微生物学通报Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
ｔｏｎｇｂａｏ＠ｉｍ．ａｃ．ｃｎ
ＳＥＰ２０，２００８，３５（９）：１４０４－１４０８
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．ＣＡＳ
＠２００８ｂｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ
青霉ＴＳ６７菌株活性产物的抗真菌作用
王淑媛王素英‘涂敏勤
（天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点实验室
天津３００１３４）
摘要：本文初步探讨了青霉ＴＳ６７（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．）的发酵活性产物对植物病原真菌的抑制作用机理，实验结果表明，用其５０％的发酵液分别处理玉蜀黍平脐蠕孢菌（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ）和大豆尖孢镰刀茵（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）１２０ｈ后，菌丝生长的抑制率分别为７７．７８％和７０．３０％，对孢子产生的抑制率分别达５８．８％和７３．５％：同时发现用５０％发酵液处理病原茵的无性繁殖孢子１２ｈ后，孢子萌发抑制率分另０迭７８．３％和６２．Ｏ％。经显微镜观察抗菌活性物质处理后的菌丝体，发现菌丝体表面瘤状畸形、菌丝生长顶端不规则膨胀、内部发生原生质浓缩，初步推测青霉ＴＳ６７主要通过影响植物病原真菌的细胞壁而实现抑制作用。关键词：抑菌活性，机理
ＴｈｅＡｎｔｉｆｕｎｇａｌ
Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ＷＡＮＧ
ｏｆＢｉｏａｃｔｉｖｅ
Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ
ＰｒｏｄｕｃｅｄｂｙＰｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．ＴＳ６７
ＷＡＮＧ
Ｓｈｕ—Ｙｕａｎ
Ｓｕ．Ｙｉｎｇ＋ＴＵ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
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（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏ肠删ａｎｄＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＴｍｎｆｉｎｏｆＣｏｍｍｅｒｃｅ，Ｔｍｎｊｉｎ３００１３４）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅａｎｔｉｆｕｎｇａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅＴＳ６７（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．）ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｂｉｏａｃｔｉｖｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｗａｓｉｎ—ｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｉｎｔｈｉｓＢｉｐｏｌａｒｉｓｍ鲫ｄ主ｓ
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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌａｃｔｉｖｉｔｙ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
随着现代农业的发展及人类对保护环境和生态认识的提高，作为生物防治重要内容的微生物农药，因具有来源广、成本低、易于降解、残留小、毒性低等特点，成为开发农用抗生素的重要途径和发展
方向‘¨。人们已经认识到海洋这一特殊生境造就了微生物种类及代谢途径特异性，可以产生大量有价值的完全不同于陆地微生物的新颖生物活性物质，海洋微生物将是今后获得新的农用抗生素的重要资
基金项目：天津市高等学校科技发展基金项目（Ｎｏ．２００４ｚｄ２０）
。通讯作者：Ｔｅｌ：０２２—８１７２０６２９；Ｆａｘ：０２２．２６６７５７８０；函：ｗｓｙｉｎｇ＠ｔｊｃｕ．ｅｄｕ．ｃｎ收稿日期：２００８．０１．１７：接受日期：２００８．０３．２１
王淑媛等：青霉Ｔ８６７菌株活性产物的抗真菌作用
源［２，３１。我国利用海洋微生物代谢产物研制农用抗生素的研究刚刚起步，且主要集中在黄海和东海海域。青霉ＴＳ６７（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．）分离自渤海近海海域水样，对玉蜀黍平脐蠕孢菌（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ）和大豆尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）具有很强的抑制作用，本实验拟在细胞水平上初步探讨该菌株发酵活性产物的抑菌机理。为该菌株的开发利用提供理论指导。
ｌ材料与方法
１．１实验材料
１．１．１菌种：青霉ＴＳ６７（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．）菌株分离自渤海近海海域水样。
植物病原真菌：玉蜀黍平脐蠕孢菌（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ）、大豆尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）为本实验室的保藏菌种。
１．１．２培养基：ＰＤＡ固体培养基，ＰＤＡ液体培养基见参考文献［４】。
海洋真菌发酵培养基：葡萄糖１０ｇ，蛋白胨２ｇ，
酵母膏１ｇ，蒸馏水４００ｍＬ，人工海水６００ｍＬ。１．２实验方法１．２．１青霉ＴＳ６７发酵液的制备：将青霉ＴＳ６７接种在ＰＤＡ固体培养基上，２８℃活化５ｄ，转接至含
５０
ｍＬ海洋真菌液体培养基的２５０ｍＬ三角瓶中，
２８。Ｃ、１７０
ｒ／ｒａｉｎ培养４
ｄ一５
ｄ，待发酵液的ｐＨ值降
为４．８～５．０时，终止发酵，并将得到的发酵液过滤除去菌丝体，收集上清液用０．２２ｌａｍ微孔滤膜过滤，制成无菌发酵液备用。
１．２．２
对病原真菌菌丝抑制作用的测定一菌落生长
法‘５】：将病原菌在ＰＤＡ固体平板上培养３ｄ形成单菌落，将发酵液用无菌水稀释成浓度为５０％、２５％、１２．５％的发酵液，然后分别取浓度为１００％、５０％、２５％、１２．５％发酵液和融化的５００ＣＰＤＡ培养基各
６
ｍＬ立即混匀倒平板，制成含有发酵液浓度为５０％、２５％、１２．５％、６．２５％的固体培养基，取直径
５
ｍｍ的菌块分别放于培养基中央，以加相同体积
的无菌水ＰＤＡ平板为对照，每个浓度重复３次，２８℃下培养，每隔２４ｈ采用十字交叉法，观察测定菌落直径，直至１２０ｈ，与对照菌落比较，计算菌丝生长抑制率。公式如下：
抑菌率＝（对照菌落直径一处理菌落直径），
对照菌落直径ｘ１００％
１４０５
１．２．３对病原菌形成无性孢子的影响：将上述培养
１２０
ｈ的病原菌菌落，用打孔器于距菌落边缘
３ｒａｍ一４
ｍｍ处打取菌块，放入试管内加入５ｍＬ蒸
馏水，将菌块上的孢子全部洗下，用血球计数板直接计数，每皿取２块，每个菌块计数３次，将６个观察数据平均，作为实验数据。
１．２．４
病原菌无性孢子萌发率的测定一悬滴法【５】：
将病原菌的孢子悬液与不同浓度的发酵液各１００止
混合，使发酵液的最终浓度为５０％、２５％、１２．５％、６．２５％，将２００ｌａＬ混合液置于凹玻片上，２８℃培养
１２
ｈ后在光学显微镜下观察孢子萌发的情况，每个
处理重复３次，随机取３个高倍镜视野下（每个视野下约１００个孢子）孢子萌发（以芽管长度超过孢子直径一半记为萌发）平均数，与对照比较，计算各处理的孢子萌发抑制率。公式如下：
孢子萌发抑制率＝（对照萌发率一处理萌发率），
对照萌发率×１００％
１．２．５对病原菌菌丝形态的影响：①将０．２ｍＬ病原菌孢子悬液接种到２．８ｍＬ的ＰＤＡ液体培养基中，２８℃恒温静止培养２４ｈ后，加入３．０ｍＬ不同浓度的发酵液使其终浓度分别为５０％、２５％、１２．５％，２８℃继续静止培养１２ｈ，光学显微镜下观测菌丝形态变化。②将玉蜀黍平脐蠕孢菌在ＰＤＡ固体平板上培养
３
ｄ，形成均匀的菌落后用５ｍｍ打孔器打取菌落边
缘均一的菌块作接种物，置于含５０％发酵液的ＰＤＡ固体培养基中央，以加相同体积的灭菌水ＰＤＡ固体培养基为对照，２８℃培养，于３ｄ和５ｄ分别取样用扫描电镜观察。
２结果与分析
２．１对菌丝生长的抑制作用
采用菌落生长法，测定了不同浓度的发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌菌丝生长的影响，结果见图１和图２。从图中可以看出：不同浓度的发酵液对两种病原菌菌丝的生长均有一定的抑制作用，且随着发酵液浓度的增加，抑菌效果明显增强。在含６．２５％发酵液的ＰＤＡ平板上，病原菌菌落的大小与对照无明显差异；在含１２．５％发酵液的ＰＤＡ平板上，前２４ｈ内菌落扩张较缓慢，４８ｈ后随着培养时间的延长，病原菌落直径与对照菌落的差异变小；在含２５％发酵液的ＰＤＡ平板上，病原菌菌落与对照菌落有明显的差异，且扩展缓慢；含５０％
１４０６
微生物学通报
２００８，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．９
发酵液ＰＤＡ平板上，病原菌菌落几乎不扩展，４８
ｈ
并且随着发酵液浓度减弱，对两种植物病真菌孢子产生抑制作用逐渐减弱。其中，５０％发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌孢子产生抑制率分别达５８．８％和７３．５％，可见发酵液中的活性产物不仅抑制病原菌菌丝的生长，更重要的是导致其产孢能力的下降，从而使病菌丧失侵染能力。
后开始缓慢扩展，菌落与对照有显著的差异。将图１和图２进行比较，可以看出发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌菌丝生长的抑制作用大于大豆尖孢镰刀菌，浓度为５０％的发酵液处理玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌１２０ｈ后，菌丝生长的抑制率分别为
７７．７８％和７０．３０％。
图２发酵液对大豆尖孢镰刀菌生长的影响
Ｆｉｇ．２
Ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｎ
ｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈｏｆＦｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ
图１
Ｆｉｇ．１
发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌生长的影响
Ｅｆｆｅｃｔｓ
Ｏｉｉ
ｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈｏｆＢｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ
孢子萌发实验结果表明：当培养达到１２ｈ时。对照组的孢子萌发率比较高，而经不同浓度发酵液处理的病原菌孢子的萌发均受到一定程度的抑制，浓度为５０％发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌孢子萌发抑制率分别为７８．３％和６２．Ｏ％，随着发酵液浓度的减少，抑菌作用降低，孢子萌发率上升，浓度为６．２５％的发酵液对孢子萌发的抑制作
用不明显。
２．２对病原菌形成无性孢子和孢子萌发的抑制作用
采用直接计数和悬滴法分别测定了青霉ＴＳ６７发酵液对病原菌无性孢子产生和孢子萌发的影响，实验结果见表ｌ。
由表１可知不同浓度的发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌孢子产生不同程度的影响，
王淑嫒等：青霉ＴＳ６７菌株活性产物的抗真菌作用
１４０７
２．３对菌丝形态的影响
２．３．１病原菌菌丝形态变化的光学显微镜观察：用油镜观察青霉ＴＳ６７菌株对病原菌菌丝形态的影响，发现用１２．５％的发酵液处理两种病原真菌１２ｈ后，菌丝生长缓慢，有的菌丝停止生长，菌丝表面有突起：用２５％发酵液处理１２ｈ后，两种病原菌菌丝体表面有许多瘤状畸形，尤其是对菌丝的顶端生长点有较大的影响，菌丝生长顶端严重的不规则膨胀，菌丝体内部出现原生质浓缩的现象：用５０％发酵液处理两种病原菌１２ｈ后均出现菌丝体断裂，菌丝体表面严重畸形；而未经发酵液处理的玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌菌丝粗细均匀，菌丝饱满，表面光滑，可见ＴＳ６７菌株的发酵活性产物一方面破坏细胞壁的结构而使菌丝形态发生显著的变化，另一方面通过影响细胞壁的形成而抑制病原菌的生长。２．３．２病原菌菌丝形态变化的扫描电镜观察：通过
扫描电镜观察发现未经发酵液处理的菌丝粗细均匀，菌丝饱满，表面光滑（见图ａ），而用发酵液处理过的菌丝较细，表面凹凸不平，菌丝整体粗细不均匀，发酵液处理３ｄ后，菌丝顶端出现皱缩，无规则卷曲（见图ｂ），菌丝局部膨大，并有断裂现象（见图ｃ），菌丝生长点出现畸变（见图ｄ），发酵液处理５ｄ后，菌丝大部分部位失水畸形（见图ｅ），菌丝不完整，出现严重断裂（见图Ｄ等现象，由此我们可以得出，ＴＳ６７菌株发酵液能够很好的抑制玉蜀黍平脐蠕孢菌的正常生长，并且进一步证实了ＴＳ６７菌株发酵活性产物对菌丝的生长点有较大的影响，出现菌丝生长顶端不规则膨胀以及皱缩。可能的原因是影响细胞壁的合成，使得真菌细胞壁厚薄不均匀，从而影响细胞膜的合成，改变细胞膜的通透性，从而破坏菌丝正常的生理代谢，并导致菌体出现皱缩或膨胀的现象ｆ６－８】。
图３
Ｆｉｇ．３
Ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｎ
不同浓度的发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌菌丝的影Ｕ向（１００×）
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（１００×）
ｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈｏｆＢｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈ
图４
Ｆｉｇ．４
Ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｎ
不同浓度的发酵液对大豆尖孢镰刀菌菌丝的影响（１００×）
ｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈｏｆＦｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（１００ｘ）
３结论
通过上述系列实验，发现青霉ＴＳ６７菌株的液体发酵活性产物不仅能够有效抑制玉蜀黍平脐蠕孢菌（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ）、大豆尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）的菌丝生长，无性孢子的形成和萌发，而且使菌丝体表面产生许多瘤状突起，菌丝局部严重膨大，并有断裂现象，菌丝生长点畸变，出现菌丝生长顶端膨胀，由此可见青霉ＴＳ６７菌株产生的
活性代谢产物是通过作用于病原真菌的细胞壁，使
ｌ物产性活株菌６０．９５１－Ｓ．等，荣德安，倩小慕，梅琦段】３１【
微生物学通禳
２００８，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．９
图５扫描电镜观察活性产物对玉蜀黍平脐蠕孢面团丝形态的影响（１８００ｘ）
ｍｙｃｅｌｉａｓｈａｐｅｏｆｂｙＢｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｕｎｄｅｒＳｃａｎｎｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（１８００ｘ）
ａ：正常菌丝；ｂ，ｃ，ｄ：５０％发酵液作用３ｄ：ｅ，ｆ：５０％发酵液作用５ｄ
Ｆｉｇ．５
ａ：Ｎｏｒｍａｌｍｙｃｅｌｉａ；ｂ，ｃ，ｄ：Ｕｎｄｅｒ５０％ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｆｏｒ３ｄ：ｅ，ＣＵｎｄｅｒ５０％ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｆｏｒ５ｄ
Ｅｆｆｅｃｔｓｏｎ
细胞壁变薄或失去完整性，造成细胞膜暴露，最后由于渗透压差导致原生质泄漏，最终导致病原菌死
２００２，ｐ．８．
【５】孔凡彬，高扬帆，陈锡岭，等・９种药剂对玉米小斑病菌
亡，这一结论与Ｍａｅｒｔｅｎｓ【９１和Ｃａｓｔｅｌｌｉ㈣在真菌细
胞壁机理研究中报道一致。另外田黎等‘１１１、屈海泳等［１２１和段琦梅等１１３１研究微生物胞外代谢产物对植物病原真菌拮抗机制的初步研究中均发现类似的现象，并推测其与病原真菌的细胞壁有关。
株发酵活性产物抑制植物病原菌的分子机制，将在其化学性质和化学结构，并利用高纯度的抗菌活性物质与病原真菌的不同细胞结构作用。以提出完整的抗菌机理，为青霉ＴＳ６７菌株的开发利用提供思
的室内抑菌试验・２００６，３７（２）：１４８—１４９・
［６１孙延忠・曾洪梅＇李国庆・抗生素对微生物作用的研究．
微生物学杂志，２００３，２３（３）：４４－４７・
【７】Ｄｏｕｇｌａｓ
ＣＭ・Ｆｕｎｇａｌ
ｐ（１，３）－Ｄ。ｇｌｕｃａｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓ・Ｍｅｄ
为了进一孝孽誊圭荸结论，．阐明青霉Ｔｓ６７菌
【８】Ｍ窦ｙｃｏ洁ｌ，２，０袁０１’墨ｊ篙‘自．丝状真菌的顶端生长及与细
胞壁关系研究进展．微生物杂志，１９９７，１７（３）：４６－５１．
［９１
Ｍ捌ｔｅｎｓ
ｅｍｐｈａｓｉｓ２２５—２２９．
ＪＡ，Ｂ。。ｇ袱怖ＭＡ．Ｆｕ：ｇａｌ
ｏｎ
ｃｅｌｌｗａｌｌｉｎｈｉｂｉｏｔｏ璐
青霉ＴＳ６７发酵活性产物分离纯化的基础上，分析
ｃｌｉｎｉｃａｌ觞ｐｃｃｔｓ．ＣｕｒｔＰｈａｒｍＤｅｓ，２０００。６（２）：
【１０】ＬｏｐｅｚＳＮ，ＣａｓｔｅｌｌｉＭＶ，ＺａｃｃｈｉｎｏＳＡ，甜ａｌ・Ｉｎｖｉｔｒｏａｎｔｉ＿
等之２ｕ。ａｆｔｉｏ。ｎｈａｌａｎ。。ｓ北ｔｒｕ尝三箸：＝１：ｏｎ然：ａ：
ｗｉｔｈ
ｉｎｈｉｂｔｏｒｙ
路和依据。ｌｏｇｕｅｓｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｇａｉｎｓｔｐｏｌｙｍｅｒｏｆｔｈｅ
参考文献篙器２。嚣ｗ８１１・肋。增删凸绷’２００１’纵８ｋ
【ｌ】胡
霞．苑艳辉，姚卫容，等．微生物农药发展概况．
［１１１田
黎，顾振芳，陈杰，等・海洋细菌Ｂ－９９８７菌株产
农药，２００５，４４（２）：４９－５２．
【２】ＢｙｎｎＧ，ＭｏｃｈｉｚｕｋｉＨ＇ＡｄａｃｈｉＭ，甜口１．Ｎｏｖｅｌ
ｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２００３，５６（２）：１０２－１０６・
【３】ＬｉｕＣＨ，ＬｉｕＪＹ，ＨｕａｎｇＬＬ，甜ａｌ・Ａｂｓｏｌｕｔｅｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ
ｏｆｋｅｉｓｓｌｏｎｅ，ａｅｒｉｅＵａＹｏ”ｒｎａｌ
ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ
ｄｉｋｅ．ｔｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｅｆｒｏｍｍａｒｉｎｅｆｕｎｇｕｓ．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ
生的抑菌物质及对几种植物病原真菌的作用・植物病理学报，２００３，３３（１）：７７—８０・【１２】屈海泳，罗
曼，蒋立科，等．＂１＂９０－１木霉菌的筛选和对
ｏｆＡｎ．
草莓灰霉病菌作用机制的研究．微生物学报，２００４，
ｍｅｔａｂｏｌｌｔｃｆｒｏｍｘＰｌ船。
ｎｅｗ雒ｎ衄。ｒｏｂｌａｌ
４４（２）：２４３—２４７．
ｓｐ．ＹＳ４１０８．ａｍａｒｉｎｅｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓｆｕｎｇｕｓ．Ｔｈｅ
…………一………。一’’。’
报，２００４，２４（６）：１０８８—１０９２．
一………’
ｏｆＰｌａｎｆＭｅｄｉｃｉ厅Ｐ，２００３．６９（５）：４８ｌ一４８３．
对植物病原菌的抑菌谱及拮抗机理初探．西北植物学
【４】赵斌，何绍江．微生物学实验．北京：科学出版社．
微生物学通报Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
ｔｏｎｇｂａｏ＠ｉｍ．ａｃ．ｃｎ
ＳＥＰ２０，２００８，３５（９）：１４０４－１４０８
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．ＣＡＳ
＠２００８ｂｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ
青霉ＴＳ６７菌株活性产物的抗真菌作用
王淑媛王素英‘涂敏勤
（天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点实验室
天津３００１３４）
摘要：本文初步探讨了青霉ＴＳ６７（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．）的发酵活性产物对植物病原真菌的抑制作用机理，实验结果表明，用其５０％的发酵液分别处理玉蜀黍平脐蠕孢菌（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ）和大豆尖孢镰刀茵（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）１２０ｈ后，菌丝生长的抑制率分别为７７．７８％和７０．３０％，对孢子产生的抑制率分别达５８．８％和７３．５％：同时发现用５０％发酵液处理病原茵的无性繁殖孢子１２ｈ后，孢子萌发抑制率分另０迭７８．３％和６２．Ｏ％。经显微镜观察抗菌活性物质处理后的菌丝体，发现菌丝体表面瘤状畸形、菌丝生长顶端不规则膨胀、内部发生原生质浓缩，初步推测青霉ＴＳ６７主要通过影响植物病原真菌的细胞壁而实现抑制作用。关键词：抑菌活性，机理
ＴｈｅＡｎｔｉｆｕｎｇａｌ
Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ＷＡＮＧ
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Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ
ＰｒｏｄｕｃｅｄｂｙＰｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．ＴＳ６７
ＷＡＮＧ
Ｓｈｕ—Ｙｕａｎ
Ｓｕ．Ｙｉｎｇ＋ＴＵ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｍｉｎ—Ｑｉｎ
（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏ肠删ａｎｄＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＴｍｎｆｉｎｏｆＣｏｍｍｅｒｃｅ，Ｔｍｎｊｉｎ３００１３４）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅａｎｔｉｆｕｎｇａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅＴＳ６７（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．）ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｂｉｏａｃｔｉｖｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｗａｓｉｎ—ｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｉｎｔｈｉｓＢｉｐｏｌａｒｉｓｍ鲫ｄ主ｓ
ｐａｐｅｒ．Ｔｈｅ
ａｎｄ
ｔｅｓｔ
ｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｍｙｃｅｆｉａｇｒｏｗｔｈ，ｓｐｏｒｅｓｆｏｒｍｉｎｇａｎｄ
ｓｐｏｒｅｓｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ
Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ
Ｃａｎ
ｂｅｉｎｈｉｂｉｔｉｅｄｂｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ，ａｆｔｅｒ５０％ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈ
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ｒｅａｃｈａｂｏｕｔ７７．７８％，７０．３０％，ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｏｆ
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ｓｐｏｒｅｓｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｗｅｒｅ
ｕｐｔｏ７８．３％，６２．０％，ｔｈｅｍｙｃｅｆｉａｕｎｄｅｒａｃｔｉｖｉｔｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｃｏｎｄｉｔｏｉｎｓａｌｓｏｇｒｏｗｉｎｇｐｏｉｎｔｅｘｐａｎｄｉｎｇｉｒｒｅｇｕｌａｒｌｙ，ｐｒｏｔｏｐｌａｓｍｉｃｃｏｎｄｅｓｉｎｇ，ｅｔｃ．Ｂａｓｅｄｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｔｈａｔａｃｔｉｖｉｔｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ
ｏｎ
ｓｈｏｗｅｄｓｕｒｆａｃｅｎｏｄｕｌａｔｉｏｎａｎｄ
ａ
ａｌｌｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓ．ｗｅｍａｙｄｒａｗｍａｙｂｅｔａｒｇｅｔａｔｆｕｎｇａｌｃｅｌｌｗａｌｌ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌａｃｔｉｖｉｔｙ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
随着现代农业的发展及人类对保护环境和生态认识的提高，作为生物防治重要内容的微生物农药，因具有来源广、成本低、易于降解、残留小、毒性低等特点，成为开发农用抗生素的重要途径和发展
方向‘¨。人们已经认识到海洋这一特殊生境造就了微生物种类及代谢途径特异性，可以产生大量有价值的完全不同于陆地微生物的新颖生物活性物质，海洋微生物将是今后获得新的农用抗生素的重要资
基金项目：天津市高等学校科技发展基金项目（Ｎｏ．２００４ｚｄ２０）
。通讯作者：Ｔｅｌ：０２２—８１７２０６２９；Ｆａｘ：０２２．２６６７５７８０；函：ｗｓｙｉｎｇ＠ｔｊｃｕ．ｅｄｕ．ｃｎ收稿日期：２００８．０１．１７：接受日期：２００８．０３．２１
王淑媛等：青霉Ｔ８６７菌株活性产物的抗真菌作用
源［２，３１。我国利用海洋微生物代谢产物研制农用抗生素的研究刚刚起步，且主要集中在黄海和东海海域。青霉ＴＳ６７（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．）分离自渤海近海海域水样，对玉蜀黍平脐蠕孢菌（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ）和大豆尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）具有很强的抑制作用，本实验拟在细胞水平上初步探讨该菌株发酵活性产物的抑菌机理。为该菌株的开发利用提供理论指导。
ｌ材料与方法
１．１实验材料
１．１．１菌种：青霉ＴＳ６７（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．）菌株分离自渤海近海海域水样。
植物病原真菌：玉蜀黍平脐蠕孢菌（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ）、大豆尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）为本实验室的保藏菌种。
１．１．２培养基：ＰＤＡ固体培养基，ＰＤＡ液体培养基见参考文献［４】。
海洋真菌发酵培养基：葡萄糖１０ｇ，蛋白胨２ｇ，
酵母膏１ｇ，蒸馏水４００ｍＬ，人工海水６００ｍＬ。１．２实验方法１．２．１青霉ＴＳ６７发酵液的制备：将青霉ＴＳ６７接种在ＰＤＡ固体培养基上，２８℃活化５ｄ，转接至含
５０
ｍＬ海洋真菌液体培养基的２５０ｍＬ三角瓶中，
２８。Ｃ、１７０
ｒ／ｒａｉｎ培养４
ｄ一５
ｄ，待发酵液的ｐＨ值降
为４．８～５．０时，终止发酵，并将得到的发酵液过滤除去菌丝体，收集上清液用０．２２ｌａｍ微孔滤膜过滤，制成无菌发酵液备用。
１．２．２
对病原真菌菌丝抑制作用的测定一菌落生长
法‘５】：将病原菌在ＰＤＡ固体平板上培养３ｄ形成单菌落，将发酵液用无菌水稀释成浓度为５０％、２５％、１２．５％的发酵液，然后分别取浓度为１００％、５０％、２５％、１２．５％发酵液和融化的５００ＣＰＤＡ培养基各
６
ｍＬ立即混匀倒平板，制成含有发酵液浓度为５０％、２５％、１２．５％、６．２５％的固体培养基，取直径
５
ｍｍ的菌块分别放于培养基中央，以加相同体积
的无菌水ＰＤＡ平板为对照，每个浓度重复３次，２８℃下培养，每隔２４ｈ采用十字交叉法，观察测定菌落直径，直至１２０ｈ，与对照菌落比较，计算菌丝生长抑制率。公式如下：
抑菌率＝（对照菌落直径一处理菌落直径），
对照菌落直径ｘ１００％
１４０５
１．２．３对病原菌形成无性孢子的影响：将上述培养
１２０
ｈ的病原菌菌落，用打孔器于距菌落边缘
３ｒａｍ一４
ｍｍ处打取菌块，放入试管内加入５ｍＬ蒸
馏水，将菌块上的孢子全部洗下，用血球计数板直接计数，每皿取２块，每个菌块计数３次，将６个观察数据平均，作为实验数据。
１．２．４
病原菌无性孢子萌发率的测定一悬滴法【５】：
将病原菌的孢子悬液与不同浓度的发酵液各１００止
混合，使发酵液的最终浓度为５０％、２５％、１２．５％、６．２５％，将２００ｌａＬ混合液置于凹玻片上，２８℃培养
１２
ｈ后在光学显微镜下观察孢子萌发的情况，每个
处理重复３次，随机取３个高倍镜视野下（每个视野下约１００个孢子）孢子萌发（以芽管长度超过孢子直径一半记为萌发）平均数，与对照比较，计算各处理的孢子萌发抑制率。公式如下：
孢子萌发抑制率＝（对照萌发率一处理萌发率），
对照萌发率×１００％
１．２．５对病原菌菌丝形态的影响：①将０．２ｍＬ病原菌孢子悬液接种到２．８ｍＬ的ＰＤＡ液体培养基中，２８℃恒温静止培养２４ｈ后，加入３．０ｍＬ不同浓度的发酵液使其终浓度分别为５０％、２５％、１２．５％，２８℃继续静止培养１２ｈ，光学显微镜下观测菌丝形态变化。②将玉蜀黍平脐蠕孢菌在ＰＤＡ固体平板上培养
３
ｄ，形成均匀的菌落后用５ｍｍ打孔器打取菌落边
缘均一的菌块作接种物，置于含５０％发酵液的ＰＤＡ固体培养基中央，以加相同体积的灭菌水ＰＤＡ固体培养基为对照，２８℃培养，于３ｄ和５ｄ分别取样用扫描电镜观察。
２结果与分析
２．１对菌丝生长的抑制作用
采用菌落生长法，测定了不同浓度的发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌菌丝生长的影响，结果见图１和图２。从图中可以看出：不同浓度的发酵液对两种病原菌菌丝的生长均有一定的抑制作用，且随着发酵液浓度的增加，抑菌效果明显增强。在含６．２５％发酵液的ＰＤＡ平板上，病原菌菌落的大小与对照无明显差异；在含１２．５％发酵液的ＰＤＡ平板上，前２４ｈ内菌落扩张较缓慢，４８ｈ后随着培养时间的延长，病原菌落直径与对照菌落的差异变小；在含２５％发酵液的ＰＤＡ平板上，病原菌菌落与对照菌落有明显的差异，且扩展缓慢；含５０％
１４０６
微生物学通报
２００８，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．９
发酵液ＰＤＡ平板上，病原菌菌落几乎不扩展，４８
ｈ
并且随着发酵液浓度减弱，对两种植物病真菌孢子产生抑制作用逐渐减弱。其中，５０％发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌孢子产生抑制率分别达５８．８％和７３．５％，可见发酵液中的活性产物不仅抑制病原菌菌丝的生长，更重要的是导致其产孢能力的下降，从而使病菌丧失侵染能力。
后开始缓慢扩展，菌落与对照有显著的差异。将图１和图２进行比较，可以看出发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌菌丝生长的抑制作用大于大豆尖孢镰刀菌，浓度为５０％的发酵液处理玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌１２０ｈ后，菌丝生长的抑制率分别为
７７．７８％和７０．３０％。
图２发酵液对大豆尖孢镰刀菌生长的影响
Ｆｉｇ．２
Ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｎ
ｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈｏｆＦｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ
图１
Ｆｉｇ．１
发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌生长的影响
Ｅｆｆｅｃｔｓ
Ｏｉｉ
ｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈｏｆＢｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ
孢子萌发实验结果表明：当培养达到１２ｈ时。对照组的孢子萌发率比较高，而经不同浓度发酵液处理的病原菌孢子的萌发均受到一定程度的抑制，浓度为５０％发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌孢子萌发抑制率分别为７８．３％和６２．Ｏ％，随着发酵液浓度的减少，抑菌作用降低，孢子萌发率上升，浓度为６．２５％的发酵液对孢子萌发的抑制作
用不明显。
２．２对病原菌形成无性孢子和孢子萌发的抑制作用
采用直接计数和悬滴法分别测定了青霉ＴＳ６７发酵液对病原菌无性孢子产生和孢子萌发的影响，实验结果见表ｌ。
由表１可知不同浓度的发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌孢子产生不同程度的影响，
王淑嫒等：青霉ＴＳ６７菌株活性产物的抗真菌作用
１４０７
２．３对菌丝形态的影响
２．３．１病原菌菌丝形态变化的光学显微镜观察：用油镜观察青霉ＴＳ６７菌株对病原菌菌丝形态的影响，发现用１２．５％的发酵液处理两种病原真菌１２ｈ后，菌丝生长缓慢，有的菌丝停止生长，菌丝表面有突起：用２５％发酵液处理１２ｈ后，两种病原菌菌丝体表面有许多瘤状畸形，尤其是对菌丝的顶端生长点有较大的影响，菌丝生长顶端严重的不规则膨胀，菌丝体内部出现原生质浓缩的现象：用５０％发酵液处理两种病原菌１２ｈ后均出现菌丝体断裂，菌丝体表面严重畸形；而未经发酵液处理的玉蜀黍平脐蠕孢菌和大豆尖孢镰刀菌菌丝粗细均匀，菌丝饱满，表面光滑，可见ＴＳ６７菌株的发酵活性产物一方面破坏细胞壁的结构而使菌丝形态发生显著的变化，另一方面通过影响细胞壁的形成而抑制病原菌的生长。２．３．２病原菌菌丝形态变化的扫描电镜观察：通过
扫描电镜观察发现未经发酵液处理的菌丝粗细均匀，菌丝饱满，表面光滑（见图ａ），而用发酵液处理过的菌丝较细，表面凹凸不平，菌丝整体粗细不均匀，发酵液处理３ｄ后，菌丝顶端出现皱缩，无规则卷曲（见图ｂ），菌丝局部膨大，并有断裂现象（见图ｃ），菌丝生长点出现畸变（见图ｄ），发酵液处理５ｄ后，菌丝大部分部位失水畸形（见图ｅ），菌丝不完整，出现严重断裂（见图Ｄ等现象，由此我们可以得出，ＴＳ６７菌株发酵液能够很好的抑制玉蜀黍平脐蠕孢菌的正常生长，并且进一步证实了ＴＳ６７菌株发酵活性产物对菌丝的生长点有较大的影响，出现菌丝生长顶端不规则膨胀以及皱缩。可能的原因是影响细胞壁的合成，使得真菌细胞壁厚薄不均匀，从而影响细胞膜的合成，改变细胞膜的通透性，从而破坏菌丝正常的生理代谢，并导致菌体出现皱缩或膨胀的现象ｆ６－８】。
图３
Ｆｉｇ．３
Ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｎ
不同浓度的发酵液对玉蜀黍平脐蠕孢菌菌丝的影Ｕ向（１００×）
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（１００×）
ｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈｏｆＢｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈ
图４
Ｆｉｇ．４
Ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｎ
不同浓度的发酵液对大豆尖孢镰刀菌菌丝的影响（１００×）
ｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈｏｆＦｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（１００ｘ）
３结论
通过上述系列实验，发现青霉ＴＳ６７菌株的液体发酵活性产物不仅能够有效抑制玉蜀黍平脐蠕孢菌（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓ）、大豆尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）的菌丝生长，无性孢子的形成和萌发，而且使菌丝体表面产生许多瘤状突起，菌丝局部严重膨大，并有断裂现象，菌丝生长点畸变，出现菌丝生长顶端膨胀，由此可见青霉ＴＳ６７菌株产生的
活性代谢产物是通过作用于病原真菌的细胞壁，使
ｌ物产性活株菌６０．９５１－Ｓ．等，荣德安，倩小慕，梅琦段】３１【
微生物学通禳
２００８，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．９
图５扫描电镜观察活性产物对玉蜀黍平脐蠕孢面团丝形态的影响（１８００ｘ）
ｍｙｃｅｌｉａｓｈａｐｅｏｆｂｙＢｉｐｏｌａｒｉｓｍａｙｄｉｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｕｎｄｅｒＳｃａｎｎｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（１８００ｘ）
ａ：正常菌丝；ｂ，ｃ，ｄ：５０％发酵液作用３ｄ：ｅ，ｆ：５０％发酵液作用５ｄ
Ｆｉｇ．５
ａ：Ｎｏｒｍａｌｍｙｃｅｌｉａ；ｂ，ｃ，ｄ：Ｕｎｄｅｒ５０％ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｆｏｒ３ｄ：ｅ，ＣＵｎｄｅｒ５０％ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｆｏｒ５ｄ
Ｅｆｆｅｃｔｓｏｎ
细胞壁变薄或失去完整性，造成细胞膜暴露，最后由于渗透压差导致原生质泄漏，最终导致病原菌死
２００２，ｐ．８．
【５】孔凡彬，高扬帆，陈锡岭，等・９种药剂对玉米小斑病菌
亡，这一结论与Ｍａｅｒｔｅｎｓ【９１和Ｃａｓｔｅｌｌｉ㈣在真菌细
胞壁机理研究中报道一致。另外田黎等‘１１１、屈海泳等［１２１和段琦梅等１１３１研究微生物胞外代谢产物对植物病原真菌拮抗机制的初步研究中均发现类似的现象，并推测其与病原真菌的细胞壁有关。
株发酵活性产物抑制植物病原菌的分子机制，将在其化学性质和化学结构，并利用高纯度的抗菌活性物质与病原真菌的不同细胞结构作用。以提出完整的抗菌机理，为青霉ＴＳ６７菌株的开发利用提供思
的室内抑菌试验・２００６，３７（２）：１４８—１４９・
［６１孙延忠・曾洪梅＇李国庆・抗生素对微生物作用的研究．
微生物学杂志，２００３，２３（３）：４４－４７・
【７】Ｄｏｕｇｌａｓ
ＣＭ・Ｆｕｎｇａｌ
ｐ（１，３）－Ｄ。ｇｌｕｃａｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓ・Ｍｅｄ
为了进一孝孽誊圭荸结论，．阐明青霉Ｔｓ６７菌
【８】Ｍ窦ｙｃｏ洁ｌ，２，０袁０１’墨ｊ篙‘自．丝状真菌的顶端生长及与细
胞壁关系研究进展．微生物杂志，１９９７，１７（３）：４６－５１．
［９１
Ｍ捌ｔｅｎｓ
ｅｍｐｈａｓｉｓ２２５—２２９．
ＪＡ，Ｂ。。ｇ袱怖ＭＡ．Ｆｕ：ｇａｌ
ｏｎ
ｃｅｌｌｗａｌｌｉｎｈｉｂｉｏｔｏ璐
青霉ＴＳ６７发酵活性产物分离纯化的基础上，分析
ｃｌｉｎｉｃａｌ觞ｐｃｃｔｓ．ＣｕｒｔＰｈａｒｍＤｅｓ，２０００。６（２）：
【１０】ＬｏｐｅｚＳＮ，ＣａｓｔｅｌｌｉＭＶ，ＺａｃｃｈｉｎｏＳＡ，甜ａｌ・Ｉｎｖｉｔｒｏａｎｔｉ＿
等之２ｕ。ａｆｔｉｏ。ｎｈａｌａｎ。。ｓ北ｔｒｕ尝三箸：＝１：ｏｎ然：ａ：
ｗｉｔｈ
ｉｎｈｉｂｔｏｒｙ
路和依据。ｌｏｇｕｅｓｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｇａｉｎｓｔｐｏｌｙｍｅｒｏｆｔｈｅ
参考文献篙器２。嚣ｗ８１１・肋。增删凸绷’２００１’纵８ｋ
【ｌ】胡
霞．苑艳辉，姚卫容，等．微生物农药发展概况．
［１１１田
黎，顾振芳，陈杰，等・海洋细菌Ｂ－９９８７菌株产
农药，２００５，４４（２）：４９－５２．
【２】ＢｙｎｎＧ，ＭｏｃｈｉｚｕｋｉＨ＇ＡｄａｃｈｉＭ，甜口１．Ｎｏｖｅｌ
ｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２００３，５６（２）：１０２－１０６・
【３】ＬｉｕＣＨ，ＬｉｕＪＹ，ＨｕａｎｇＬＬ，甜ａｌ・Ａｂｓｏｌｕｔｅｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ
ｏｆｋｅｉｓｓｌｏｎｅ，ａｅｒｉｅＵａＹｏ”ｒｎａｌ
ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ
ｄｉｋｅ．ｔｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｅｆｒｏｍｍａｒｉｎｅｆｕｎｇｕｓ．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ
生的抑菌物质及对几种植物病原真菌的作用・植物病理学报，２００３，３３（１）：７７—８０・【１２】屈海泳，罗
曼，蒋立科，等．＂１＂９０－１木霉菌的筛选和对
ｏｆＡｎ．
草莓灰霉病菌作用机制的研究．微生物学报，２００４，
ｍｅｔａｂｏｌｌｔｃｆｒｏｍｘＰｌ船。
ｎｅｗ雒ｎ衄。ｒｏｂｌａｌ
４４（２）：２４３—２４７．
ｓｐ．ＹＳ４１０８．ａｍａｒｉｎｅｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓｆｕｎｇｕｓ．Ｔｈｅ
…………一………。一’’。’
报，２００４，２４（６）：１０８８—１０９２．
一………’
ｏｆＰｌａｎｆＭｅｄｉｃｉ厅Ｐ，２００３．６９（５）：４８ｌ一４８３．
对植物病原菌的抑菌谱及拮抗机理初探．西北植物学
【４】赵斌，何绍江．微生物学实验．北京：科学出版社．