实验六 水中细菌总数的检测
水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。因此，它是评价水质污染程度的重要指标之一。由于重金属及某些其他的有毒物质对细菌有杀灭或抑制的作用，在总细菌数少的水样中并不能排除这些物质的污染。
本实验采用标准平皿发对水样中细菌计数，这是测定水中好氧和兼性厌氧异养细菌密度的方法。由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状、成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或其他环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。细菌总数是指1mL 水样在营养琼脂培养基中，37℃ 24h培养后所生长的菌落数（CFU ）。一般测定，1mL 自来水的总菌数不得超过100CFU 。
一、材料与方法 1、材料
（1） 营养琼脂培养基。
配方：蛋白胨10.0g 、牛肉浸出粉3.0g 、氯化钠5.0g 、琼脂粉14.0g 、蒸馏水1000mL 、pH 值7.2±0.2。 （2） 2216E培养基 配方：蛋白胨50g 、酵母膏1.0g 、FePO 4 0.01g 、琼脂 18.0g、蒸馏水 1000mL、pH 值 7.6～7.8。
2、方法
水中细菌总数的平板计数测定方法。 二、实验步骤
1、采集水样，注意采集水样的代表性和数量。
2、吸取0.5mL 水样（河水、污水、游泳池水或港湾水等），注入盛有4.5mL
-1
无菌水的试管中，混合成10稀释液，注意吸水样前，水样和稀释水应彻底搅动均匀。
3、吸稀释液0.5mL 按10倍稀释法稀释成10-2、10-3、10-4等连续的稀释度（如下图）。
4、根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度，中等的选取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度。稀释度的选择是本实验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30~300之间。
5、吸取由高倍到底倍的稀释液，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿1mL 。 6、注入彻底融化并冷却到45℃的营养琼脂培养基（用于河水样。温度过高，
可将土壤菌悬液中的菌杀死；温度过低，则培养基凝固太快，不易倒出）或2216E 培养基（用于海水、港湾水样）约15mL ，立即旋摇培养皿，充分混合。方法是握住平皿，先往一个方向画圆，再朝相反方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿使这个混合液体溅到培养皿的边缘。让平皿培养基于水平位置放置至固化。
7、接种河水样培养基，倒置，37℃培养24h ，接种海水、港湾水样的培养皿，应倒置，在18～20℃下培养到长出明显菌落（5天左右）。
三、结果与讨论
取同一稀释度的平板培养物，依菌落计数原则进行计算。 1、菌落计数原则
平皿菌落数的计算可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，防止遗漏，也可借助于菌落计数器计数。对那些看来相似，并且长得相当接近，但并不相触的菌落，只要它们之间的距离至少相当于最小菌落的直径，便应一一予以计数。对链状菌落，应把一条链当做一个菌落来计数，不可去数链上各个单一的菌。若同一个稀释度中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半时，而另一半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同一稀释度的平均菌落数，供下一步计数时用。
2、计数方法 （1）首先选择平均菌落数在30~300者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数。
（2）若两个稀释度的平均菌落数都在30~300之间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则报告其中较小的数字（见下表例2和例3）。
（3）如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见下表例4）。
（4）若所有稀释度的平均菌落数都小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（见下表例5）。
（5）如果全部稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见下表例6）。
（6）菌落数在100以内时按实有数报告；大于100时，采用两位有效数字；在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为缩短数字后面的零数也可用10 的指数来表示。在所需报告的菌落数多至无法计算是，应注明水样的稀释倍数。
3、报告水样中细菌总数。
附：1、培养基的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的配制
配方：牛肉膏5.0g 、蛋白胨10.0g 、NaCl5.0g 、琼脂20.0g 、蒸馏水1000mL 、pH 值7.0。 2、高氏一号培养基配制 配方：可溶性淀粉20g 、KNO 3 1.0g 、K 2HPO 4 0.5g 、MgSO 4·7H 2O 0.5g 、NaCl 0.5g 、FeSO 4·7H 2O 0.01g 、琼脂 20g、蒸馏水 1000mL、pH 值7.2～7.4。
3、查氏培养基的配制
配方：蔗糖30g 、K 2HPO 4 1g 、KCl 1g 、NaNO 3 2g 、MgSO 4·7H 2O 0.5g 、FeSO 4·7H 2O 0.01g 、水1000mL 、pH 值6～7。
实验结果：
从指导老师那里得知，实验结果具体集中在1/100和1/1000两个梯度上。故在这两个
实验六 水中细菌总数的检测
水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。因此，它是评价水质污染程度的重要指标之一。由于重金属及某些其他的有毒物质对细菌有杀灭或抑制的作用，在总细菌数少的水样中并不能排除这些物质的污染。
本实验采用标准平皿发对水样中细菌计数，这是测定水中好氧和兼性厌氧异养细菌密度的方法。由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状、成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或其他环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。细菌总数是指1mL 水样在营养琼脂培养基中，37℃ 24h培养后所生长的菌落数（CFU ）。一般测定，1mL 自来水的总菌数不得超过100CFU 。
一、材料与方法 1、材料
（1） 营养琼脂培养基。
配方：蛋白胨10.0g 、牛肉浸出粉3.0g 、氯化钠5.0g 、琼脂粉14.0g 、蒸馏水1000mL 、pH 值7.2±0.2。 （2） 2216E培养基 配方：蛋白胨50g 、酵母膏1.0g 、FePO 4 0.01g 、琼脂 18.0g、蒸馏水 1000mL、pH 值 7.6～7.8。
2、方法
水中细菌总数的平板计数测定方法。 二、实验步骤
1、采集水样，注意采集水样的代表性和数量。
2、吸取0.5mL 水样（河水、污水、游泳池水或港湾水等），注入盛有4.5mL
-1
无菌水的试管中，混合成10稀释液，注意吸水样前，水样和稀释水应彻底搅动均匀。
3、吸稀释液0.5mL 按10倍稀释法稀释成10-2、10-3、10-4等连续的稀释度（如下图）。
4、根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度，中等的选取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度。稀释度的选择是本实验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30~300之间。
5、吸取由高倍到底倍的稀释液，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿1mL 。 6、注入彻底融化并冷却到45℃的营养琼脂培养基（用于河水样。温度过高，
可将土壤菌悬液中的菌杀死；温度过低，则培养基凝固太快，不易倒出）或2216E 培养基（用于海水、港湾水样）约15mL ，立即旋摇培养皿，充分混合。方法是握住平皿，先往一个方向画圆，再朝相反方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿使这个混合液体溅到培养皿的边缘。让平皿培养基于水平位置放置至固化。
7、接种河水样培养基，倒置，37℃培养24h ，接种海水、港湾水样的培养皿，应倒置，在18～20℃下培养到长出明显菌落（5天左右）。
三、结果与讨论
取同一稀释度的平板培养物，依菌落计数原则进行计算。 1、菌落计数原则
平皿菌落数的计算可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，防止遗漏，也可借助于菌落计数器计数。对那些看来相似，并且长得相当接近，但并不相触的菌落，只要它们之间的距离至少相当于最小菌落的直径，便应一一予以计数。对链状菌落，应把一条链当做一个菌落来计数，不可去数链上各个单一的菌。若同一个稀释度中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半时，而另一半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同一稀释度的平均菌落数，供下一步计数时用。
2、计数方法 （1）首先选择平均菌落数在30~300者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数。
（2）若两个稀释度的平均菌落数都在30~300之间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则报告其中较小的数字（见下表例2和例3）。
（3）如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见下表例4）。
（4）若所有稀释度的平均菌落数都小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（见下表例5）。
（5）如果全部稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见下表例6）。
（6）菌落数在100以内时按实有数报告；大于100时，采用两位有效数字；在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为缩短数字后面的零数也可用10 的指数来表示。在所需报告的菌落数多至无法计算是，应注明水样的稀释倍数。
3、报告水样中细菌总数。
附：1、培养基的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的配制
配方：牛肉膏5.0g 、蛋白胨10.0g 、NaCl5.0g 、琼脂20.0g 、蒸馏水1000mL 、pH 值7.0。 2、高氏一号培养基配制 配方：可溶性淀粉20g 、KNO 3 1.0g 、K 2HPO 4 0.5g 、MgSO 4·7H 2O 0.5g 、NaCl 0.5g 、FeSO 4·7H 2O 0.01g 、琼脂 20g、蒸馏水 1000mL、pH 值7.2～7.4。
3、查氏培养基的配制
配方：蔗糖30g 、K 2HPO 4 1g 、KCl 1g 、NaNO 3 2g 、MgSO 4·7H 2O 0.5g 、FeSO 4·7H 2O 0.01g 、水1000mL 、pH 值6～7。
实验结果：
从指导老师那里得知，实验结果具体集中在1/100和1/1000两个梯度上。故在这两个