一 名词解释
细胞工程、生物工程、多能干细胞、继代培养、人工种子、看护培养、固定化培养、细胞两相培养、不对称融合、雄核发育。
二 填空
1 生物工程的六大组成：发酵工程、酶工程、蛋白质工程、基因工程、生物化学工程、细胞工程。
2 基因工程（DNA重组技术）的一般步骤：（1）目的基因的获得，（2）将目的基因与质粒重组，（3）将重组DNA引入到宿主细胞，（4）筛选能表达的目的基因。
3 细胞融合的方法，生物法：HVJ法；化学法：高Ca离子、高pH结合PEG诱导融合，NaNO3诱导；物理法：电融合法
4 病毒在植物体内的传播途径：通过维管系统和胞间连丝
5 动物细胞培养的传统方法：悬滴培养、灌注小室培养、转管培养、转瓶培养和培养板培养。
三 简答题
1、杂种细胞筛选方法：选择性培养基筛选法、遗传互补筛选法、抗性互补筛选法、利用物理特性筛选法、利用生长特性筛选法
2、有什么方法可以防止或缓解褐变？
当外植体处于机械损伤等逆境时，细胞膜的结构遭到破坏，酚酶催化多酚类化合物，使其发生氧化形成棕褐色的醌类物质和水；醌类物质经过非酶促聚合，形成黑褐色物质（羟醌和黑色素等），引起褐变的发生。
解决途径：（1）选择适宜的外植体
（2）选择适宜的培养条件（低盐、低pH、低温、弱光照）
（3）细胞筛选和材料预处理（黑暗条件下，5°C，12~14h）
（4）使用抑制剂和吸附剂（抗坏血酸、PVP、少量活性炭等）
（5）连续转移
3、胚状体同步发育方法及原理
（1）抑制剂法：在细胞培养初期加入细胞分裂抑制剂，去除抑制剂后细胞可同步发育。
（2）低温法：低温处理抑制细胞分裂，再恢复正常温度使细胞分裂同步化。
（3）渗透压法：不同发育时期的胚状体对渗透压的要求不同，用一定的渗透压使胚状体停止在某一阶段，然后再使其同步发育。
（4）通气法：细胞分裂旺盛时有大量气体（如乙烯）生成。可以通过在培养基中通入乙烯或氮气控制细胞同步分裂。
（5）分离筛选法：用不同孔径的筛网将不同发育时期的胚状体分离开来，也可以采用密度梯度离心法来选择不同发育时期的胚状体。
4、为什么用茎间做外植体能培养出脱毒苗？
茎尖培养脱毒的原理：病毒在感染植物上分布不一致，即在老叶片及成熟的组织和器官病毒含量较高，而幼嫩的及未成熟的组织和器官病毒含量较低，生长点（0.1~1mm区域）则几乎不含或很少。
茎尖（分生组织）无病毒可能存在的原因：
（1）在一个植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但分生组织中不存在维管束系统。
（2）病毒在细胞间移动的另一个途径是胞间连丝，然而，它的速度很慢，难以追上活跃生长的茎间。分生组织分化速度大于病毒传播速度。
（3）在茎尖中存在高水平的内源生长素，可抑制病毒的增殖。
5、生物反应器存在的问题？
植物细胞培养在放大培养时往往产量会比实验室摇瓶培养或小型反应器培养下降许多，次级
代谢产物合成能力也会下降许多，可能是由于以下因素引起的：
（1）通气和搅拌引起的流体压力易造成细胞损伤、有益气体的散失、大量泡沫的生成等，这些均会对细胞生长和产物积累产生影响。
（2）高密度引起培养液粘度增加，造成营养吸收、气体传递的抑制。
（3）反应器结构缺陷（如死角等）导致细胞黏附，引起细胞死亡、腐败以及营养和气体吸收限制等。
（4）对产物生物合成机制、途径等不了解，因此，很难维持最佳培养条件。
6、动物细胞体外培养有哪些类型？
（一）贴附型细胞
（1）成纤维型细胞 细胞大致呈梭形，多数细胞间排列松散，有较大的细胞间隙，起源于胚肺细胞。
（2）上皮型细胞 细胞扁平状，形态较为规则，排列紧密，呈“铺路石状”，起源于内胚层与外胚层的细胞。
（3）游走型细胞 外形不规则且不断变化，生长位置不固定。如具有吞噬作用的单核巨噬细胞系统的细胞。
（4）多形型细胞 形态不规则，一般分胞体和胞突两部分，如神经元和神经胶质细胞。
（二）非贴附型细胞（悬浮细胞）
细胞体外生长不必贴壁，密度较高，胞体始终为球形。如血液白细胞、淋巴组织细胞等。
四 论述题
1、细胞工程在林木培育中的应用与意义
（1）脱毒苗与快速繁殖：保持优良品种的遗传特性，高效快速地实现种苗的大量繁殖，从植物体上取材少，培养周期短，繁殖率高，便于自动化管理。
（2）植物特殊倍性创造：创造多倍体或单倍体诱导纯合正常植株，如无籽西瓜就是三倍体。
（3）体细胞杂交：把两亲本的优良性状组合在同一后代中，克服远缘杂交不亲和。
（4）次生产物生产：用于生物制药等，如人参皂甙、工业化生产紫杉醇等。
（5）基础研究：用于研究植物的生长特性和性状等。
（6）培育植物新品种：转基因植物的培育，如抗虫、抗病棉花。
2、细胞工程在给人们带来利益的同时也带来了不利（题目记不得了，大概是这个意思。从克隆方面讲）
3、什么叫组织培养？以烟草为例说明植物组织培养的步骤。
（1）准备工作：准备好培养基试剂以及要取材的烟草。
（2）培养基制备：按照培养基配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中→在搪瓷杯中加入所需水量，加热溶解→加琼脂溶化→用1N NaOH或1N HCl调至培养基规定的pH值→分装加塞→培养基灭菌→培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长→保存备用
（3）外植体制备：烟草外植体取材（烟草根、茎、叶均可）→自来水冲洗→70%酒精表面消毒20~60S→无菌水冲洗→消毒剂处理3~5次→无菌水充分冲洗3~5次→备用
（4）接种：消毒后，对外植体进行修剪、剪切，并接入培养基中。并标上日期。
（5）培养：培养条件一般控制在12小时光照，20±1℃。
（6）定期检查：定期检查烟草的培养情况，及时记录和处理污染的材料。
（7）移栽、炼苗：培养一段时间后的烟草需要经炼苗后才能正常种植。
一 名词解释
细胞工程、生物工程、多能干细胞、继代培养、人工种子、看护培养、固定化培养、细胞两相培养、不对称融合、雄核发育。
二 填空
1 生物工程的六大组成：发酵工程、酶工程、蛋白质工程、基因工程、生物化学工程、细胞工程。
2 基因工程（DNA重组技术）的一般步骤：（1）目的基因的获得，（2）将目的基因与质粒重组，（3）将重组DNA引入到宿主细胞，（4）筛选能表达的目的基因。
3 细胞融合的方法，生物法：HVJ法；化学法：高Ca离子、高pH结合PEG诱导融合，NaNO3诱导；物理法：电融合法
4 病毒在植物体内的传播途径：通过维管系统和胞间连丝
5 动物细胞培养的传统方法：悬滴培养、灌注小室培养、转管培养、转瓶培养和培养板培养。
三 简答题
1、杂种细胞筛选方法：选择性培养基筛选法、遗传互补筛选法、抗性互补筛选法、利用物理特性筛选法、利用生长特性筛选法
2、有什么方法可以防止或缓解褐变？
当外植体处于机械损伤等逆境时，细胞膜的结构遭到破坏，酚酶催化多酚类化合物，使其发生氧化形成棕褐色的醌类物质和水；醌类物质经过非酶促聚合，形成黑褐色物质（羟醌和黑色素等），引起褐变的发生。
解决途径：（1）选择适宜的外植体
（2）选择适宜的培养条件（低盐、低pH、低温、弱光照）
（3）细胞筛选和材料预处理（黑暗条件下，5°C，12~14h）
（4）使用抑制剂和吸附剂（抗坏血酸、PVP、少量活性炭等）
（5）连续转移
3、胚状体同步发育方法及原理
（1）抑制剂法：在细胞培养初期加入细胞分裂抑制剂，去除抑制剂后细胞可同步发育。
（2）低温法：低温处理抑制细胞分裂，再恢复正常温度使细胞分裂同步化。
（3）渗透压法：不同发育时期的胚状体对渗透压的要求不同，用一定的渗透压使胚状体停止在某一阶段，然后再使其同步发育。
（4）通气法：细胞分裂旺盛时有大量气体（如乙烯）生成。可以通过在培养基中通入乙烯或氮气控制细胞同步分裂。
（5）分离筛选法：用不同孔径的筛网将不同发育时期的胚状体分离开来，也可以采用密度梯度离心法来选择不同发育时期的胚状体。
4、为什么用茎间做外植体能培养出脱毒苗？
茎尖培养脱毒的原理：病毒在感染植物上分布不一致，即在老叶片及成熟的组织和器官病毒含量较高，而幼嫩的及未成熟的组织和器官病毒含量较低，生长点（0.1~1mm区域）则几乎不含或很少。
茎尖（分生组织）无病毒可能存在的原因：
（1）在一个植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但分生组织中不存在维管束系统。
（2）病毒在细胞间移动的另一个途径是胞间连丝，然而，它的速度很慢，难以追上活跃生长的茎间。分生组织分化速度大于病毒传播速度。
（3）在茎尖中存在高水平的内源生长素，可抑制病毒的增殖。
5、生物反应器存在的问题？
植物细胞培养在放大培养时往往产量会比实验室摇瓶培养或小型反应器培养下降许多，次级
代谢产物合成能力也会下降许多，可能是由于以下因素引起的：
（1）通气和搅拌引起的流体压力易造成细胞损伤、有益气体的散失、大量泡沫的生成等，这些均会对细胞生长和产物积累产生影响。
（2）高密度引起培养液粘度增加，造成营养吸收、气体传递的抑制。
（3）反应器结构缺陷（如死角等）导致细胞黏附，引起细胞死亡、腐败以及营养和气体吸收限制等。
（4）对产物生物合成机制、途径等不了解，因此，很难维持最佳培养条件。
6、动物细胞体外培养有哪些类型？
（一）贴附型细胞
（1）成纤维型细胞 细胞大致呈梭形，多数细胞间排列松散，有较大的细胞间隙，起源于胚肺细胞。
（2）上皮型细胞 细胞扁平状，形态较为规则，排列紧密，呈“铺路石状”，起源于内胚层与外胚层的细胞。
（3）游走型细胞 外形不规则且不断变化，生长位置不固定。如具有吞噬作用的单核巨噬细胞系统的细胞。
（4）多形型细胞 形态不规则，一般分胞体和胞突两部分，如神经元和神经胶质细胞。
（二）非贴附型细胞（悬浮细胞）
细胞体外生长不必贴壁，密度较高，胞体始终为球形。如血液白细胞、淋巴组织细胞等。
四 论述题
1、细胞工程在林木培育中的应用与意义
（1）脱毒苗与快速繁殖：保持优良品种的遗传特性，高效快速地实现种苗的大量繁殖，从植物体上取材少，培养周期短，繁殖率高，便于自动化管理。
（2）植物特殊倍性创造：创造多倍体或单倍体诱导纯合正常植株，如无籽西瓜就是三倍体。
（3）体细胞杂交：把两亲本的优良性状组合在同一后代中，克服远缘杂交不亲和。
（4）次生产物生产：用于生物制药等，如人参皂甙、工业化生产紫杉醇等。
（5）基础研究：用于研究植物的生长特性和性状等。
（6）培育植物新品种：转基因植物的培育，如抗虫、抗病棉花。
2、细胞工程在给人们带来利益的同时也带来了不利（题目记不得了，大概是这个意思。从克隆方面讲）
3、什么叫组织培养？以烟草为例说明植物组织培养的步骤。
（1）准备工作：准备好培养基试剂以及要取材的烟草。
（2）培养基制备：按照培养基配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中→在搪瓷杯中加入所需水量，加热溶解→加琼脂溶化→用1N NaOH或1N HCl调至培养基规定的pH值→分装加塞→培养基灭菌→培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长→保存备用
（3）外植体制备：烟草外植体取材（烟草根、茎、叶均可）→自来水冲洗→70%酒精表面消毒20~60S→无菌水冲洗→消毒剂处理3~5次→无菌水充分冲洗3~5次→备用
（4）接种：消毒后，对外植体进行修剪、剪切，并接入培养基中。并标上日期。
（5）培养：培养条件一般控制在12小时光照，20±1℃。
（6）定期检查：定期检查烟草的培养情况，及时记录和处理污染的材料。
（7）移栽、炼苗：培养一段时间后的烟草需要经炼苗后才能正常种植。