实验32 土壤中农药残留量的测定——气相色谱法
一、
（1）
（2）
（3）
二、 目的和要求 了解从土样中提取有机氯农药的方法。 掌握气象色谱法的定性、定量方法。 通过实验，初步了解气象色谱仪的结构及操作技术。 原理
六六六农药有7种顺、反异构体（α、β、γ、δ、ε、η、和θ也称甲体、乙体、丙体、丁体、戊体、己体和庚体）。一般只检测前4种异构体。它们的物理化学性质稳定，不易分解，且具有水溶性低、脂溶性高、在有机溶剂中分配系数大的特点，因此，本法采用的有机溶剂提取，浓硫酸纯化以消除或减少对分析的干扰，然后用电子捕获检测器进行检测。用标准化合物的保留时间定性，用峰高外标法定量。
三、 仪器与试剂
（1） 附有电子捕获检测器的气象色谱仪。
（2） 水分快速测定仪。
（3） 250mL 脂肪提取器。
（4） 微量注射器。
（5） 石油醚。沸程为60~90℃，重蒸馏，色谱进样无干扰峰。
（6） 丙酮。重蒸馏，色谱进样无干扰峰。
（7） 无水硫酸钠。300℃烘4h 后，干燥备用。
（8） 2%无水硫酸钠。
（9） 30~80木硅藻土（celite ）。
（10） 脱脂棉。用石油醚回流4h 后，干燥备用。
（11） 滤纸筒。适当大小滤纸用石油醚回流4h 后，干燥做成筒状。
（12） α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六标准液。将色谱纯α-六六六、
β-六六六、γ-六六六、δ-六六六用石油醚配制成200mg/L的储备液，石油醚配制成适当浓度的使用标准液。注意在配制β-六六六标准液时，先用少量苯溶液。
四、 实验步骤
1. 土样的提取
称取经风干过60目筛的土壤20.00g （另取10.00g 测定水分含量）置于小烧杯中，加2mL 水，4g 硅藻土，充分混合后，全部移入滤纸筒内，上部盖一滤纸，移入脂肪提取器中。加入80mL （1:1）石油醚—丙酮混合液浸泡12h 后，加热回流提取4h 。回流结束后，使脂肪提取器上部有积聚的溶剂。待冷却后将提取液移入500mL 分液漏斗中，用脂肪提取器上部溶液分3次冲洗提取器烧杯，将洗涤液并入分液漏斗中。向分液漏斗中加入300mL2%硫酸钠水溶液，振摇2min ，静止分层后，弃去下层丙酮水溶液，上层石油醚提取液供纯化用。
2. 纯化
在盛有石油醚提取液的分液漏斗中，加入6mL 浓硫酸，开始轻轻振摇，并不断将分液漏斗中因受热释放的气体放出。以防压力太大引起爆炸，然后剧烈振摇1min 。静止分层后弃去下部硫酸层。用硫酸纯化数次，视提取液中杂质多少而定，一般1~3次，然后加入100mL2%硫酸钠水溶液，振摇洗去石油醚中残存的硫酸。静止分层后，弃去下部水相。上层石油醚提取液通过铺有1cm 厚的无水硫酸钠层的漏斗（漏斗下部用脱脂棉支撑无水硫酸钠），脱水后的石油醚收集于50mL 容量瓶中，无水硫酸钠层用少量石油醚洗涤2~3次。洗涤液也收集于上述容量瓶中，加石油醚稀释至刻度，供色谱测定。
3. 气象色谱测定
1） 分析条件
检测器：电子捕获检测器
色谱柱;DB-5毛细管柱，长30cm 。
柱箱温度：初始温度为60℃，以20℃/min升温至180℃，再以10℃/min升温速率升至240℃。
汽化室温度：250℃。
检测器温度：300℃。
载气：氦气。
2） 色谱分析
首先用微量进样器从进口定量注入各六六六标准样，各2次。记录进样量、保留时间及峰高或面积，计算时用平均值。再用同样的方法对样品进行进样分析，并进行记录。
五、 数据处理
（1） 以表格形式记录色谱的操作条件和标准样测试结果。
（2） 以表格形式记录土样测定结果，并按下下列公式计算六六六各异构体的量。
c 样(μg /kg )=H 样⨯C 标⨯Q 标H 标⨯Q 样⨯R ⨯K
式中：c 样——样品中六六六的含量，μg /kg
H 样——样品中相应峰的高度，mm ；
H 标——标准溶液峰高，mm ；
C 标——标准溶液浓度，μg /L ；
Q 标——标准溶液进样量，5μL ；
Q 样——样品进样量，5μL ； K ——样品提取液的体积相当于样品的质量，kg /L ，本法中
K =20. 00⨯(1-M ) 50
六、 注意事项
（1） 进样量要准确，进样动作要迅速，每次进样后，注射器一定要用石油醚洗净，最好
用氮气流冲干净，避免样品互相污染，影响测定结果。
（2） 纯化时出现乳化现象可采用过滤、离心或反复滴液的方法解决。
（3） 如果土样中六六六异构体浓度较低，则纯化的石油醚提取液用K-D 液浓缩器浓缩至
相应体积。
（4） 相应化合物的添加回收率，可用相应浓度的该化合物表样添加到土样中测定。 R ——相应化合物的添加回收率，%； M ——土壤中水分的质量百分数，%；
实验32 土壤中农药残留量的测定——气相色谱法
一、
（1）
（2）
（3）
二、 目的和要求 了解从土样中提取有机氯农药的方法。 掌握气象色谱法的定性、定量方法。 通过实验，初步了解气象色谱仪的结构及操作技术。 原理
六六六农药有7种顺、反异构体（α、β、γ、δ、ε、η、和θ也称甲体、乙体、丙体、丁体、戊体、己体和庚体）。一般只检测前4种异构体。它们的物理化学性质稳定，不易分解，且具有水溶性低、脂溶性高、在有机溶剂中分配系数大的特点，因此，本法采用的有机溶剂提取，浓硫酸纯化以消除或减少对分析的干扰，然后用电子捕获检测器进行检测。用标准化合物的保留时间定性，用峰高外标法定量。
三、 仪器与试剂
（1） 附有电子捕获检测器的气象色谱仪。
（2） 水分快速测定仪。
（3） 250mL 脂肪提取器。
（4） 微量注射器。
（5） 石油醚。沸程为60~90℃，重蒸馏，色谱进样无干扰峰。
（6） 丙酮。重蒸馏，色谱进样无干扰峰。
（7） 无水硫酸钠。300℃烘4h 后，干燥备用。
（8） 2%无水硫酸钠。
（9） 30~80木硅藻土（celite ）。
（10） 脱脂棉。用石油醚回流4h 后，干燥备用。
（11） 滤纸筒。适当大小滤纸用石油醚回流4h 后，干燥做成筒状。
（12） α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六标准液。将色谱纯α-六六六、
β-六六六、γ-六六六、δ-六六六用石油醚配制成200mg/L的储备液，石油醚配制成适当浓度的使用标准液。注意在配制β-六六六标准液时，先用少量苯溶液。
四、 实验步骤
1. 土样的提取
称取经风干过60目筛的土壤20.00g （另取10.00g 测定水分含量）置于小烧杯中，加2mL 水，4g 硅藻土，充分混合后，全部移入滤纸筒内，上部盖一滤纸，移入脂肪提取器中。加入80mL （1:1）石油醚—丙酮混合液浸泡12h 后，加热回流提取4h 。回流结束后，使脂肪提取器上部有积聚的溶剂。待冷却后将提取液移入500mL 分液漏斗中，用脂肪提取器上部溶液分3次冲洗提取器烧杯，将洗涤液并入分液漏斗中。向分液漏斗中加入300mL2%硫酸钠水溶液，振摇2min ，静止分层后，弃去下层丙酮水溶液，上层石油醚提取液供纯化用。
2. 纯化
在盛有石油醚提取液的分液漏斗中，加入6mL 浓硫酸，开始轻轻振摇，并不断将分液漏斗中因受热释放的气体放出。以防压力太大引起爆炸，然后剧烈振摇1min 。静止分层后弃去下部硫酸层。用硫酸纯化数次，视提取液中杂质多少而定，一般1~3次，然后加入100mL2%硫酸钠水溶液，振摇洗去石油醚中残存的硫酸。静止分层后，弃去下部水相。上层石油醚提取液通过铺有1cm 厚的无水硫酸钠层的漏斗（漏斗下部用脱脂棉支撑无水硫酸钠），脱水后的石油醚收集于50mL 容量瓶中，无水硫酸钠层用少量石油醚洗涤2~3次。洗涤液也收集于上述容量瓶中，加石油醚稀释至刻度，供色谱测定。
3. 气象色谱测定
1） 分析条件
检测器：电子捕获检测器
色谱柱;DB-5毛细管柱，长30cm 。
柱箱温度：初始温度为60℃，以20℃/min升温至180℃，再以10℃/min升温速率升至240℃。
汽化室温度：250℃。
检测器温度：300℃。
载气：氦气。
2） 色谱分析
首先用微量进样器从进口定量注入各六六六标准样，各2次。记录进样量、保留时间及峰高或面积，计算时用平均值。再用同样的方法对样品进行进样分析，并进行记录。
五、 数据处理
（1） 以表格形式记录色谱的操作条件和标准样测试结果。
（2） 以表格形式记录土样测定结果，并按下下列公式计算六六六各异构体的量。
c 样(μg /kg )=H 样⨯C 标⨯Q 标H 标⨯Q 样⨯R ⨯K
式中：c 样——样品中六六六的含量，μg /kg
H 样——样品中相应峰的高度，mm ；
H 标——标准溶液峰高，mm ；
C 标——标准溶液浓度，μg /L ；
Q 标——标准溶液进样量，5μL ；
Q 样——样品进样量，5μL ； K ——样品提取液的体积相当于样品的质量，kg /L ，本法中
K =20. 00⨯(1-M ) 50
六、 注意事项
（1） 进样量要准确，进样动作要迅速，每次进样后，注射器一定要用石油醚洗净，最好
用氮气流冲干净，避免样品互相污染，影响测定结果。
（2） 纯化时出现乳化现象可采用过滤、离心或反复滴液的方法解决。
（3） 如果土样中六六六异构体浓度较低，则纯化的石油醚提取液用K-D 液浓缩器浓缩至
相应体积。
（4） 相应化合物的添加回收率，可用相应浓度的该化合物表样添加到土样中测定。 R ——相应化合物的添加回收率，%； M ——土壤中水分的质量百分数，%；