｏｎｔ．－２４．４１１．０８４４Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ１－１０．４２１．０９９８Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ２－２０．４９１．０８８７Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ３
－２３．３２
１．０８５６
注：Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｃｏｎｔ．ｗａｓｔｈｅｃｅｌｌｕｌｏｓｅｆｒｏｍｎａｔｕｒｅｎｅｗｌｙｆｏｒｍｅｄｘｙ
ｌｅｍｏｆｇｉｎｋｇｏ；Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ１，Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ２ａｎｄＣｅｌｌｕｌｏｓｅ３ｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｆｒｏｍｘｙｌｅｍ１，ｘｙｌｅｍ２，ｘｙ
ｌｅｍ３２２ 高分辨率固体核磁１３
犆犖犕犚谱图分析
尿苷二磷酸葡萄糖（ＵＤＰＧｌｕ）被认为是纤维素的前驱物［１０，１１］，在图２中，对吸收了（６１３
Ｃ）尿苷二磷酸葡萄糖的银杏新生木质部与天然的银杏新生木质部的ＣＰ／ＭＡＳ１３
Ｃ
ＮＭＲ图谱进行比较，可知在芳香族区（１１０～１６０ｐｐ
ｍ）没有明显的差别，说明投入的纤维素前驱物和抑制剂ＡＯＰＰ没有影响植物的正常代谢
。
犉犻犵２ 犛狅犻犾犱狊狋犪狋犲１３
犆犖犕犚狊狆犲犮狋狉犪狅犳狓狔犾犲犿狅犳犵犻狀犽狅犪：Ｎａｔｒｕｅｘｙｌｅｍｏｆｇｉｎｋｇｏ；犫：Ｘｙｌｅｍｏｆｇｉｎｋｇ
ｏ（６１３Ｃ） 其信号吸收峰的基团归属见表４，基于化学位移δ＝５６处对谱图中的信号的强度进行对比，在化学位移δ＝１５０．４２（Ｎｏ．２）为愈创木基型木素的Ｃ３和Ｃ４，化学位移δ＝１３３．５３（Ｎｏ．３）为愈创木基木素的Ｃ１，在９４．６４ｐｐｍ（Ｎｏ．４）处的信号峰来自纤维素Ｃ１及木聚糖Ｃ４，８９．１２ｐｐｍ（Ｎｏ．５）处的信号峰来自于苯基香豆满β５结构及ββ结构（
１，２图３）中αＣ的共振信号、结晶区纤维素Ｃ４，８３．３８ｐｐｍ（Ｎｏ．６）处的信号峰来自愈创木基βＯ４结构（３，图３）中的Ｃβ的信号峰和非
结晶区的纤维素Ｃ４，７２．６５ｐｐｍ（Ｎｏ．８）处的信号峰与天然银杏的峰相比有明显的增强，Ａｚｕｍａ等
［１２］
对纤维素及其相关
碳水化合物的核磁研究表明纤维素６位上的碳有醚键存在时，纤维素Ｃ６的峰位移迁移到７
２．６ｐｐｍ，根据谢益民［１３］
的研究结果木素苯丙烷结构上只有αＣ上有醚键的存在，由此可知７２．６５ｐｐｍ处的峰为βＯ４结构中αＣ与纤维素６位上的Ｃ以醚键形式连接（４，图３）。在化学位移δ＝６２．７（Ｎｏ．９
）处的峰说明有β１结构存在（５，图３）
，而且葡萄糖６位上碳经１３Ｃ同位素标记以后得到了明显的增强，为纤维素上Ｃ６的增强峰，说明了Ｃ６标记的纤维素前驱物能被聚合为纤维素高分子。
犜犪犫犾犲４ 犆犺犲犿犻犮犪犾狊犺犻犳狋狊犪狀犱犪狊狊犻犵
狀犿犲狀狋狊狅犳１３
犆犖犕犚狊犻犵狀犪犾狊狅犳狓狔犾犲犿犳狉狅犿犵犻狀犽犵
狅信号
化学位移序号（δ，ｐｐｍ）官能团归属
１１７３．９４乙酰基碳ＣＨ３ＣＯＯＲ２１５０．４２愈创木基型木素的Ｃ３和Ｃ４３１３３．５３愈创木基型木素的Ｃ１４９４．６４纤维素Ｃ１、木聚糖Ｃ４
５８９．１２结晶区纤维素Ｃ４、苯基香豆满和松脂酚Ｃα６
８３．３８愈创木基βＯ４结构中的Ｃ４β和非结晶区纤维
素的Ｃ７７５．０２半纤维素Ｃ２，Ｃ３，Ｃ５
８７２．６５醚化的纤维素Ｃ６，纤维素Ｃ２，Ｃ３，Ｃ５
９６２．７０纤维素Ｃ６、愈创木基Ｏ４结构中Ｃ１构中的βγ、β结Ｃα和Ｃβ１０５６．３５木素甲氧基ＯＣＨ３１１
２１．４３
甲基
犉犻犵３ 犌狌犪犻犪犮狔犾狆狉狅狆犪狀犲狊狋狉狌犲狋狌狉犲犻狀犵犻狀犽犵狅犪狀犱狋犺犲犾犻狀犽犪犵
犲狑犻狋犺犮犲犾犾狌犾狅狊犲，犚１，犎，犪犾犽狔犾；犔，狆狅犾狔犾犻犵
狀狅犾 结 论
（
１）通过向正在生长中的银杏植物中投加纤维素前驱物，结合碳１３丰度检测结果，证实了纤维素前驱物尿苷二磷酸葡萄糖（ＵＤＰＧｌｕ）在植物体内被有效代谢，并聚合成纤维素高分子。
（２
）根据银杏新生木质部的固体核磁图分析结果，外源性尿苷二磷酸葡萄糖和ＰＡＬ酶抑制剂ＡＯＰＰ没有影响植物的正常代谢，木素结构单元之间主要以βＯ４，β１，β５和β的方式连接。而且证实了纤维素６位上的碳原子与木素苯丙烷结构上的αＣ以醚键的形式连接。
３β
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊
［，，１］ａｎｕａｎ，ＣｕｉＸｉａｏｘｉａＺｈａｎｉｉｎ．ＰｒｏｄｅｄｉａＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ２０１２，１６：１２５． ＷｇＸｇＬｐｇ［，２］ｒｋｍａｎＡ．Ｉｎｄ．Ｅｎ．Ｃｈｅｍ．１９５７，４９：１３９５． Ｂｊｇ
［，Ａ，，３］ａｒｉｏｎＣａｒｒｉｅｒｎｎｅＬｏｉｎｅｔＳｅｒａｎｉＣｈｒｉｓｔｅｌｌｅＡｂｓａｌｏｎ，ｅｔａｌ．ＢｉｏｍａｓｓａｎｄＢｉｏｅｎｅｒ２０１２，４３：６５． Ｍｐｐｇｙ
［（（，（）：范建云，谢益民）中国造纸学报）４］ＡＮＪｉａｎｕｎ，ＸＩＥＹｉｍｉｎ．ＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａＰｕｌｎｄＰａｅｒ２００６，２１１． Ｆｙｐａｐ［，（）：５］ａｒｌｓｓｏｎＯ，ＷｅｓｔｅｒｍａｒｋＵ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｕｌｎｄＰａｅｒＳｃｉｅｎｃｅ１９９６，２２１０３９７． Ｋｐａｐ［，，，（）：６］ａｒｔｉｎＬａｗｏｋｏＧｕｎｎａｒＨｅｎｒｉｋｓｓｏｎＧｏｒａｎＧｅｌｌｅｒｓｔｅｄｔ．Ｈｏｌｚｆｏｒｓｃｈｕｎ２００３，５７１６９． Ｍｇ
［，，，，（）：７］ｉｎＺｈｅｎｆｕＫｏｋｏＳＫａｔｓｕｍａｔａＴｈｉＢａｃｈＴｕｅｔＬａｍ，ｅｔａｌ．ＷｉｌｅｅｒｉｏｄｉｃａｌｓＩｎｔｅｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２００６，８３２１０３． ＪｙｙｙＰ［（）：８］ｉｎｅｖＺ，ＡｈｍａｄＺＷ，ＲｏｂｅｒｔＴＣ，ｅｔａｌ．ＣａｒｂｏｈｄｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ，２００６，３４１１０１７４３． Ｄｙ
［：Ｃ石淑兰，何福望）制浆造纸分析与检测）９］ＨＩＳｈｕｌａｎ，ＨＥＦｕｗａｎ．ＰｕｌｎｄＰａｅｒＡｎａｌｓｉｓａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎ（．ＢｅｉｉｎｈｉｎａＬｉｈｔ Ｓｇ（ｐａｐｙｊｇｇ
（，北京：中国轻工业出版社）Ｉｎｄｕｓｔｒｒｅｓｓ２００９．ｙＰ
［］，（（，（）：宋东亮，沈君辉）植物生理学通讯）１０ＯＮＧＤｏｎｌｉａｎＳＨＥＮＪｕｎｈｕｉ．ＰｌａｎｔＰｈｓｉｏｌｏｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ２００８，４４４７９１． ＳｇｇｙｇｙＣ［］（（，）：李春秀，齐力旺）生物技术通报）１１ＩＣｈｕｎｘｉｕ，ＱＩＬｉｗａｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ２００５，（４５． ＬｇｇｙＩ［］，，１２ｚｕｍａＪＫｏｓｈｉｉｍａＴ．ＷｏｏｄＲｅｓｅａｒｃｈ１９８１，１６：６３． Ａｊ
［］，Ｗ，１３ｉｅＹＭ，ＹａｓｕｄａＳｕＨ，ｅｔａｌ．Ｊ．ＷｏｏｄＳｃｉ．２０００，４６：１３０． Ｘ
犃狀犪犾狊犻狊狅犳狋犺犲犃狊狊狅犮犻犪狋犻狅狀犫犲狋狑犲犲狀犆犲犾犾狌犾狅狊犲犪狀犱犔犻狀犻狀犫犪狉犫狅狀１３狔犵狔犆
犜狉犪犮犲狉犕犲狋犺狅犱
，，ＹＡＮ，ＸＩＡＮＧＳｏｎｍｉｎＸＩＥＹｉｍｉｎＧＨａｉｔａｏＹＡＯＬａｎｇｇ
，Ｈ，ＷｕＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｌｉｎａｅｒｍａｋｉｎｎｉｎｅｅｒｉｎｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｆＴｅｃｈｎｏｌｏｈａｎ３００６８，Ｃｈｉｎａ ４ｐｇ＆ＰｐｇＥｇｇｙｏｇｙ
，犃犫狊狋狉犪犮狋Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｕｒｔｈｅｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｅｌｌｕｌｏｓｅａｎｄｌｉｎｉｎｉｎｇｍｎｏｓｅｒｍｐｌａｎｔｃａｒｂｏｈｄｒａｔｅｐａｒｔｏｆ ｇｙｐｙ
１３（，，ｔｈｅｌｉｎｉｎｃａｒｂｏｈｄｒａｔｅｃｏｍｌｅｘｅｓｗａｓａｎａｌｚｅｄ．Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｐｒｅｃｕｒｓｏｒｉ．ｅ．６Ｃ）ｕｒｉｄｉｎｅｄｉｈｏｓｈｈａｔｅｇｌｕｃｏｓｅｗａｓｓｎｔｈｅｓｉｚｅｄｐｐｙｇｙｐｙａｎｄｉｎｅｃｔｅｄｉｎｔｏａｌｉｖｉｎｉｎｋｏｔｒｅｅｗｉｔｈｌｉｎｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒＡＯＰＰａｎｄｅｘｏｅｎｏｕｓｌｉｎｉｎｐｒｅｃｕｒｓｏｒ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｆｒｏｍｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｊｇｇｇｇｇｇ
３
ｔｉｏｎｏｆ１Ｃａｂｕｎｄａｎｃｅｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｈｅｄｅｏｓｉｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｕｌｏｓｅｉｎｔｈｅｃｅｌｌｗａｌｌｉｓｖｅｒｆａｓｔａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｉｎｔｈｅｐｒｉｍａｒａｌｌ．Ｔｈｅａｐｙｙｗ３ｎａｌｓｉｓｏｆｈｉｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓｏｌｉｄｎｕｃｌｅａｒｍａｎｅｔｉｃ１ｏｓｉｔｉｏｎｏｆｌｕｃｏｓｅｕｎｉｔｓｉｎＣＮＭＲｓｅｃｔｒａｃｏｎｆｉｒｍｓｔｈａｔｔｈｅｂｏｎｄｓｂｅｔｗｅｅｎＣｙｇｇｐｇ６ｐ
ｃａｒｂｏｎｓｏｆｌｉｎｉｎｓｉｄｅｃｈａｉｎａｒｅｂｅｎｚｌｅｔｈｅｒｌｉｎｋａｅ．ｃｅｌｌｕｌｏｓｅａｎｄαｇｙｇ
１３
；；／犓犲狑狅狉犱狊ｅｌｌｕｌｏｓｅＣｉｓｏｔｏｉｃｔｒａｃｅｒＣＰＭＡＳＮＭＲ；Ｌｉｎｉｎｃａｒｂｏｈｄｒａｔｅｃｏｍｌｅｘｅｓ Ｃｐｇｙｐ狔
（）ＲｅｃｅｉｖｅｄＪａｎ．１０，２０１３；ａｃｃｅｔｅｄＡｒ．８，２０１３ ｐｐ
ｏｒｒｅｓｏｎｄｉｎｕｔｈｏｒＣｐｇａ
第３第９期 光谱学与光谱分析３卷，
年２０１３９月 ＳｅｃｔｒｏｓｃｏｎｄＳｅｃｔｒａｌＡｎａｌｓｉｓｐｐｙａｐｙＶｏｌ．３３，Ｎｏ．９，２４８８２４９１ｐｐ
，Ｓｅｔｅｍｂｅｒ２０１３ ｐ
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纤维素１犆同位素示踪法研究纤维素与木素连接方式
向松明１，谢益民，杨海涛，姚 兰
湖北工业大学制浆造纸工程研究所，湖北武汉 ４３００６８
摘 要 为了阐明裸子植物中纤维素与木素之间的连接方式，从多糖的角度分析糖单元与木素苯丙烷结构
１３
单元之间的共价键连接方式，合成了带６Ｃ标记的纤维素前驱物尿苷二磷酸葡萄糖，并将其与ＰＡＬ酶的
葡萄糖苷一起投入生长中的银杏植物体内。碳１抑制剂ＡＯＰＰ及外源性木素前驱物松柏醇Ｄ３丰度检测得β
３知纤维素在细胞壁的沉积主要是从在初生壁开始，高分辨率固体核磁１ＣＮＭＲ分析证实了纤维素６位碳与
木素以苯甲醚键等方式连接。
１３
／关键词 纤维素；碳水化合物复合体Ｃ标记；ＣＰＭＡＳＮＭＲ；木素
：／（）中图分类号：ＴＳ７１＋１ 文献标识码：Ａ 犇犗犐１０．３９６４．ｉｓｓｎ．１００００５９３２０１３０９２４８８０４ｊ
醚键、苯甲酯键及缩醛键的连接，其中苯甲醚键可能是主要
引 言
证明了植物原料和未漂纸浆中相当 大量的实验研究
大的一部分木素与半纤维素和纤维素通过化学键结合，并以，木素—碳水化合物复合体（ｌｉｎｉｎｃａｒｂｏｈｄｒａｔｅｃｏｍｌｅｘｅｓｇｙｐ的形式存在于植物纤维的细胞壁中，尤其是ＬＣＣ）ＬＣＣ结构（
的存在阻碍了木素的脱除，使得制浆和漂白过苯甲醚键型）
［］
程中消耗大量的化学药品和能源。Ｋａｒｌｓｓｏｎ等５利用分子排
［１４］
的连接方式。但是对于此键的形成机理、比例、构成糖的种类和成键的位置还缺乏深入的研究。
３
实验采用稳定性同位素１Ｃ标记技术，合成Ｃ６位上带碳
［１３标记的纤维素前驱物尿苷二磷酸葡萄糖（ＵＤＰｌｕｃｏｓｅ６ｇ１３
），并将其与苯丙氨酸解氨酶的抑制剂ＡＯＣ］ＰＰ及外源性葡萄糖苷一起投入到银杏植物体内，木素前驱物松柏醇Ｄβ
１３
从而实现ＬＣＣ中聚葡萄糖部分上ＣＣ标记。利用６位的
３ＧＶＩＩｓｏＰｒｉｍｅＣ的丰度，从Ⅱ气质稳定同位素质谱仪检测１
而了解细胞壁中纤维素的沉积规律，同时确定同位素丰度比３
／较高的部位，作为提取ＬＣＣ的样品。并用固体ＣＰＭＡＳ１Ｃ
ＮＭＲ检测分析新生木质部组织，从而获得纤维素与木素的
阻色谱法证明松树硫酸盐浆中有稳定的木素纤维素化学键
［］存在。之后，Ｍ聚糖复合体的网ａｒｔｉｎＬａｗｏｋｏ６研究了木素
状结构，采用新方法从未漂硫酸盐针叶木浆中提取出了大量有代表性的ＬＣＣ，发现硫酸盐浆中至少有９０％的残余木素与碳水化合物以化学键相连，而且证实ＬＣＣ的连接中有９２％是木素与木聚糖、葡甘露聚糖间的连接，只有少部分约８％是木素与纤维素之间的连接。Ｋａｔｓｕｍａｔａ等
［７］
连接信息，以及ＬＣ键中糖的种类和糖环上碳原子的位置。
１ 实验部分
３１３
尿苷二磷酸葡萄糖１１ １犆标记的纤维素前驱物—（６犆）
研究了针叶
的合成
］根据已知文献［所介绍的方法按图１所示的路线合成８
１３
纤维素的前驱物—（尿苷二磷酸葡萄糖。６Ｃ）
木和非针叶木植物细胞壁中纤维素与木素间的连接，研究发现在针叶木中一半以上的纤维素与木素相连接，在非针叶木中只有六分之一的纤维素与木素间有连接，而且通过扫描电
４］
子显微镜可以观察到木素与纤维素的连接位置。范建云等［
利用经过润胀处理的微晶纤维素，在酶（葡萄糖甙酶、葡萄β
３糖氧化酶及辣根过氧化物酶）的存在下与带１Ｃ标记松柏醇
１２ 纤维素前驱物在银杏植物中的投入方法
选用３～４年生的银杏植株作为接受纤维素前驱物的植
物试样，银杏能在水的浸泡中存活二个月以上，不影响其代谢。六月初，将购买的银杏截成３０ｃｍ左右长度，保留２０～
１３
尿苷二磷酸３０片叶子，浸泡在配置的溶液中，溶液由（６Ｃ）
葡萄糖甙发生聚和反应得到木素纤维素复合体（ｄｅｈｄｒｏｙ，ＤＨ，用高分辨ＰＣＣ）ｅｎａｔｉｏｎｐｏｌｍｅｒｃｅｌｌｕｌｏｓｅｃｏｍｌｅｘｅｓｇｙｐ
３
／ＭＡ率的ＣＰＳ１ＣＮＭＲ分析发现木素与纤维素之间有苯甲
２０１３０１１０，修订日期：２０１３０４０８ 收稿日期：
）资助３１０７０５２１，３０９０１１４０ 基金项目：国家自然科学基金项目（
：Ｍ１９８８年生，湖北工业大学硕士研究生 ｅｍａｉｌｉｎｉａ０１０６＠１６３．ｃｏｍ 作者简介：向松明，女，ｇｊ
：ｍａｉｌｃｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎｍｘｉｅ通讯联系人 ｅ＠ｓｐｐｙ
１３
（犉犻１ 犛狀狋犺犲狊犻狊狅犳狌狉犻犱犻狀犲犱犻犺狅狊犺狅６犆）犾狌犮狅狊犲犵狔狆狆犵
（葡萄糖、松柏醇葡萄糖苷、ＡＯＰＰ［４００ｍ００ｍ０）ｇ＋４ｇ＋９
－１
·（］组成，植物在人工培养箱中培养３ｍ２００ｍＬ）０天，温ｇ度为２５℃，湿度为５０％。
３３
，１多点校正，获得样品的Ｃ同位素值１Ｃ（ＶＰＤＢ）Ｃ（％）＝３３
）／（），ＣＲｒ＋１０００ＲｒＣＲｒ＋１０００Ｒｒ＋１０００１００（δ１δ１３１２３／Ｒｒ表示ＶＰＤＢ标样中１ＣＣ＝０．０１１２３７２，Ｃ为测定的δ１
１３ 银杏粉末的制备
银杏植物培养一个月后，取出剥皮，晾干，用冷冻切片机分别取０．３，０．３５，０．４ｍｍ厚度的新生木质部，分别磨成／过１苯混合液（和热水脱脂处００目的粉末，并用乙醇１２，φ）理。
１４ 犔犆犆的制备
将上述银杏粉末在真空干燥器中用五氧化二磷干燥１周，直到五氧化二磷不吸水为止，用水冷式振动球磨处理７２，然后采用Ｂｒｋｍａｎ的方法提取ＬＣＣ。ｈｊ乙醇纤维素制备１５ 硝酸
］按文献［制取硝酸乙醇纤维素。９１６ 碳１３丰度检测
用锡舟包约０经过干燥分．１ｍＯｇ样品，燃烧生成的Ｃ２，离后进入质谱仪测定Ｃ同位素。元素分析仪为德国Ｅｌｅｍｅｎｔａｒ公司生产的ＶａｒｉｏＰＹＲＯｃｕｂｅ型，选择ＣＮ模式，ＣｕＯ作
为氧化剂，燃烧温度为９质谱仪为２０℃，还原温度为６００℃；Ｉｓｏｒｉｍｅ公司的Ｉｓｏｒｉｍｅ１００型。利用国际标样ＩＡＥＡＣＨ３，ｐｐＩＡＥＡ６０１和工作标样磺胺多点校正，获得样品的Ｃ同位素
３值，再计算得到样品１Ｃ丰度。３１７ 高分辨率固体核磁１犆犖犕犚测试
［２］
。如表１所示，取离形成层不同距离的碳同位素值（ＶＰＤＢ）新生木质部层做碳１３丰度检测，与空白样对比，每一层的
１３
值都有明显增加，ＸＣ（ＶＰＤＢ）ｌｅｍ１增加的幅度最大，ｙ
３１３
尿苷二磷酸葡萄糖在植物体Ｃ提高了１１．８１，表明（６Ｃ）δ１
内被有效代谢，并聚合为纤维素高分子，不影响植物生长，
而且使生成的纤维素被碳１３同位素成功标记，Ｘｌｅｍ１标ｙ记的效果最好，说明在细胞壁发育的初期，即初生壁形成的时期，纤维素前驱物被吸收和转化为纤维素的速度最快。从表２中ＬＣＣ碳１３丰度检测的结果所示，得到了带碳１３标记的ＬＣＣ，ＬＣＣ１的标记效果最好，可以用于ＬＣＣ的结构分析，ＬＣＣ的碳１３同位素丰度与木质部组织的变化一致。表３是对提取的硝酸乙醇纤维素做碳１３丰度检测，取不同厚度层的纤维素的检测结果与空白组相比，丰度值都有明显的增
３
犜犪犫犾犲１ １犆犃犫狌狀犱犪狀犮犲犻狀狓犾犲犿狅犳犻狀犽狅狔犵犵
Ｎａｍｅｌｅｍｃｏｎｔ．ＸｙＸｌｅｍ１ｙＸｌｅｍ２ｙＸｌｅｍ３ｙ
１３
Ｃ（ＶＰＤＢ）－２７．１８－１５．３７－１９．４８－２５．０７
１３
Ｃ％
１．０８１４１．０９４３１．０８９８１．０８３７
采用带固体探头的瑞士ＢＲＵＫＥＲ公司ＡＶＡＮＣＥⅢ
４００ＭＨｚ宽腔固体核磁共振谱仪，并用常规交叉极化（ＣＰ）
３
）和魔角旋转（法在１ＭＡＳ００．６ＭＨｚ下对样品进行１Ｃ连续３
扫描得到１ＣＮＭＲ。实验条件为：温度２５℃，３ｍｓ接触时
；注：ｘｌｅｍｃｏｎｔ．ｗａｓｎａｔｕｒｅｎｅｗｌｆｏｒｍｅｄｘｌｅｍｏｆｇｉｎｋｏｘｌｅｍ１，ｙｙｙｇｙ
ｘｌｅｍ２ａｎｄｘｌｅｍ３ｗｅｒｅｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｈｅｘｌｅｍｄｉｓｔａｎｃｅｄｆｒｏｍｙｙｐｙｔｙｃａｍｂｉｕｍ００．３，０．３～０．６５，０．６５～１．０５ｍｍ
３
犜犪犫犾犲２ １犆犃犫狌狀犱犪狀犮犲狅犳犔犆犆犻狀狓犾犲犿狅犳犵犻狀犽狅狔犵
，脉冲迟滞３ｓ，每间，０．０５ｓ接受时间，脉冲宽度为３５ｋＨｚ个样品进行约５０００次扫描。
ＮａｍｅＬＣＣｃｏｎｔ．ＬＣＣ１ＬＣＣ２ＬＣＣ３
１３
Ｃ（ＶＰＤＢ）－２６．４０－１１．０８－２０．０８－２４．８８
１３
Ｃ％
１．０８２２１．０９９１１．０８９２１．０８３９
２ 结果与讨论
２１ 碳１３丰度检测
利用国际标样ＩＡＥＡＣＨ３，ＩＡＥＡ６０１和工作标样磺胺
注：ＬＣＣ１，ＬＣＣ２，ＬＣＣ３ｗｅｒｅｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｆｒｏｍｘｌｅｍ１，ｘｌｅｍ２，ｐｙｙｙ
ｘｌｅｍ３ｙ
加，以Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ１的丰度值增加的最明显，结果表明纤维素
前驱物（６１３
Ｃ）尿苷二磷酸葡萄糖在植物体内代谢成了带碳１３标记的纤维素，同时也证实了（６１３
Ｃ）
尿苷二磷酸葡萄糖为纤维素的前驱物。
犜犪犫犾犲３ １３
犆犃犫狌狀犱犪狀犮犲狅犳犆犲犾犾狌犾狅狊犲犻狀狓狔犾犲犿狅犳犵犻狀犽犵
狅Ｎａｍｅ１３
Ｃ（ＶＰＤＢ）１３
Ｃ％
Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｃｏｎｔ．－２４．４１１．０８４４Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ１－１０．４２１．０９９８Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ２－２０．４９１．０８８７Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ３
－２３．３２
１．０８５６
注：Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｃｏｎｔ．ｗａｓｔｈｅｃｅｌｌｕｌｏｓｅｆｒｏｍｎａｔｕｒｅｎｅｗｌｙｆｏｒｍｅｄｘｙ
ｌｅｍｏｆｇｉｎｋｇｏ；Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ１，Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ２ａｎｄＣｅｌｌｕｌｏｓｅ３ｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｆｒｏｍｘｙｌｅｍ１，ｘｙｌｅｍ２，ｘｙ
ｌｅｍ３２２ 高分辨率固体核磁１３
犆犖犕犚谱图分析
尿苷二磷酸葡萄糖（ＵＤＰＧｌｕ）被认为是纤维素的前驱物［１０，１１］，在图２中，对吸收了（６１３
Ｃ）尿苷二磷酸葡萄糖的银杏新生木质部与天然的银杏新生木质部的ＣＰ／ＭＡＳ１３
Ｃ
ＮＭＲ图谱进行比较，可知在芳香族区（１１０～１６０ｐｐ
ｍ）没有明显的差别，说明投入的纤维素前驱物和抑制剂ＡＯＰＰ没有影响植物的正常代谢
。
犉犻犵２ 犛狅犻犾犱狊狋犪狋犲１３
犆犖犕犚狊狆犲犮狋狉犪狅犳狓狔犾犲犿狅犳犵犻狀犽狅犪：Ｎａｔｒｕｅｘｙｌｅｍｏｆｇｉｎｋｇｏ；犫：Ｘｙｌｅｍｏｆｇｉｎｋｇ
ｏ（６１３Ｃ） 其信号吸收峰的基团归属见表４，基于化学位移δ＝５６处对谱图中的信号的强度进行对比，在化学位移δ＝１５０．４２（Ｎｏ．２）为愈创木基型木素的Ｃ３和Ｃ４，化学位移δ＝１３３．５３（Ｎｏ．３）为愈创木基木素的Ｃ１，在９４．６４ｐｐｍ（Ｎｏ．４）处的信号峰来自纤维素Ｃ１及木聚糖Ｃ４，８９．１２ｐｐｍ（Ｎｏ．５）处的信号峰来自于苯基香豆满β５结构及ββ结构（
１，２图３）中αＣ的共振信号、结晶区纤维素Ｃ４，８３．３８ｐｐｍ（Ｎｏ．６）处的信号峰来自愈创木基βＯ４结构（３，图３）中的Ｃβ的信号峰和非
结晶区的纤维素Ｃ４，７２．６５ｐｐｍ（Ｎｏ．８）处的信号峰与天然银杏的峰相比有明显的增强，Ａｚｕｍａ等
［１２］
对纤维素及其相关
碳水化合物的核磁研究表明纤维素６位上的碳有醚键存在时，纤维素Ｃ６的峰位移迁移到７
２．６ｐｐｍ，根据谢益民［１３］
的研究结果木素苯丙烷结构上只有αＣ上有醚键的存在，由此可知７２．６５ｐｐｍ处的峰为βＯ４结构中αＣ与纤维素６位上的Ｃ以醚键形式连接（４，图３）。在化学位移δ＝６２．７（Ｎｏ．９
）处的峰说明有β１结构存在（５，图３）
，而且葡萄糖６位上碳经１３Ｃ同位素标记以后得到了明显的增强，为纤维素上Ｃ６的增强峰，说明了Ｃ６标记的纤维素前驱物能被聚合为纤维素高分子。
犜犪犫犾犲４ 犆犺犲犿犻犮犪犾狊犺犻犳狋狊犪狀犱犪狊狊犻犵
狀犿犲狀狋狊狅犳１３
犆犖犕犚狊犻犵狀犪犾狊狅犳狓狔犾犲犿犳狉狅犿犵犻狀犽犵
狅信号
化学位移序号（δ，ｐｐｍ）官能团归属
１１７３．９４乙酰基碳ＣＨ３ＣＯＯＲ２１５０．４２愈创木基型木素的Ｃ３和Ｃ４３１３３．５３愈创木基型木素的Ｃ１４９４．６４纤维素Ｃ１、木聚糖Ｃ４
５８９．１２结晶区纤维素Ｃ４、苯基香豆满和松脂酚Ｃα６
８３．３８愈创木基βＯ４结构中的Ｃ４β和非结晶区纤维
素的Ｃ７７５．０２半纤维素Ｃ２，Ｃ３，Ｃ５
８７２．６５醚化的纤维素Ｃ６，纤维素Ｃ２，Ｃ３，Ｃ５
９６２．７０纤维素Ｃ６、愈创木基Ｏ４结构中Ｃ１构中的βγ、β结Ｃα和Ｃβ１０５６．３５木素甲氧基ＯＣＨ３１１
２１．４３
甲基
犉犻犵３ 犌狌犪犻犪犮狔犾狆狉狅狆犪狀犲狊狋狉狌犲狋狌狉犲犻狀犵犻狀犽犵狅犪狀犱狋犺犲犾犻狀犽犪犵
犲狑犻狋犺犮犲犾犾狌犾狅狊犲，犚１，犎，犪犾犽狔犾；犔，狆狅犾狔犾犻犵
狀狅犾 结 论
（
１）通过向正在生长中的银杏植物中投加纤维素前驱物，结合碳１３丰度检测结果，证实了纤维素前驱物尿苷二磷酸葡萄糖（ＵＤＰＧｌｕ）在植物体内被有效代谢，并聚合成纤维素高分子。
（２
）根据银杏新生木质部的固体核磁图分析结果，外源性尿苷二磷酸葡萄糖和ＰＡＬ酶抑制剂ＡＯＰＰ没有影响植物的正常代谢，木素结构单元之间主要以βＯ４，β１，β５和β的方式连接。而且证实了纤维素６位上的碳原子与木素苯丙烷结构上的αＣ以醚键的形式连接。
３β
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊
［，，１］ａｎｕａｎ，ＣｕｉＸｉａｏｘｉａＺｈａｎｉｉｎ．ＰｒｏｄｅｄｉａＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ２０１２，１６：１２５． ＷｇＸｇＬｐｇ［，２］ｒｋｍａｎＡ．Ｉｎｄ．Ｅｎ．Ｃｈｅｍ．１９５７，４９：１３９５． Ｂｊｇ
［，Ａ，，３］ａｒｉｏｎＣａｒｒｉｅｒｎｎｅＬｏｉｎｅｔＳｅｒａｎｉＣｈｒｉｓｔｅｌｌｅＡｂｓａｌｏｎ，ｅｔａｌ．ＢｉｏｍａｓｓａｎｄＢｉｏｅｎｅｒ２０１２，４３：６５． Ｍｐｐｇｙ
［（（，（）：范建云，谢益民）中国造纸学报）４］ＡＮＪｉａｎｕｎ，ＸＩＥＹｉｍｉｎ．ＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａＰｕｌｎｄＰａｅｒ２００６，２１１． Ｆｙｐａｐ［，（）：５］ａｒｌｓｓｏｎＯ，ＷｅｓｔｅｒｍａｒｋＵ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｕｌｎｄＰａｅｒＳｃｉｅｎｃｅ１９９６，２２１０３９７． Ｋｐａｐ［，，，（）：６］ａｒｔｉｎＬａｗｏｋｏＧｕｎｎａｒＨｅｎｒｉｋｓｓｏｎＧｏｒａｎＧｅｌｌｅｒｓｔｅｄｔ．Ｈｏｌｚｆｏｒｓｃｈｕｎ２００３，５７１６９． Ｍｇ
［，，，，（）：７］ｉｎＺｈｅｎｆｕＫｏｋｏＳＫａｔｓｕｍａｔａＴｈｉＢａｃｈＴｕｅｔＬａｍ，ｅｔａｌ．ＷｉｌｅｅｒｉｏｄｉｃａｌｓＩｎｔｅｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２００６，８３２１０３． ＪｙｙｙＰ［（）：８］ｉｎｅｖＺ，ＡｈｍａｄＺＷ，ＲｏｂｅｒｔＴＣ，ｅｔａｌ．ＣａｒｂｏｈｄｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ，２００６，３４１１０１７４３． Ｄｙ
［：Ｃ石淑兰，何福望）制浆造纸分析与检测）９］ＨＩＳｈｕｌａｎ，ＨＥＦｕｗａｎ．ＰｕｌｎｄＰａｅｒＡｎａｌｓｉｓａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎ（．ＢｅｉｉｎｈｉｎａＬｉｈｔ Ｓｇ（ｐａｐｙｊｇｇ
（，北京：中国轻工业出版社）Ｉｎｄｕｓｔｒｒｅｓｓ２００９．ｙＰ
［］，（（，（）：宋东亮，沈君辉）植物生理学通讯）１０ＯＮＧＤｏｎｌｉａｎＳＨＥＮＪｕｎｈｕｉ．ＰｌａｎｔＰｈｓｉｏｌｏｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ２００８，４４４７９１． ＳｇｇｙｇｙＣ［］（（，）：李春秀，齐力旺）生物技术通报）１１ＩＣｈｕｎｘｉｕ，ＱＩＬｉｗａｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ２００５，（４５． ＬｇｇｙＩ［］，，１２ｚｕｍａＪＫｏｓｈｉｉｍａＴ．ＷｏｏｄＲｅｓｅａｒｃｈ１９８１，１６：６３． Ａｊ
［］，Ｗ，１３ｉｅＹＭ，ＹａｓｕｄａＳｕＨ，ｅｔａｌ．Ｊ．ＷｏｏｄＳｃｉ．２０００，４６：１３０． Ｘ
犃狀犪犾狊犻狊狅犳狋犺犲犃狊狊狅犮犻犪狋犻狅狀犫犲狋狑犲犲狀犆犲犾犾狌犾狅狊犲犪狀犱犔犻狀犻狀犫犪狉犫狅狀１３狔犵狔犆
犜狉犪犮犲狉犕犲狋犺狅犱
，，ＹＡＮ，ＸＩＡＮＧＳｏｎｍｉｎＸＩＥＹｉｍｉｎＧＨａｉｔａｏＹＡＯＬａｎｇｇ
，Ｈ，ＷｕＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｌｉｎａｅｒｍａｋｉｎｎｉｎｅｅｒｉｎｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｆＴｅｃｈｎｏｌｏｈａｎ３００６８，Ｃｈｉｎａ ４ｐｇ＆ＰｐｇＥｇｇｙｏｇｙ
，犃犫狊狋狉犪犮狋Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｕｒｔｈｅｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｅｌｌｕｌｏｓｅａｎｄｌｉｎｉｎｉｎｇｍｎｏｓｅｒｍｐｌａｎｔｃａｒｂｏｈｄｒａｔｅｐａｒｔｏｆ ｇｙｐｙ
１３（，，ｔｈｅｌｉｎｉｎｃａｒｂｏｈｄｒａｔｅｃｏｍｌｅｘｅｓｗａｓａｎａｌｚｅｄ．Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｐｒｅｃｕｒｓｏｒｉ．ｅ．６Ｃ）ｕｒｉｄｉｎｅｄｉｈｏｓｈｈａｔｅｇｌｕｃｏｓｅｗａｓｓｎｔｈｅｓｉｚｅｄｐｐｙｇｙｐｙａｎｄｉｎｅｃｔｅｄｉｎｔｏａｌｉｖｉｎｉｎｋｏｔｒｅｅｗｉｔｈｌｉｎｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒＡＯＰＰａｎｄｅｘｏｅｎｏｕｓｌｉｎｉｎｐｒｅｃｕｒｓｏｒ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｆｒｏｍｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｊｇｇｇｇｇｇ
３
ｔｉｏｎｏｆ１Ｃａｂｕｎｄａｎｃｅｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｈｅｄｅｏｓｉｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｕｌｏｓｅｉｎｔｈｅｃｅｌｌｗａｌｌｉｓｖｅｒｆａｓｔａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｉｎｔｈｅｐｒｉｍａｒａｌｌ．Ｔｈｅａｐｙｙｗ３ｎａｌｓｉｓｏｆｈｉｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓｏｌｉｄｎｕｃｌｅａｒｍａｎｅｔｉｃ１ｏｓｉｔｉｏｎｏｆｌｕｃｏｓｅｕｎｉｔｓｉｎＣＮＭＲｓｅｃｔｒａｃｏｎｆｉｒｍｓｔｈａｔｔｈｅｂｏｎｄｓｂｅｔｗｅｅｎＣｙｇｇｐｇ６ｐ
ｃａｒｂｏｎｓｏｆｌｉｎｉｎｓｉｄｅｃｈａｉｎａｒｅｂｅｎｚｌｅｔｈｅｒｌｉｎｋａｅ．ｃｅｌｌｕｌｏｓｅａｎｄαｇｙｇ
１３
；；／犓犲狑狅狉犱狊ｅｌｌｕｌｏｓｅＣｉｓｏｔｏｉｃｔｒａｃｅｒＣＰＭＡＳＮＭＲ；Ｌｉｎｉｎｃａｒｂｏｈｄｒａｔｅｃｏｍｌｅｘｅｓ Ｃｐｇｙｐ狔
（）ＲｅｃｅｉｖｅｄＪａｎ．１０，２０１３；ａｃｃｅｔｅｄＡｒ．８，２０１３ ｐｐ
ｏｒｒｅｓｏｎｄｉｎｕｔｈｏｒＣｐｇａ