【中图分类号】R286 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2010)10-0181-02 【摘要】目的:采用正交实验法,以延胡索乙素的含量为指标,对延胡索产地加工和醋制方法进行优选。方法:采用高效液相色谱法测定延胡索供试品中延胡索乙素含量。结果:延胡索产地加工及醋制的最佳工艺条件是延胡索趁鲜切片4 mm,加醋量40%,在50℃下干燥。结论:验证实验表明,所选的最佳炮制工艺较为合理。 【关键词】延胡索;炮制;工艺 元胡为常用理气止痛药,具有活血、利气、止痛的功能,用于治胸胁、脘腹疼痛,经闭痛经,产后瘀阻,跌扑肿痛等症。历代对元胡的炮制有生用、炒、醋炙、酒炙、醋煮、盐炙等,现多采用醋炙、醋煮和醋蒸,部分地区沿用酒炙和盐炙。中医临床除用生品外,多用其醋制品,《中国药典》2005年版载有生元胡和醋元胡。古人总结用醋炮制元胡理论为“醋制入肝,增强止痛作用”,据报道,元胡醋制后有效成分及药效作用也确实增强。 传统的炮制方法工艺繁琐,实际应用费时费力,且加热会使元胡所含生物碱尤其是季铵碱类破坏,从而增加了有效成分流失和破坏的机会。我们以延胡索乙素作为指标性成分,对市售的醋制延胡索进行含量测定,发现其远远低于药典规定的标准。而且目前延胡索炮制工艺完全凭借经验,缺乏科学合理的标准化操作规范。� 1 仪器与试药 Waters 2695液相色谱仪,Waters 2996 PDA检测器,METTLER分析天平 (十万分之一),METTLER分析天平(万分之一)。 色谱纯甲醇(天津四友公司),娃哈哈纯净水,其他试剂均为分析纯。� 2 方法与结果 (1)实验设计将延胡索鲜品按照不同厚度切片,干燥后,按不同比例喷洒米醋,在不同温度下进行干燥,采用L9(34)正交实验表安排实验,通过对其中延胡索乙素含量的测定,筛选出延胡索产地加工炮制的最佳工艺条件。 根据预试验结果,确定以药材切片厚度、加醋量和干燥温度为考察因素,每个因素3个水平。 (2)样品的制备取延胡索原药材,抢水洗净,趁鲜切片,喷淋米醋,烘干,取出晾凉,筛去碎屑。 (3)延胡索乙素含量测定。对照品溶液的制备精密称定延胡索乙素对照品13 mg,置于250 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜滤过,配制成1 ml含延胡索乙素0.052 mg的对照品溶液。 供试品溶液的制备取样品约5g,精密称定,置平底烧瓶中,精密加入浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液500 ml,称定重量,冷浸1 h后加热回流1 h,放冷,再称定重量,用浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液补足减失重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25 ml,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液。 色谱条件色谱柱:Waters Xbridge ODSC18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液(三乙胺调pH值至6.0)(55∶45);检测波长:280 nm; 柱温25℃;流速:1.0 ml• min-1;柱温26 ℃。进样量:20 μl。 线性关系考察精密吸取延胡索乙素对照品溶液2,5,10,20,40 μl 分别注入高效液相色谱仪中,按上述色谱条件测定峰面积。以对照品进样浓度(mg/ml)为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程Y=8.02×105X+757,R=0.999 9。表明延胡索乙素在0.104～2.08 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。 重复性考察取同一样品5 g,精密称定,按上述色谱条件测定样品中延胡索乙素的峰面积,结果RSD为2.052%。 稳定性实验取同一供试品溶液,分别于0,1,2,4,8,12,24,36,48 h在上述色谱条件下进样分析。延胡索乙素的RSD为0.647%,结果表明供试品溶液在48 h内稳定。 加样回收率实验取已知含量的样品(样品4)2.5g,精密称定,精密加入对照品溶液10 ml(0.249 7 mg/ml),配制成加样的供试品溶液,在上述色谱条件下进样分析,计算回收率。 样品含量测定分别精密量取延胡索乙素对照品溶液和各供试品溶液进样,测定含量,色谱图见图1～2,以干燥品计算样品中延胡索乙素的含量。 空白列D项R值较小,作为误差项,由方差结果分析,因素A、B和C对实验结果都有显著影响,K3a>K1a>K2a,故A因素选择水平3,即选择切片厚度为4 mm;K3b>K1b>K2b,故B因素选择水平3,即选择喷醋量为40%;K3c>K2c>K1c,故因素C选择水平3,即干燥温度为70℃,但因水平3和水平2结果相差不大,考虑到实际生产,为节约能源,选择干燥温度为50℃。所以,最终确定延胡索最佳工艺为A3B3C2,即将延胡索在产地趁鲜切片4 mm,干燥后,加40%的米醋,在50℃下干燥。� 3 讨论 本研究针对延胡索传统的产地加工和醋炙方法的步骤繁琐,有效成分损失多的问题,以延胡索趁鲜切片厚度,加醋量和干燥温度为考察因素,以延胡索乙素的含量为指标,采用正交实验设计,优选出延胡索醋炙的最佳工艺,即将延胡索趁鲜切片4 mm,干燥后加40%的米醋,在50℃下干燥。按“2.2”项下的方法重复操作,测定延胡索乙素含量,对最佳工艺进行验证,结果延胡索乙素含量的RSD 操作中为使延胡索均匀吸入米醋,可采用定量米醋少量多次喷淋的方法,喷淋后将其用保鲜膜覆盖,防止米醋的挥发。醋炙后的饮片,晾凉后筛去碎屑,可采用塑料袋密封包装,防止饮片受潮影响炮制品的质量和含量的测定。 延胡索鲜品可采用枪水洗的方法除去外表泥沙,沥干水分即可趁鲜切片。鲜品贮藏过程中容易发芽,影响产品质量,所以实验室将其进行日晒,除去延胡索表皮的水分,这样就避免了发芽的现象,可供再次实验之用。 元胡饮片加工的传统法工艺繁琐,不仅浪费大量的时间和能源,还增加了有效成分流失和破坏的机会。改进的工艺方法是将产地加工和饮片的炮制加工过程同时完成,这样就减少了受热环节及有效成分的损失,简化了工艺,节省了人力、时间及能源,且炮制过程有具体可依据的工艺参数和质量控制方法,加工出的元胡饮片有效成分溶出率高于传统醋炙法,起到了增效的作用。对于其镇痛效果是否显著强于生品和市售品,将有待于进一步研究。 参考文献� [1] 刘冠军, 张丽华, 陈士兰. 元胡炮制沿革及现代研究[J]. 时珍国医国药, 1999, 10(7):524� [2] 胡庆龄.生制延胡索镇痛作用的比较[J]. 安徽医药, 2000,4 (2):48� [3] 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S]. 北京: 化学工业出版社, 2005:94�
【中图分类号】R286 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2010)10-0181-02 【摘要】目的:采用正交实验法,以延胡索乙素的含量为指标,对延胡索产地加工和醋制方法进行优选。方法:采用高效液相色谱法测定延胡索供试品中延胡索乙素含量。结果:延胡索产地加工及醋制的最佳工艺条件是延胡索趁鲜切片4 mm,加醋量40%,在50℃下干燥。结论:验证实验表明,所选的最佳炮制工艺较为合理。 【关键词】延胡索;炮制;工艺 元胡为常用理气止痛药,具有活血、利气、止痛的功能,用于治胸胁、脘腹疼痛,经闭痛经,产后瘀阻,跌扑肿痛等症。历代对元胡的炮制有生用、炒、醋炙、酒炙、醋煮、盐炙等,现多采用醋炙、醋煮和醋蒸,部分地区沿用酒炙和盐炙。中医临床除用生品外,多用其醋制品,《中国药典》2005年版载有生元胡和醋元胡。古人总结用醋炮制元胡理论为“醋制入肝,增强止痛作用”,据报道,元胡醋制后有效成分及药效作用也确实增强。 传统的炮制方法工艺繁琐,实际应用费时费力,且加热会使元胡所含生物碱尤其是季铵碱类破坏,从而增加了有效成分流失和破坏的机会。我们以延胡索乙素作为指标性成分,对市售的醋制延胡索进行含量测定,发现其远远低于药典规定的标准。而且目前延胡索炮制工艺完全凭借经验,缺乏科学合理的标准化操作规范。� 1 仪器与试药 Waters 2695液相色谱仪,Waters 2996 PDA检测器,METTLER分析天平 (十万分之一),METTLER分析天平(万分之一)。 色谱纯甲醇(天津四友公司),娃哈哈纯净水,其他试剂均为分析纯。� 2 方法与结果 (1)实验设计将延胡索鲜品按照不同厚度切片,干燥后,按不同比例喷洒米醋,在不同温度下进行干燥,采用L9(34)正交实验表安排实验,通过对其中延胡索乙素含量的测定,筛选出延胡索产地加工炮制的最佳工艺条件。 根据预试验结果,确定以药材切片厚度、加醋量和干燥温度为考察因素,每个因素3个水平。 (2)样品的制备取延胡索原药材,抢水洗净,趁鲜切片,喷淋米醋,烘干,取出晾凉,筛去碎屑。 (3)延胡索乙素含量测定。对照品溶液的制备精密称定延胡索乙素对照品13 mg,置于250 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜滤过,配制成1 ml含延胡索乙素0.052 mg的对照品溶液。 供试品溶液的制备取样品约5g,精密称定,置平底烧瓶中,精密加入浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液500 ml,称定重量,冷浸1 h后加热回流1 h,放冷,再称定重量,用浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液补足减失重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25 ml,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液。 色谱条件色谱柱:Waters Xbridge ODSC18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液(三乙胺调pH值至6.0)(55∶45);检测波长:280 nm; 柱温25℃;流速:1.0 ml• min-1;柱温26 ℃。进样量:20 μl。 线性关系考察精密吸取延胡索乙素对照品溶液2,5,10,20,40 μl 分别注入高效液相色谱仪中,按上述色谱条件测定峰面积。以对照品进样浓度(mg/ml)为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程Y=8.02×105X+757,R=0.999 9。表明延胡索乙素在0.104～2.08 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。 重复性考察取同一样品5 g,精密称定,按上述色谱条件测定样品中延胡索乙素的峰面积,结果RSD为2.052%。 稳定性实验取同一供试品溶液,分别于0,1,2,4,8,12,24,36,48 h在上述色谱条件下进样分析。延胡索乙素的RSD为0.647%,结果表明供试品溶液在48 h内稳定。 加样回收率实验取已知含量的样品(样品4)2.5g,精密称定,精密加入对照品溶液10 ml(0.249 7 mg/ml),配制成加样的供试品溶液,在上述色谱条件下进样分析,计算回收率。 样品含量测定分别精密量取延胡索乙素对照品溶液和各供试品溶液进样,测定含量,色谱图见图1～2,以干燥品计算样品中延胡索乙素的含量。 空白列D项R值较小,作为误差项,由方差结果分析,因素A、B和C对实验结果都有显著影响,K3a>K1a>K2a,故A因素选择水平3,即选择切片厚度为4 mm;K3b>K1b>K2b,故B因素选择水平3,即选择喷醋量为40%;K3c>K2c>K1c,故因素C选择水平3,即干燥温度为70℃,但因水平3和水平2结果相差不大,考虑到实际生产,为节约能源,选择干燥温度为50℃。所以,最终确定延胡索最佳工艺为A3B3C2,即将延胡索在产地趁鲜切片4 mm,干燥后,加40%的米醋,在50℃下干燥。� 3 讨论 本研究针对延胡索传统的产地加工和醋炙方法的步骤繁琐,有效成分损失多的问题,以延胡索趁鲜切片厚度,加醋量和干燥温度为考察因素,以延胡索乙素的含量为指标,采用正交实验设计,优选出延胡索醋炙的最佳工艺,即将延胡索趁鲜切片4 mm,干燥后加40%的米醋,在50℃下干燥。按“2.2”项下的方法重复操作,测定延胡索乙素含量,对最佳工艺进行验证,结果延胡索乙素含量的RSD 操作中为使延胡索均匀吸入米醋,可采用定量米醋少量多次喷淋的方法,喷淋后将其用保鲜膜覆盖,防止米醋的挥发。醋炙后的饮片,晾凉后筛去碎屑,可采用塑料袋密封包装,防止饮片受潮影响炮制品的质量和含量的测定。 延胡索鲜品可采用枪水洗的方法除去外表泥沙,沥干水分即可趁鲜切片。鲜品贮藏过程中容易发芽,影响产品质量,所以实验室将其进行日晒,除去延胡索表皮的水分,这样就避免了发芽的现象,可供再次实验之用。 元胡饮片加工的传统法工艺繁琐,不仅浪费大量的时间和能源,还增加了有效成分流失和破坏的机会。改进的工艺方法是将产地加工和饮片的炮制加工过程同时完成,这样就减少了受热环节及有效成分的损失,简化了工艺,节省了人力、时间及能源,且炮制过程有具体可依据的工艺参数和质量控制方法,加工出的元胡饮片有效成分溶出率高于传统醋炙法,起到了增效的作用。对于其镇痛效果是否显著强于生品和市售品,将有待于进一步研究。 参考文献� [1] 刘冠军, 张丽华, 陈士兰. 元胡炮制沿革及现代研究[J]. 时珍国医国药, 1999, 10(7):524� [2] 胡庆龄.生制延胡索镇痛作用的比较[J]. 安徽医药, 2000,4 (2):48� [3] 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S]. 北京: 化学工业出版社, 2005:94�