高效液相色谱(HPLC)使用中常见故障及解决方法(三)峰型异常问题

峰型问题是液相的主要问题,在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。

1、色谱图中未出峰。解决方法:系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调整即可。

2、一个峰或几个峰是负峰。解决方法:流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。

3、所有峰均为负峰。解决方法:信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。

4、所有峰均为宽峰。解决方法:系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。 、

5、所出峰比预想的小。解决方法:样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。

6、出现双峰或肩峰。解决方法:进样量过大;样品浓度过高;保护柱或色谱柱柱头堵塞;保护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。

7、前伸峰。解决方法:进样量或样品浓度高;溶解样品的溶剂较流动相极性强;保护柱或色谱柱污染或失效。

8、拖尾峰。解决方法:柱超载,降低样品量;增加柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰,对样品进行清洁过滤;调整流动相;硅羟基作用,加入三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效,更换烧结不锈钢;加在线过滤器,对样品进行过滤;死体积或柱外体积过大,将连接点降至最低;尽可能使用内径较细的连接管;柱效下降,更换柱子;采用保护柱,对柱子进行再生。

9、出现平头峰。解决方法:检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高。

10、出现鬼峰。解决方法:进样阀残余峰,在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物,改进样品的预处理;流动相污染,更换新流动相,尽可能现配现用,隔夜的流动相再次使用时要过滤;尽可能使用HPLC级试剂;流路中有小的气泡,打开Purge阀,加大流速排除。

峰型问题是液相的主要问题,在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。

1、色谱图中未出峰。解决方法:系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调整即可。

2、一个峰或几个峰是负峰。解决方法:流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。

3、所有峰均为负峰。解决方法:信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。

4、所有峰均为宽峰。解决方法:系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。 、

5、所出峰比预想的小。解决方法:样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。

6、出现双峰或肩峰。解决方法:进样量过大;样品浓度过高;保护柱或色谱柱柱头堵塞;保护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。

7、前伸峰。解决方法:进样量或样品浓度高;溶解样品的溶剂较流动相极性强;保护柱或色谱柱污染或失效。

8、拖尾峰。解决方法:柱超载,降低样品量;增加柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰,对样品进行清洁过滤;调整流动相;硅羟基作用,加入三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效,更换烧结不锈钢;加在线过滤器,对样品进行过滤;死体积或柱外体积过大,将连接点降至最低;尽可能使用内径较细的连接管;柱效下降,更换柱子;采用保护柱,对柱子进行再生。

9、出现平头峰。解决方法:检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高。

10、出现鬼峰。解决方法:进样阀残余峰,在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物,改进样品的预处理;流动相污染,更换新流动相,尽可能现配现用,隔夜的流动相再次使用时要过滤;尽可能使用HPLC级试剂;流路中有小的气泡,打开Purge阀,加大流速排除。


相关文章

  • 高效液相色谱仪期间核查方法研究
  • ・14・中国兽药杂志 2005,39(11):14-15/胡大方,等 高效液相色谱仪期间核查方法研究 胡大方,王海波 (四川省兽药监察所,四川成都 610041) [收稿日期]2005 03 22 [文献标识码]A [文章编号]1002 1 ...查看


  • 高效液相色谱技术及其应用
  • 目录 1.高效液相色谱技术..................................................................................................... 1 1.1 ...查看


  • 高效液相色谱法
  • 高效液相色谱在蛋白质分离中的应用 蛋白质是生命有机体的主要成分,在生命体生长发育的各个阶段都起着重要作用.所以蛋白质的分离和检测一直是人们研究的热点.Regnier认为:蛋白质是分子大小.形状和表面都不均一且各具特征的半僵硬分子.这就赋予蛋 ...查看


  • 仪器分析论文
  • 09包装专业仪器分析期末论文 题目:高效液相色谱法原理及应用 姓名: 学号: 指导老师:吴继魁 时间:2012.12.25 高效液相色谱法原理及应用.............................................. ...查看


  • 第4章第1-6节高效液相色谱分析
  • 第四章 高效液相色谱法 第一节 概述 一.定义与分类 液相色谱是指流动相为液体的这类色谱法的总称.高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC),是一种在经典液相色谱基础上发展起 ...查看


  • 高效液相色谱在食品检测中的应用
  • 高效液相色谱在食品检测中的应用 姓名:王成花 专业:食品科学与工程 学号:1043113087 高效液相色谱在食品检测中的应用 摘要:随着我国社会的飞速发展,人们的生活水平也在不断的提高,对食品质量也就更加重视.在各种食品检测技术中,高效液 ...查看


  • 高效液相色谱法 1
  • 高效液相层析仪 高效液相色谱法(英语:high performance liquid chromatography,缩写 HPLC),又译高效液相层析法,以前曾指高压液相层析法(high pressure liquid chromatogr ...查看


  • 高效液相色谱法简介
  • 高效液相色谱法简介 "色谱"一词是由俄国科学家斯威特提出的.色谱法是基于补充物质在相对运动物的两相之间分布时,物理或物理化学性质的微小的差异而使混合物相互分离的一类分离或分析方法.发展与上世纪初,飞速发展于五十年代,有超 ...查看


  • 黄曲霉素检测分析技术进展
  • 黄曲霉毒素分析检测方法进展 浙江工业大学 海洋学院 食安1201 蔡婉静[1**********]2 白鸣鸣[1**********]1 摘要:黄曲霉素是一种具有极强致癌性的剧毒真菌毒素,它广泛存在于天然食品中.其中在天然食品中最常见的是黄 ...查看


热门内容