淋巴细胞分离

小鼠外周血淋巴细胞分离

实验目的

1. 了解淋巴细胞分离的意义

2. 掌握淋巴细胞分离的技术，为进一步进行生物实验奠定基础

实验材料

1.淋巴细胞分离液，EDTA抗凝剂 PBS缓冲液戊巴比妥钠溶液

2.其他：注射器（1ml，10ml） 1ml、20ul的枪以及相应的枪头滴管水平离心机医用镊子 EP管（5ml，10ml）

实验过程

1.给小鼠注射戊巴比妥钠麻醉剂，使其麻醉

2.用镊子用力拉扯掉麻醉完全小鼠的其中一只眼睛，将血液滴入事先已经加入100ulEDTA抗凝剂的5mlEP管中，取足1ml新鲜血液

3.用滴管将抗凝后的血加入事先加入1mlPBS缓冲液的5ml的EP管中稀释(血液与PBS的比率为1:1)

4.用滴管将稀释后的1ml新鲜血液沿试管壁缓缓（一定要慢）加到含有2ml淋巴细胞分离液(事先要恢复到室温)的10mlEP管中（稀释血液：分离液=1:1），沿管壁流下的稀释血液叠加在分离液之上，并与分离液形成明显的界面

5.经水平式离心机离心（1500r/min）15分钟，小心取出试管

6.用平口滴管小心吸取中层呈白絮状的淋巴细胞，用PBS溶液洗涤两

次，每次离心1800r/min，10min

7.弃上清液，加入4mlPBS待用

第一次离心后图片

问题

第一次分离后淋巴细胞层存在红细胞，怀疑是抗凝剂储存时间久导致血液抗凝补充分。