质量监控中国蜂业APICULTURE OF CHINA 2011年第62卷第1期
薄层色谱法测定蜂蜜中高果糖淀粉糖浆的改进研究
梁瑜1王圣义1邓劲松2吴辉1
（1湖北扬子江蜂业有限公司，武汉430070；2湖北生态职业技术学院，武汉430070）
摘要:本实验在GB/T18932.2-2002方法基础上，对样品前处理步骤做了改进。2g 蜂蜜样品溶液在用活性炭
SPE （固相萃取）柱上得到净化和分离，再浓缩，薄层展开，阳性样品显色后在Rf 值小于0.35的区域呈现蓝色带状斑点群。纯蜂蜜和含5%糖浆的蜂蜜作为监控样品与待测样品同步检测。实验结果表明：使用本改进方法可以得到与GB/T18932.2-2002方法相同的结果，而且可以极大地提高实验工作效率和极大地降低检测成本。
关键词:蜂蜜；活性炭SPE 空柱；高果糖淀粉糖浆；薄层色谱
1前言
高果糖淀粉糖浆由于高果糖浆颜色和味道与蜂蜜相似, 但其价格比蜂蜜便宜得多, 于是容易被掺入到蜂
有薄层色谱法、蜜中。检验蜂蜜中的高果糖淀粉糖浆，
同位素质谱法、气相色谱法、分光光度法、高效液相法
《蜂蜜中高果糖淀粉糖浆等[1]。采用GB/T18932.2-2002
由测定方法薄层色谱法》方法检测高果糖淀粉糖浆，于对设备和操作要求低，是一种比较好的有关蜂蜜产
品真实性要求[2]的筛选方法，适合于企业使用。本实验是在GB/T18932.2-2002方法的基础上，通过对其中样品前处理步骤进行改进，不但保证了结果的准确性，而且极大地节约了时间，降低了成本。2
仪器和试剂
SHB —III 循环水式多用真空泵、固相萃取装置（安
图1
制备的活性炭SPE 柱
3.2样品前处理方法
称取2g 蜂蜜样品，精确到1mg ，置于50ml 烧杯中，加入10ml 水溶解后，缓缓加入活性炭SPE 柱中，打开活栓，在真空泵的吸引下，使样品溶液以2秒/滴的速度通过柱子，待液面下降到柱面以上2mm 时，量取乙醇
溶液（7+93）25ml 加到柱中，以1秒/滴洗涤柱子，弃掉流出液。再加入乙醇（1+1）10ml 洗脱，洗脱液收集在10ml 的离心管中，将离心管中的洗脱液转移至50ml 茄形瓶中，用旋转蒸发器在80℃水浴中蒸干，加入0.3ml 水溶解后，作为薄层层析样液。3.3薄层层析
用10μl 微量注射器在距离薄层板下端2.0cm 的位置，点上6μ（l 3X2μl ）的点样液，同时水平距离2cm 点上经过同样处理的纯蜂蜜，含有5%、10%糖浆的蜂蜜标准液和5%糖浆溶液作为对照。把薄层板放入展开槽中，按照GB/T18932.2-2002方法进行展开和显色。3.4结果判定
按照GB/T18932.2-2002方法进行结果判定。3.5实验数据比较
3.5. 1展开谱图效果比较（见图2）3.5. 2填料用量、萃取剂用量和样品处理时间的比较（见表1、表2、表3）4结果与讨论
捷伦科技有限公司）、恒温干燥箱、旋转蒸发器、薄层色谱层开槽、微量注射器（10μl ）、电吹风机、25ml 玻璃喷雾器（华西医科大仪器厂）、SPEc1/16″—6筛板、500mg/6ml SPE 空柱（广州菲罗门科学仪器有限公司）、Darco G60活性炭、Celite 545硅藻土、乙醇溶液（7+93、1+1）、展开剂（正丁醇+乙酸+水=2+1+1）、显色剂（50ml 丙酮、
[3]
1g 二苯胺盐酸盐、1ml 苯胺、5ml 磷酸）、GF254硅胶板(200mmX200mm，膜厚0.15mm) （青岛硕远化工有限公司）。
3实验部分
3.1活性炭SPE 柱的制作方法
在SPE 空柱底部塞入一个筛板，压紧。称取硅藻土0.2g, 用蒸馏水混匀, 用一次性吸管移入SPE 柱管中, 自然沉降形成3mm 厚的硅藻土层, 然后称取活性炭0.5g, 加入10ml 水搅拌后, 倾入柱中, 打开真空泵, 使活性炭沉降, 当水面快到达活性炭层面时, 再次注入0.2g 用水混好的硅藻土。在真空泵的吸引下，以1秒/滴的速度用25ml 的水预洗活性炭SPE 柱，当液面到达柱面上2mm 时关掉活栓，备用。如图1：
2011Vol.62No.1中国蜂业APICULTURE OF CHINA 质量监控37
观察到，二者蓝色斑点的清晰度较为接近，对应斑点的Rf 值比较接近。这说明采用本改进方法可以取得与GB/T18932.2-2002方法接近的结果，不影响对蜂蜜中果葡糖浆的定性判断。
以测试一个样（使用一根柱子）计算，通过比较本改进方法与GB/T18932.2-2002方法，本改进方法可以极大地减少活性炭和硅藻土的使用量，本方法使用量为后者的5.6%，萃取剂使用量为后者的6.7%，前处理时间（指淋洗和浓缩步骤，不包括制柱步骤）为后者的50%。
在实际操作过程中，制柱步骤需要花费大量时间，每根玻璃柱的流速要做到一致很困难，而且玻璃层析柱在操作步骤以及清洗步骤很容易断裂，从而大量增加检测成本。本改进方法通过使用SPE 柱管，可以极大地降低检测成本和提高工作效率。5结论
本实验通过对GB/T18932.2-2002方法的样品前处理步骤进行改进，以活性炭SPE 柱替代玻璃层析柱，取得了和GB/T18932.2-2002方法相同的结果，并且极大地提高了工作效率和降低了检测成本。本改进方法可以被企业用于蜂蜜真实性要求的检验。
参考文献
[1]庞国芳，范春林，曹彦忠等. 蜂蜜中高果糖淀粉糖浆薄层色谱鉴2003，54（增刊），16-18. 别技术的研究. 中国养蜂，
[2]李子健，管春华，李晓栋等.GB18796-2005《蜂蜜》北京：中国标准出版社.2005,7.
[3]庞国芳，范春林，曹彦忠等.GB/T18932.2-2002《蜂蜜中高果糖. 北京：中国标准出版社.2003,3. 淀粉糖浆测定方法薄层色谱法》
图2左边为采用本改进研究方法所得谱图，右边为采用
GB/T18932.2方法所得谱图。谱图从左往右依次为：纯正蜂蜜、含5%糖浆蜂蜜、含10%糖浆蜂蜜、10%糖浆。
表1
活性炭
硅藻土
表2
填料用量的比较活性炭SPE 柱
0.5g 0.4g 萃取溶剂用量的比较
玻璃层析柱500ml 300ml 100ml 玻璃层析柱
6g 10g
活性炭SPE 柱
蒸馏水预洗用量25ml （7+93）乙醇溶液25ml （1+1）乙醇溶液10ml
表3
样品处理所需时间的比较(以一个样品计)
活性炭SPE 柱
70分钟10分钟
玻璃层析柱120分钟40分钟
淋洗过程浓缩过程
比较采用本改进方法与GB/T18932.2-2002方法所得谱图（见图2），二者在Rf 值0.35以下区域，含5%和10%糖浆蜂蜜与5%糖浆均有2个蓝色斑点，而纯正蜂蜜在Rf 值0.35以下区域没有蓝色斑点。从谱图中可以
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我患脚气多年，原来夏天比较严重，冬天较轻，现在冬夏一样。每个脚趾之间起水泡、发痒，最后抓破皮出血。医生说：“这是脚气。”吃药和服用其他偏方都不见效。有一位蜂农告诉我：“蜂胶可以治脚气。”我想：正好我家有蜂胶，那我就试一下。用后我觉得效果还不错，现介绍一下使用方法。
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陕西绥德县名州路，718000张亚利
蜂
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胶
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治脚
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先打一盆水，往水盆里倒5毫升的蜂胶酊，把脚洗
干净，用棉签蘸蜂胶酊在脚趾溃烂处擦一遍消毒，在脚趾破烂的地方贴一点蜂胶（最好用含量高的蜂胶），不用任何包扎，结果两天就不痒了。3天换一次蜂胶，更换时，要把原来的蜂胶洗净后再贴，反复多次，脚气再没有复发。
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气
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质量监控中国蜂业APICULTURE OF CHINA 2011年第62卷第1期
薄层色谱法测定蜂蜜中高果糖淀粉糖浆的改进研究
梁瑜1王圣义1邓劲松2吴辉1
（1湖北扬子江蜂业有限公司，武汉430070；2湖北生态职业技术学院，武汉430070）
摘要:本实验在GB/T18932.2-2002方法基础上，对样品前处理步骤做了改进。2g 蜂蜜样品溶液在用活性炭
SPE （固相萃取）柱上得到净化和分离，再浓缩，薄层展开，阳性样品显色后在Rf 值小于0.35的区域呈现蓝色带状斑点群。纯蜂蜜和含5%糖浆的蜂蜜作为监控样品与待测样品同步检测。实验结果表明：使用本改进方法可以得到与GB/T18932.2-2002方法相同的结果，而且可以极大地提高实验工作效率和极大地降低检测成本。
关键词:蜂蜜；活性炭SPE 空柱；高果糖淀粉糖浆；薄层色谱
1前言
高果糖淀粉糖浆由于高果糖浆颜色和味道与蜂蜜相似, 但其价格比蜂蜜便宜得多, 于是容易被掺入到蜂
有薄层色谱法、蜜中。检验蜂蜜中的高果糖淀粉糖浆，
同位素质谱法、气相色谱法、分光光度法、高效液相法
《蜂蜜中高果糖淀粉糖浆等[1]。采用GB/T18932.2-2002
由测定方法薄层色谱法》方法检测高果糖淀粉糖浆，于对设备和操作要求低，是一种比较好的有关蜂蜜产
品真实性要求[2]的筛选方法，适合于企业使用。本实验是在GB/T18932.2-2002方法的基础上，通过对其中样品前处理步骤进行改进，不但保证了结果的准确性，而且极大地节约了时间，降低了成本。2
仪器和试剂
SHB —III 循环水式多用真空泵、固相萃取装置（安
图1
制备的活性炭SPE 柱
3.2样品前处理方法
称取2g 蜂蜜样品，精确到1mg ，置于50ml 烧杯中，加入10ml 水溶解后，缓缓加入活性炭SPE 柱中，打开活栓，在真空泵的吸引下，使样品溶液以2秒/滴的速度通过柱子，待液面下降到柱面以上2mm 时，量取乙醇
溶液（7+93）25ml 加到柱中，以1秒/滴洗涤柱子，弃掉流出液。再加入乙醇（1+1）10ml 洗脱，洗脱液收集在10ml 的离心管中，将离心管中的洗脱液转移至50ml 茄形瓶中，用旋转蒸发器在80℃水浴中蒸干，加入0.3ml 水溶解后，作为薄层层析样液。3.3薄层层析
用10μl 微量注射器在距离薄层板下端2.0cm 的位置，点上6μ（l 3X2μl ）的点样液，同时水平距离2cm 点上经过同样处理的纯蜂蜜，含有5%、10%糖浆的蜂蜜标准液和5%糖浆溶液作为对照。把薄层板放入展开槽中，按照GB/T18932.2-2002方法进行展开和显色。3.4结果判定
按照GB/T18932.2-2002方法进行结果判定。3.5实验数据比较
3.5. 1展开谱图效果比较（见图2）3.5. 2填料用量、萃取剂用量和样品处理时间的比较（见表1、表2、表3）4结果与讨论
捷伦科技有限公司）、恒温干燥箱、旋转蒸发器、薄层色谱层开槽、微量注射器（10μl ）、电吹风机、25ml 玻璃喷雾器（华西医科大仪器厂）、SPEc1/16″—6筛板、500mg/6ml SPE 空柱（广州菲罗门科学仪器有限公司）、Darco G60活性炭、Celite 545硅藻土、乙醇溶液（7+93、1+1）、展开剂（正丁醇+乙酸+水=2+1+1）、显色剂（50ml 丙酮、
[3]
1g 二苯胺盐酸盐、1ml 苯胺、5ml 磷酸）、GF254硅胶板(200mmX200mm，膜厚0.15mm) （青岛硕远化工有限公司）。
3实验部分
3.1活性炭SPE 柱的制作方法
在SPE 空柱底部塞入一个筛板，压紧。称取硅藻土0.2g, 用蒸馏水混匀, 用一次性吸管移入SPE 柱管中, 自然沉降形成3mm 厚的硅藻土层, 然后称取活性炭0.5g, 加入10ml 水搅拌后, 倾入柱中, 打开真空泵, 使活性炭沉降, 当水面快到达活性炭层面时, 再次注入0.2g 用水混好的硅藻土。在真空泵的吸引下，以1秒/滴的速度用25ml 的水预洗活性炭SPE 柱，当液面到达柱面上2mm 时关掉活栓，备用。如图1：
2011Vol.62No.1中国蜂业APICULTURE OF CHINA 质量监控37
观察到，二者蓝色斑点的清晰度较为接近，对应斑点的Rf 值比较接近。这说明采用本改进方法可以取得与GB/T18932.2-2002方法接近的结果，不影响对蜂蜜中果葡糖浆的定性判断。
以测试一个样（使用一根柱子）计算，通过比较本改进方法与GB/T18932.2-2002方法，本改进方法可以极大地减少活性炭和硅藻土的使用量，本方法使用量为后者的5.6%，萃取剂使用量为后者的6.7%，前处理时间（指淋洗和浓缩步骤，不包括制柱步骤）为后者的50%。
在实际操作过程中，制柱步骤需要花费大量时间，每根玻璃柱的流速要做到一致很困难，而且玻璃层析柱在操作步骤以及清洗步骤很容易断裂，从而大量增加检测成本。本改进方法通过使用SPE 柱管，可以极大地降低检测成本和提高工作效率。5结论
本实验通过对GB/T18932.2-2002方法的样品前处理步骤进行改进，以活性炭SPE 柱替代玻璃层析柱，取得了和GB/T18932.2-2002方法相同的结果，并且极大地提高了工作效率和降低了检测成本。本改进方法可以被企业用于蜂蜜真实性要求的检验。
参考文献
[1]庞国芳，范春林，曹彦忠等. 蜂蜜中高果糖淀粉糖浆薄层色谱鉴2003，54（增刊），16-18. 别技术的研究. 中国养蜂，
[2]李子健，管春华，李晓栋等.GB18796-2005《蜂蜜》北京：中国标准出版社.2005,7.
[3]庞国芳，范春林，曹彦忠等.GB/T18932.2-2002《蜂蜜中高果糖. 北京：中国标准出版社.2003,3. 淀粉糖浆测定方法薄层色谱法》
图2左边为采用本改进研究方法所得谱图，右边为采用
GB/T18932.2方法所得谱图。谱图从左往右依次为：纯正蜂蜜、含5%糖浆蜂蜜、含10%糖浆蜂蜜、10%糖浆。
表1
活性炭
硅藻土
表2
填料用量的比较活性炭SPE 柱
0.5g 0.4g 萃取溶剂用量的比较
玻璃层析柱500ml 300ml 100ml 玻璃层析柱
6g 10g
活性炭SPE 柱
蒸馏水预洗用量25ml （7+93）乙醇溶液25ml （1+1）乙醇溶液10ml
表3
样品处理所需时间的比较(以一个样品计)
活性炭SPE 柱
70分钟10分钟
玻璃层析柱120分钟40分钟
淋洗过程浓缩过程
比较采用本改进方法与GB/T18932.2-2002方法所得谱图（见图2），二者在Rf 值0.35以下区域，含5%和10%糖浆蜂蜜与5%糖浆均有2个蓝色斑点，而纯正蜂蜜在Rf 值0.35以下区域没有蓝色斑点。从谱图中可以
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我患脚气多年，原来夏天比较严重，冬天较轻，现在冬夏一样。每个脚趾之间起水泡、发痒，最后抓破皮出血。医生说：“这是脚气。”吃药和服用其他偏方都不见效。有一位蜂农告诉我：“蜂胶可以治脚气。”我想：正好我家有蜂胶，那我就试一下。用后我觉得效果还不错，现介绍一下使用方法。
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陕西绥德县名州路，718000张亚利
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干净，用棉签蘸蜂胶酊在脚趾溃烂处擦一遍消毒，在脚趾破烂的地方贴一点蜂胶（最好用含量高的蜂胶），不用任何包扎，结果两天就不痒了。3天换一次蜂胶，更换时，要把原来的蜂胶洗净后再贴，反复多次，脚气再没有复发。
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