几种常用鉴别和选择培养基的配制
一、目的要求
了解选择培养基和鉴别培养基的配制原理。
学习和掌握马丁培养基、含氨苄青霉素的LB培养基及伊红美蓝琼脂培养基
的配制方法。
二、基本原理
马丁培养基及含氨苄青霉素的LB培养基两者均属选择培养基。马丁培养基
常用于从自然环境中分离真菌，培养基中的去氧胆酸钠和链霉素(30 u／m1)不是微生物的营养成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂，不仅防止霉菌菌丝蔓延，还可抑制G+细菌生长，而链霉素对多数G-细菌具抑制生长作用。所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响．从而达到分离真菌的目的。含氨苄青霉素的LB培养基在基因工程研究中常用于筛选具有氨苄青霉素抗性的菌株。培养基中含有一定浓度(100μg/ml培养基)的氨苄青霉素，它能杀死培养基中一切不抗氨苄青霉素的细菌，而只有对氨苄青霉素具有抗性的细菌才能正常生长繁殖，从而达到快速筛选氨苄青霉素抗性菌株的目的。
伊红美蓝琼脂培养基是一种鉴别培养基。常用于检查乳制品和饮用水中是否含有致病性的肠道细菌。培养基中的伊红为酸性染料，美蓝则为碱性染料。当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊红染色，再与美蓝结合生成紫黑色化合物。在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多，带负电荷，与美蓝结合，被染成蓝色菌落。
三、实验材料
(一)药品
葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O，胰蛋白胨，酵母提取物，NaCl、
乳糖、K2HP04 、伊红、美蓝、琼脂等。
(二)溶液
0.1％孟加拉红溶液、链霉素溶液(10000u／m1)、2％去氧胆酸钠溶液、氨苄青霉素溶液(25mg／m1)、2％伊红溶液、0.5％美蓝溶液、1mol/l NaOH、1mol/l HCl溶液等。
(三)仪器
天平、高压蒸汽灭菌锅等。
(四)玻璃器皿
移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
(五)其他物品
药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮
纸、报纸等。
四、实验内容
(一)马丁培养基的配制
1．培养基成分
葡萄糖 1g
蛋白胨 0.5g
KH2P04·3H2O 0.1g
MgSO4·7H2O 0.05g
0.1％孟加拉红溶液 0.33ml
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
2％去氧胆酸钠溶液 2ml（预先灭菌，临用前加入）
链霉素溶液(10000u／m1) 0.33ml（临用前加入）
自然pH
2．配制方法
(1)称量 称取培养基各成分的所需量。
(2)溶化 在烧杯中加入约2／3所需水量，然后依次逐一溶化培养基各成
分。按每100ml培养基加入0.33m1的0.1％孟加拉红溶液。
(3)定容 待各成分完全溶化后，补足水量至所需体积。
(4)加琼脂 加入所需琼脂量，加热融化，补足失水。
(5)分装、加塞、包扎。
(6)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(7)临用前，加热融化培养基，候冷至60℃左右，按每100 m1培养基无菌
操作加入2m1的2％去氧胆酸钠溶液及0.33m1的链霉素溶液(10000u／m1)，迅
速混匀。
(二)含氨苄青霉素的LB培养基的配制
1．培养基成分
胰蛋白胨 1g
酵母提取物 0.5g
NaCl 1g
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
氨苄青霉素溶液(25mg／m1) 0.4ml（临用前加入）
pH 7.0
2．配制方法
(1)称量 称取培养基各成分所需量，置于烧杯中。
(2)溶化 加入所需水量2／3的蒸馏水于烧杯中，搅拌使药品全部溶化。
(3)调PH。
(4)定容。
(5)加琼脂 融化并补足失水。
(6)分装、加塞、包扎。
(7)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(8)临用前，加热融化培养基，候冷至60 Dc左右，按每100mI培养基无菌操作加入0.4m1氨苄青霉素溶液(25mg／m1)，迅速混匀。
(三)伊红美蓝(EMB)培养基的配制
1．培养基成分
乳糖 1g
胰蛋白胨 0.5g
NaCl 0.5g
K2HP04 2g
2％伊红溶液 2ml
0.5％美蓝溶液 1ml
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
自然pH或 pH 7.2
2．配制方法
(1)称量 称取培养基各成分所需量
(2)溶化 在烧杯中加入约2／3所需水量、依次逐逐一溶化培养基各成分。
(3)定容。
(4)调pH。
(5)按每100 m1培养基加入2m12％伊红溶液和1ml0.5％美蓝溶液。
(6)加琼脂 加热融化并补足失水。
(7)分装、加塞、包扎。
(8)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
几种常用鉴别和选择培养基的配制
一、目的要求
了解选择培养基和鉴别培养基的配制原理。
学习和掌握马丁培养基、含氨苄青霉素的LB培养基及伊红美蓝琼脂培养基
的配制方法。
二、基本原理
马丁培养基及含氨苄青霉素的LB培养基两者均属选择培养基。马丁培养基
常用于从自然环境中分离真菌，培养基中的去氧胆酸钠和链霉素(30 u／m1)不是微生物的营养成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂，不仅防止霉菌菌丝蔓延，还可抑制G+细菌生长，而链霉素对多数G-细菌具抑制生长作用。所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响．从而达到分离真菌的目的。含氨苄青霉素的LB培养基在基因工程研究中常用于筛选具有氨苄青霉素抗性的菌株。培养基中含有一定浓度(100μg/ml培养基)的氨苄青霉素，它能杀死培养基中一切不抗氨苄青霉素的细菌，而只有对氨苄青霉素具有抗性的细菌才能正常生长繁殖，从而达到快速筛选氨苄青霉素抗性菌株的目的。
伊红美蓝琼脂培养基是一种鉴别培养基。常用于检查乳制品和饮用水中是否含有致病性的肠道细菌。培养基中的伊红为酸性染料，美蓝则为碱性染料。当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊红染色，再与美蓝结合生成紫黑色化合物。在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多，带负电荷，与美蓝结合，被染成蓝色菌落。
三、实验材料
(一)药品
葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O，胰蛋白胨，酵母提取物，NaCl、
乳糖、K2HP04 、伊红、美蓝、琼脂等。
(二)溶液
0.1％孟加拉红溶液、链霉素溶液(10000u／m1)、2％去氧胆酸钠溶液、氨苄青霉素溶液(25mg／m1)、2％伊红溶液、0.5％美蓝溶液、1mol/l NaOH、1mol/l HCl溶液等。
(三)仪器
天平、高压蒸汽灭菌锅等。
(四)玻璃器皿
移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
(五)其他物品
药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮
纸、报纸等。
四、实验内容
(一)马丁培养基的配制
1．培养基成分
葡萄糖 1g
蛋白胨 0.5g
KH2P04·3H2O 0.1g
MgSO4·7H2O 0.05g
0.1％孟加拉红溶液 0.33ml
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
2％去氧胆酸钠溶液 2ml（预先灭菌，临用前加入）
链霉素溶液(10000u／m1) 0.33ml（临用前加入）
自然pH
2．配制方法
(1)称量 称取培养基各成分的所需量。
(2)溶化 在烧杯中加入约2／3所需水量，然后依次逐一溶化培养基各成
分。按每100ml培养基加入0.33m1的0.1％孟加拉红溶液。
(3)定容 待各成分完全溶化后，补足水量至所需体积。
(4)加琼脂 加入所需琼脂量，加热融化，补足失水。
(5)分装、加塞、包扎。
(6)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(7)临用前，加热融化培养基，候冷至60℃左右，按每100 m1培养基无菌
操作加入2m1的2％去氧胆酸钠溶液及0.33m1的链霉素溶液(10000u／m1)，迅
速混匀。
(二)含氨苄青霉素的LB培养基的配制
1．培养基成分
胰蛋白胨 1g
酵母提取物 0.5g
NaCl 1g
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
氨苄青霉素溶液(25mg／m1) 0.4ml（临用前加入）
pH 7.0
2．配制方法
(1)称量 称取培养基各成分所需量，置于烧杯中。
(2)溶化 加入所需水量2／3的蒸馏水于烧杯中，搅拌使药品全部溶化。
(3)调PH。
(4)定容。
(5)加琼脂 融化并补足失水。
(6)分装、加塞、包扎。
(7)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(8)临用前，加热融化培养基，候冷至60 Dc左右，按每100mI培养基无菌操作加入0.4m1氨苄青霉素溶液(25mg／m1)，迅速混匀。
(三)伊红美蓝(EMB)培养基的配制
1．培养基成分
乳糖 1g
胰蛋白胨 0.5g
NaCl 0.5g
K2HP04 2g
2％伊红溶液 2ml
0.5％美蓝溶液 1ml
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
自然pH或 pH 7.2
2．配制方法
(1)称量 称取培养基各成分所需量
(2)溶化 在烧杯中加入约2／3所需水量、依次逐逐一溶化培养基各成分。
(3)定容。
(4)调pH。
(5)按每100 m1培养基加入2m12％伊红溶液和1ml0.5％美蓝溶液。
(6)加琼脂 加热融化并补足失水。
(7)分装、加塞、包扎。
(8)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。