一、什么是清洁验证？为什么清洁验证的检验方法要经过验证？
我们首先回顾一下，为什么要进行清洁？
清洁是为了除去产品残留、工艺残留和环境污染（removesproduct residues, process residues and environmental contaminants ）。
清洁验证是为了证明清洁工艺（清洁SOP）能达到预期的清洁目的。
证明的办法就是检查（检验）产品残留、工艺残留和环境污染带来的影响是否降低到足够低。（并不需要最低）
清洁验证要保证“设备/系统可以安全地生产后续产品（相同或不同产品）”，相当于对清洁工艺的安全性评估。
因此，清洁验证中所使用的检验方法十分重要，需要进行适当的验证。
（举一个不太适当的例子，如果把清洁验证比作是一个产品，那么检验方法就是一把尺，而对检验方法的验证是就对尺的计量。）
二、检验方法的建立
1、清洁验证的检验往往都需要建立专门的检验方法，这是因为：
A、检验的内容是残留物，因此检验的限度值、线性范围，都与产品的检验有很大的区别。
B、如果是外来污染物（如清洁剂），需要开发专门的检验手段。
C、如果活性成分在清洁过程中发生降解，那么原有的方法可能就不再适用。
2、检验方法的建立时需要一些必要的前提
A、首先要确定清洁方法，包括具体的清洁工艺或清洁SOP。
B、要有确定取样方法，因为不同的取样方式会对检测结果造成干扰。
C、最重要的一点，要确定残留物及限度标准，要围绕着残留物的性质和残留限度的大小来选择合适的检验方法。
3、选择检验方法建议应考虑的一些因素
A、分析方法的选择会受到实际情况的限制，选择的出发点是该方法能够满足预期的目的。
B、开发新的分析方法时，应该考虑开发新的方法需要时间、人力、仪器成本。
建议首先选用公司现有的分析方法，或对现有方法的限度值进行调整。比如：药典，公司的内控方法。
C、要考虑到清洁工艺的干扰，如使用清洁剂，要包括对特定成份残留的检测，尤其是当清洁剂的pH值变化较大的，还要考虑到清洁剂对活性成份的影响。
D、还要考虑取样过程的影响，如使用棉签擦拭时，需要考虑方法的适用性，棉签的干扰，棉签对回收残留物时的回收率。
E、当设备表面取样时的回收率可能低于 100%时，需要进行适当的校正，以保证检验方法的限度要求能够达到。
F、对特定的成份，还要考虑取样至检测的时间间隔，应评估贮存条件（时间、温度、贮存的小瓶等）对样品稳定性的影响。
G、如果活性成份在清洁过程产生降解，还要考虑到对降解产物的分析，或者采用一些非专属性的方法是一个很好的办法。
三、清洁验证中检验方法的特定要求
清洁验证的一个关键点是确定残留限度，这里的残留通常是指“产品残留”（活性成份）的分析方法验证。
通常情况下，清洁验证的方法验证与常用的方法学验证一样，应按照《中国药典》附录9101进行，参照“杂质测定”中定量或限度的方法进行验证，包括准确性、精密度、专属性、线性和范围，以及定量限和检测限等内容，需要注意以下方面：
A、准确性和精密度的验证通常只需要在残留限度范围进行，一般为残留物限度的50%-150，综合回收率不低于75%，回收率的RSD应不大于10%。
B、定量限和检测限必须低于样品的可接受限度，而且最好是远低于可接受限度，以确保清洁程序的耐用性。定量限通常达到限度标准的1/10，定量要求低于通常仪器分析的要求。
C、专属性方法应关注可能只有在清洁工艺中使用到的其他物质（例如清洁剂）可能带来的干扰。
对于使用合格/不合格方法来进行清洁验证的公司， 不需进行全面的分析方法验证，只需要报告样品的结果是低于或等于或高于合格/不合格限度值。（适用于限度检查）
通常内毒素检验方法都是药典方法，不需要进行正式的验证，但需要确认其适用性。
经批准的微生物检验方法也不需要额外的方法验证。
四、方法验证与回收率实验
指南中提到“分析方法验证方案可以只包括残留物溶液的验证，也可以包括取样回收率研究，尽管取样回收率研究可以独立于分析方法验证而单独进行”。
但有些同学会用取样回收率实验（一般是用于擦拭法）来代替方法学验证，这是不全面的，这二者还是有区别的。
原因是，清洁验证最关键的是要“防止出现假阴性的情况”，可能是分析方法的灵敏度不够，也可能是取样操作造成干扰， 或者回收率过低，影响因素较多。
从时间顺序上来说，应该是先做方法学验证，确认方法的可靠性后再进行取样回收率实验。
（相对于方法学验证，回收率实验是对取样方法的验证）
二者关注的范围也不同，分析方法的回收率范围一般为定量限至限度标准（或120%），是为了确认检验方法有足够的灵敏度。而回收率的范围一般在限度标准之上，是为了保证取样操作的可靠性，在清洁不彻底时能够有准确的取样量。
同时，二者也有关联，要考虑到取样回收率对分析方法的影响，如果回收率低于100%时，分析方法的限度标准要经过系数的较正，也要考虑检测限/定量限是否能够达到要求。
五、参考文献
1、《药品生产验证指南（2003版）》，化学工业出版社。
2、PDA Technical Report No. 29(Revised 2012)：Points to Consider for CleaningValidation。
3、FDA：GUIDE TO INSPECTIONS VALIDATION OF CLEANING PROCESSES。
4、《制药企业GMP管理实用指南》，中国计量出版社。
5、《GMP认证指南》
（资料准备过程中感谢同事王娟、高玲霞的大力帮助）
一、什么是清洁验证？为什么清洁验证的检验方法要经过验证？
我们首先回顾一下，为什么要进行清洁？
清洁是为了除去产品残留、工艺残留和环境污染（removesproduct residues, process residues and environmental contaminants ）。
清洁验证是为了证明清洁工艺（清洁SOP）能达到预期的清洁目的。
证明的办法就是检查（检验）产品残留、工艺残留和环境污染带来的影响是否降低到足够低。（并不需要最低）
清洁验证要保证“设备/系统可以安全地生产后续产品（相同或不同产品）”，相当于对清洁工艺的安全性评估。
因此，清洁验证中所使用的检验方法十分重要，需要进行适当的验证。
（举一个不太适当的例子，如果把清洁验证比作是一个产品，那么检验方法就是一把尺，而对检验方法的验证是就对尺的计量。）
二、检验方法的建立
1、清洁验证的检验往往都需要建立专门的检验方法，这是因为：
A、检验的内容是残留物，因此检验的限度值、线性范围，都与产品的检验有很大的区别。
B、如果是外来污染物（如清洁剂），需要开发专门的检验手段。
C、如果活性成分在清洁过程中发生降解，那么原有的方法可能就不再适用。
2、检验方法的建立时需要一些必要的前提
A、首先要确定清洁方法，包括具体的清洁工艺或清洁SOP。
B、要有确定取样方法，因为不同的取样方式会对检测结果造成干扰。
C、最重要的一点，要确定残留物及限度标准，要围绕着残留物的性质和残留限度的大小来选择合适的检验方法。
3、选择检验方法建议应考虑的一些因素
A、分析方法的选择会受到实际情况的限制，选择的出发点是该方法能够满足预期的目的。
B、开发新的分析方法时，应该考虑开发新的方法需要时间、人力、仪器成本。
建议首先选用公司现有的分析方法，或对现有方法的限度值进行调整。比如：药典，公司的内控方法。
C、要考虑到清洁工艺的干扰，如使用清洁剂，要包括对特定成份残留的检测，尤其是当清洁剂的pH值变化较大的，还要考虑到清洁剂对活性成份的影响。
D、还要考虑取样过程的影响，如使用棉签擦拭时，需要考虑方法的适用性，棉签的干扰，棉签对回收残留物时的回收率。
E、当设备表面取样时的回收率可能低于 100%时，需要进行适当的校正，以保证检验方法的限度要求能够达到。
F、对特定的成份，还要考虑取样至检测的时间间隔，应评估贮存条件（时间、温度、贮存的小瓶等）对样品稳定性的影响。
G、如果活性成份在清洁过程产生降解，还要考虑到对降解产物的分析，或者采用一些非专属性的方法是一个很好的办法。
三、清洁验证中检验方法的特定要求
清洁验证的一个关键点是确定残留限度，这里的残留通常是指“产品残留”（活性成份）的分析方法验证。
通常情况下，清洁验证的方法验证与常用的方法学验证一样，应按照《中国药典》附录9101进行，参照“杂质测定”中定量或限度的方法进行验证，包括准确性、精密度、专属性、线性和范围，以及定量限和检测限等内容，需要注意以下方面：
A、准确性和精密度的验证通常只需要在残留限度范围进行，一般为残留物限度的50%-150，综合回收率不低于75%，回收率的RSD应不大于10%。
B、定量限和检测限必须低于样品的可接受限度，而且最好是远低于可接受限度，以确保清洁程序的耐用性。定量限通常达到限度标准的1/10，定量要求低于通常仪器分析的要求。
C、专属性方法应关注可能只有在清洁工艺中使用到的其他物质（例如清洁剂）可能带来的干扰。
对于使用合格/不合格方法来进行清洁验证的公司， 不需进行全面的分析方法验证，只需要报告样品的结果是低于或等于或高于合格/不合格限度值。（适用于限度检查）
通常内毒素检验方法都是药典方法，不需要进行正式的验证，但需要确认其适用性。
经批准的微生物检验方法也不需要额外的方法验证。
四、方法验证与回收率实验
指南中提到“分析方法验证方案可以只包括残留物溶液的验证，也可以包括取样回收率研究，尽管取样回收率研究可以独立于分析方法验证而单独进行”。
但有些同学会用取样回收率实验（一般是用于擦拭法）来代替方法学验证，这是不全面的，这二者还是有区别的。
原因是，清洁验证最关键的是要“防止出现假阴性的情况”，可能是分析方法的灵敏度不够，也可能是取样操作造成干扰， 或者回收率过低，影响因素较多。
从时间顺序上来说，应该是先做方法学验证，确认方法的可靠性后再进行取样回收率实验。
（相对于方法学验证，回收率实验是对取样方法的验证）
二者关注的范围也不同，分析方法的回收率范围一般为定量限至限度标准（或120%），是为了确认检验方法有足够的灵敏度。而回收率的范围一般在限度标准之上，是为了保证取样操作的可靠性，在清洁不彻底时能够有准确的取样量。
同时，二者也有关联，要考虑到取样回收率对分析方法的影响，如果回收率低于100%时，分析方法的限度标准要经过系数的较正，也要考虑检测限/定量限是否能够达到要求。
五、参考文献
1、《药品生产验证指南（2003版）》，化学工业出版社。
2、PDA Technical Report No. 29(Revised 2012)：Points to Consider for CleaningValidation。
3、FDA：GUIDE TO INSPECTIONS VALIDATION OF CLEANING PROCESSES。
4、《制药企业GMP管理实用指南》，中国计量出版社。
5、《GMP认证指南》
（资料准备过程中感谢同事王娟、高玲霞的大力帮助）