兔的超数排卵、早期胚胎观察及移植
捉兔的方法
在饲养管理兔时,常要捉兔。在捉兔时要讲究方法,如果方法 不当,往往会造成兔骨折和孕兔流产等不良后果。
兔的耳部都是软骨,不能承受其全身体重。单拎提兔耳时,兔 感到疼痛而挣扎,易造成耳根损坏,导致耳朵下垂。兔的后腿发达,骨质松脆,善于跳跃,单拎后腿时,兔会剧烈挣扎,极易造成骨
折和后肢瘫痪,对孕兔来说极易造成流产。兔不习惯于头部向下,倒拎兔时兔的脑部充血,使头部血液循环发生障碍,严重时会导致兔死亡。单抓背部皮肤将兔拎起,易使皮层和肌肉松开,同时会压迫和损伤内脏,这些捉兔方法都是不适宜的。
正确的方法是:对子兔,因其个体小、体重轻,可以直接抓其背部皮肤或围绕胸部大把松松抓起,切不可抓握太紧。对幼兔,应悄悄接近,切不可突然接近,先用手抚摸,消除兔的恐惧感,静伏后大把连同两耳将颈肩部皮肤一起抓住,兔体平衡,不会挣扎。对成年兔,方法同幼兔,但由于成年兔体重大,操作者需两手配合,一手捕捉,一手置于股后托住兔臀部,以支持体重。这样既不会伤害兔 也避免兔抓伤人。
母兔生殖系统 母兔生殖系统包括卵巢、输卵管、子宫、阴道和外生殖器等部。
卵巢:是产生卵子和雌性激素的腺体,在腹腔内,位于肾脏后方,以短的卵巢系膜悬于第五腰椎横突附近的体壁上,左右各一,呈卵圆形,色淡红。卵巢的形状大小,依年龄及性发育的情况而定。幼兔的卵巢到面平滑,体较小,成年兔的卵巢表面平滑,体较小,成年兔的卵巢增大,长1.0— 1.7厘米,宽0.3—0.7厘米,重0.3—0.5克,表面有透明的小圆泡突出,形似桑椹,即为成熟的卵泡。怀孕母兔的卵巢表面有时可见暗色的小丘,称为黄体。
输卵管:左、右各一条,是卵子通过及受精的管道。其前端有漏斗的结构叫喇叭口,开口朝向氏放巢。成熟的卵子从卵巢壁破裂出来后掉入喇叭口,由于输卵客壁肌肉的蠕动及管壁上纤毛的运动,使卵子沿输卵管几子宫方向运行。兔子的输卵管全长约9—15厘米,后端接子宫。 子宫:子宫是胚胎生长发育的器官。兔有一对子宫,前接输卵管,后以子宫口开口于单一的阴道。左右子宫沿全长都是分离的。没有任何程度的愈合,因此也就没有子宫体和子宫角的区别属于双子宫类型。
阴道:位于直肠的腹侧,膀胱的背侧,紧接在子宫的后面。兔子的阴道相当长,长达7.5到8.0厘米,可分为固有阴道和阴道前庭两部。阴道前庭以阴门开口于体外。
外生殖器(外阴部):包括阴门、阴唇及阴蒂等部。阴门开口于肛门腹方,长约1厘米,阴门两侧隆起形成阴唇。在当大,长约2厘米,具有特别丰富的感觉神经末梢。
生殖系统的作用是繁殖后代,使种群得到发展和延续。家兔是繁殖力很强的动物,在生理结构上又具有一系列特点。熟悉这些特点有助于发挥家兔生殖系统的作用。
怎样给兔注射药物?
注射给药,事先对所使用的注射器、针头必须严格消毒(高压蒸气或煮沸消毒)处理。注射前后,对注射部位要经剪毛和使用70%-75%酒精棉球局部消毒,以防止感染,常采用方法如下: (l)皮下注射法一般选在颈部、肩部、腋下、股内侧或腹下皮肤薄、松弛易移动的部位,局部剪毛,用75%酒精棉球或2%~5%碘酒棉球涂擦消毒后,以左手拇指、食指和中指将皮肤提起,捏成三角形,右手沿三角形基部几乎与兔体保持水平,将针头迅速刺入皮下1 5厘米,然后松开左手,注人药液,拔出针头后,再用酒精棉球压迫片刻。对新生子兔进行皮下注射时,可选用2~7号针头,且注入的药液容积不得超过0 01毫升/克体重。
(2)皮内注射法通常在腰部和腹部做皮内注射。注射部位局部剪毛消毒后,将皮肤展平,针头与皮肤呈30。角刺人真皮,缓慢将药液注入。注射完毕后,拔出针头,用酒精棉球轻轻压迫针孔,以免药液外溢。注意每点注射药量不应超过0.5毫升,推药时可感到阻力很大,且在注药部位出现一小丘疹状隆起为正确。
(3)肌内注射法注射部位在颈部、臀部和大腿部。注射部位 局部剪毛消毒后,针头垂直于皮肤迅速刺入一定深度,回抽无回血后,缓缓注药。注意不要损伤大的血管、神经和骨骼。注射结束拔 出针头后,用酒精棉球再压迫一会儿。
(4)静脉注射法注射部位通常选在兔两耳外缘的耳静脉,助手将兔确实保定妥当,术者将注射部位清洁消毒后,以左手把握兔耳,并压迫耳根部以使静脉怒张,右手持连接3-7号针头的注射器,先与血管平行刺人皮肤,这样针尖就位于扩张的静脉血管的皮下组织,然后将针头斜面向上,与静脉血管呈30。角准确地刺入血管,再慢慢将药液注入。若不见回血,应轻轻移动针头或重新刺人,必须见到回血方可注射药液。注射时应避免将气泡注入,否则可因栓塞造成死亡。注射完毕拔出针头,需用酒精棉球压迫针眼片刻,以防出血。注射时,如发现针头接触处皮下有凸包或觉有阻力者,应拔出针头重新注射。注射药液量大时,尚应加温到与兔体温等同。
(5)腹腔注射法注射部位选在脐后部腹底壁,偏腹中线左侧 3毫米处,剪毛消毒后,使兔后躯抬高,对着脊柱向下刺针,回抽活塞,如无气体、液体及血液后注药,刺针不应过深,以免伤及内脏。
注射宜选择在兔胃、肠及膀胱空虚时进行。当药液量大时应将其 加热至与兔体温等同为宜。
(6)灌肠法先将兔伏卧保定,用导尿管在其前端涂以石蜡油 载植物油后缓缓插入肛门内,待兔不挣扎时,继续向直肠内延伸 3.3厘米即可,后端接上吸有药液的注射器,把药液注入直肠内。 灌入直肠内的药液不能有强烈的刺激性,也应防止过冷过热,最好 与兔体温一致。
(7)气管内注射法注射部位选在兔颈上1/3下界正中线上。 剪毛消毒后,垂直刺针,刺入气管后阻力消失,回抽有气体,然后慢 慢注药。气管内注射时药液应加温,每次用药剂量不宜过多。药 液应为可溶性并容易吸收。
兔的超数排卵、早期胚胎观察及移植
材料和器械
(一)动物 4只供体母兔,6 只受体母兔, 2~3只公兔
(二)器具 玻璃注射器,兔用手术台,创巾,止血纱布,药棉,缝合针和线,移卵管,实体显微镜
(三)药品 FSH ,PMSG ,HCG ,75%酒精,0.9%NaCl ,碘酒,新洁尔灭液,冲卵液,麻醉药 内容和步骤
(一)供体兔超数排卵处理
1.FSH 处理组 先用碘酒棉球消毒母兔颈部皮肤,每只每次颈部皮下注射FSH 10~15 IU或0.15 mg,连续注射6次,每次相隔10~14 h,总量为0.9 mg/只,最后一次注射FSH 后,从耳静脉注射(先用酒精棉球消毒耳朵边缘)hCG 75 IU,随即放入公兔笼内,观察是否配种。一般来说,超排处理后,母兔阴部表现出发情症状,能成功地配种。
2.PMSG 处理组 母兔颈部皮肤消毒同上。于皮下一次注射PMSG 150 IU。之后48~72 h,同上述方法注射同量的hCG ,随即放入公兔笼内。
3.对照组 颈部皮下注射生理盐水,其他处理同上。
(二)手术冲胚方法
供体注射hCG ,并与公兔交配后24 h、36 h或48 h进行冲胚。
1.耳静脉注射10 ml 空气处死供体母兔。如做活体手术,则用麻醉药麻醉后再按外科手术要求打开腹腔。
2.将把母兔背朝下放固定于兔手术台上。
3.在母兔腹部最后两对乳头的腹中线部剪毛,用沾满肥皂水的纱布清洗局部,再用剃须刀刮毛,先后分别用碘酒和酒精棉球由内向外进行消毒,然后盖上创巾并固定好。
4.用手术刀在腹中线处皮肤切开2~3 cm长的术口,再在腹壁肌白线上切一小口,用中指垫着以手术剪扩大术口。活体冲卵时,要注意止血,随时用温生理盐水保温术口。
5.打开腹腔后,沿着子宫轻轻引出输卵管及卵巢。与卵巢下脂肪组织处,以长夹夹注以固定卵巢。仔细观察卵巢的变化,记录排卵点(卵巢排完卵后的小红点)。
6.先在卵巢附近找到输卵管的伞,从伞部插入冲卵管并用手指或夹子固定,另一端接表面皿。另一个人用10 ml 注射器配制9号针头吸一管冲卵液(可用生理盐水代替)。从子宫向输卵管方向,与子宫角末端和输卵管交界的无血管处插入针头,使针头伸入输卵管内并用手指固定。然后慢慢地推动注射器,将冲卵液注入输卵管,使冲卵液由伞部收集到表面皿内。一般每次5 ml 即可。注意冲卵液不得流失。
(三)早期胚胎观察
将接有冲卵液的表面皿置于实体显微镜下,检查胚胎的数量和发育形态。正常兔的受精卵是卵圆形,直径为140 μm ,在透明带外围有一厚层黏蛋白层(兔胚胎特有结构)。卵黄颗粒很细,分布很均匀,容易看到核的变化。在卵黄周隙内可见2个极体。而未受精的卵母细胞中,粗细不一的卵黄颗粒清楚可见,且分布不均,不能看到细胞核,在卵黄周隙内只有一个极体。一般在交配后24 h,受精卵已发育成2-细胞胚胎,48 h即发育成16-细胞胚胎(早期桑葚胚)。
(四)胚胎移植
1.受体的选择 选择与共同发情时间一致(发情时间相差不易超过一天)的受体(自然发情或超排处理诱发发情)。
2.保定、麻醉、开腹手术 参照供体处理方法。
3.胚胎分装 先向输卵管内吸进少量PBS ,接着吸入一点空气,然后再将胚胎连同少量PBS 吸入,接着再吸入一点空气和PBS ,在移卵管尖端保留一段空隙,这样就可防止胚胎丢失。
4.移植部位 将胚胎移入排卵侧的生殖道内。凡从供体输卵管内得到的胚胎应移植到受体输卵管内。从输卵管的伞部插入移卵管2~3 cm深,轻轻地注入胚胎,最后慢慢地抽出移卵管。一般一侧输卵管可移植5~10枚胚胎。如从供体子宫收集的胚胎也应移植到受体母兔相应得部位。
5.缝合 按外科手术要求分别缝合肌层和皮肤,并进行消毒。注意手术后供体和受体的护理。
兔的超数排卵、早期胚胎观察及移植
捉兔的方法
在饲养管理兔时,常要捉兔。在捉兔时要讲究方法,如果方法 不当,往往会造成兔骨折和孕兔流产等不良后果。
兔的耳部都是软骨,不能承受其全身体重。单拎提兔耳时,兔 感到疼痛而挣扎,易造成耳根损坏,导致耳朵下垂。兔的后腿发达,骨质松脆,善于跳跃,单拎后腿时,兔会剧烈挣扎,极易造成骨
折和后肢瘫痪,对孕兔来说极易造成流产。兔不习惯于头部向下,倒拎兔时兔的脑部充血,使头部血液循环发生障碍,严重时会导致兔死亡。单抓背部皮肤将兔拎起,易使皮层和肌肉松开,同时会压迫和损伤内脏,这些捉兔方法都是不适宜的。
正确的方法是:对子兔,因其个体小、体重轻,可以直接抓其背部皮肤或围绕胸部大把松松抓起,切不可抓握太紧。对幼兔,应悄悄接近,切不可突然接近,先用手抚摸,消除兔的恐惧感,静伏后大把连同两耳将颈肩部皮肤一起抓住,兔体平衡,不会挣扎。对成年兔,方法同幼兔,但由于成年兔体重大,操作者需两手配合,一手捕捉,一手置于股后托住兔臀部,以支持体重。这样既不会伤害兔 也避免兔抓伤人。
母兔生殖系统 母兔生殖系统包括卵巢、输卵管、子宫、阴道和外生殖器等部。
卵巢:是产生卵子和雌性激素的腺体,在腹腔内,位于肾脏后方,以短的卵巢系膜悬于第五腰椎横突附近的体壁上,左右各一,呈卵圆形,色淡红。卵巢的形状大小,依年龄及性发育的情况而定。幼兔的卵巢到面平滑,体较小,成年兔的卵巢表面平滑,体较小,成年兔的卵巢增大,长1.0— 1.7厘米,宽0.3—0.7厘米,重0.3—0.5克,表面有透明的小圆泡突出,形似桑椹,即为成熟的卵泡。怀孕母兔的卵巢表面有时可见暗色的小丘,称为黄体。
输卵管:左、右各一条,是卵子通过及受精的管道。其前端有漏斗的结构叫喇叭口,开口朝向氏放巢。成熟的卵子从卵巢壁破裂出来后掉入喇叭口,由于输卵客壁肌肉的蠕动及管壁上纤毛的运动,使卵子沿输卵管几子宫方向运行。兔子的输卵管全长约9—15厘米,后端接子宫。 子宫:子宫是胚胎生长发育的器官。兔有一对子宫,前接输卵管,后以子宫口开口于单一的阴道。左右子宫沿全长都是分离的。没有任何程度的愈合,因此也就没有子宫体和子宫角的区别属于双子宫类型。
阴道:位于直肠的腹侧,膀胱的背侧,紧接在子宫的后面。兔子的阴道相当长,长达7.5到8.0厘米,可分为固有阴道和阴道前庭两部。阴道前庭以阴门开口于体外。
外生殖器(外阴部):包括阴门、阴唇及阴蒂等部。阴门开口于肛门腹方,长约1厘米,阴门两侧隆起形成阴唇。在当大,长约2厘米,具有特别丰富的感觉神经末梢。
生殖系统的作用是繁殖后代,使种群得到发展和延续。家兔是繁殖力很强的动物,在生理结构上又具有一系列特点。熟悉这些特点有助于发挥家兔生殖系统的作用。
怎样给兔注射药物?
注射给药,事先对所使用的注射器、针头必须严格消毒(高压蒸气或煮沸消毒)处理。注射前后,对注射部位要经剪毛和使用70%-75%酒精棉球局部消毒,以防止感染,常采用方法如下: (l)皮下注射法一般选在颈部、肩部、腋下、股内侧或腹下皮肤薄、松弛易移动的部位,局部剪毛,用75%酒精棉球或2%~5%碘酒棉球涂擦消毒后,以左手拇指、食指和中指将皮肤提起,捏成三角形,右手沿三角形基部几乎与兔体保持水平,将针头迅速刺入皮下1 5厘米,然后松开左手,注人药液,拔出针头后,再用酒精棉球压迫片刻。对新生子兔进行皮下注射时,可选用2~7号针头,且注入的药液容积不得超过0 01毫升/克体重。
(2)皮内注射法通常在腰部和腹部做皮内注射。注射部位局部剪毛消毒后,将皮肤展平,针头与皮肤呈30。角刺人真皮,缓慢将药液注入。注射完毕后,拔出针头,用酒精棉球轻轻压迫针孔,以免药液外溢。注意每点注射药量不应超过0.5毫升,推药时可感到阻力很大,且在注药部位出现一小丘疹状隆起为正确。
(3)肌内注射法注射部位在颈部、臀部和大腿部。注射部位 局部剪毛消毒后,针头垂直于皮肤迅速刺入一定深度,回抽无回血后,缓缓注药。注意不要损伤大的血管、神经和骨骼。注射结束拔 出针头后,用酒精棉球再压迫一会儿。
(4)静脉注射法注射部位通常选在兔两耳外缘的耳静脉,助手将兔确实保定妥当,术者将注射部位清洁消毒后,以左手把握兔耳,并压迫耳根部以使静脉怒张,右手持连接3-7号针头的注射器,先与血管平行刺人皮肤,这样针尖就位于扩张的静脉血管的皮下组织,然后将针头斜面向上,与静脉血管呈30。角准确地刺入血管,再慢慢将药液注入。若不见回血,应轻轻移动针头或重新刺人,必须见到回血方可注射药液。注射时应避免将气泡注入,否则可因栓塞造成死亡。注射完毕拔出针头,需用酒精棉球压迫针眼片刻,以防出血。注射时,如发现针头接触处皮下有凸包或觉有阻力者,应拔出针头重新注射。注射药液量大时,尚应加温到与兔体温等同。
(5)腹腔注射法注射部位选在脐后部腹底壁,偏腹中线左侧 3毫米处,剪毛消毒后,使兔后躯抬高,对着脊柱向下刺针,回抽活塞,如无气体、液体及血液后注药,刺针不应过深,以免伤及内脏。
注射宜选择在兔胃、肠及膀胱空虚时进行。当药液量大时应将其 加热至与兔体温等同为宜。
(6)灌肠法先将兔伏卧保定,用导尿管在其前端涂以石蜡油 载植物油后缓缓插入肛门内,待兔不挣扎时,继续向直肠内延伸 3.3厘米即可,后端接上吸有药液的注射器,把药液注入直肠内。 灌入直肠内的药液不能有强烈的刺激性,也应防止过冷过热,最好 与兔体温一致。
(7)气管内注射法注射部位选在兔颈上1/3下界正中线上。 剪毛消毒后,垂直刺针,刺入气管后阻力消失,回抽有气体,然后慢 慢注药。气管内注射时药液应加温,每次用药剂量不宜过多。药 液应为可溶性并容易吸收。
兔的超数排卵、早期胚胎观察及移植
材料和器械
(一)动物 4只供体母兔,6 只受体母兔, 2~3只公兔
(二)器具 玻璃注射器,兔用手术台,创巾,止血纱布,药棉,缝合针和线,移卵管,实体显微镜
(三)药品 FSH ,PMSG ,HCG ,75%酒精,0.9%NaCl ,碘酒,新洁尔灭液,冲卵液,麻醉药 内容和步骤
(一)供体兔超数排卵处理
1.FSH 处理组 先用碘酒棉球消毒母兔颈部皮肤,每只每次颈部皮下注射FSH 10~15 IU或0.15 mg,连续注射6次,每次相隔10~14 h,总量为0.9 mg/只,最后一次注射FSH 后,从耳静脉注射(先用酒精棉球消毒耳朵边缘)hCG 75 IU,随即放入公兔笼内,观察是否配种。一般来说,超排处理后,母兔阴部表现出发情症状,能成功地配种。
2.PMSG 处理组 母兔颈部皮肤消毒同上。于皮下一次注射PMSG 150 IU。之后48~72 h,同上述方法注射同量的hCG ,随即放入公兔笼内。
3.对照组 颈部皮下注射生理盐水,其他处理同上。
(二)手术冲胚方法
供体注射hCG ,并与公兔交配后24 h、36 h或48 h进行冲胚。
1.耳静脉注射10 ml 空气处死供体母兔。如做活体手术,则用麻醉药麻醉后再按外科手术要求打开腹腔。
2.将把母兔背朝下放固定于兔手术台上。
3.在母兔腹部最后两对乳头的腹中线部剪毛,用沾满肥皂水的纱布清洗局部,再用剃须刀刮毛,先后分别用碘酒和酒精棉球由内向外进行消毒,然后盖上创巾并固定好。
4.用手术刀在腹中线处皮肤切开2~3 cm长的术口,再在腹壁肌白线上切一小口,用中指垫着以手术剪扩大术口。活体冲卵时,要注意止血,随时用温生理盐水保温术口。
5.打开腹腔后,沿着子宫轻轻引出输卵管及卵巢。与卵巢下脂肪组织处,以长夹夹注以固定卵巢。仔细观察卵巢的变化,记录排卵点(卵巢排完卵后的小红点)。
6.先在卵巢附近找到输卵管的伞,从伞部插入冲卵管并用手指或夹子固定,另一端接表面皿。另一个人用10 ml 注射器配制9号针头吸一管冲卵液(可用生理盐水代替)。从子宫向输卵管方向,与子宫角末端和输卵管交界的无血管处插入针头,使针头伸入输卵管内并用手指固定。然后慢慢地推动注射器,将冲卵液注入输卵管,使冲卵液由伞部收集到表面皿内。一般每次5 ml 即可。注意冲卵液不得流失。
(三)早期胚胎观察
将接有冲卵液的表面皿置于实体显微镜下,检查胚胎的数量和发育形态。正常兔的受精卵是卵圆形,直径为140 μm ,在透明带外围有一厚层黏蛋白层(兔胚胎特有结构)。卵黄颗粒很细,分布很均匀,容易看到核的变化。在卵黄周隙内可见2个极体。而未受精的卵母细胞中,粗细不一的卵黄颗粒清楚可见,且分布不均,不能看到细胞核,在卵黄周隙内只有一个极体。一般在交配后24 h,受精卵已发育成2-细胞胚胎,48 h即发育成16-细胞胚胎(早期桑葚胚)。
(四)胚胎移植
1.受体的选择 选择与共同发情时间一致(发情时间相差不易超过一天)的受体(自然发情或超排处理诱发发情)。
2.保定、麻醉、开腹手术 参照供体处理方法。
3.胚胎分装 先向输卵管内吸进少量PBS ,接着吸入一点空气,然后再将胚胎连同少量PBS 吸入,接着再吸入一点空气和PBS ,在移卵管尖端保留一段空隙,这样就可防止胚胎丢失。
4.移植部位 将胚胎移入排卵侧的生殖道内。凡从供体输卵管内得到的胚胎应移植到受体输卵管内。从输卵管的伞部插入移卵管2~3 cm深,轻轻地注入胚胎,最后慢慢地抽出移卵管。一般一侧输卵管可移植5~10枚胚胎。如从供体子宫收集的胚胎也应移植到受体母兔相应得部位。
5.缝合 按外科手术要求分别缝合肌层和皮肤,并进行消毒。注意手术后供体和受体的护理。