２１
・药物研究・
烟酰胺对椎问盘工、Ⅱ型胶原的调控作用
徐蔚蔚１
［摘要］
邵增务１
郭兵１杨述华１
俞旭东１
谢卯１
熊蠡茗１
目的：考察烟酰胺对白介素一ｌｐ诱导的体外兔腰椎间盘退变模型中Ｉ、Ⅱ型胶原的保护作用，并初步探讨其机
制。方法：构建兔腰椎间盘组织凝胶培养模型，将其分为正常对照组，烟酰胺对照组（加入０．５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺），退变组（加
入１０ｎｇ／ｍｌＩＬ－－１１３）和３个烟酰胺治疗组（加入ＩＬ一１Ｂ的同时，并分别加入０．５ｍｇ／ｍｌ。０．２５ｍｇ／ｍｌ和０．０５ｍｇ／ｍｌ烟酰
胺）。培养３天及ｌ周时取各组髓核和纤维环分别行Ｉ、Ⅱ型胶原基因ＲＴ—ＰＣＲ检测，培养２周时行Ｉ、Ⅱ型胶原、ｉＮ一０Ｓ、ＴＧＦ－－６１及Ｃａｓｐａｓｅ－－３免疫组化检测。结果：①ＲＴ—ＰＣＲ显示３天及１周时，各治疗组Ｉ、Ⅱ型胶原表达均强于退变组，烟酰胺的保护作用随浓度增加而增强。②Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组化显示，各治疗组椎问盘正常结构和胶原含量均优于退变组，以大剂量烟酰胺治疗组最显著。③ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３免疫组化显示，治疗组阳性细胞染色率均低于退变组（Ｐ＜０．０１）。ＴＧＦ－－８１免疫组化显示，治疗组阳性细胞染色率高于退变组（Ｐ＜Ｏ．０１）。结论：烟酰胺能够抑制ＩＬ－－１６诱发的椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原表达及含量的下降，这种保护机制与其抑制ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３表达和维持ＴＧＦ—Ｂ１表达的作用有关。［关键词］椎间盘；烟酰胺；Ｉ型胶原；Ⅱ型胶原；白细胞介素一１８［中图分类号］Ｒ一３３
Ｒ６８１．５＋３
［文献标识码］
Ａ
［文章编号］１００５－－０２０５（２００８）０６—００２１—０５
ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＮｉａｃｉｎａｍｉｄｅ
ＷＰｉｗｅｉ
ｏｎ
ＩｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌＤｉｓｃＴｙｐｅ
ｉｎｖｉｔｒｏ
ＹＡＮＧＳｈｕｈｕ
ＩａｎｄⅡＣｏｌｌａｇｅｎ
ＸＵ
ＳＨＡ０Ｚｅｎｇｗｕ
ＸＩＥ
ｔＯ
ＧＵｏＢｉｎｇ
ＹＵＸｕｄｏｎｇ
Ｍａｏ
Ｘ１０ＮＧＬｉｍｉｎｇ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，ＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ
ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００２２，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉａｅｉｎａｍｉｄｅ
ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－－１６（ＩＬ一１６）ｉｎｖｉｔｒｏａｎｄ
ｔＯ
ｏｎ
ｔｙｐｅ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓｉｎｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｈｒａｌｄｉｓｃ（ＩＶＤ）ｄｅｇｅｎｅｒａ—
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｈｉｂａ’ＳＩＶＤｃｕｌｔｕｒｅ
ｃｏｎ—
ｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｏｓｓｉｂｌｅ
ｍｏｄｅｌｗａｓａｄｏｐｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．ＩＶＤｓｆｒｏｍａｄｕｌｔＪａｐａｎｅｓｅｗｈｉｔｅｒａｂｂｉｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ６ｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｒｍａｌｔｒｏｌ，ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ１Ｂａｎｄ
ｇｒｏｕｐ（Ｏ．５ｍｇ／ｍｌｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ），ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ（１０ｎｇ／ｍｌＩＬ～１Ｊ３）ａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ（ｂｏｔｈＩＬ一
０．５ｍｇ／ｍｌ，０．２５ｍｇ／ｍｌ，０。０５ｍｇ／ｍｌｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ａｆｔｅｒ３ｄａｙｓａｎｄ１ｗｅｅｋｏｆｃｕｌｔｕｒｅ，ｔｈｅＩＶＤｓｗｅｒｅ
ｔｙｐｅ
ｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｏｒ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓ
ｒｅｖｅｒｓｅ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ＰＣＲ）．Ｔｗｏｗｅｅｋｓｌａｔｅｒ，ＩＶＤｓ
ｔｙｐｅ
ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｏｒｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈ
ｔｙｐｅ
ｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＩ
ａｎｄ
ｌＩｃｏｌｌａｇｅｎｓ，ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ｉＮＯＳ），
ｆａｃｔｏｒ－－１３１（ＴＧＦ－－１３１）ａｎｄｃａｓｐａｓｅ一３．Ｒｅｓｕｌｔｓ：①ＲＴ—ＰＣＲｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｂｏｔｈ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｗａｓ
ｗｉｔｈｄｅｎｓｅｒｄｏｓｅｓｏｆ
ｏｆＩＶＤｓａｎｄ
ｓｔｒｏｎｇｅｒ
ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ．②Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｓｔａｉｎｉｎｇｏｆ
ｔｙｐｅ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔ
ａｓ
ｔｈｅｔｉｏｎ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｃｏｎｔｅｎｔｓ
ｏｆｃｏｌｌａｇｅｎｓｗｅｒｅｂｅｔｔｅｒｒｅｖｅｒｓｅｄｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ
ｇｒｏｕｐ
ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｏｓｅｉｎｄｅｇｅｎｅｒａ—
ｇｒｏｕｐ．③Ｐｏｓｉｔｉｖｅ—ｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｉＮＯＳａｎｄｃａｓｐａｓｅ－－３ｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔＷｆｌＳｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｗｈｉｌｅ
ｃａｎ
ＴＧＦ一口１ｅｖｉ—
ｅｘ—
ｄｅｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ
ｔｙｐｅ
ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓｉｎＩＶＤｉｎｄｕｃｅｄｂｙＩＬ一１口ｔｈｒｏｕｇｈｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉＮＯＳａｎｄｃａｓｐａｓｅ－－３
ＴＧＦ一８１．
Ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ；Ｔｙｐｅ
ａｎｄｓｕｓｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＫｅｙｗｏｒｄｓ
ＩｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＩＣｏｌｌａｇｅｎ；ＴｙｐｅⅡｃｏｌｌａｇｅｎ；Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－－１１３
胶原是椎间盘基质内的含量最大的蛋白质成分，椎间盘内的胶原主要包括Ｉ型和Ⅱ犁胶原，其中髓核以Ⅱ型胶原为主．
纤维环以Ｉ型胶原为主。胶原成分质和量的下降是椎问盘退
基金项目：湖北省自然科学基金资助项目（Ｎｏ．２００４ＡＢＡｌ９３）１华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科（武汉，４３００２２）通讯作者：熊蠡茗
变早期重要的生化事件，如何维持胶原成分的质和量是椎间盘退变研究需要解决的重要问题。白细胞介素一１（ＩＬ一１）等炎性因子参与椎间盘退变过程的始终，能够显著影响Ｉ、Ⅱ型胶
２２
原的表达和含量。烟酰胺（Ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ）是具有抗炎作用的维生素，同时能够促进细胞能量代谢。此前我们报道了烟酰胺能
够明显提升正常及退变椎间盘内聚集蛋白聚糖的质和量‘１，本研究中我们将进一步考察不同浓度的烟酰胺对于兔椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原表达及含量的影响，同时考察诱导型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）、转化生长因子一ｐｌ（ＴＧＦ—ｐ１）、细胞凋亡蛋白酶（ｅａｓｐａｓｅ－－３）的表达情况，以探讨烟酰胺的可能作用机制。１材料与方法
１．１椎间盘组织体外培养
温度５６℃，３５个循环，产物大小４０３ｂｐ（根据Ｇｅｎｂａｎｋ序列号
Ｄ４９３９９自行设计）。１１型胶原上、下游引物：５’一ＡＣＧＣＴＣ
ＡＡＧＴＣＣＣＴＣＡＡＣＴＣＡＣＣＧＣＴＣ
Ａ一３’和５’一ＴＣＴＡＴＣＣＡＧＴＡＧ
Ｔ一３’，解链温度５５℃，３５个循环，产物大小
１３１ｂｐ（根据Ｏｅｎｂａｎｋ序列号Ｄ８３２２８自行设计）。ｐ—Ａｃｔｉｎ上、下游引物分别为：５一ＴＧＣ
ＴＴＣＴＡＧＧＣＧＧＡＣＴＧＴＴＡ一３’
和５’一ＣＧＴＣＡＣＡＴＧＧＣＡＴＣＴＣＡＣＧＡ一３。，解链温度５１℃，３５个循环，产物大小３１４ｂｐ［“。ＰＣＲ产物（每５ｕｌ产物加入ｓｙｂｇｒｅｅｎ１“１）经２％琼脂糖凝胶电泳，结果由ＨＭｌＡＳ一２０００
椎问盘组织取自１３只日本大白兔（３～４月龄，体重１．５～２ｋｇ，雌雄不限，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供）。
耳缘静脉空气注射处死动物后无菌条件下取出Ｌ１～１．６节段腰
分析仪照相后测算条带积分吸光度，以目的基因与口一Ａｅｔｉｎ条
带吸光度的比值ｒ作为基因相对表达量。１．４椎间盘组织免疫组化
椎，无菌操作台内完整剥离椎间盘（共７８枚椎间盘）。ＰＢＳ清
洗后采用前述方法－Ｌ行藻酸盐凝胶内椎间盘组织培养。每孔加入ｌｍｌ含２０％胎牛血清（三利公司）的ＤＭＥＭ—Ｆ１２（Ｇｉｂｉｃｏ公司）（内加２５ｐｇ／ｍｌ维生素Ｃ，Ａｍｒｅｓｃｏ公司），置于３７℃，５％
４％甲醛溶液固定标本，常规石腊包埋，制作６ｂｔｍ厚切片，
脱蜡至水，热抗原修复。１：８０稀释的兔抗人Ｉ、Ⅱ型胶原、ｉＮ—
ＯＳ、ＴＧＦ－８１、Ｃａｓｐａｓｅ－－３多克隆抗体（博士德公司）３７℃孵育３０ｍｉｎ，采用羊抗兔免疫组化ＳＰ试剂盒（中杉公司），根据其说
明书要求加入二抗等直至苏木素复染，树胶封片。ＨＭＩＡＳ一２０００分析仪照相，每张切片随机观察１０个视野。对Ｉ、Ⅱ型胶原染色作相对光密度分析，计算ｉＮＯＳ、ＴＧＦ一８ｌ和Ｃａｓｐａｓｅ－－３染色阳性细胞率（阳性细胞率一阳性细胞总数／细胞总数×１００％）。
ＣＯ：条件下培养。自培养当天起在各组培养基内加入不同量
的烟酰胺和ＩＩ。一ｌ口（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ公司）。每天换液一次。１．２标本分组
将椎间盘组织随机分为６组。每组１３个：第一组为正常对照组，不加入药物；第二组加入０．５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺作为烟酰胺对照组；第三组加入１０ｎｇ／ｍｌＩＬ－－１Ｂ作为退变组；第四至第六祖为烟酰胺治疗组，第四组加入０．５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺和１０ｎｇ／ｍｌ
ＩＬ
１．５统计学分析
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ结果作组间独立样本ｔ检验。对Ｉ、Ⅱ型胶原染色结果作吸光度分析，结果用ｊ土ｓ表示。对
ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３及ＴＧＦ—Ｂ１染色结果计算各组阳性、阴性
一１１３；第五组加入０．２５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺和１０ｎｇ／ｍｌ１Ｉ。一１Ｂ；第六组加入０．０５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺和１０ｎｇ／ｍｌＩＬ一１８。培养３天，１周时对各组标本行Ｉ、Ⅱ型胶原基因ＲＴ—ＰＣＲ检测，培养２周时行Ｉ、Ⅱ型胶原，ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３及ＴＧＦ—Ｂ１免疫组化检测。
１．３
细胞数总和，然后行卡方检验。所有数据采用ｓｐｓｓｌ２．０软件分
析。２结果
２．１
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ
标本取出后迅速置于一７０℃冻存。检测时每一样本称取
３０ｒａｇ纤维环组织，加入Ｔｒｉｚｏｌ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ公司）ｌｍｌ，研磨，按说明书提取总ＲＮＡ。取ｌ且ｇ总ＲＮＡ，采用
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ（见表１）
退变组Ｉ、Ⅱ型胶原表达量与同期同部位正常对照组相比
均显示出较为明显的抑制。而烟酰胺治疗组Ｉ、Ⅱ型胶原表达较同期同部位退变组相比均有提高，并且随着剂量的加大Ｉ、Ⅱ型胶原表达增高，甚至略高于正常组。Ｉ型胶原在纤维环内表达较活跃，随着时间的延长Ｉ型胶原合成轻微减少。Ⅱ型胶原在髓核内表达较活跃，随着时间的延长Ⅱ型胶原合成明显减
少（图１）。
Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司逆转录试剂盒，按其说明书进行ｍＲＮＡ逆转
录。取２“ｌｃＤＮＡ模板，加入２０ｐｍｏｌ引物（上海生工生物工程
公司合成）配制成２５／１１反应体系，在ＴａｑＤＮＡ聚合酶（ＭＢＩＦｅｒｍｅｎｔａｓ）催化下分别进行Ｉ、Ⅱ型胶原及８一Ａｃｔｉｎ基因
ＰＣＲ。Ｉ型胶原上、下游引物：５’一ＣＣＴＧＧＣＡＴＡＡＡＧＧＧＡＣＡＣ一３’和５’一ＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＧＡＧＧＡＧＧＧＴ一３’，解链
表１各组椎问盘Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ相对表达量（孑±Ｓ）
正常对照组烟酰胺对照组
退变组
０．５４土０．０９０．６０±０．１１
１．０９±０．１３１．１８士０．１１
１．４６±０．１７１．５ｌ±０．１６
０．６４±０．２００．７１士０．１５
０．５９±０．１００．５５±０．１０
０．７６±０．１３０．８０±０．２０
１．３９±０．１５０．４４±０．１１０．５２±０．１２０．１９士０．１３●
１．３５±０．１２
０．８７４－０．２４ｅ
０．２９±０．１３＠０．４４士０．２３●０．８０－－４－０．１５●０．３７－４－０．１０●０．３１士０．１１●０．３２±０．２４ｅ
０．５ｍｇ／ｍｌ治疗组０．２５ｍｇ／ｍｌ治疗组０．０５ｍｇ／ｍｌ治疗组
０．５４士０．０９Ａ１．１４士０．２８Ａ１－４７士０．１５Ａ０．６８±０．１８Ａ０．５６士０．１５Ａ０．６２±０．１７Ａ１．４０±０．２４▲０．４３±０．１５Ａ０．３９±０．１４０．３６±０．１１
１．００士０．２ｌ▲１．０８±０．２４▲０．５４士０．１０Ａ０．２５±０．１３０．９２±０．１５▲１．００±０．１６Ａ０．４４±０．１４
０．２５±０．１４
０．５８±０．１８０．４７±０．１６
１．１３±０．３００．９７±０．２８
０．３９±０．１０
０．３６±０．１６
注：●同期同部位退变组与正常对照组比较Ｐ＜Ｏ．０５；▲同期同部位３个烟酰胺治疗组与退变组比较Ｐ＜Ｏ．０５
图１—１各组■核、纤维环Ｉ、Ⅱ田１—２各组■核、纤维环
型胶原ＲＴ—ＰＣＲ
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ２．２
Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组化
正常对照组及烟酰胺对照组纤维环结构完整，Ｉ、Ⅱ型胶
原沿板层状结构分布，排列清晰有序，可见较多软骨样细胞，细
胞核形态浑圆饱满；髓核陷窝样结构饱满，胶原纤维分布均匀。
退变组纤维环板层状结构不清晰，Ｉ、Ⅱ型胶原纹路均紊乱，髓核陷窝样结构变小且不规则，胶原分布欠均匀。烟酰胺治疗组
与退变组相比纤维环板层结构保留较好，胶原纹路连续，髓核
陷窝样结构保留较好（图２）。各组Ｉ、Ⅱ型胶原光密度详见表
２。２．３
ｉＮＯＳ免疫组化
各组椎间盘阳性细胞率分别为１８．７％，１３．５％，６０．７％，
２１．７％，２８．７％和３３．６％。第一、二组纤维环内仅有少量ｉＮＯＳ阳性染色细胞。两者无明显差异（Ｘ２＝１．４８１，Ｐ一０．２２４），而第
三组阳性染色率较第一组明显升高（Ｘ２＝５４．５６９，Ｐ＝０．０００）（图３—１）。各剂量治疗组阳性染色率较退变组均明显下降（Ｘ２
＝４５．１９，Ｐ一０．０００；Ｘ２＝２８．１９１，Ｐ＝０．０００；Ｘ２＝１９．７３２，Ｐ
＝０．０００）（图３—２）。
表２各组椎问盘Ｉ、Ⅱ型胶原光密度值（ｉ－Ｉ－５）
注：●烟酰胺对照组、退变组与正常对照组比较Ｐ＜０．０５；▲３组烟酰胺治疗组与退变组比较Ｐ＜０．０５
２．４ＴＧＦ一８１免疫组化
各组阳性细胞率分别为８０．８％，８４．５％，２５．２％，６８．６％，
６８．４％和６１．２％。第一、二组多数细胞染色为阳性，两者无明显差别（Ｘ２＝０．５４７，Ｐ＝０．４５９）。丽第三组阳性染色率较第一
组明显下降（Ｘ２＝７６．５４７，Ｐ＝０．０００）（图４—１）。各剂量治疗组阳性染色率均显著高于第三组（Ｘ２＝４６．４６５，Ｐ２０．０００；Ｘ２
＝４５．２３９，Ｐ一０．０００；ｙ２—３２．１９２，Ｐ＝０．０００）（图４—２）。
２．５
Ｃａｓｐａｓｅ－－３免疫组化
２３
图１—３各组髓核、纤维环Ｉ、图１—４各组■核、纤维环
Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ
各组阳性细胞率分别为６．５％，５．１％，２８．２％，１２．３％，１２．７％和１６．８％。第一组及第二组椎间盘仅有少量阳性染色细
胞，两者无明显差别（Ｘ２＝０．２２ｌ，Ｐ一０．６３８）。第三组阳性染色
率达２８．２％，较第一组有显著性差异（Ｘ２＝２１．４５９，Ｐ＝０．０００）（图５—１）。各剂量治疗组阳性染色率较第三组均下降，但仅第
四、五组较第三组有显著性差异（Ｘ２—８．４３２，Ｐ＝０．００４；Ｘ２—７．６６８，Ｐ＝０．００６），小剂量治疗组阳性染色率较退变组虽有所
下降，但并无统计学意义（Ｘ２—３．７１，Ｐ一０．０５４）（图５—２）。
３讨论
椎间盘退变的进程复杂而漫长，一般认为力学因素等外界
因素首先干扰椎间盘细胞的生物学行为，进而引发蛋白聚糖、
胶原等基质成分的品质下降，最终使椎间盘进入难以自行逆转的退变。炎性因子的作用贯穿这个过程的始终，它们一方面通
过调节基质的合成效率和蛋白酶的活动来影响基质质量，进而
影响细胞的生存环境；另一方面通过细胞因子网络直接干扰细胞的生长、分化以及凋亡［３－５］。如ＩＬ一１Ｂ不仅可以直接启动凋亡的胞内过程，还能够使Ｎ０、ＴＮＦ（肿瘤坏死因子）等炎性因子
的分泌显著增加，导致椎间盘内合成代谢和分解代谢失衡，引
起基质成分质、量的下降［６］。Ｎ０在椎间盘退变中扮演着重要
角色：ｉＮＯＳ引起的ＮＯ含量上升是压力诱发椎间盘退变的首要机制，Ｎ０还可以直接抑制蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的合成，加剧ａｇｇｒｅｃａｎａｓｅ（聚集蛋白聚糖酶）和ＭＭＰｓ（基质金属蛋白酶）对胶原和蛋白聚糖的酶解［７］。因此，本研究选用ＩＬ一１Ｂ来诱发实
验性椎间盘退变。
Ｉ、Ⅱ型胶原是椎问盘组织较有特征性的基质成分，其合成与降解情况可以反映出细胞和基质的状态［８］。本研究显示，
烟酰胺可以有效减轻ＩＬ－－１１３对Ｉ、Ⅱ型胶原表达的抑制。同时
免疫组化显示烟酰胺对ＩＬ－－１６诱导的板层状结构破坏有抑制作用，从侧面反映胶原的降解也受到了抑制。烟酰胺可以较好
地抵消ＩＬ一１Ｂ对Ｉ、Ⅱ型胶原表达的抑制，但并不能使胶原的
含量维持在正常水平。这可能是因为ＩＬ一１８能够通过多种途径。尤其是增强酶解的作用，对胶原进行调节。
烟酰胺是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸即辅酶Ｉ的前体，在多个组织均表现出强大的抗炎作用。，其抗炎机制可能源于其对ＩＬ一１等炎性因子诱导的ＰＡＲＰ（多ＡＤＰ核糖聚合酶）活性的抑制。ＰＡＲＰ受抑可以有效降低ｉＮＯＳ基因的表达，显著减少ＮＯ
的合成［９’１…。本研究中我们发现，退变组ｉＮＯＳ阳性细胞比例
２４
ＣｈｉｎｅｓｅＪＴｒａｄＭｅｄＴｒａｕｍ＆Ｏｒｔｈｏｐ，Ｊｕｎ２００８，Ｖｏｌ
１６，Ｎｏ６
图２—１椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
图２—２椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组图２—３椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
化２００×退变组纤维环Ｉ型胶原染色化２００×烟酰胺治疗组纤维环Ｉ型胶原染色
化２００×退变组髓核Ｉ型胶原染色
圈２—４椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
图２—５椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组图２—６椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
化２００×烟酰胺治疗组髓核Ｉ型胶原
染色
化２００×退变组纤维环Ⅱ型胶原染色化２００×烟酰胺治疗组纤维环Ⅱ型胶原染色
图２—７椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
图２—８椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组图３—１退变组及治疗组纤维环ｉＮ—
化２００×退变组髓核Ⅱ型胶原染色化２００×烟酰胺治疗组髓核Ⅱ型胶原染色
ＯＳ免疫组化染色２００×退变组椎间盘内多数细胞出现阳性染色。阳性染色
率为６０．７％。
圈３—２退变组及治疗组纤维环ｉＮ・圈４—１退变组及治疗组纤维环ＴＧＦ图４—２退变组及治疗组纤维环ＴＧＦ～Ｂ１免疫组化染色２００／烟酰胺０．５ｍｇ／ｍｌ治疗组阳性染色细胞数较退
变组明显增多．阳性染色率为６８．６％。
ＯＳ免疫组化染色２００×烟酰胺０．５ｍｇ／ｍｌ治疗组阳性染色细胞数较退变组明显减少。阳性染色率为２１．７％。
－１３１免疫组化染色２００×退变组椎间盘内阳性染色细胞较少，阳性染色率
２５．２％。
图５—１退变组及治疗组纤维环Ｃａｓｐａｓｅ一３免疫组化染色２００×退变组椎问盘内阳性染色细胞较多。阳性染色率２８．２％。
图５—２退变组及治疗组纤维环Ｃａｓｐａｓｅ一３免疫组化染色２００×烟酰胺０．５ｍｇ／ｍｌ治疗组阳性染色细胞数较退变组有所减少，阳性染色率为１２．３％。
约为正常对照组的４倍，表明ＩＬ－－１Ｂ对ｉＮＯＳ具有很强的诱导作用。而大剂量治疗组阳性细胞率则降至退变组的约１／３，与
正常组较为接近。与此同时，我们发现烟酰胺对于椎问盘细胞ＴＧＦ－－Ｂ１的表达表现出较好的保护作用，０．５ｍｇ／ｍｌ组阳性细胞率约为退变组的３倍。我们此前报道：ＴＧＦ—Ｂ１在退变椎间
盘内表达下降，而通过提高ＴＧＦ—Ｂ１含量，则可以改善甚至阻
逆椎间盘退变口…。烟酰胺对椎间盘胶原的保护作用可能同时源于其对ｉＮＯＳ的抑制作用及对ＴＧＦ—ｐ１的保护作用。
凋亡引发的细胞数量下降会直接导致胶原等基质成分合
成不足，是椎问盘退变难以逆转的重要原因。Ｃａｓｐａｓｅ是一类
半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶，目前已发现１４种，分别参与细
胞凋亡的启动和执行过程，Ｃａｓｐａｓｅ－－３是效应阶段的重要执行
者Ｄｚ，１３］。本研究中治疗组阳性细胞率较退变组明显下降，表明烟酰胺对ＩＬ－－１８诱导的细胞凋亡具有一定的抑制作用。但烟酰胺并不能使阳性细胞率降至正常组水平，这可能是因为ＩＬ一１８具有启动多种凋亡途径的能力。
本研究发现，烟酰胺对椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原有良好的保护
２５
作用，这种作用与其对ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３的抑制及对ＴＧＦ—ｐ１的保护作用有关。细胞外基质质量下降，细胞凋亡和炎性因子分泌增加是椎间盘退变的三个重要机制。本研究中烟酰胺对这三种机制均表现出的一定抑制作用，结合我们此前的报
道［１］，可以认为烟酰胺具备进一步开发成为椎间盘退变防治药物的潜力。目前临床上缺乏高效、毒副作用少、价格低廉且可长期应用的椎间盘退变防治药物。作为临床应用多年的维生
素类药物，烟酰胺具有安全可靠且价格低廉的优势。对烟酰胺作进一步实验研究，将有助于我们尽早将其应用于椎间盘退变
的临床治疗，有助于开拓椎问盘退变研究的新思路。参考文献
Ｅ１］熊晓芊。杨述华，邵增务，等．烟酰胺对椎间盘聚集蛋白聚糖的调
控作用［Ｊ］．中国中医骨伤科杂志，２００５，１３（５）：１—４．［２］
ＢＥＲＧＬＵＮＤ
Ｍ，ＷＩＩＧＭ，ＴＯＲＳＴＥＮＳＳＯＮＭ，ｅｔａ１．Ａｓｓｅｓｓ—
ｍｅｎｔｏｆｍＲＮＡｌｅｖｅｌｓｆｏｒｍａｔｒｉｘｍｏｌｅｃｕｌｅｓａｎｄＴＧＦ～ｂｅｔａｌｉｎｒａｂｂｉｔｆｌｅｘｏｒａｎｄｐｅｒｏｎｅｕｓ
ｔｅｎｄｏｎｓｒｅｖｅａｌｓｒｅｇｉｏｎａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ
ｉｎ
ｓｔｅａｄｙ－－ｓｔａｔｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＪＨａｎｄ
Ｓｕｒｇ，２００４，２９（２）：１６５—
１６９．
［３３熊晓芊，邵增务，杨述华．聚集蛋白聚糖与椎问盘退变的研究进
展［Ｊ］．中国脊柱脊髓杂志，２００５，１５（１）：５４—５６．Ｅ４３
ＷＥＩＬＥＲ
Ｃ。ＮＥＲＬＩＣＨ
Ａ
Ｇ．ＢＡＣＨＭＥＩＥＲＢＥ，ｅｔ
ａ１．Ｅｘｐｒｅｓ—ｓｉｏｎａｎｄ
ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａ
ｉｎ
ｈｕｍａｎｌｕｒｅ—
ｂａｒｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃｓ：ａｓｔｕｄｙ
ｉｎ
ｓｕｒｇｉｃａｌｓｐｅｃｉｍｅｎ
ａｎｄ
ａｕｔｏｐｓｙ
ｃｏｎｔｒｏｌｓＦＪ３．Ｓｐｉｎｅ，２００５，３０（１）：４４—５３．［５３
ＰＯＤＩＣＨＥＴＴＹＶ
Ｋ．Ｔｈｅ
ａｇｉｎｇ
ｓｐｉｎｅ；ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ
ｍｅｄｉａｔｏｒｓ
ｉｎ
ｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃ
ｄｅｇｅｎｅｆａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣｅｌｌＭｏｌＢｉｏｌ，
２００７，５３（５）：４—１８．
Ｅ６３
ＬＥ
ＭＡＩＴＲＥＣＬ，ＦＲＥＥＭＯＮＴ
ＡＪ，ＨＯＹＬＯＮＤＪＡ．Ｔｈｅｒｏｌｅ
ｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１
ｉｎｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ
ｏｆ
ｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃ
ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓｅａｒｃｈＴｈｅｒａｐｙ，２００５，７（４）：７３２—
４５．
［７３
ＳＨＥＮＢ，ＭＥＬＲＯＳＥＪ，ＧＨＯＳＨ
Ｐ．ｅｔａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘ
ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－－２
ａｎｄ——３
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｉｎｏｖｉｎｅ
ｎｕｃｌｅｕｓ
ｐｕｌｐｏｓｕｓ
ｃｅｌｌｓｇｒｏｗｎｉｎ
ｔｈｒｅｅ—ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ
ａｇａｒｏｓｅ
ｇｅｌｃｕｌｔｕｒｅｂｙｉｎｔｅｒｌｅｕ—
ｋｉｎ—ｌｂｅｔａ：ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｐａｔｈｗａｙｏｆ
ｄｉｓｃ
ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｌ－Ｊ］．Ｅｕｒ
Ｓｐｉｎｅ
Ｊ，２００３，１２（１）：６６—７５．
Ｅ８］ＬＥＭＡＩＴＲＥ
Ｃ
Ｌ，ＰＯＣＫＥＲＴ
Ａ，ＢＵＴＴＬＥＤＪ，ｅｔａ１．Ｍａｔｒｉｘ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ａｎｄ
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃｄｅｇｅｎｅｒａ—
ｔｉｏｎ［－Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ，２００７，３５（Ｐｔ４）：６５２—５．
［９］ＮＡＭＡＺＩＭＲ．Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ：ａｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ａｄｄｉｔｉｏｎｔｏ
ｔｈｅａｎｔｉ—
ｐｓｏｒｉａｔｉｃ
ｗｅａｐｏｎｒｙ［，Ｊ］．ＦＡＳＥＢＪ．２００３，１７（１１）：１３７７—１３７９．
［１０３
ＳＵ
ＣＦ，ＬＩＵ
Ｄ
Ｄ，ＫＡＯＳＪ。ｅｔａ１．Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｂｒｏｇａｔｅｓ
ａ—
ｃｕｔｅ
ｌｕｎｇ
ｉｎｊｕｒｙｃａｕｓｅｄｂｙ
ｉｓｃｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｕｒ
Ｒｅｓｐｉｒ
Ｊ，２００７。３０（２）：１９９—２０４．Ｅｐｕｂ２００７
Ｍａｙ
１５．
［１１３
ＺＨＡＮＺ，ＳＨＡＯｚ，ＸＩＯＮＧ
Ｘ。ｅｔａ１．Ａｄ／ＣＭＶ—ｈＴＧＦ—ｂｅ—ｔａｌ
ｔｒｅａｔｓ
ｒａｂｂｉｔｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌ
ｄｉｓｃｓ
ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｉｎ
ｖｉｖｏ［Ｊ］．Ｊ
Ｈｕａｚｈｏｎｇ
Ｕｎｉｖ
Ｓｃｉ
ＴｅｃｈｎｏｌｏｇＭｅｄＳｅｉ，２００４，２４（６）：５９９—６０１，
６２４．
［１２３
ＫＲＯＥＭＥＲＧ，ＲＥＥＤＪｃ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃｏｎｔｒｏｌｏｆｃｅｌｌｄｅａｔｈ
［Ｊ］．ＮａｔＭｅｄ，２０００，６（５）：５１３—９．
［１３１
ＭＡＺＵＤＭＥＤＲＳ，ＰＬＥＳＣＡＤ，ＡＬＭＡＳＡＮＡ．Ｃａｓｐａｓｅ一３
ａｃ—
ｔｉｖａｔｉｏｎ
ｉｓ
ａ
ｃｒｉｔｉｃａｌｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｏｆ
ｇｅｎｏｔｏｘｉｃｓｔｒｅｓｓ—ｉｎｄｕｃｅｄａｐ—
ｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ，２００８，４１４：１３—２１．
（收稿日期：Ｚ００７一１１—２８）
烟酰胺对椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原的调控作用
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
徐蔚蔚， 邵增务， 郭兵， 杨述华， 俞旭东， 谢卯， 熊蠡茗， XU Weiwei， SHAOZengwu， GUO Bing， YANG Shuhua， YU Xudong， XIE Mao， XIONG Liming华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,武汉,430022
中国中医骨伤科杂志
CHINESE JOURNAL OF TRADITIONAL MEDICAL TRAUMATOLOGY & ORTHOPEDICS2008，16(6)8次
参考文献(13条)
1.熊晓芊.杨述华.邵增务 烟酰胺对椎间盘聚集蛋白聚糖的调控作用[期刊论文]-中国中医骨伤科杂志 2005(05)2.BERGLUND M.WIIG M.TORSTENSSON M Assessment of mRNA levels for matrix molecules and TGF-beta1 inrabbit flexor and peroneus tendons reveals regional differences in steady-state expression 2004(02)3.熊晓芊.邵增务.杨述华 聚集蛋白聚糖与椎盘间退变的研究进展[期刊论文]-中国脊柱脊髓杂志 2005(01)4.WEILER C.NERLICH A G.BACHMEIER B E Expression and distribution of tumor necrosis factor alpha inhuman lumbar intervertebral discs:a study in surgical specimen and autopsy controls 2005(01)5.PODICHETTY V K The aging spine:the role of inflammatory mediators in intervertebral discdegeneration[期刊论文]-Cellular and Molecular Biology 2007(05)
6.LE MAITRE C L.FREEMONT A J.HOYLOND J A The role of interleukin-1 in the pathogenesis of humanintervertebral disc degeneration 2005(04)
7.SHEN B.MELROSE J.GHOSH P Induction of matrix metalloproteinase-2 and-3 activity in ovine nucleuspulposus cells grown in three-dimensional agarose gel culture by interleukin-1 beta:a potentialpathway of disc degeneration 2003(01)
8.LE MAITRE C L.POCKERT A.BUTTLE DJ Matrix synthesis and degradation in human intervertebral discdegeneration 2007
9.NAMAZI M R Nicotinamide:a potential addition to the antipsoriatic weaponry 2003(11)
10.SU C F.LIU D D.KAO S J Nicotinamide abrogates acute lung injury caused by ischaemia/ reperfusion2007(02)
11.ZHAN Z.SHAO Z.XIONG X Ad/CMV-hTGF-beta1 treats rabbit intervertebral discs degeneration in vivo[期刊论文]-Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Science) 2004(06)12.KROEMER G.REED J C Mitochondrial control of cell death 2000(05)
13.MAZUDMEDR S.PLESCA D.ALMASAN A Caspase-3 activation is a critical determinant of genotoxicstress-induced apoptosis 2008
相似文献(8条)
1.期刊论文 郭兵.邵增务.熊蠡茗.杨述华.周建国.徐蔚蔚.Guo Bing.Shao Zeng-wu.Xiong Li-ming.Yang Shu-hua.Zhou Jian-guo.Xu Wei-wei 烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因的影响 -中国组织工程研究与临床康复2008,12(46)
背景:前期研究已证实,烟酰胺能够促进椎间盘细胞的增殖并对白细胞介素1β致椎间盘退变起到保护作用,而烟酰胺对椎间盘退变的保护机制还不很清楚.目的:观察烟酰胺对白细胞介索1 β诱导体外培养的兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响.设计、时间及地点:实验于2007-11/2008-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:3-4月龄日本大白兔10只,体质量1.5-2.0kg,取L1-6脊柱节段56个椎间盘组织,用于构建兔椎间盘组织凝胶培养模型.方法:将56枚椎间盘随机分为4组,每组14枚.正常对照组:不加入药物;烟酰胺组:加入0.5 g/L烟酰胺;退变组;加入10 μg/L白细胞介素1β;治疗组加入10 μ g/L白细胞介素1β及0.5 g/L烟酰胺.培养2周后对各组标本行TUNEL染色及Fas,Caspase-3,Bcl-2,低氧诱导因子1α、葡萄糖转运体1、血管内皮细胞生长因子免疫组织化学染色.主要观察指标:各组标本TLINEL染色及免疫组织化学染色阳性细胞率.结果:TUNEL染色示加入烟酰
性细胞率升高(P=0.004).Caspase-3染色示治疗组阳性细胞率较退变组下降(P=0.024),但仍高于正常对照组(P=0.006).低氧诱导因子1 α染色示烟酰胺组阳性细胞率低于正常对照组(P＜0.01);退变组阳性细胞率较正常对照组上升(P＜0.01).葡萄糖转运体1染色示治疗组阳性细胞率高于正常对照组(P＜0.01).结论:烟酰胺可以抑制白细胞介素1β诱导的椎间盘细胞凋亡,改善白细胞介素1β导致的椎间盘能量代谢障碍.
2.期刊论文 徐蔚蔚.邵增务.熊蠡茗.杨述华.俞旭东.郭兵.谢卯 烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响 -华中科技大学学报（医学版）2009,38(2)
目的 观察烟酰胺(Nia)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的体外培养的退变兔椎间盘组织内细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响.方法 构建兔椎间盘组织凝胶培养模型,分为正常对照组(不加入药物),烟酰胺组(加入0.5 mg/ml烟酰胺),退变组(加入10 ng/ml IL-1β)和治疗组(加入10 ng/ml IL-1β及0.5 mg/ml烟酰胺).培养2周后对各组标本分别行TUNEL染色,Fas、Caspase 3、Bcl-2、HIF-1α、GLUT-1及VEGF免疫组化染色.结果 TUNEL染色示治疗组阳性细胞染色率较退变组有所下降.Fas、Bcl-2染色示治疗组阳性细胞率均与退变组接近(均P>0.05).Caspase 3染色示治疗组阳性细胞率较退变组明显降低(P0.05).结论 烟酰胺可以抑制IL-1β诱导的椎间盘细胞凋亡,改善IL-1β导致的椎间盘能量代谢障碍.
3.期刊论文 徐润冰.邵增务.熊晓芊.刘心.胡绪江.周鹏.Xu RB.Shao ZW.Xiong XQ.Liu X.Hu XJ.Zhou P 烟酰胺对肿瘤坏死因子α诱导纤维环基质降解的抑制作用 -中国组织工程研究与临床康复2007,11(2)
目的:观察烟酰胺对肿瘤坏死因子α诱导纤维环基质降解的抑制作用,并分析其作用途径.方法:实验于2005-10/12在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室及骨科实验室完成.椎间盘组织取自12只清洁级日本大白兔,兔龄4个月,体质量2.5～3.0 kg,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供.建立兔椎间盘组织凝胶培养模型,将其分为4组,即正常对照组、烟酰胺组、退变组及治疗组.正常对照组不加入药物;烟酰胺组加入0.5 g/L烟酰胺;退变组加入10 μg/L肿瘤坏死因子α诱导纤维环基质降解;治疗组加入0.5 g/L烟酰胺和10 μg/L肿瘤坏死因子α.培养1周后比较各组标本纤维环结构(藏红O-快绿染色强度)、糖醛酸含量、Ⅰ,Ⅱ型胶原结构及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达情况(染色阳性细胞率).结果:①各组兔椎间盘标本纤维环结构比较:治疗组纤维环结构的破坏得到较好的抑制,染色浓度高于退变组.②各组兔椎间盘标本纤维环糖醛酸含量比较:治疗组较退变组增高约
48%(t=16.93,P=0.000),与烟酰胺组接近(t=0.71,P=0.657).③各组兔椎间盘标本纤维环Ⅰ,Ⅱ型胶原结构及分布情况:治疗组板层结构完整性和胶原纹路连续性好于退变组,Ⅰ,Ⅱ型胶原含量之比较正常组升高.④各组兔椎间盘标本纤维环半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性染色率比较:治疗组明显低于退变组(10.3%,17.9%,χ2=5.081,P＜0.01).结论:烟酰胺能够减轻肿瘤坏死因子α对纤维环基质的破坏作用,这种作用与烟酰胺减少纤维环半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3依赖的细胞凋亡有关.
4.期刊论文 周建国.杨述华.杨操.邵增务.徐蔚蔚.郭兵.俞旭东.熊蠡茗.Zhou Jian-guo.Yang Shu-hua.Yang Cao.Shao Zeng-wu.Xu Wei-wei.Guo Bing.Yu Xu-dong.Xiong Li-ming 烟酰胺对压力诱发免腰椎间盘退变的保护作用 -中国组织工程研究与临床康复2009,13(33)
背景:最近研究已经证实,烟酰胺能够促进椎间盘细胞的增殖并对椎间盘退变有改善作用.目的:验证烟酰胺对压力诱发的兔腰椎间盘退变的保护作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-11/2009-04在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室及骨科实验室完成.材料:4月龄日本大白兔24只,体质量2.0 kg;烟酰胺为天津市大茂化学试剂厂产品.方法:取24只日本大白兔随机分入1～6组,采用可控轴向压力,以98 N压力诱发椎间盘退变建立兔腰椎间盘退变模型,并按分组要求给予兔口服烟酰胺;第1组2只,安装加压装置不予加压或给药;第2组2只,给予50mg/kg烟酰胺口服1周:第3组5只,以98N压力加压1周;第4组5只,以98 N压力加压1周,去除压力自行恢复1周;第5组5只,加压1周同时给予50 mg/kg烟酰胺口服1周;第6组5只,自加压开始时持续给予50 mg/kg烟酰胺,加压1周,然后去除压力后恢复1周.主要观察指标:以Thompson分级法及腰椎间盘磁共振评价退变程度;苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及藏红O-快绿染色考察其组织学改变:P161NK4A免疫组织化学染色检测细胞增殖和衰老状态的变化.结果:①第2组椎间盘未见明显退变;第3组5只动物Thompson分级均为Ⅱ级,第4组4只为Ⅱ级,1只为Ⅲ级,第5组2只为Ⅰ级,3只为Ⅱ级,第6组3只为Ⅰ级,2只为Ⅱ级.MRI也显示,服用烟酰胺的动物椎间盘退变程度有所减轻.②第6组纤维环Ⅱ型胶原含量较第4组高约53.2%(P＜0.01).③第2组藏红O染色强度较第1组有所上升;第5,6组髓核和纤维环染色强度均高于第4组的相对应部位,其中以第6组髓核上升最为明显(P＜0.01,P＜0.01),第6组较第5组有轻微上升.④P161NK4A阳性率随烟酰胺给药时间延长而降低.结论:烟酰胺有助于减轻压力对椎间盘的损伤,能够促进压力损伤后的椎间盘恢复.
5.期刊论文 熊晓芊.杨述华.邵增务.詹子睿.段德宇.吴宏斌 烟酰胺对椎间盘聚集蛋白聚糖的调控作用 -中国中医骨伤科杂志2005,13(5)
目的:观察烟酰胺对椎间盘聚集蛋白聚糖的调节作用.方法:构建体外椎间盘组织凝胶培养模型,以10ng/mlIL-1β诱发椎间盘退变,同时以0.5
mg/ml,0.25 mg/ml和0.05 mg/ml烟酰胺进行治疗,于造模的第一、二周对各组行葡萄糖醛酸含量测定、藏红O-快绿染色及聚集蛋白聚糖核心蛋白基因RT-PCR检测.结果:①给与0.5 mg/ml烟酰胺一周后髓核糖醛酸含量较正常对照上升44.8%,(P＜0.01);给与IL-1的各组糖醛酸含量随烟酰胺浓度上升而增高:0.5 mg/ml治疗一周后髓核糖醛酸含量较未治疗组上升68.3%,(P＜0.01),2周后髓核及纤维糖醛本含量仍高于同期正常组(P＜0.01)和未治疗组
(P＜0.01).②藏红O-快绿染色显示,随着烟酰胺浓度加大,髓核及纤维环染色浓度越大,组织结构受IL-1β破坏越小.③RT-PCR显示与IL-1的各组椎间盘内,核心蛋白表达强度随烟酰胺浓度上升而上升.结论:体外条件下,烟酰胺可提高椎间盘聚集蛋白聚糖含量,对抗IL-1β诱导的椎间盘退变,具备用于椎间盘退变临床治疗的潜力.
6.期刊论文 徐蔚蔚.邵增务.裴洪.周建国.黄吉军.俞旭东.熊蠡茗 烟酰胺对压力致兔腰椎间盘退变的保护作用 -华中科技大学学报（医学版）2009,38(5)
目的 考察烟酰胺对压力诱发的兔腰椎间盘退变的保护作用.方法 取24只日本大白兔随机分入1～6组,采用可控轴向压力致兔腰椎间盘退变模型,以98N压力诱发椎间盘退变,并按分组要求灌胃给予烟酰胺:第1组2只,安装加压装置不予加压或给药;第2组2只,给予50 mg/(kg·d)烟酰胺灌胃1周;第3组5只,以98 N压力加压1周;第4组5只,以98 N压力加压1周,去除压力自行恢复1周;第5组5只,加压1周,去除压力后给予50 mg/(kg·d)烟酰胺灌胃1周;第6组5只,加压1周,去除压力后恢复1周,自加压开始时持续给予50 mg/(kg·d)烟酰胺灌胃2周.Thompson分级法及腰椎间盘磁共振成像(MRI)评价退变程度;苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色及藏红O-快绿染色观察其组织学改变;P161NK4A免疫组化染色检测细胞增殖和衰老状态的变化.结果 ①第2组椎间盘未见明显退变;第3组5只动物Thompson分级均为Ⅱ级,第4组4只为Ⅱ级,1只为Ⅲ级,第5组2只为Ⅰ级,3只为Ⅱ级,第6组3只为Ⅰ级,2只为Ⅱ级.MRI也显示.服用烟酰胺的动物椎间盘退变程度有所减轻.②Ⅱ型胶原免疫组化染色显示,第6组纤维环Ⅱ型胶原含量较第4组高约53.2%(P
7.期刊论文 聂克.杨述华.熊蠡茗.郭兵.周建国.Nie Ke.Yang Shu-hua.Xiong Li-ming.Guo Bing.Zhou Jian-guo 烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调节作用 -中国组织工程研究与临床康复2008,12(37)
背景:研究表明,烟酰胺能够对白细胞介素1β或肿瘤坏死因子α致椎间盘退变起到保护作用,但烟酰胺对椎间盘细胞凋亡与增殖的保护机制尚不很清楚.目的:观察烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调控作用及其机制.设计、时间及地点:随机对照分组设计,于2007-04/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室及协和医院干细胞中心完成.材料:2～3月龄日本大白兔10只,体质量1.5～2.0 kg,取L1～L6节段椎间盘内髓核细胞,体外培养髓核细胞凋亡模型.方法:实验分为6组,正常对照组:不加任何药物;烟酰胺组:加入0.5 g/L 烟酰胺;白细胞介素1β组:加入10 μg/L 白细胞介素1β;白细胞介素1β+Caspase抑制剂组:加入10 μg/L 白细胞介素1β及非特异性Caspase抑制剂Z-VAD-FM;白细胞介素1β+小剂量烟酰胺组:加入10 μg/L 白细胞介素1β及0.05 g/L 烟酰胺组;白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组:10 μg/L 白细胞介素1β及0.5 g/L 烟酰胺.3 d 后对各组细胞行Annexin V-PI染色
,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能染色检测及MTT检测.主要观察指标:各组细胞凋亡率、caspase-3、8、9功能染色阳性细胞率及各组细胞的吸光
度.结果:①白细胞介素1β+Caspase抑制剂组和白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组较白细胞介素1β组细胞凋亡率明显下降(P
8.学位论文 熊晓芊 烟酰胺治疗兔椎间盘退变的实验研究 2006
一.烟酰胺对体外培养兔椎间盘基质的保护作用
目的:观察烟酰胺对椎间盘蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的保护作用，并探讨其机制。
方法:构建兔椎间盘组织凝胶培养模型，以白介素-1β(IL-1β)诱发其退变。将其分为1～6组：第1组为正常对照，2～6组分别加入
0.5mg/mlNia；10ng/mlIL-1β；10ng/mlIL-1β及0.5mgNia，10ng/mlIL-1β及0.25mgNia；10ng/mlIL-1β及0.05mgNia。培养至1周及2周时对各组标本藏红O-快绿染色，葡萄糖醛酸含量测定，以及aggrecan核心蛋白，培养至2周时行椎间盘Ⅱ型胶原RT-PCR及免疫组化检测，培养1周时行iNOS及TGF-β1免疫组化检测。
结论：体外条件下，烟酰胺可提高椎间盘聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原含量，对抗IL-1β诱发的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量下降。这种保护作用与其抑制iNOS的表达和保护TGF-β1的表达有关。烟酰胺具备用于椎间盘退变临床治疗的潜力。 二.烟酰胺对体外培养兔椎间盘组织凋亡及能量代谢相关基因的影响
目的:观察烟酰胺(Nia)对白介素-1β(IL-1β)诱导的体外培养的椎间盘组织内细胞凋亡的抑制作用及能量代谢相关基因：HIF-1α(缺氧诱导因子-1α)、GLUT-1(葡萄糖转运蛋白-1)和VEGF(血管内皮生长因子)表达的影响。
方法:构建兔椎间盘组织凝胶培养模型，将其分为1～4组：第1组为正常对照，2～4组分别加入0.5mg/mlNia；10ng/mlIL-1β；10ng/mlIL-1β及0.5mgNia。培养一周后对各组标本行TUNEL、FAS、Caspase-3、Bcl-2、HIF-1α，GLUT-1及VEGF免疫组化染色。
结论:烟酰胺可以抑制IL-1β诱导的椎间盘细胞凋亡。烟酰胺对椎问盘组织的能量代谢有促进作用，可以改善IL-1β导致的能量代谢障碍。 三.烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调节作用
目的:考察烟酰胺(Nia)对髓核细胞增殖及凋亡的调控作用及其机制。
方法:体外培养兔髓核细胞，将其分为1～6组：第1组为正常对照组，不加入药物。2～6组分别加入0.5mg/ml烟酰胺，10ng/mlIL-1β，10ng/mlIL-1β及非特异性Caspase抑制剂Z-VAD-FMK，10ng/mlIL-1β及0.05mg/ml烟酰胺，10ng/mlIL-1β及0.5mg/ml烟酰胺。药物处理3天后对各组细胞行AnnexinV-PI染色、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能的流式细胞仪检测，荧光显微镜照相及MTT法检测。
结论:烟酰胺可以促进髓核细胞的增殖和抑制IL-1β诱导的髓核细胞凋亡，对于凋亡的抑制作用主要通过抑制Caspase-9相关的线粒体凋亡途径实现的。
四.可控压力致兔腰椎间盘退变模型的构建及其对纤维环能量代谢相关基因的影响
目的:构建“可控压力致兔腰椎问盘退变模型”，并考查该模型能量代谢相关基因：HIF-1α(缺氧诱导因子-1α)、GLUT-1(葡萄糖转运蛋白-1)和VEGF(血管内皮生长因子)的表达情况并探讨其意义。
方法:采用可控压力致兔腰椎问盘退变模型构建轻度兔椎问盘退变模型，Thompson分级及HE化染色观察退变程度。以10kg轴向压力获得加压24h组、72h组、加压24h后恢复48h组(恢复组)及正常对照组兔椎间盘标本，分离其纤维环组织，RT-PCR检测HIF-1α、GLUT-1基因的表达，WesternBlot及免疫组化检测VEGF的含量及分布。
结论:可控压力致椎间盘退变模型可以有效地诱发压力导致的椎间盘退变。能量代谢相关基因表达的变化在压力致椎间盘组织损伤及损伤后修复的过程中扮演者重要角色。因此，将具有细胞能量代谢促进作用的烟酰胺应用于椎间盘退变的治疗和预防具有可靠的理论基础。 五.烟酰胺治疗可控压力致兔腰椎间盘退变模型的实验研究 目的:考查烟酰胺对压力导致的兔椎问盘退变的治疗作用。
方法:构建可控压力致兔椎间盘退变模型。将24只日本大白兔随机分入1～6组：第1组2只，为假手术对照组；第2组2只，给与约50mg/kg烟酰胺口服1周；第3组5只，以10kg压力加压1周；第4组5只，以10kg压力加压1周，白行恢复1周，第5组5只，加压1周，给予约50mg/kg烟酰胺口服1周，第6组5只，给与约50mg/kg烟酰胺口服2周，这期间先加压1周，然后恢复1周。对各组标本进行形态学观察、HE染色、藏红O-快绿染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色。 结论:烟酰胺有助于减轻压力对椎问盘的损伤，能够促进压力损伤后的椎问盘恢复。
引证文献(7条)
1.周建国.杨操.杨述华.谢卯.黄吉军.郭兵.熊蠡茗 一氧化氮对兔纤维环细胞生物学行为的影响[期刊论文]-中国中医骨伤科杂志 2009(9)
2.黄吉军.邵增务.谢卯.周建国.刘佳.熊蠡茗 静压力与白介素-1β诱导兔纤维环细胞损伤效果的比较[期刊论文]-中国中医骨伤科杂志 2009(8)
3.张其川.杨述华.熊蠡茗.周建国.黄吉军.容威 丹参酮ⅡA对兔纤维环细胞能量代谢的保护作用[期刊论文]-中国中医骨伤科杂志 2009(5)
4.徐蔚蔚.邵增务.熊蠡茗.杨述华.俞旭东.郭兵.谢卯 烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响[期刊论文]-华中科技大学学报（医学版） 2009(2)
5.谢卯.熊蠡茗.杨述华 椎间盘细胞培养的研究进展[期刊论文]-中华骨科杂志 2009(4)
6.郭兵.邵增务.熊蠡茗.杨述华.周建国.徐蔚蔚 烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因的影响[期刊论文]-中国组织工程研究与临床康复 2008(46)
7.聂克.杨述华.熊蠡茗.郭兵.周建国 烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调节作用[期刊论文]-中国组织工程研究与临床康复 2008(37)
本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgzygsk200806009.aspx
２１
・药物研究・
烟酰胺对椎问盘工、Ⅱ型胶原的调控作用
徐蔚蔚１
［摘要］
邵增务１
郭兵１杨述华１
俞旭东１
谢卯１
熊蠡茗１
目的：考察烟酰胺对白介素一ｌｐ诱导的体外兔腰椎间盘退变模型中Ｉ、Ⅱ型胶原的保护作用，并初步探讨其机
制。方法：构建兔腰椎间盘组织凝胶培养模型，将其分为正常对照组，烟酰胺对照组（加入０．５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺），退变组（加
入１０ｎｇ／ｍｌＩＬ－－１１３）和３个烟酰胺治疗组（加入ＩＬ一１Ｂ的同时，并分别加入０．５ｍｇ／ｍｌ。０．２５ｍｇ／ｍｌ和０．０５ｍｇ／ｍｌ烟酰
胺）。培养３天及ｌ周时取各组髓核和纤维环分别行Ｉ、Ⅱ型胶原基因ＲＴ—ＰＣＲ检测，培养２周时行Ｉ、Ⅱ型胶原、ｉＮ一０Ｓ、ＴＧＦ－－６１及Ｃａｓｐａｓｅ－－３免疫组化检测。结果：①ＲＴ—ＰＣＲ显示３天及１周时，各治疗组Ｉ、Ⅱ型胶原表达均强于退变组，烟酰胺的保护作用随浓度增加而增强。②Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组化显示，各治疗组椎问盘正常结构和胶原含量均优于退变组，以大剂量烟酰胺治疗组最显著。③ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３免疫组化显示，治疗组阳性细胞染色率均低于退变组（Ｐ＜０．０１）。ＴＧＦ－－８１免疫组化显示，治疗组阳性细胞染色率高于退变组（Ｐ＜Ｏ．０１）。结论：烟酰胺能够抑制ＩＬ－－１６诱发的椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原表达及含量的下降，这种保护机制与其抑制ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３表达和维持ＴＧＦ—Ｂ１表达的作用有关。［关键词］椎间盘；烟酰胺；Ｉ型胶原；Ⅱ型胶原；白细胞介素一１８［中图分类号］Ｒ一３３
Ｒ６８１．５＋３
［文献标识码］
Ａ
［文章编号］１００５－－０２０５（２００８）０６—００２１—０５
ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＮｉａｃｉｎａｍｉｄｅ
ＷＰｉｗｅｉ
ｏｎ
ＩｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌＤｉｓｃＴｙｐｅ
ｉｎｖｉｔｒｏ
ＹＡＮＧＳｈｕｈｕ
ＩａｎｄⅡＣｏｌｌａｇｅｎ
ＸＵ
ＳＨＡ０Ｚｅｎｇｗｕ
ＸＩＥ
ｔＯ
ＧＵｏＢｉｎｇ
ＹＵＸｕｄｏｎｇ
Ｍａｏ
Ｘ１０ＮＧＬｉｍｉｎｇ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，ＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ
ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００２２，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉａｅｉｎａｍｉｄｅ
ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－－１６（ＩＬ一１６）ｉｎｖｉｔｒｏａｎｄ
ｔＯ
ｏｎ
ｔｙｐｅ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓｉｎｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｈｒａｌｄｉｓｃ（ＩＶＤ）ｄｅｇｅｎｅｒａ—
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｈｉｂａ’ＳＩＶＤｃｕｌｔｕｒｅ
ｃｏｎ—
ｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｏｓｓｉｂｌｅ
ｍｏｄｅｌｗａｓａｄｏｐｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．ＩＶＤｓｆｒｏｍａｄｕｌｔＪａｐａｎｅｓｅｗｈｉｔｅｒａｂｂｉｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ６ｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｒｍａｌｔｒｏｌ，ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ１Ｂａｎｄ
ｇｒｏｕｐ（Ｏ．５ｍｇ／ｍｌｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ），ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ（１０ｎｇ／ｍｌＩＬ～１Ｊ３）ａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ（ｂｏｔｈＩＬ一
０．５ｍｇ／ｍｌ，０．２５ｍｇ／ｍｌ，０。０５ｍｇ／ｍｌｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ａｆｔｅｒ３ｄａｙｓａｎｄ１ｗｅｅｋｏｆｃｕｌｔｕｒｅ，ｔｈｅＩＶＤｓｗｅｒｅ
ｔｙｐｅ
ｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｏｒ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓ
ｒｅｖｅｒｓｅ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ＰＣＲ）．Ｔｗｏｗｅｅｋｓｌａｔｅｒ，ＩＶＤｓ
ｔｙｐｅ
ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｏｒｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈ
ｔｙｐｅ
ｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＩ
ａｎｄ
ｌＩｃｏｌｌａｇｅｎｓ，ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ｉＮＯＳ），
ｆａｃｔｏｒ－－１３１（ＴＧＦ－－１３１）ａｎｄｃａｓｐａｓｅ一３．Ｒｅｓｕｌｔｓ：①ＲＴ—ＰＣＲｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｂｏｔｈ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｗａｓ
ｗｉｔｈｄｅｎｓｅｒｄｏｓｅｓｏｆ
ｏｆＩＶＤｓａｎｄ
ｓｔｒｏｎｇｅｒ
ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ．②Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｓｔａｉｎｉｎｇｏｆ
ｔｙｐｅ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔ
ａｓ
ｔｈｅｔｉｏｎ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｃｏｎｔｅｎｔｓ
ｏｆｃｏｌｌａｇｅｎｓｗｅｒｅｂｅｔｔｅｒｒｅｖｅｒｓｅｄｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ
ｇｒｏｕｐ
ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｏｓｅｉｎｄｅｇｅｎｅｒａ—
ｇｒｏｕｐ．③Ｐｏｓｉｔｉｖｅ—ｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｉＮＯＳａｎｄｃａｓｐａｓｅ－－３ｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔＷｆｌＳｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｗｈｉｌｅ
ｃａｎ
ＴＧＦ一口１ｅｖｉ—
ｅｘ—
ｄｅｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ
ｔｙｐｅ
ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ
ＩａｎｄⅡｃｏｌｌａｇｅｎｓｉｎＩＶＤｉｎｄｕｃｅｄｂｙＩＬ一１口ｔｈｒｏｕｇｈｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉＮＯＳａｎｄｃａｓｐａｓｅ－－３
ＴＧＦ一８１．
Ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ；Ｔｙｐｅ
ａｎｄｓｕｓｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＫｅｙｗｏｒｄｓ
ＩｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＩＣｏｌｌａｇｅｎ；ＴｙｐｅⅡｃｏｌｌａｇｅｎ；Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－－１１３
胶原是椎间盘基质内的含量最大的蛋白质成分，椎间盘内的胶原主要包括Ｉ型和Ⅱ犁胶原，其中髓核以Ⅱ型胶原为主．
纤维环以Ｉ型胶原为主。胶原成分质和量的下降是椎问盘退
基金项目：湖北省自然科学基金资助项目（Ｎｏ．２００４ＡＢＡｌ９３）１华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科（武汉，４３００２２）通讯作者：熊蠡茗
变早期重要的生化事件，如何维持胶原成分的质和量是椎间盘退变研究需要解决的重要问题。白细胞介素一１（ＩＬ一１）等炎性因子参与椎间盘退变过程的始终，能够显著影响Ｉ、Ⅱ型胶
２２
原的表达和含量。烟酰胺（Ｎｉａｃｉｎａｍｉｄｅ）是具有抗炎作用的维生素，同时能够促进细胞能量代谢。此前我们报道了烟酰胺能
够明显提升正常及退变椎间盘内聚集蛋白聚糖的质和量‘１，本研究中我们将进一步考察不同浓度的烟酰胺对于兔椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原表达及含量的影响，同时考察诱导型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）、转化生长因子一ｐｌ（ＴＧＦ—ｐ１）、细胞凋亡蛋白酶（ｅａｓｐａｓｅ－－３）的表达情况，以探讨烟酰胺的可能作用机制。１材料与方法
１．１椎间盘组织体外培养
温度５６℃，３５个循环，产物大小４０３ｂｐ（根据Ｇｅｎｂａｎｋ序列号
Ｄ４９３９９自行设计）。１１型胶原上、下游引物：５’一ＡＣＧＣＴＣ
ＡＡＧＴＣＣＣＴＣＡＡＣＴＣＡＣＣＧＣＴＣ
Ａ一３’和５’一ＴＣＴＡＴＣＣＡＧＴＡＧ
Ｔ一３’，解链温度５５℃，３５个循环，产物大小
１３１ｂｐ（根据Ｏｅｎｂａｎｋ序列号Ｄ８３２２８自行设计）。ｐ—Ａｃｔｉｎ上、下游引物分别为：５一ＴＧＣ
ＴＴＣＴＡＧＧＣＧＧＡＣＴＧＴＴＡ一３’
和５’一ＣＧＴＣＡＣＡＴＧＧＣＡＴＣＴＣＡＣＧＡ一３。，解链温度５１℃，３５个循环，产物大小３１４ｂｐ［“。ＰＣＲ产物（每５ｕｌ产物加入ｓｙｂｇｒｅｅｎ１“１）经２％琼脂糖凝胶电泳，结果由ＨＭｌＡＳ一２０００
椎问盘组织取自１３只日本大白兔（３～４月龄，体重１．５～２ｋｇ，雌雄不限，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供）。
耳缘静脉空气注射处死动物后无菌条件下取出Ｌ１～１．６节段腰
分析仪照相后测算条带积分吸光度，以目的基因与口一Ａｅｔｉｎ条
带吸光度的比值ｒ作为基因相对表达量。１．４椎间盘组织免疫组化
椎，无菌操作台内完整剥离椎间盘（共７８枚椎间盘）。ＰＢＳ清
洗后采用前述方法－Ｌ行藻酸盐凝胶内椎间盘组织培养。每孔加入ｌｍｌ含２０％胎牛血清（三利公司）的ＤＭＥＭ—Ｆ１２（Ｇｉｂｉｃｏ公司）（内加２５ｐｇ／ｍｌ维生素Ｃ，Ａｍｒｅｓｃｏ公司），置于３７℃，５％
４％甲醛溶液固定标本，常规石腊包埋，制作６ｂｔｍ厚切片，
脱蜡至水，热抗原修复。１：８０稀释的兔抗人Ｉ、Ⅱ型胶原、ｉＮ—
ＯＳ、ＴＧＦ－８１、Ｃａｓｐａｓｅ－－３多克隆抗体（博士德公司）３７℃孵育３０ｍｉｎ，采用羊抗兔免疫组化ＳＰ试剂盒（中杉公司），根据其说
明书要求加入二抗等直至苏木素复染，树胶封片。ＨＭＩＡＳ一２０００分析仪照相，每张切片随机观察１０个视野。对Ｉ、Ⅱ型胶原染色作相对光密度分析，计算ｉＮＯＳ、ＴＧＦ一８ｌ和Ｃａｓｐａｓｅ－－３染色阳性细胞率（阳性细胞率一阳性细胞总数／细胞总数×１００％）。
ＣＯ：条件下培养。自培养当天起在各组培养基内加入不同量
的烟酰胺和ＩＩ。一ｌ口（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ公司）。每天换液一次。１．２标本分组
将椎间盘组织随机分为６组。每组１３个：第一组为正常对照组，不加入药物；第二组加入０．５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺作为烟酰胺对照组；第三组加入１０ｎｇ／ｍｌＩＬ－－１Ｂ作为退变组；第四至第六祖为烟酰胺治疗组，第四组加入０．５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺和１０ｎｇ／ｍｌ
ＩＬ
１．５统计学分析
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ结果作组间独立样本ｔ检验。对Ｉ、Ⅱ型胶原染色结果作吸光度分析，结果用ｊ土ｓ表示。对
ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３及ＴＧＦ—Ｂ１染色结果计算各组阳性、阴性
一１１３；第五组加入０．２５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺和１０ｎｇ／ｍｌ１Ｉ。一１Ｂ；第六组加入０．０５ｍｇ／ｍｌ烟酰胺和１０ｎｇ／ｍｌＩＬ一１８。培养３天，１周时对各组标本行Ｉ、Ⅱ型胶原基因ＲＴ—ＰＣＲ检测，培养２周时行Ｉ、Ⅱ型胶原，ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３及ＴＧＦ—Ｂ１免疫组化检测。
１．３
细胞数总和，然后行卡方检验。所有数据采用ｓｐｓｓｌ２．０软件分
析。２结果
２．１
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ
标本取出后迅速置于一７０℃冻存。检测时每一样本称取
３０ｒａｇ纤维环组织，加入Ｔｒｉｚｏｌ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ公司）ｌｍｌ，研磨，按说明书提取总ＲＮＡ。取ｌ且ｇ总ＲＮＡ，采用
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ（见表１）
退变组Ｉ、Ⅱ型胶原表达量与同期同部位正常对照组相比
均显示出较为明显的抑制。而烟酰胺治疗组Ｉ、Ⅱ型胶原表达较同期同部位退变组相比均有提高，并且随着剂量的加大Ｉ、Ⅱ型胶原表达增高，甚至略高于正常组。Ｉ型胶原在纤维环内表达较活跃，随着时间的延长Ｉ型胶原合成轻微减少。Ⅱ型胶原在髓核内表达较活跃，随着时间的延长Ⅱ型胶原合成明显减
少（图１）。
Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司逆转录试剂盒，按其说明书进行ｍＲＮＡ逆转
录。取２“ｌｃＤＮＡ模板，加入２０ｐｍｏｌ引物（上海生工生物工程
公司合成）配制成２５／１１反应体系，在ＴａｑＤＮＡ聚合酶（ＭＢＩＦｅｒｍｅｎｔａｓ）催化下分别进行Ｉ、Ⅱ型胶原及８一Ａｃｔｉｎ基因
ＰＣＲ。Ｉ型胶原上、下游引物：５’一ＣＣＴＧＧＣＡＴＡＡＡＧＧＧＡＣＡＣ一３’和５’一ＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＧＡＧＧＡＧＧＧＴ一３’，解链
表１各组椎问盘Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ相对表达量（孑±Ｓ）
正常对照组烟酰胺对照组
退变组
０．５４土０．０９０．６０±０．１１
１．０９±０．１３１．１８士０．１１
１．４６±０．１７１．５ｌ±０．１６
０．６４±０．２００．７１士０．１５
０．５９±０．１００．５５±０．１０
０．７６±０．１３０．８０±０．２０
１．３９±０．１５０．４４±０．１１０．５２±０．１２０．１９士０．１３●
１．３５±０．１２
０．８７４－０．２４ｅ
０．２９±０．１３＠０．４４士０．２３●０．８０－－４－０．１５●０．３７－４－０．１０●０．３１士０．１１●０．３２±０．２４ｅ
０．５ｍｇ／ｍｌ治疗组０．２５ｍｇ／ｍｌ治疗组０．０５ｍｇ／ｍｌ治疗组
０．５４士０．０９Ａ１．１４士０．２８Ａ１－４７士０．１５Ａ０．６８±０．１８Ａ０．５６士０．１５Ａ０．６２±０．１７Ａ１．４０±０．２４▲０．４３±０．１５Ａ０．３９±０．１４０．３６±０．１１
１．００士０．２ｌ▲１．０８±０．２４▲０．５４士０．１０Ａ０．２５±０．１３０．９２±０．１５▲１．００±０．１６Ａ０．４４±０．１４
０．２５±０．１４
０．５８±０．１８０．４７±０．１６
１．１３±０．３００．９７±０．２８
０．３９±０．１０
０．３６±０．１６
注：●同期同部位退变组与正常对照组比较Ｐ＜Ｏ．０５；▲同期同部位３个烟酰胺治疗组与退变组比较Ｐ＜Ｏ．０５
图１—１各组■核、纤维环Ｉ、Ⅱ田１—２各组■核、纤维环
型胶原ＲＴ—ＰＣＲ
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ２．２
Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组化
正常对照组及烟酰胺对照组纤维环结构完整，Ｉ、Ⅱ型胶
原沿板层状结构分布，排列清晰有序，可见较多软骨样细胞，细
胞核形态浑圆饱满；髓核陷窝样结构饱满，胶原纤维分布均匀。
退变组纤维环板层状结构不清晰，Ｉ、Ⅱ型胶原纹路均紊乱，髓核陷窝样结构变小且不规则，胶原分布欠均匀。烟酰胺治疗组
与退变组相比纤维环板层结构保留较好，胶原纹路连续，髓核
陷窝样结构保留较好（图２）。各组Ｉ、Ⅱ型胶原光密度详见表
２。２．３
ｉＮＯＳ免疫组化
各组椎间盘阳性细胞率分别为１８．７％，１３．５％，６０．７％，
２１．７％，２８．７％和３３．６％。第一、二组纤维环内仅有少量ｉＮＯＳ阳性染色细胞。两者无明显差异（Ｘ２＝１．４８１，Ｐ一０．２２４），而第
三组阳性染色率较第一组明显升高（Ｘ２＝５４．５６９，Ｐ＝０．０００）（图３—１）。各剂量治疗组阳性染色率较退变组均明显下降（Ｘ２
＝４５．１９，Ｐ一０．０００；Ｘ２＝２８．１９１，Ｐ＝０．０００；Ｘ２＝１９．７３２，Ｐ
＝０．０００）（图３—２）。
表２各组椎问盘Ｉ、Ⅱ型胶原光密度值（ｉ－Ｉ－５）
注：●烟酰胺对照组、退变组与正常对照组比较Ｐ＜０．０５；▲３组烟酰胺治疗组与退变组比较Ｐ＜０．０５
２．４ＴＧＦ一８１免疫组化
各组阳性细胞率分别为８０．８％，８４．５％，２５．２％，６８．６％，
６８．４％和６１．２％。第一、二组多数细胞染色为阳性，两者无明显差别（Ｘ２＝０．５４７，Ｐ＝０．４５９）。丽第三组阳性染色率较第一
组明显下降（Ｘ２＝７６．５４７，Ｐ＝０．０００）（图４—１）。各剂量治疗组阳性染色率均显著高于第三组（Ｘ２＝４６．４６５，Ｐ２０．０００；Ｘ２
＝４５．２３９，Ｐ一０．０００；ｙ２—３２．１９２，Ｐ＝０．０００）（图４—２）。
２．５
Ｃａｓｐａｓｅ－－３免疫组化
２３
图１—３各组髓核、纤维环Ｉ、图１—４各组■核、纤维环
Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ
Ｉ、Ⅱ型胶原ＲＴ—ＰＣＲ
各组阳性细胞率分别为６．５％，５．１％，２８．２％，１２．３％，１２．７％和１６．８％。第一组及第二组椎间盘仅有少量阳性染色细
胞，两者无明显差别（Ｘ２＝０．２２ｌ，Ｐ一０．６３８）。第三组阳性染色
率达２８．２％，较第一组有显著性差异（Ｘ２＝２１．４５９，Ｐ＝０．０００）（图５—１）。各剂量治疗组阳性染色率较第三组均下降，但仅第
四、五组较第三组有显著性差异（Ｘ２—８．４３２，Ｐ＝０．００４；Ｘ２—７．６６８，Ｐ＝０．００６），小剂量治疗组阳性染色率较退变组虽有所
下降，但并无统计学意义（Ｘ２—３．７１，Ｐ一０．０５４）（图５—２）。
３讨论
椎间盘退变的进程复杂而漫长，一般认为力学因素等外界
因素首先干扰椎间盘细胞的生物学行为，进而引发蛋白聚糖、
胶原等基质成分的品质下降，最终使椎间盘进入难以自行逆转的退变。炎性因子的作用贯穿这个过程的始终，它们一方面通
过调节基质的合成效率和蛋白酶的活动来影响基质质量，进而
影响细胞的生存环境；另一方面通过细胞因子网络直接干扰细胞的生长、分化以及凋亡［３－５］。如ＩＬ一１Ｂ不仅可以直接启动凋亡的胞内过程，还能够使Ｎ０、ＴＮＦ（肿瘤坏死因子）等炎性因子
的分泌显著增加，导致椎间盘内合成代谢和分解代谢失衡，引
起基质成分质、量的下降［６］。Ｎ０在椎间盘退变中扮演着重要
角色：ｉＮＯＳ引起的ＮＯ含量上升是压力诱发椎间盘退变的首要机制，Ｎ０还可以直接抑制蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的合成，加剧ａｇｇｒｅｃａｎａｓｅ（聚集蛋白聚糖酶）和ＭＭＰｓ（基质金属蛋白酶）对胶原和蛋白聚糖的酶解［７］。因此，本研究选用ＩＬ一１Ｂ来诱发实
验性椎间盘退变。
Ｉ、Ⅱ型胶原是椎问盘组织较有特征性的基质成分，其合成与降解情况可以反映出细胞和基质的状态［８］。本研究显示，
烟酰胺可以有效减轻ＩＬ－－１１３对Ｉ、Ⅱ型胶原表达的抑制。同时
免疫组化显示烟酰胺对ＩＬ－－１６诱导的板层状结构破坏有抑制作用，从侧面反映胶原的降解也受到了抑制。烟酰胺可以较好
地抵消ＩＬ一１Ｂ对Ｉ、Ⅱ型胶原表达的抑制，但并不能使胶原的
含量维持在正常水平。这可能是因为ＩＬ一１８能够通过多种途径。尤其是增强酶解的作用，对胶原进行调节。
烟酰胺是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸即辅酶Ｉ的前体，在多个组织均表现出强大的抗炎作用。，其抗炎机制可能源于其对ＩＬ一１等炎性因子诱导的ＰＡＲＰ（多ＡＤＰ核糖聚合酶）活性的抑制。ＰＡＲＰ受抑可以有效降低ｉＮＯＳ基因的表达，显著减少ＮＯ
的合成［９’１…。本研究中我们发现，退变组ｉＮＯＳ阳性细胞比例
２４
ＣｈｉｎｅｓｅＪＴｒａｄＭｅｄＴｒａｕｍ＆Ｏｒｔｈｏｐ，Ｊｕｎ２００８，Ｖｏｌ
１６，Ｎｏ６
图２—１椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
图２—２椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组图２—３椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
化２００×退变组纤维环Ｉ型胶原染色化２００×烟酰胺治疗组纤维环Ｉ型胶原染色
化２００×退变组髓核Ｉ型胶原染色
圈２—４椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
图２—５椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组图２—６椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
化２００×烟酰胺治疗组髓核Ｉ型胶原
染色
化２００×退变组纤维环Ⅱ型胶原染色化２００×烟酰胺治疗组纤维环Ⅱ型胶原染色
图２—７椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组
图２—８椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原免疫组图３—１退变组及治疗组纤维环ｉＮ—
化２００×退变组髓核Ⅱ型胶原染色化２００×烟酰胺治疗组髓核Ⅱ型胶原染色
ＯＳ免疫组化染色２００×退变组椎间盘内多数细胞出现阳性染色。阳性染色
率为６０．７％。
圈３—２退变组及治疗组纤维环ｉＮ・圈４—１退变组及治疗组纤维环ＴＧＦ图４—２退变组及治疗组纤维环ＴＧＦ～Ｂ１免疫组化染色２００／烟酰胺０．５ｍｇ／ｍｌ治疗组阳性染色细胞数较退
变组明显增多．阳性染色率为６８．６％。
ＯＳ免疫组化染色２００×烟酰胺０．５ｍｇ／ｍｌ治疗组阳性染色细胞数较退变组明显减少。阳性染色率为２１．７％。
－１３１免疫组化染色２００×退变组椎间盘内阳性染色细胞较少，阳性染色率
２５．２％。
图５—１退变组及治疗组纤维环Ｃａｓｐａｓｅ一３免疫组化染色２００×退变组椎问盘内阳性染色细胞较多。阳性染色率２８．２％。
图５—２退变组及治疗组纤维环Ｃａｓｐａｓｅ一３免疫组化染色２００×烟酰胺０．５ｍｇ／ｍｌ治疗组阳性染色细胞数较退变组有所减少，阳性染色率为１２．３％。
约为正常对照组的４倍，表明ＩＬ－－１Ｂ对ｉＮＯＳ具有很强的诱导作用。而大剂量治疗组阳性细胞率则降至退变组的约１／３，与
正常组较为接近。与此同时，我们发现烟酰胺对于椎问盘细胞ＴＧＦ－－Ｂ１的表达表现出较好的保护作用，０．５ｍｇ／ｍｌ组阳性细胞率约为退变组的３倍。我们此前报道：ＴＧＦ—Ｂ１在退变椎间
盘内表达下降，而通过提高ＴＧＦ—Ｂ１含量，则可以改善甚至阻
逆椎间盘退变口…。烟酰胺对椎间盘胶原的保护作用可能同时源于其对ｉＮＯＳ的抑制作用及对ＴＧＦ—ｐ１的保护作用。
凋亡引发的细胞数量下降会直接导致胶原等基质成分合
成不足，是椎问盘退变难以逆转的重要原因。Ｃａｓｐａｓｅ是一类
半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶，目前已发现１４种，分别参与细
胞凋亡的启动和执行过程，Ｃａｓｐａｓｅ－－３是效应阶段的重要执行
者Ｄｚ，１３］。本研究中治疗组阳性细胞率较退变组明显下降，表明烟酰胺对ＩＬ－－１８诱导的细胞凋亡具有一定的抑制作用。但烟酰胺并不能使阳性细胞率降至正常组水平，这可能是因为ＩＬ一１８具有启动多种凋亡途径的能力。
本研究发现，烟酰胺对椎间盘Ｉ、Ⅱ型胶原有良好的保护
２５
作用，这种作用与其对ｉＮＯＳ、Ｃａｓｐａｓｅ－－３的抑制及对ＴＧＦ—ｐ１的保护作用有关。细胞外基质质量下降，细胞凋亡和炎性因子分泌增加是椎间盘退变的三个重要机制。本研究中烟酰胺对这三种机制均表现出的一定抑制作用，结合我们此前的报
道［１］，可以认为烟酰胺具备进一步开发成为椎间盘退变防治药物的潜力。目前临床上缺乏高效、毒副作用少、价格低廉且可长期应用的椎间盘退变防治药物。作为临床应用多年的维生
素类药物，烟酰胺具有安全可靠且价格低廉的优势。对烟酰胺作进一步实验研究，将有助于我们尽早将其应用于椎间盘退变
的临床治疗，有助于开拓椎问盘退变研究的新思路。参考文献
Ｅ１］熊晓芊。杨述华，邵增务，等．烟酰胺对椎间盘聚集蛋白聚糖的调
控作用［Ｊ］．中国中医骨伤科杂志，２００５，１３（５）：１—４．［２］
ＢＥＲＧＬＵＮＤ
Ｍ，ＷＩＩＧＭ，ＴＯＲＳＴＥＮＳＳＯＮＭ，ｅｔａ１．Ａｓｓｅｓｓ—
ｍｅｎｔｏｆｍＲＮＡｌｅｖｅｌｓｆｏｒｍａｔｒｉｘｍｏｌｅｃｕｌｅｓａｎｄＴＧＦ～ｂｅｔａｌｉｎｒａｂｂｉｔｆｌｅｘｏｒａｎｄｐｅｒｏｎｅｕｓ
ｔｅｎｄｏｎｓｒｅｖｅａｌｓｒｅｇｉｏｎａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ
ｉｎ
ｓｔｅａｄｙ－－ｓｔａｔｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＪＨａｎｄ
Ｓｕｒｇ，２００４，２９（２）：１６５—
１６９．
［３３熊晓芊，邵增务，杨述华．聚集蛋白聚糖与椎问盘退变的研究进
展［Ｊ］．中国脊柱脊髓杂志，２００５，１５（１）：５４—５６．Ｅ４３
ＷＥＩＬＥＲ
Ｃ。ＮＥＲＬＩＣＨ
Ａ
Ｇ．ＢＡＣＨＭＥＩＥＲＢＥ，ｅｔ
ａ１．Ｅｘｐｒｅｓ—ｓｉｏｎａｎｄ
ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａ
ｉｎ
ｈｕｍａｎｌｕｒｅ—
ｂａｒｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃｓ：ａｓｔｕｄｙ
ｉｎ
ｓｕｒｇｉｃａｌｓｐｅｃｉｍｅｎ
ａｎｄ
ａｕｔｏｐｓｙ
ｃｏｎｔｒｏｌｓＦＪ３．Ｓｐｉｎｅ，２００５，３０（１）：４４—５３．［５３
ＰＯＤＩＣＨＥＴＴＹＶ
Ｋ．Ｔｈｅ
ａｇｉｎｇ
ｓｐｉｎｅ；ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ
ｍｅｄｉａｔｏｒｓ
ｉｎ
ｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃ
ｄｅｇｅｎｅｆａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣｅｌｌＭｏｌＢｉｏｌ，
２００７，５３（５）：４—１８．
Ｅ６３
ＬＥ
ＭＡＩＴＲＥＣＬ，ＦＲＥＥＭＯＮＴ
ＡＪ，ＨＯＹＬＯＮＤＪＡ．Ｔｈｅｒｏｌｅ
ｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１
ｉｎｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ
ｏｆ
ｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃ
ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓｅａｒｃｈＴｈｅｒａｐｙ，２００５，７（４）：７３２—
４５．
［７３
ＳＨＥＮＢ，ＭＥＬＲＯＳＥＪ，ＧＨＯＳＨ
Ｐ．ｅｔａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘ
ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－－２
ａｎｄ——３
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｉｎｏｖｉｎｅ
ｎｕｃｌｅｕｓ
ｐｕｌｐｏｓｕｓ
ｃｅｌｌｓｇｒｏｗｎｉｎ
ｔｈｒｅｅ—ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ
ａｇａｒｏｓｅ
ｇｅｌｃｕｌｔｕｒｅｂｙｉｎｔｅｒｌｅｕ—
ｋｉｎ—ｌｂｅｔａ：ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｐａｔｈｗａｙｏｆ
ｄｉｓｃ
ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｌ－Ｊ］．Ｅｕｒ
Ｓｐｉｎｅ
Ｊ，２００３，１２（１）：６６—７５．
Ｅ８］ＬＥＭＡＩＴＲＥ
Ｃ
Ｌ，ＰＯＣＫＥＲＴ
Ａ，ＢＵＴＴＬＥＤＪ，ｅｔａ１．Ｍａｔｒｉｘ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ａｎｄ
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃｄｅｇｅｎｅｒａ—
ｔｉｏｎ［－Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ，２００７，３５（Ｐｔ４）：６５２—５．
［９］ＮＡＭＡＺＩＭＲ．Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ：ａｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ａｄｄｉｔｉｏｎｔｏ
ｔｈｅａｎｔｉ—
ｐｓｏｒｉａｔｉｃ
ｗｅａｐｏｎｒｙ［，Ｊ］．ＦＡＳＥＢＪ．２００３，１７（１１）：１３７７—１３７９．
［１０３
ＳＵ
ＣＦ，ＬＩＵ
Ｄ
Ｄ，ＫＡＯＳＪ。ｅｔａ１．Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｂｒｏｇａｔｅｓ
ａ—
ｃｕｔｅ
ｌｕｎｇ
ｉｎｊｕｒｙｃａｕｓｅｄｂｙ
ｉｓｃｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｕｒ
Ｒｅｓｐｉｒ
Ｊ，２００７。３０（２）：１９９—２０４．Ｅｐｕｂ２００７
Ｍａｙ
１５．
［１１３
ＺＨＡＮＺ，ＳＨＡＯｚ，ＸＩＯＮＧ
Ｘ。ｅｔａ１．Ａｄ／ＣＭＶ—ｈＴＧＦ—ｂｅ—ｔａｌ
ｔｒｅａｔｓ
ｒａｂｂｉｔｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌ
ｄｉｓｃｓ
ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｉｎ
ｖｉｖｏ［Ｊ］．Ｊ
Ｈｕａｚｈｏｎｇ
Ｕｎｉｖ
Ｓｃｉ
ＴｅｃｈｎｏｌｏｇＭｅｄＳｅｉ，２００４，２４（６）：５９９—６０１，
６２４．
［１２３
ＫＲＯＥＭＥＲＧ，ＲＥＥＤＪｃ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃｏｎｔｒｏｌｏｆｃｅｌｌｄｅａｔｈ
［Ｊ］．ＮａｔＭｅｄ，２０００，６（５）：５１３—９．
［１３１
ＭＡＺＵＤＭＥＤＲＳ，ＰＬＥＳＣＡＤ，ＡＬＭＡＳＡＮＡ．Ｃａｓｐａｓｅ一３
ａｃ—
ｔｉｖａｔｉｏｎ
ｉｓ
ａ
ｃｒｉｔｉｃａｌｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｏｆ
ｇｅｎｏｔｏｘｉｃｓｔｒｅｓｓ—ｉｎｄｕｃｅｄａｐ—
ｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ，２００８，４１４：１３—２１．
（收稿日期：Ｚ００７一１１—２８）
烟酰胺对椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原的调控作用
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
徐蔚蔚， 邵增务， 郭兵， 杨述华， 俞旭东， 谢卯， 熊蠡茗， XU Weiwei， SHAOZengwu， GUO Bing， YANG Shuhua， YU Xudong， XIE Mao， XIONG Liming华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,武汉,430022
中国中医骨伤科杂志
CHINESE JOURNAL OF TRADITIONAL MEDICAL TRAUMATOLOGY & ORTHOPEDICS2008，16(6)8次
参考文献(13条)
1.熊晓芊.杨述华.邵增务 烟酰胺对椎间盘聚集蛋白聚糖的调控作用[期刊论文]-中国中医骨伤科杂志 2005(05)2.BERGLUND M.WIIG M.TORSTENSSON M Assessment of mRNA levels for matrix molecules and TGF-beta1 inrabbit flexor and peroneus tendons reveals regional differences in steady-state expression 2004(02)3.熊晓芊.邵增务.杨述华 聚集蛋白聚糖与椎盘间退变的研究进展[期刊论文]-中国脊柱脊髓杂志 2005(01)4.WEILER C.NERLICH A G.BACHMEIER B E Expression and distribution of tumor necrosis factor alpha inhuman lumbar intervertebral discs:a study in surgical specimen and autopsy controls 2005(01)5.PODICHETTY V K The aging spine:the role of inflammatory mediators in intervertebral discdegeneration[期刊论文]-Cellular and Molecular Biology 2007(05)
6.LE MAITRE C L.FREEMONT A J.HOYLOND J A The role of interleukin-1 in the pathogenesis of humanintervertebral disc degeneration 2005(04)
7.SHEN B.MELROSE J.GHOSH P Induction of matrix metalloproteinase-2 and-3 activity in ovine nucleuspulposus cells grown in three-dimensional agarose gel culture by interleukin-1 beta:a potentialpathway of disc degeneration 2003(01)
8.LE MAITRE C L.POCKERT A.BUTTLE DJ Matrix synthesis and degradation in human intervertebral discdegeneration 2007
9.NAMAZI M R Nicotinamide:a potential addition to the antipsoriatic weaponry 2003(11)
10.SU C F.LIU D D.KAO S J Nicotinamide abrogates acute lung injury caused by ischaemia/ reperfusion2007(02)
11.ZHAN Z.SHAO Z.XIONG X Ad/CMV-hTGF-beta1 treats rabbit intervertebral discs degeneration in vivo[期刊论文]-Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Science) 2004(06)12.KROEMER G.REED J C Mitochondrial control of cell death 2000(05)
13.MAZUDMEDR S.PLESCA D.ALMASAN A Caspase-3 activation is a critical determinant of genotoxicstress-induced apoptosis 2008
相似文献(8条)
1.期刊论文 郭兵.邵增务.熊蠡茗.杨述华.周建国.徐蔚蔚.Guo Bing.Shao Zeng-wu.Xiong Li-ming.Yang Shu-hua.Zhou Jian-guo.Xu Wei-wei 烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因的影响 -中国组织工程研究与临床康复2008,12(46)
背景:前期研究已证实,烟酰胺能够促进椎间盘细胞的增殖并对白细胞介素1β致椎间盘退变起到保护作用,而烟酰胺对椎间盘退变的保护机制还不很清楚.目的:观察烟酰胺对白细胞介索1 β诱导体外培养的兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响.设计、时间及地点:实验于2007-11/2008-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:3-4月龄日本大白兔10只,体质量1.5-2.0kg,取L1-6脊柱节段56个椎间盘组织,用于构建兔椎间盘组织凝胶培养模型.方法:将56枚椎间盘随机分为4组,每组14枚.正常对照组:不加入药物;烟酰胺组:加入0.5 g/L烟酰胺;退变组;加入10 μg/L白细胞介素1β;治疗组加入10 μ g/L白细胞介素1β及0.5 g/L烟酰胺.培养2周后对各组标本行TUNEL染色及Fas,Caspase-3,Bcl-2,低氧诱导因子1α、葡萄糖转运体1、血管内皮细胞生长因子免疫组织化学染色.主要观察指标:各组标本TLINEL染色及免疫组织化学染色阳性细胞率.结果:TUNEL染色示加入烟酰
性细胞率升高(P=0.004).Caspase-3染色示治疗组阳性细胞率较退变组下降(P=0.024),但仍高于正常对照组(P=0.006).低氧诱导因子1 α染色示烟酰胺组阳性细胞率低于正常对照组(P＜0.01);退变组阳性细胞率较正常对照组上升(P＜0.01).葡萄糖转运体1染色示治疗组阳性细胞率高于正常对照组(P＜0.01).结论:烟酰胺可以抑制白细胞介素1β诱导的椎间盘细胞凋亡,改善白细胞介素1β导致的椎间盘能量代谢障碍.
2.期刊论文 徐蔚蔚.邵增务.熊蠡茗.杨述华.俞旭东.郭兵.谢卯 烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响 -华中科技大学学报（医学版）2009,38(2)
目的 观察烟酰胺(Nia)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的体外培养的退变兔椎间盘组织内细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响.方法 构建兔椎间盘组织凝胶培养模型,分为正常对照组(不加入药物),烟酰胺组(加入0.5 mg/ml烟酰胺),退变组(加入10 ng/ml IL-1β)和治疗组(加入10 ng/ml IL-1β及0.5 mg/ml烟酰胺).培养2周后对各组标本分别行TUNEL染色,Fas、Caspase 3、Bcl-2、HIF-1α、GLUT-1及VEGF免疫组化染色.结果 TUNEL染色示治疗组阳性细胞染色率较退变组有所下降.Fas、Bcl-2染色示治疗组阳性细胞率均与退变组接近(均P>0.05).Caspase 3染色示治疗组阳性细胞率较退变组明显降低(P0.05).结论 烟酰胺可以抑制IL-1β诱导的椎间盘细胞凋亡,改善IL-1β导致的椎间盘能量代谢障碍.
3.期刊论文 徐润冰.邵增务.熊晓芊.刘心.胡绪江.周鹏.Xu RB.Shao ZW.Xiong XQ.Liu X.Hu XJ.Zhou P 烟酰胺对肿瘤坏死因子α诱导纤维环基质降解的抑制作用 -中国组织工程研究与临床康复2007,11(2)
目的:观察烟酰胺对肿瘤坏死因子α诱导纤维环基质降解的抑制作用,并分析其作用途径.方法:实验于2005-10/12在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室及骨科实验室完成.椎间盘组织取自12只清洁级日本大白兔,兔龄4个月,体质量2.5～3.0 kg,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供.建立兔椎间盘组织凝胶培养模型,将其分为4组,即正常对照组、烟酰胺组、退变组及治疗组.正常对照组不加入药物;烟酰胺组加入0.5 g/L烟酰胺;退变组加入10 μg/L肿瘤坏死因子α诱导纤维环基质降解;治疗组加入0.5 g/L烟酰胺和10 μg/L肿瘤坏死因子α.培养1周后比较各组标本纤维环结构(藏红O-快绿染色强度)、糖醛酸含量、Ⅰ,Ⅱ型胶原结构及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达情况(染色阳性细胞率).结果:①各组兔椎间盘标本纤维环结构比较:治疗组纤维环结构的破坏得到较好的抑制,染色浓度高于退变组.②各组兔椎间盘标本纤维环糖醛酸含量比较:治疗组较退变组增高约
48%(t=16.93,P=0.000),与烟酰胺组接近(t=0.71,P=0.657).③各组兔椎间盘标本纤维环Ⅰ,Ⅱ型胶原结构及分布情况:治疗组板层结构完整性和胶原纹路连续性好于退变组,Ⅰ,Ⅱ型胶原含量之比较正常组升高.④各组兔椎间盘标本纤维环半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性染色率比较:治疗组明显低于退变组(10.3%,17.9%,χ2=5.081,P＜0.01).结论:烟酰胺能够减轻肿瘤坏死因子α对纤维环基质的破坏作用,这种作用与烟酰胺减少纤维环半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3依赖的细胞凋亡有关.
4.期刊论文 周建国.杨述华.杨操.邵增务.徐蔚蔚.郭兵.俞旭东.熊蠡茗.Zhou Jian-guo.Yang Shu-hua.Yang Cao.Shao Zeng-wu.Xu Wei-wei.Guo Bing.Yu Xu-dong.Xiong Li-ming 烟酰胺对压力诱发免腰椎间盘退变的保护作用 -中国组织工程研究与临床康复2009,13(33)
背景:最近研究已经证实,烟酰胺能够促进椎间盘细胞的增殖并对椎间盘退变有改善作用.目的:验证烟酰胺对压力诱发的兔腰椎间盘退变的保护作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-11/2009-04在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室及骨科实验室完成.材料:4月龄日本大白兔24只,体质量2.0 kg;烟酰胺为天津市大茂化学试剂厂产品.方法:取24只日本大白兔随机分入1～6组,采用可控轴向压力,以98 N压力诱发椎间盘退变建立兔腰椎间盘退变模型,并按分组要求给予兔口服烟酰胺;第1组2只,安装加压装置不予加压或给药;第2组2只,给予50mg/kg烟酰胺口服1周:第3组5只,以98N压力加压1周;第4组5只,以98 N压力加压1周,去除压力自行恢复1周;第5组5只,加压1周同时给予50 mg/kg烟酰胺口服1周;第6组5只,自加压开始时持续给予50 mg/kg烟酰胺,加压1周,然后去除压力后恢复1周.主要观察指标:以Thompson分级法及腰椎间盘磁共振评价退变程度;苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及藏红O-快绿染色考察其组织学改变:P161NK4A免疫组织化学染色检测细胞增殖和衰老状态的变化.结果:①第2组椎间盘未见明显退变;第3组5只动物Thompson分级均为Ⅱ级,第4组4只为Ⅱ级,1只为Ⅲ级,第5组2只为Ⅰ级,3只为Ⅱ级,第6组3只为Ⅰ级,2只为Ⅱ级.MRI也显示,服用烟酰胺的动物椎间盘退变程度有所减轻.②第6组纤维环Ⅱ型胶原含量较第4组高约53.2%(P＜0.01).③第2组藏红O染色强度较第1组有所上升;第5,6组髓核和纤维环染色强度均高于第4组的相对应部位,其中以第6组髓核上升最为明显(P＜0.01,P＜0.01),第6组较第5组有轻微上升.④P161NK4A阳性率随烟酰胺给药时间延长而降低.结论:烟酰胺有助于减轻压力对椎间盘的损伤,能够促进压力损伤后的椎间盘恢复.
5.期刊论文 熊晓芊.杨述华.邵增务.詹子睿.段德宇.吴宏斌 烟酰胺对椎间盘聚集蛋白聚糖的调控作用 -中国中医骨伤科杂志2005,13(5)
目的:观察烟酰胺对椎间盘聚集蛋白聚糖的调节作用.方法:构建体外椎间盘组织凝胶培养模型,以10ng/mlIL-1β诱发椎间盘退变,同时以0.5
mg/ml,0.25 mg/ml和0.05 mg/ml烟酰胺进行治疗,于造模的第一、二周对各组行葡萄糖醛酸含量测定、藏红O-快绿染色及聚集蛋白聚糖核心蛋白基因RT-PCR检测.结果:①给与0.5 mg/ml烟酰胺一周后髓核糖醛酸含量较正常对照上升44.8%,(P＜0.01);给与IL-1的各组糖醛酸含量随烟酰胺浓度上升而增高:0.5 mg/ml治疗一周后髓核糖醛酸含量较未治疗组上升68.3%,(P＜0.01),2周后髓核及纤维糖醛本含量仍高于同期正常组(P＜0.01)和未治疗组
(P＜0.01).②藏红O-快绿染色显示,随着烟酰胺浓度加大,髓核及纤维环染色浓度越大,组织结构受IL-1β破坏越小.③RT-PCR显示与IL-1的各组椎间盘内,核心蛋白表达强度随烟酰胺浓度上升而上升.结论:体外条件下,烟酰胺可提高椎间盘聚集蛋白聚糖含量,对抗IL-1β诱导的椎间盘退变,具备用于椎间盘退变临床治疗的潜力.
6.期刊论文 徐蔚蔚.邵增务.裴洪.周建国.黄吉军.俞旭东.熊蠡茗 烟酰胺对压力致兔腰椎间盘退变的保护作用 -华中科技大学学报（医学版）2009,38(5)
目的 考察烟酰胺对压力诱发的兔腰椎间盘退变的保护作用.方法 取24只日本大白兔随机分入1～6组,采用可控轴向压力致兔腰椎间盘退变模型,以98N压力诱发椎间盘退变,并按分组要求灌胃给予烟酰胺:第1组2只,安装加压装置不予加压或给药;第2组2只,给予50 mg/(kg·d)烟酰胺灌胃1周;第3组5只,以98 N压力加压1周;第4组5只,以98 N压力加压1周,去除压力自行恢复1周;第5组5只,加压1周,去除压力后给予50 mg/(kg·d)烟酰胺灌胃1周;第6组5只,加压1周,去除压力后恢复1周,自加压开始时持续给予50 mg/(kg·d)烟酰胺灌胃2周.Thompson分级法及腰椎间盘磁共振成像(MRI)评价退变程度;苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色及藏红O-快绿染色观察其组织学改变;P161NK4A免疫组化染色检测细胞增殖和衰老状态的变化.结果 ①第2组椎间盘未见明显退变;第3组5只动物Thompson分级均为Ⅱ级,第4组4只为Ⅱ级,1只为Ⅲ级,第5组2只为Ⅰ级,3只为Ⅱ级,第6组3只为Ⅰ级,2只为Ⅱ级.MRI也显示.服用烟酰胺的动物椎间盘退变程度有所减轻.②Ⅱ型胶原免疫组化染色显示,第6组纤维环Ⅱ型胶原含量较第4组高约53.2%(P
7.期刊论文 聂克.杨述华.熊蠡茗.郭兵.周建国.Nie Ke.Yang Shu-hua.Xiong Li-ming.Guo Bing.Zhou Jian-guo 烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调节作用 -中国组织工程研究与临床康复2008,12(37)
背景:研究表明,烟酰胺能够对白细胞介素1β或肿瘤坏死因子α致椎间盘退变起到保护作用,但烟酰胺对椎间盘细胞凋亡与增殖的保护机制尚不很清楚.目的:观察烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调控作用及其机制.设计、时间及地点:随机对照分组设计,于2007-04/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室及协和医院干细胞中心完成.材料:2～3月龄日本大白兔10只,体质量1.5～2.0 kg,取L1～L6节段椎间盘内髓核细胞,体外培养髓核细胞凋亡模型.方法:实验分为6组,正常对照组:不加任何药物;烟酰胺组:加入0.5 g/L 烟酰胺;白细胞介素1β组:加入10 μg/L 白细胞介素1β;白细胞介素1β+Caspase抑制剂组:加入10 μg/L 白细胞介素1β及非特异性Caspase抑制剂Z-VAD-FM;白细胞介素1β+小剂量烟酰胺组:加入10 μg/L 白细胞介素1β及0.05 g/L 烟酰胺组;白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组:10 μg/L 白细胞介素1β及0.5 g/L 烟酰胺.3 d 后对各组细胞行Annexin V-PI染色
,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能染色检测及MTT检测.主要观察指标:各组细胞凋亡率、caspase-3、8、9功能染色阳性细胞率及各组细胞的吸光
度.结果:①白细胞介素1β+Caspase抑制剂组和白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组较白细胞介素1β组细胞凋亡率明显下降(P
8.学位论文 熊晓芊 烟酰胺治疗兔椎间盘退变的实验研究 2006
一.烟酰胺对体外培养兔椎间盘基质的保护作用
目的:观察烟酰胺对椎间盘蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的保护作用，并探讨其机制。
方法:构建兔椎间盘组织凝胶培养模型，以白介素-1β(IL-1β)诱发其退变。将其分为1～6组：第1组为正常对照，2～6组分别加入
0.5mg/mlNia；10ng/mlIL-1β；10ng/mlIL-1β及0.5mgNia，10ng/mlIL-1β及0.25mgNia；10ng/mlIL-1β及0.05mgNia。培养至1周及2周时对各组标本藏红O-快绿染色，葡萄糖醛酸含量测定，以及aggrecan核心蛋白，培养至2周时行椎间盘Ⅱ型胶原RT-PCR及免疫组化检测，培养1周时行iNOS及TGF-β1免疫组化检测。
结论：体外条件下，烟酰胺可提高椎间盘聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原含量，对抗IL-1β诱发的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量下降。这种保护作用与其抑制iNOS的表达和保护TGF-β1的表达有关。烟酰胺具备用于椎间盘退变临床治疗的潜力。 二.烟酰胺对体外培养兔椎间盘组织凋亡及能量代谢相关基因的影响
目的:观察烟酰胺(Nia)对白介素-1β(IL-1β)诱导的体外培养的椎间盘组织内细胞凋亡的抑制作用及能量代谢相关基因：HIF-1α(缺氧诱导因子-1α)、GLUT-1(葡萄糖转运蛋白-1)和VEGF(血管内皮生长因子)表达的影响。
方法:构建兔椎间盘组织凝胶培养模型，将其分为1～4组：第1组为正常对照，2～4组分别加入0.5mg/mlNia；10ng/mlIL-1β；10ng/mlIL-1β及0.5mgNia。培养一周后对各组标本行TUNEL、FAS、Caspase-3、Bcl-2、HIF-1α，GLUT-1及VEGF免疫组化染色。
结论:烟酰胺可以抑制IL-1β诱导的椎间盘细胞凋亡。烟酰胺对椎问盘组织的能量代谢有促进作用，可以改善IL-1β导致的能量代谢障碍。 三.烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调节作用
目的:考察烟酰胺(Nia)对髓核细胞增殖及凋亡的调控作用及其机制。
方法:体外培养兔髓核细胞，将其分为1～6组：第1组为正常对照组，不加入药物。2～6组分别加入0.5mg/ml烟酰胺，10ng/mlIL-1β，10ng/mlIL-1β及非特异性Caspase抑制剂Z-VAD-FMK，10ng/mlIL-1β及0.05mg/ml烟酰胺，10ng/mlIL-1β及0.5mg/ml烟酰胺。药物处理3天后对各组细胞行AnnexinV-PI染色、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能的流式细胞仪检测，荧光显微镜照相及MTT法检测。
结论:烟酰胺可以促进髓核细胞的增殖和抑制IL-1β诱导的髓核细胞凋亡，对于凋亡的抑制作用主要通过抑制Caspase-9相关的线粒体凋亡途径实现的。
四.可控压力致兔腰椎间盘退变模型的构建及其对纤维环能量代谢相关基因的影响
目的:构建“可控压力致兔腰椎问盘退变模型”，并考查该模型能量代谢相关基因：HIF-1α(缺氧诱导因子-1α)、GLUT-1(葡萄糖转运蛋白-1)和VEGF(血管内皮生长因子)的表达情况并探讨其意义。
方法:采用可控压力致兔腰椎问盘退变模型构建轻度兔椎问盘退变模型，Thompson分级及HE化染色观察退变程度。以10kg轴向压力获得加压24h组、72h组、加压24h后恢复48h组(恢复组)及正常对照组兔椎间盘标本，分离其纤维环组织，RT-PCR检测HIF-1α、GLUT-1基因的表达，WesternBlot及免疫组化检测VEGF的含量及分布。
结论:可控压力致椎间盘退变模型可以有效地诱发压力导致的椎间盘退变。能量代谢相关基因表达的变化在压力致椎间盘组织损伤及损伤后修复的过程中扮演者重要角色。因此，将具有细胞能量代谢促进作用的烟酰胺应用于椎间盘退变的治疗和预防具有可靠的理论基础。 五.烟酰胺治疗可控压力致兔腰椎间盘退变模型的实验研究 目的:考查烟酰胺对压力导致的兔椎问盘退变的治疗作用。
方法:构建可控压力致兔椎间盘退变模型。将24只日本大白兔随机分入1～6组：第1组2只，为假手术对照组；第2组2只，给与约50mg/kg烟酰胺口服1周；第3组5只，以10kg压力加压1周；第4组5只，以10kg压力加压1周，白行恢复1周，第5组5只，加压1周，给予约50mg/kg烟酰胺口服1周，第6组5只，给与约50mg/kg烟酰胺口服2周，这期间先加压1周，然后恢复1周。对各组标本进行形态学观察、HE染色、藏红O-快绿染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色。 结论:烟酰胺有助于减轻压力对椎问盘的损伤，能够促进压力损伤后的椎问盘恢复。
引证文献(7条)
1.周建国.杨操.杨述华.谢卯.黄吉军.郭兵.熊蠡茗 一氧化氮对兔纤维环细胞生物学行为的影响[期刊论文]-中国中医骨伤科杂志 2009(9)
2.黄吉军.邵增务.谢卯.周建国.刘佳.熊蠡茗 静压力与白介素-1β诱导兔纤维环细胞损伤效果的比较[期刊论文]-中国中医骨伤科杂志 2009(8)
3.张其川.杨述华.熊蠡茗.周建国.黄吉军.容威 丹参酮ⅡA对兔纤维环细胞能量代谢的保护作用[期刊论文]-中国中医骨伤科杂志 2009(5)
4.徐蔚蔚.邵增务.熊蠡茗.杨述华.俞旭东.郭兵.谢卯 烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响[期刊论文]-华中科技大学学报（医学版） 2009(2)
5.谢卯.熊蠡茗.杨述华 椎间盘细胞培养的研究进展[期刊论文]-中华骨科杂志 2009(4)
6.郭兵.邵增务.熊蠡茗.杨述华.周建国.徐蔚蔚 烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因的影响[期刊论文]-中国组织工程研究与临床康复 2008(46)
7.聂克.杨述华.熊蠡茗.郭兵.周建国 烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调节作用[期刊论文]-中国组织工程研究与临床康复 2008(37)
本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgzygsk200806009.aspx