高效液相色谱仪使用管理制度
一、高效液相色谱使用管理准则
1、仪器使用者必须经过专门的技术培训，掌握仪器的性能，操作方法和使用注意事项，方可独立完成实验。
2、 使用仪器务必登记开始和结束时间，若仪器出现异常，及时停机找管理人员说明并在登记本上记录详情。
3、根据实验需要若要晚间时段、节假日使用必须提前提出要求，管理人员给予安排，但要遵守实验室安全守则。
4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
5、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
6、关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统，退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机，关闭Agilent 1200各模块电源开关。
7、实验数据要妥善保存，整理，不可复制，泄露实验数据。
8、实验之后的材料、溶液必须及时清理，保证实验室的清洁和安全。
9、未经培训、考核人员不得上机操作，否则对仪器设备损坏或性能下降等将追究相应的责任。
10、未经管理人员许可不得擅自改变仪器的运行参数，不得用控制仪器的电脑操作、打印任何与实验无关的材料。
11、外来人员（非本公司实验室特定实验员）借用液相色谱仪时，应首先向部门经理和实验室管理人员申请，批准后认真填写《实验仪器借用登记表》方可按规范进行操作使用。
12、允许晚间、节假日加班的人员，登记领取钥匙，钥匙要保管好，不得转让他人且及时归还。注意要及时锁门，并保证实验室的水电安全。
13、实验室内严禁吸烟，进食，听音乐等可能对实验研究及仪器性能造成影响或 与实验无关的一切活动。
14、使用者须认真履行仪器使用登记制度，认真填写《液相色谱仪使用登记薄》以《及大型精密仪器使用登记表》 ，借用仪器者应认真填写《实验仪器借用登记表》
二、 流动相，溶剂的使用管理
1、所选用的流动相溶剂要有一定的化学稳定性，不与固定相和样品组分起反应，其纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求。
2、溶剂应当不干扰检测器的工作，溶剂应与检测器匹配，选择不影响检测器正常工作应选择在测定波长范围内无吸收的流动相。
3、在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
4、溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5、从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
6、流动相溶剂应选择HPLC 的溶剂或依此为标准的溶剂。流动相使用前用0.45μm 滤膜过滤、脱气，清除微粒和灰尘。 在送液泵内，为了防止杂物（固体）进入流路，装有吸滤器，但网孔径为10μm ，比此更小的颗粒仍然可通过，这会导致流路和柱子堵塞和污染。为此，建议常用0.45μm 滤膜过滤。流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力温度变化时容易产生大量气泡，会导致泵误动作和输液不畅，检测器产生噪声信号等。
7、流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。
8、做HPLC 流动相的试剂应用HPLC 级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需经常更换，防止长菌变质。使用去离子水、针剂水、纯净水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。
9、流动相的pH 值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的
10、用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置过夜或更长时间。
11、若需要使用含盐的流动相，使用前请务必过滤。并且使用该含盐流动相前，色谱柱需先用低比例有机相（有机相含量应不低于10%）的溶液冲洗，以免缓冲盐析出。流动相若为蒸馏水或含盐的缓冲液，建议现用现配，以免流动相因滋生微生物而造成柱填料的污染。
12、进行梯度实验时要注意梯度变化过程中流动相的互溶性，避免因流动相不互溶而导致的缓冲盐析出问题。反相系统更换正相系统或正相系统更换反相系统时，用异丙醇置换系统内
的储存流动相后在接柱子。
13、在更换两种互不相溶的流动相时，中间要用异丙醇溶液清洗过渡。例如：先用甲醇水做流动相，然后在用正己烷做流动相时，一定要先用异丙醇溶液冲洗甲醇水，然后用正己烷冲洗异丙醇，反之也是一样。在更换流动相时还要考虑色谱柱是否更换。
14、仪器在短期（两三天）不用时，流路中可以是甲醇或水。仪器在长期不用时，流路中应用甲醇。
15、流动相含有浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶剂，会对流路中的PEEK 树脂管路强度变成差、PEEK 树脂管容易破裂使溶剂外溅。流动相含有卤素离子的溶剂，如KCI 、NaCI 、NH4CI 等。对流路中的不锈钢材料有腐蚀作用，以上的溶剂须尽量避免使用。非用不可时，分析完了后，应立刻用蒸馏水把全流路清洗干净。
16、流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC 系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。
17、磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。
三 微量注射器的使用及注意事项
1 微量注射器是易碎器械，使用时应多加小心，不用时要洗净放入盒内，注射器芯与套之间湿度不足时(将干未干之际) 不得来回多次抽动芯子，否则会严重磨损，损坏气密性，降低准确度。
2 微量注射器在进样前和进样后都需用洗针液洗净，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，注射器不得接触强碱性溶液，以免腐蚀玻璃而造成漏气。
3 对10-100微升的注射器，如遇针尖堵塞，宜用直径为0.1 mm 的细钢丝耐心穿通, 不能用火烧的方法，以免退火而失去刺戳能力。
4 硅橡胶垫在几十次进样后，容易漏气，需及时更换。
5 用微量注射器取液体试样，应先用少量试样洗涤多次，再慢慢抽入试样，并稍多于需要量。如内有气泡则将针头朝上，手指轻轻弹注射器玻璃壁使气泡上升排出，再将过量的试样排出，
用滤纸吸去针尖外所沾试样。注意切勿使针头内的试样流失。
6 取好样后应立即进样，进样时，注射器应与进样口垂直，插到底后迅速注入试样，完成后立即拔出注射器，整个动作应进行得稳当，连贯，迅速。针尖在进样器中的位置，插入速度，停留时间和拔出速度等都会影响进样的重复性，操作时应注意。
四. 操作过程中需注意问题
1 注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；加液后必须排气泡，管道中的气泡要排尽，禁止气泡入泵。
2 建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method ，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果。
3 操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
4 操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法（新柱不提倡），若还是无法通畅，则需换柱；
5 基线产生不规则噪声，可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡（使其平衡，若用离子对试剂，在首次使用使需要足够的时间和溶剂体积，色谱柱才能达到足够的平衡），流动相被污染（更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统），色谱柱被污染（为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱），检测器不稳定。
6. 开机时自上而下打开色谱仪组件电源，最后关机时自下而上关闭组件。
高效液相色谱仪使用管理制度
一、高效液相色谱使用管理准则
1、仪器使用者必须经过专门的技术培训，掌握仪器的性能，操作方法和使用注意事项，方可独立完成实验。
2、 使用仪器务必登记开始和结束时间，若仪器出现异常，及时停机找管理人员说明并在登记本上记录详情。
3、根据实验需要若要晚间时段、节假日使用必须提前提出要求，管理人员给予安排，但要遵守实验室安全守则。
4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
5、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
6、关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统，退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机，关闭Agilent 1200各模块电源开关。
7、实验数据要妥善保存，整理，不可复制，泄露实验数据。
8、实验之后的材料、溶液必须及时清理，保证实验室的清洁和安全。
9、未经培训、考核人员不得上机操作，否则对仪器设备损坏或性能下降等将追究相应的责任。
10、未经管理人员许可不得擅自改变仪器的运行参数，不得用控制仪器的电脑操作、打印任何与实验无关的材料。
11、外来人员（非本公司实验室特定实验员）借用液相色谱仪时，应首先向部门经理和实验室管理人员申请，批准后认真填写《实验仪器借用登记表》方可按规范进行操作使用。
12、允许晚间、节假日加班的人员，登记领取钥匙，钥匙要保管好，不得转让他人且及时归还。注意要及时锁门，并保证实验室的水电安全。
13、实验室内严禁吸烟，进食，听音乐等可能对实验研究及仪器性能造成影响或 与实验无关的一切活动。
14、使用者须认真履行仪器使用登记制度，认真填写《液相色谱仪使用登记薄》以《及大型精密仪器使用登记表》 ，借用仪器者应认真填写《实验仪器借用登记表》
二、 流动相，溶剂的使用管理
1、所选用的流动相溶剂要有一定的化学稳定性，不与固定相和样品组分起反应，其纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求。
2、溶剂应当不干扰检测器的工作，溶剂应与检测器匹配，选择不影响检测器正常工作应选择在测定波长范围内无吸收的流动相。
3、在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
4、溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5、从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
6、流动相溶剂应选择HPLC 的溶剂或依此为标准的溶剂。流动相使用前用0.45μm 滤膜过滤、脱气，清除微粒和灰尘。 在送液泵内，为了防止杂物（固体）进入流路，装有吸滤器，但网孔径为10μm ，比此更小的颗粒仍然可通过，这会导致流路和柱子堵塞和污染。为此，建议常用0.45μm 滤膜过滤。流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力温度变化时容易产生大量气泡，会导致泵误动作和输液不畅，检测器产生噪声信号等。
7、流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基线水平很难稳定，特别是发生漂移，也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时，混合液变化大，往往会与室温相差很大，务必注意。
8、做HPLC 流动相的试剂应用HPLC 级的、水应用二次蒸馏水，水相流动相需经常更换，防止长菌变质。使用去离子水、针剂水、纯净水（炊用）并不合适、尤其是做梯度洗脱时，水中的不纯物会成为鬼峰，从而干扰分析结果。
9、流动相的pH 值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的
10、用缓冲盐做流动相时，在使用前和使用后都要用水清洗流路，绝对禁止将缓冲溶液留在流路中静置过夜或更长时间。
11、若需要使用含盐的流动相，使用前请务必过滤。并且使用该含盐流动相前，色谱柱需先用低比例有机相（有机相含量应不低于10%）的溶液冲洗，以免缓冲盐析出。流动相若为蒸馏水或含盐的缓冲液，建议现用现配，以免流动相因滋生微生物而造成柱填料的污染。
12、进行梯度实验时要注意梯度变化过程中流动相的互溶性，避免因流动相不互溶而导致的缓冲盐析出问题。反相系统更换正相系统或正相系统更换反相系统时，用异丙醇置换系统内
的储存流动相后在接柱子。
13、在更换两种互不相溶的流动相时，中间要用异丙醇溶液清洗过渡。例如：先用甲醇水做流动相，然后在用正己烷做流动相时，一定要先用异丙醇溶液冲洗甲醇水，然后用正己烷冲洗异丙醇，反之也是一样。在更换流动相时还要考虑色谱柱是否更换。
14、仪器在短期（两三天）不用时，流路中可以是甲醇或水。仪器在长期不用时，流路中应用甲醇。
15、流动相含有浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶剂，会对流路中的PEEK 树脂管路强度变成差、PEEK 树脂管容易破裂使溶剂外溅。流动相含有卤素离子的溶剂，如KCI 、NaCI 、NH4CI 等。对流路中的不锈钢材料有腐蚀作用，以上的溶剂须尽量避免使用。非用不可时，分析完了后，应立刻用蒸馏水把全流路清洗干净。
16、流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC 系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。
17、磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。
三 微量注射器的使用及注意事项
1 微量注射器是易碎器械，使用时应多加小心，不用时要洗净放入盒内，注射器芯与套之间湿度不足时(将干未干之际) 不得来回多次抽动芯子，否则会严重磨损，损坏气密性，降低准确度。
2 微量注射器在进样前和进样后都需用洗针液洗净，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，注射器不得接触强碱性溶液，以免腐蚀玻璃而造成漏气。
3 对10-100微升的注射器，如遇针尖堵塞，宜用直径为0.1 mm 的细钢丝耐心穿通, 不能用火烧的方法，以免退火而失去刺戳能力。
4 硅橡胶垫在几十次进样后，容易漏气，需及时更换。
5 用微量注射器取液体试样，应先用少量试样洗涤多次，再慢慢抽入试样，并稍多于需要量。如内有气泡则将针头朝上，手指轻轻弹注射器玻璃壁使气泡上升排出，再将过量的试样排出，
用滤纸吸去针尖外所沾试样。注意切勿使针头内的试样流失。
6 取好样后应立即进样，进样时，注射器应与进样口垂直，插到底后迅速注入试样，完成后立即拔出注射器，整个动作应进行得稳当，连贯，迅速。针尖在进样器中的位置，插入速度，停留时间和拔出速度等都会影响进样的重复性，操作时应注意。
四. 操作过程中需注意问题
1 注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；加液后必须排气泡，管道中的气泡要排尽，禁止气泡入泵。
2 建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method ，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果。
3 操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
4 操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法（新柱不提倡），若还是无法通畅，则需换柱；
5 基线产生不规则噪声，可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡（使其平衡，若用离子对试剂，在首次使用使需要足够的时间和溶剂体积，色谱柱才能达到足够的平衡），流动相被污染（更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统），色谱柱被污染（为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱），检测器不稳定。
6. 开机时自上而下打开色谱仪组件电源，最后关机时自下而上关闭组件。