总皂苷含量测定的方法学验证
试剂：Amberlite-XAD-2大孔树脂 Sigma 化学公司 U.S.A.
中性氧化铝 层析用 100-200目
人参皂苷Re 购自中国药品生物制品鉴定所 正丁醇、乙醇、高氯酸、冰乙酸 分析纯
香草醛溶液：称取5g 香草醛，加冰乙酸并定容至100ml 。
人参皂苷Re 标准溶液：精确称取人参皂苷Re 标准品0.020g ，用甲醇溶解并定容至10.0ml ，即每毫升人参皂苷Re2.0mg 。
实验步骤：
供试品溶液：（1）试样处理：吸取2.0ml 试样于25ml 容量瓶中，加水定容至刻度，取1.0ml 进行柱层析。
（2）柱层析：用10ml 注射器作层析柱，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm 中性氧化铝。先用25ml70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25ml 水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0ml 以处理好的试样溶液，用25ml 水洗柱，弃去洗脱液，用25ml70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。以此作显色用。
（3）显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8ml 高氯酸，混匀后移入5ml 带塞刻度离心管中，60℃水浴上加热10min ，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0ml ，摇匀后，以1cm 比色池于560nm 波长处与标准管一起进行比色测定。
对照品溶液（4）标准管：吸取人参皂苷Re 标准溶液（2.0mg/ml）50μl 放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热），以下操作从“3.2 柱层析”起，与试样相同，测定吸光度值。
空白溶液（5）空白溶液：吸取甲醇溶液50μl 放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热），以下操作从“3.2 柱层析”起，与试样相同，测定吸光度值。
1. 确定最大吸收波长（波层扫描）
精密量取对照品溶液于1cm 吸收池中，以空白试剂作参比，在分光光度计上从波长42-650 nm ，每隔10 nm 测定一次吸光度。
2. 线性关系考察——标准曲线的制备：
分别紧密量取10、20、30、40、50、60、70μl 对照品溶液，吸取人参皂苷Re 标准溶液（2.0mg/ml）50μl 放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热），以下操作从“3.2 柱层析”起，与试样相同，测定吸光度值。以吸收值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3. 专属性试验：
阴性样品：辅料+无皂苷的中药 供试样品
4. 精密度试验 4.1重复性
在同一批样品中取2ml 样品6份，分别按照上述方法配制成供试品溶液，测定吸光度值。 4.2 中间精密度
不同日期，重复操作重复性试验。将重复性实验数据合并，共12个数据分析RSD 值。 5. 稳定性试验
取供试品溶液适量，按照测定法测定吸光度值，分别在0、2、4、6、8h 各测定一次。
6. 准确度——加样回收率
精密称取样品9份，每份1ml ，精密称定，置于25ml 容量瓶中，分别加入不同量的人参皂苷Re 标准品溶液（分组如下表），加入蒸馏水至刻度，摇匀，制得3组不同浓度的供试品溶液，按照测定法操作，测定吸光度值。
7. 十批样品测定
取十批样品，制备十批供试品溶液，每批供试品溶液重复测定2次
总皂苷含量测定的方法学验证
试剂：Amberlite-XAD-2大孔树脂 Sigma 化学公司 U.S.A.
中性氧化铝 层析用 100-200目
人参皂苷Re 购自中国药品生物制品鉴定所 正丁醇、乙醇、高氯酸、冰乙酸 分析纯
香草醛溶液：称取5g 香草醛，加冰乙酸并定容至100ml 。
人参皂苷Re 标准溶液：精确称取人参皂苷Re 标准品0.020g ，用甲醇溶解并定容至10.0ml ，即每毫升人参皂苷Re2.0mg 。
实验步骤：
供试品溶液：（1）试样处理：吸取2.0ml 试样于25ml 容量瓶中，加水定容至刻度，取1.0ml 进行柱层析。
（2）柱层析：用10ml 注射器作层析柱，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm 中性氧化铝。先用25ml70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25ml 水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0ml 以处理好的试样溶液，用25ml 水洗柱，弃去洗脱液，用25ml70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。以此作显色用。
（3）显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8ml 高氯酸，混匀后移入5ml 带塞刻度离心管中，60℃水浴上加热10min ，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0ml ，摇匀后，以1cm 比色池于560nm 波长处与标准管一起进行比色测定。
对照品溶液（4）标准管：吸取人参皂苷Re 标准溶液（2.0mg/ml）50μl 放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热），以下操作从“3.2 柱层析”起，与试样相同，测定吸光度值。
空白溶液（5）空白溶液：吸取甲醇溶液50μl 放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热），以下操作从“3.2 柱层析”起，与试样相同，测定吸光度值。
1. 确定最大吸收波长（波层扫描）
精密量取对照品溶液于1cm 吸收池中，以空白试剂作参比，在分光光度计上从波长42-650 nm ，每隔10 nm 测定一次吸光度。
2. 线性关系考察——标准曲线的制备：
分别紧密量取10、20、30、40、50、60、70μl 对照品溶液，吸取人参皂苷Re 标准溶液（2.0mg/ml）50μl 放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热），以下操作从“3.2 柱层析”起，与试样相同，测定吸光度值。以吸收值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3. 专属性试验：
阴性样品：辅料+无皂苷的中药 供试样品
4. 精密度试验 4.1重复性
在同一批样品中取2ml 样品6份，分别按照上述方法配制成供试品溶液，测定吸光度值。 4.2 中间精密度
不同日期，重复操作重复性试验。将重复性实验数据合并，共12个数据分析RSD 值。 5. 稳定性试验
取供试品溶液适量，按照测定法测定吸光度值，分别在0、2、4、6、8h 各测定一次。
6. 准确度——加样回收率
精密称取样品9份，每份1ml ，精密称定，置于25ml 容量瓶中，分别加入不同量的人参皂苷Re 标准品溶液（分组如下表），加入蒸馏水至刻度，摇匀，制得3组不同浓度的供试品溶液，按照测定法操作，测定吸光度值。
7. 十批样品测定
取十批样品，制备十批供试品溶液，每批供试品溶液重复测定2次