常用试剂的配制
1．无Ca2+、Mg2+Hanks液
NaCl 4.5g
KCl 0.2g NaHCO3 0.175g Na2HPO4·12H2O 0.076g KH2PO4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml
将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO3 调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。
2．甲基红试剂 （1）成份
甲基红 0.1g 95％乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。
蒸馏水 200ml
3．Hanks液（原液）
原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO4·7H2O 2g MgCl2·6H2O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl2 2.8g溶于100ml双蒸水
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na2NPO4·12H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。
使用时甲,乙原液按下列比例配成 Hanks 液 使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO3调整PH值。
4．0.4%酚红溶液
称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒
几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。
5．pH7.2 Tris-NH4CI溶液(红细胞崩解液）
Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH4Cl（氯化氨) 3.735g 6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液
巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解
巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。 7．磷酸盐缓冲液 (PB)
A 液： 为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH2PO4 · H2O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最后补加蒸馏水至 1000ml 。
B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na2HPO4.7H2O 3.6g（或 Na2HPO4·12H2O
71.6g, 或Na2HPO4 · 2H2O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加蒸8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS）
硼酸钠（Na2B4O7.10H2O） 0.46g 硼酸（H2BO3） 0.51g
加蒸馏水至100ml 溶解。
9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS） 配制方法一：
0.2mol/L Na2HPO4（ Na2HPO4·12H2O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH2PO4（NaH2PO4·2H2O 35.6g加蒸馏水至1000ml） 取0.2mol/L Na2HPO4 81.0ml 加0.2mol/L NaH2PO4 19ml,再加1900mlH2O和17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。
PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。 配制方法二：
甲液（0.1mol/LKH2PO4溶液）：KH2PO413.608g，加蒸馏水至1000ml。 乙液（0.1mol/L Na2HPO4溶液）：Na2HPO435.814g，加蒸馏水至1000ml。
取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。
加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。
再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。
10．0.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液
Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g 加蒸馏水至1000ml。ELISA实验包被用。
11．0.01mol/L pH7.4 PBS内含2%BSA（牛血清白蛋白）
取BSA2ml加0.01mol/L pH7.4PBS至100ml即可。ELISA实验封闭用。 12．PH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。
0.2mol/L Na2PO4(28.4g/L) 25.7ml
0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L) 24.5ml
加蒸馏水至100ml即为pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。 13．底物溶液
pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液加入邻苯二胺1mg/ml，再加入30%的H2O2 (1μl/ml)溶解后即为ELISA底物液，临用前配制，避光保存。
14．2mol/L硫酸
浓H2SO4（36N）取 1ml36N的H2SO4缓缓加入18 ml蒸馏水内即为2mol/L，用于ELISA实验终止反应。
15．清洁液的配制
清洁液分高、中、低液三种。 低浓度清洁液
重铬酸钾 100g 水 750ml 硫酸 250ml 中浓度清洁液
重铬酸钾 60g
水 300ml 硫酸 460ml 高浓度清洁液
重铬酸钾 100g 水 200ml 硫酸 800ml
先将重铬酸钾倒入自来水中，然后加入浓硫酸，边加硫酸边用玻璃棒搅拌。由于加入浓硫酸后产生高热，故加酸时要慢，溶器应用耐酸耐高温塑料或陶器制品。
配制好的清洁液，应存于有盖的玻璃溶器内。需要浸泡的玻璃器皿一定要干燥，如
果清洁液经过长期使用已呈黑色，表明已经失效，不宜再用。由于清洁液有强腐蚀性，故操作时要十分注意。
16．PH6.4 l/l5mol/ml磷酸盐缓冲盐水（PBS）： （1）l/l5mol/ml 磷酸二氢钾溶液
KH2PO4 9.04g 蒸馏水 加至1000ml （2）l/l5mol/ml 磷酸氢二钠溶液
Na2HPO4·2H2 O 11.87g （或 Na2HPO4·l2H2 O 23.86g 蒸馏水 加至1000ml （3）PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸盐缓冲盐水（PBS）
l/l5mol/ml磷酸二氢钾溶液 73ml l/l5mol/ml磷酸氢二钠溶液 27ml NaCl 0.5g
混匀溶解即可。
17．柯氏试剂(靛基质试剂) （1）成份
纯戊醇 150ml 浓盐酸 50ml
对二甲基氨基苯甲醛 10g
（2）制法：将对二甲基氨基苯甲醛加入纯戊醇内，使其溶解。将浓盐酸一滴滴慢慢加入，边加边摇，不能加得太快，以致温度升高溶液颜色变深。 （3）用途：测定细菌能否产生吲哚。
一、玻璃仪器的洗涤方法 1.洁净剂及其使用范围
最常用的洁净剂有肥皂、合成洗涤剂（如洗衣粉）、洗液（清洁液）、有机溶剂等。
肥皂、合成洗涤剂等一般用于可以用毛刷直接刷洗的仪器，如烧瓶、烧杯、试剂瓶等非计量及非光学要求的玻璃仪器。
肥皂、合成洗涤剂也可用于滴定管、移液管、量瓶等计量玻璃仪器的洗涤，但不能用毛刷刷洗。
洗液多用于不能用毛刷刷洗的玻璃仪器，如滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗、凯氏烧瓶等特殊要求与形状的玻璃仪器；也用于洗涤长久不用的玻璃仪器和毛刷刷不下的污垢。 2.洗液的配制及说明 铬酸清洁液的配制：
处方1 处方2 重铬酸钾（钠） 10g 200g
纯化水 10ml 100ml（或适量） 浓硫酸 100ml 1500ml
制法：称取处方量之重铬酸钾，于干燥研钵中研细，将此细粉加入盛有适量水的玻璃容器内，加热，搅拌使溶解，待冷后，将此玻璃容器放在冷水浴中，缓慢将浓硫酸断续加入，不断搅拌，勿使温度过高，容器内容物颜色渐变深，并注意冷却，直至加完混匀，即得。
说明：（1）硫酸遇水能产生强烈放热反应，故须等重铬酸钾溶液冷却后，再将硫酸缓缓加入，边加边搅拌，不能相反操作，以防发生爆炸。
（2）清洁液专供清洁玻璃器皿之用，它能去污去热原的作用的原因为本品具有强烈的氧化作用。重铬酸钾与浓硫酸相遇时产生具有强氧化作用的铬酐： K2CrO7＋H2SO4→H2CrO7＋K2SO4 ↓
2CrO3＋H2O→Cr2O3＋3[O]
浓硫酸是一个含氧酸，在高浓度时具有氧化作用，加热时作用更为显著： H2SO4→H2O＋SO2＋[O] Δ
K2CrO7＋3SO2＋H2SO4→Cr2（SO4）3＋K2SO4＋H2O
（3）铬酸的清洁效力之大小，决定于反应中产生铬酐（CrO3）的多少及硫酸浓度之大小。铬酐越多，酸越浓，清洁效力越好。
（4）用清洁液清洁玻璃仪器之前，最好先用水冲洗仪器，洗取大部分有机物，尽可能仪器空干，这样可减少清洁液消耗和避免稀释而降效。
（5）本品可重复使用，但溶液呈绿色时已失去氧化效力，不可再用，但能更新再用。 更新方法：取废液滤出杂质，不断搅拌缓慢加入高锰酸钾粉末，每升约6～8g，至反应完毕，溶液呈棕色为止。静置使沉淀，倾取上清液，在160℃以下加热，使水分蒸发，得浓稠状棕黑色液，放冷，再加入适量浓硫酸，混匀，使析出的重铬酸钾溶解，备用。 （6）硫酸具有腐蚀性，配制时宜小心。
（7）用铬酸清洁液洗涤仪器，是利用其与污物起化学反应的作用，将污物洗去，故要浸泡一定时间，一般放置过夜（根据情况）；有时可加热一下，使有充分作用的机会。 3.洗涤玻璃仪器的方法与要求
（1）一般的玻璃仪器（如烧瓶、烧杯等）：先用自来水冲洗一下，然后用肥皂、洗衣粉用毛刷刷洗，再用自来水清洗，最后用纯化水冲洗3次（应顺壁冲洗并充分震荡，以提高冲洗效果）。 计量玻璃仪器（如滴定管、移液管、量瓶等）：也可用肥皂、洗衣粉的洗涤，但不能用毛刷刷洗。
（2）精密或难洗的玻璃仪器（滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗等）：先用自来水冲洗后，沥干，再用铬酸清洁液处理一段时间（一般放置过夜），然后用自来水清洗，最后用纯化水冲洗3次。
（3）洗刷仪器时，应首先将手用肥皂洗净，免得手上的油污物沾附在仪器壁上，增加洗刷的困难。
（4）一个洗净的玻璃仪器应该不挂水珠（洗净的仪器倒置时，水流出后器壁不挂水珠）。
常用试剂的配制
1．无Ca2+、Mg2+Hanks液
NaCl 4.5g
KCl 0.2g NaHCO3 0.175g Na2HPO4·12H2O 0.076g KH2PO4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml
将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO3 调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。
2．甲基红试剂 （1）成份
甲基红 0.1g 95％乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。
蒸馏水 200ml
3．Hanks液（原液）
原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO4·7H2O 2g MgCl2·6H2O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl2 2.8g溶于100ml双蒸水
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na2NPO4·12H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。
使用时甲,乙原液按下列比例配成 Hanks 液 使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO3调整PH值。
4．0.4%酚红溶液
称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒
几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。
5．pH7.2 Tris-NH4CI溶液(红细胞崩解液）
Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH4Cl（氯化氨) 3.735g 6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液
巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解
巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。 7．磷酸盐缓冲液 (PB)
A 液： 为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH2PO4 · H2O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最后补加蒸馏水至 1000ml 。
B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na2HPO4.7H2O 3.6g（或 Na2HPO4·12H2O
71.6g, 或Na2HPO4 · 2H2O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加蒸8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS）
硼酸钠（Na2B4O7.10H2O） 0.46g 硼酸（H2BO3） 0.51g
加蒸馏水至100ml 溶解。
9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS） 配制方法一：
0.2mol/L Na2HPO4（ Na2HPO4·12H2O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH2PO4（NaH2PO4·2H2O 35.6g加蒸馏水至1000ml） 取0.2mol/L Na2HPO4 81.0ml 加0.2mol/L NaH2PO4 19ml,再加1900mlH2O和17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。
PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。 配制方法二：
甲液（0.1mol/LKH2PO4溶液）：KH2PO413.608g，加蒸馏水至1000ml。 乙液（0.1mol/L Na2HPO4溶液）：Na2HPO435.814g，加蒸馏水至1000ml。
取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。
加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。
再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。
10．0.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液
Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g 加蒸馏水至1000ml。ELISA实验包被用。
11．0.01mol/L pH7.4 PBS内含2%BSA（牛血清白蛋白）
取BSA2ml加0.01mol/L pH7.4PBS至100ml即可。ELISA实验封闭用。 12．PH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。
0.2mol/L Na2PO4(28.4g/L) 25.7ml
0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L) 24.5ml
加蒸馏水至100ml即为pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。 13．底物溶液
pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液加入邻苯二胺1mg/ml，再加入30%的H2O2 (1μl/ml)溶解后即为ELISA底物液，临用前配制，避光保存。
14．2mol/L硫酸
浓H2SO4（36N）取 1ml36N的H2SO4缓缓加入18 ml蒸馏水内即为2mol/L，用于ELISA实验终止反应。
15．清洁液的配制
清洁液分高、中、低液三种。 低浓度清洁液
重铬酸钾 100g 水 750ml 硫酸 250ml 中浓度清洁液
重铬酸钾 60g
水 300ml 硫酸 460ml 高浓度清洁液
重铬酸钾 100g 水 200ml 硫酸 800ml
先将重铬酸钾倒入自来水中，然后加入浓硫酸，边加硫酸边用玻璃棒搅拌。由于加入浓硫酸后产生高热，故加酸时要慢，溶器应用耐酸耐高温塑料或陶器制品。
配制好的清洁液，应存于有盖的玻璃溶器内。需要浸泡的玻璃器皿一定要干燥，如
果清洁液经过长期使用已呈黑色，表明已经失效，不宜再用。由于清洁液有强腐蚀性，故操作时要十分注意。
16．PH6.4 l/l5mol/ml磷酸盐缓冲盐水（PBS）： （1）l/l5mol/ml 磷酸二氢钾溶液
KH2PO4 9.04g 蒸馏水 加至1000ml （2）l/l5mol/ml 磷酸氢二钠溶液
Na2HPO4·2H2 O 11.87g （或 Na2HPO4·l2H2 O 23.86g 蒸馏水 加至1000ml （3）PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸盐缓冲盐水（PBS）
l/l5mol/ml磷酸二氢钾溶液 73ml l/l5mol/ml磷酸氢二钠溶液 27ml NaCl 0.5g
混匀溶解即可。
17．柯氏试剂(靛基质试剂) （1）成份
纯戊醇 150ml 浓盐酸 50ml
对二甲基氨基苯甲醛 10g
（2）制法：将对二甲基氨基苯甲醛加入纯戊醇内，使其溶解。将浓盐酸一滴滴慢慢加入，边加边摇，不能加得太快，以致温度升高溶液颜色变深。 （3）用途：测定细菌能否产生吲哚。
一、玻璃仪器的洗涤方法 1.洁净剂及其使用范围
最常用的洁净剂有肥皂、合成洗涤剂（如洗衣粉）、洗液（清洁液）、有机溶剂等。
肥皂、合成洗涤剂等一般用于可以用毛刷直接刷洗的仪器，如烧瓶、烧杯、试剂瓶等非计量及非光学要求的玻璃仪器。
肥皂、合成洗涤剂也可用于滴定管、移液管、量瓶等计量玻璃仪器的洗涤，但不能用毛刷刷洗。
洗液多用于不能用毛刷刷洗的玻璃仪器，如滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗、凯氏烧瓶等特殊要求与形状的玻璃仪器；也用于洗涤长久不用的玻璃仪器和毛刷刷不下的污垢。 2.洗液的配制及说明 铬酸清洁液的配制：
处方1 处方2 重铬酸钾（钠） 10g 200g
纯化水 10ml 100ml（或适量） 浓硫酸 100ml 1500ml
制法：称取处方量之重铬酸钾，于干燥研钵中研细，将此细粉加入盛有适量水的玻璃容器内，加热，搅拌使溶解，待冷后，将此玻璃容器放在冷水浴中，缓慢将浓硫酸断续加入，不断搅拌，勿使温度过高，容器内容物颜色渐变深，并注意冷却，直至加完混匀，即得。
说明：（1）硫酸遇水能产生强烈放热反应，故须等重铬酸钾溶液冷却后，再将硫酸缓缓加入，边加边搅拌，不能相反操作，以防发生爆炸。
（2）清洁液专供清洁玻璃器皿之用，它能去污去热原的作用的原因为本品具有强烈的氧化作用。重铬酸钾与浓硫酸相遇时产生具有强氧化作用的铬酐： K2CrO7＋H2SO4→H2CrO7＋K2SO4 ↓
2CrO3＋H2O→Cr2O3＋3[O]
浓硫酸是一个含氧酸，在高浓度时具有氧化作用，加热时作用更为显著： H2SO4→H2O＋SO2＋[O] Δ
K2CrO7＋3SO2＋H2SO4→Cr2（SO4）3＋K2SO4＋H2O
（3）铬酸的清洁效力之大小，决定于反应中产生铬酐（CrO3）的多少及硫酸浓度之大小。铬酐越多，酸越浓，清洁效力越好。
（4）用清洁液清洁玻璃仪器之前，最好先用水冲洗仪器，洗取大部分有机物，尽可能仪器空干，这样可减少清洁液消耗和避免稀释而降效。
（5）本品可重复使用，但溶液呈绿色时已失去氧化效力，不可再用，但能更新再用。 更新方法：取废液滤出杂质，不断搅拌缓慢加入高锰酸钾粉末，每升约6～8g，至反应完毕，溶液呈棕色为止。静置使沉淀，倾取上清液，在160℃以下加热，使水分蒸发，得浓稠状棕黑色液，放冷，再加入适量浓硫酸，混匀，使析出的重铬酸钾溶解，备用。 （6）硫酸具有腐蚀性，配制时宜小心。
（7）用铬酸清洁液洗涤仪器，是利用其与污物起化学反应的作用，将污物洗去，故要浸泡一定时间，一般放置过夜（根据情况）；有时可加热一下，使有充分作用的机会。 3.洗涤玻璃仪器的方法与要求
（1）一般的玻璃仪器（如烧瓶、烧杯等）：先用自来水冲洗一下，然后用肥皂、洗衣粉用毛刷刷洗，再用自来水清洗，最后用纯化水冲洗3次（应顺壁冲洗并充分震荡，以提高冲洗效果）。 计量玻璃仪器（如滴定管、移液管、量瓶等）：也可用肥皂、洗衣粉的洗涤，但不能用毛刷刷洗。
（2）精密或难洗的玻璃仪器（滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗等）：先用自来水冲洗后，沥干，再用铬酸清洁液处理一段时间（一般放置过夜），然后用自来水清洗，最后用纯化水冲洗3次。
（3）洗刷仪器时，应首先将手用肥皂洗净，免得手上的油污物沾附在仪器壁上，增加洗刷的困难。
（4）一个洗净的玻璃仪器应该不挂水珠（洗净的仪器倒置时，水流出后器壁不挂水珠）。