大鼠冰冻切片操作方法

大鼠冰冻切片操作方法

【操作步骤】（含溶液配置）

1． 小鼠的灌注固定：动物经麻醉后开胸暴露心脏，经左心室先快速灌注生理盐水(50mL左右) 至流出液变清亮，然后换4％多聚甲醛继续灌注大约100ml 至组织变硬。

2． 取材：小心剥离脑组织，置广口瓶中用4％多聚甲醛后固定12～24h 。

3． 脱水：将标本移入30%蔗糖溶液（用4％多聚甲醛配制），4℃放置至组织块沉底

4． 将少量包埋剂OCT 滴加到标本台，放入恒冷箱切片机内至变白，然后取出快速将表面用单面刀片修平。

5． 用安全刀片将标本底部修平后迅速粘附于标本台，然后置入-24℃恒冷箱切片机的冷冻台。待组织略微发白时用OCT 在标本表面涂一薄层，继续冷冻20min 。

6． 调好切片厚度后开始切片。如果是采用漂片，切片厚度一般20～30μm，切好的片子可以连续收集也可以每隔5～6片收集一片，移入含4％多聚甲醛的6孔板、24孔板或别的容器。如果是准备做贴片，片厚一般10μm；可以连续裱片，也可以每隔5片或10片裱一片，贴好后放切片盒，50度左右烤片1小时使其贴牢.

7． 将切好的片子放4℃保存备用。

注意事项：

1. 做室旁核的话可以将脑袋反过来，在腹侧面，大概切掉视交叉前和下丘脑之后的部分、只保留中间部分然后连续切片就可以了。如果是漂片，室旁核的部分切不了很多；如果贴片那切出来的要多一点。做免疫组化的话漂片就可以了。

2.液氮或低温冰箱里的冻存必须要有防冻液，否则必然切片会碎掉。

大鼠冰冻切片操作方法

【操作步骤】（含溶液配置）

1． 小鼠的灌注固定：动物经麻醉后开胸暴露心脏，经左心室先快速灌注生理盐水(50mL左右) 至流出液变清亮，然后换4％多聚甲醛继续灌注大约100ml 至组织变硬。

2． 取材：小心剥离脑组织，置广口瓶中用4％多聚甲醛后固定12～24h 。

3． 脱水：将标本移入30%蔗糖溶液（用4％多聚甲醛配制），4℃放置至组织块沉底

4． 将少量包埋剂OCT 滴加到标本台，放入恒冷箱切片机内至变白，然后取出快速将表面用单面刀片修平。

5． 用安全刀片将标本底部修平后迅速粘附于标本台，然后置入-24℃恒冷箱切片机的冷冻台。待组织略微发白时用OCT 在标本表面涂一薄层，继续冷冻20min 。

6． 调好切片厚度后开始切片。如果是采用漂片，切片厚度一般20～30μm，切好的片子可以连续收集也可以每隔5～6片收集一片，移入含4％多聚甲醛的6孔板、24孔板或别的容器。如果是准备做贴片，片厚一般10μm；可以连续裱片，也可以每隔5片或10片裱一片，贴好后放切片盒，50度左右烤片1小时使其贴牢.

7． 将切好的片子放4℃保存备用。

注意事项：

1. 做室旁核的话可以将脑袋反过来，在腹侧面，大概切掉视交叉前和下丘脑之后的部分、只保留中间部分然后连续切片就可以了。如果是漂片，室旁核的部分切不了很多；如果贴片那切出来的要多一点。做免疫组化的话漂片就可以了。

2.液氮或低温冰箱里的冻存必须要有防冻液，否则必然切片会碎掉。


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