真菌DNA 提取方法
方法一：
取出约0.1 g 菌丝体, 加入1 mL 裂解缓冲液( Tris-HCl 100 mmol/L (p H 9.0) ; EDTA 100 mmol/ L ;NaCl 400 mmol/L ;2 %SDS) ,加入少许石英砂, 在研钵中将菌丝进行充分研磨。将菌体移入1.5 mL 的离心管中, 于65℃水浴保温30 min ,每10 min 取出充分混匀1 次。加入等体积的苯酚∶氯仿∶异戊醇(体积比为24 ∶24 ∶1) ,轻轻混匀5min ,12 000 r/ min 离心10 min 。吸取上清液, 加入等体积氯仿, 轻摇5 min ,12 000r/ min 离心10 min 。收集上清液, 加入0.75 倍体积的异丙醇沉淀DNA ,用70 %乙醇冲洗2～3 次后自然风干, 加入500μL 1 ×TE 缓冲液溶解DNA 。加入2 μL RNase( 10 mg/ mL ) , 37 ℃水浴保温30min 。加入等体积苯酚∶氯仿(体积比为1 ∶1) , 轻摇5 min ,12 000 r/ min 离心10 min 。取上清液加入等体积氯仿, 轻摇5 min ,12 000 r/ min 离心10 min 。吸取上清液, 用2 倍体积的无水乙醇沉淀DNA , -20 ℃短暂放置后,12 000 r/ min 离心。用70 %的乙醇洗涤沉淀DNA 2 次, 自然风干后溶于适量0.1 ×TE 缓冲液中, 贮存于- 20 ℃备用。
方法二
1. 实验试剂
（1）DNA 提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS
（2）3M NaAc
（3）TE ：10 mmol/L Tris-HCl pH8.0，1 mmol/L EDTA
（4）酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)
（5）氯仿:异戊醇(24:1)
（6）异丙醇
（7）无水乙醇
（8）75%乙醇
（9）RNaseA
2. 实验步骤
（1）取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
（2）加入4mL 提取液，快速振荡混匀
（3）加入等体积的4mL 的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min （此处是粗提没有加酚，可以节约成本）
（4）1000rpm ，4℃，5min
（5）上清用氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000rpm ，4℃离心5min ）
（6）取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min
（7）用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500ul TE 中
（8）加入1ul RNaseA （10mg/mL），37℃处理1h
（9）用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000rpm ，4℃离心5min ）
（10）取上清，1/10V 3M NaAc，2.5V 体积的无水乙醇，-70℃沉淀30min 以上。
（11）沉淀用75%乙醇漂洗，风干，溶于20ul TE中，-20℃保存备用。
方法三
实验步骤：
1. 真菌菌丝0.5-1g ，在液氮中迅速研磨成粉
2. 加入3mL 65℃预热的DNA 提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30min ，期间混匀2-3次
3. 加入1mL 5M KAc，冰浴20min
4. 氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm ，4℃离心5min ）
5. 取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇，混匀，静置约30 min
6. 用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500ul TE 中
7. 加入1ul RNaseA（10mg/mL），37℃处理1h
8. 用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000rpm ，4℃离心5min ）
9. 取上清，1/10V 3M NaAc，2.5V 体积的无水乙醇，-70℃沉淀30min 以上
10. 沉淀用75%乙醇漂洗，风干，溶于200ul TE中，-20℃保存备用
DNA 提取缓冲液：100mM Tris-HCl （pH8.0），20mM EDTA （pH8.0），1.5M NaCl ，2% CTAB(W/V)，4% PVP40
（W/V）和2%巯基乙醇（V/V），PVP 和巯基乙醇使用前加入5M KAc
方法二和三，是大同小异。主要是DNA 提取液配方不一样！成本也不一样！
方法四：CTAB 法：
取少许新鲜菌体，加液氮研磨，加入3 ml 2%CTAB(加PVP) ，装管；65 ℃水浴45 min，13000 r/min 离心10 min ；取上清（水相）于一新离心管中，加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1），12000 r/min 离心10 min；取上清，加等体积的氯仿/异戊醇（24∶1），12000 r/min 离心10 min；取上清，加2 L 的无水乙醇和NaCl 溶液，-20 ℃ 沉淀30 min ，12 000 r/min 离心20 min ；收集沉淀，75%酒精冲洗，超净台真空干燥；100 μl TE 溶解DNA ，-20 ℃保存备用。加入1 μl 的RNA 酶，37 ℃水浴1 h；加入400 μl 氯仿/异戊醇（24∶1），12000 r/min 离心10 min，重复2次。
方法五：SDS 法：
取200 mg 菌体，液氮研磨，加入400 μl SDS 提取缓冲液；65 ℃水浴45 min ，13000 r/min 离心5 min ；取上清转到离心管中，加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1）；摇匀，离心5 min ，取上清，加等体积的氯仿/异戊醇；摇匀，离心3 min，取上清，加入2 倍体积的无水乙醇和2 mol/L NaCl，-20 ℃沉淀30 min，12 000 r/min 离心20 min；去上清，70%酒精冲洗，超净工作台倒置进行真空干燥；加500 μl TE，加2 μl 的RNA 酶，37 ℃水浴1 h；加入800 μl 氯仿/异戊醇（24∶1），12000 r/min 离心10 min，重复2 次，余下的步骤和CTAB 相同。
方法六：改良的CTAB 法：
取200 mg菌体，液氮研磨，加入3 ml 3% CTAB提取缓冲液；65 ℃水浴45 min，40 ℃ 4000 r/min离心20 min；取上清转到离心管中，加入4 μl 10 mg/ml 蛋白酶，37 ℃水浴1 h；加入800 μl Tris饱和酚，摇匀，13000 r/min 离心10min ；取上清，加入等体积的氯仿/异戊醇，摇匀，13000 r/min 离心10 min；取上清，加10 mg/ml 的RNA 酶，37 ℃水浴过夜处理；加入800 μl 氯仿/异戊醇，摇匀，13000 r/min 离心10 min；取上清，加600 μ l 异戊醇，-20 ℃沉淀30 min，余下步骤同上。
3.DNA 的检测
DNA 样品在0.8 %的琼脂糖凝胶上进行电泳, 加入4μL DNA 样品以6*10loading Buffer 1ml,作为分子标记,100 V 电压下电泳30 min ,EB溶液染色15－20min, 紫外灯下观察拍照。
真菌DNA 提取方法
方法一：
取出约0.1 g 菌丝体, 加入1 mL 裂解缓冲液( Tris-HCl 100 mmol/L (p H 9.0) ; EDTA 100 mmol/ L ;NaCl 400 mmol/L ;2 %SDS) ,加入少许石英砂, 在研钵中将菌丝进行充分研磨。将菌体移入1.5 mL 的离心管中, 于65℃水浴保温30 min ,每10 min 取出充分混匀1 次。加入等体积的苯酚∶氯仿∶异戊醇(体积比为24 ∶24 ∶1) ,轻轻混匀5min ,12 000 r/ min 离心10 min 。吸取上清液, 加入等体积氯仿, 轻摇5 min ,12 000r/ min 离心10 min 。收集上清液, 加入0.75 倍体积的异丙醇沉淀DNA ,用70 %乙醇冲洗2～3 次后自然风干, 加入500μL 1 ×TE 缓冲液溶解DNA 。加入2 μL RNase( 10 mg/ mL ) , 37 ℃水浴保温30min 。加入等体积苯酚∶氯仿(体积比为1 ∶1) , 轻摇5 min ,12 000 r/ min 离心10 min 。取上清液加入等体积氯仿, 轻摇5 min ,12 000 r/ min 离心10 min 。吸取上清液, 用2 倍体积的无水乙醇沉淀DNA , -20 ℃短暂放置后,12 000 r/ min 离心。用70 %的乙醇洗涤沉淀DNA 2 次, 自然风干后溶于适量0.1 ×TE 缓冲液中, 贮存于- 20 ℃备用。
方法二
1. 实验试剂
（1）DNA 提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS
（2）3M NaAc
（3）TE ：10 mmol/L Tris-HCl pH8.0，1 mmol/L EDTA
（4）酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)
（5）氯仿:异戊醇(24:1)
（6）异丙醇
（7）无水乙醇
（8）75%乙醇
（9）RNaseA
2. 实验步骤
（1）取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
（2）加入4mL 提取液，快速振荡混匀
（3）加入等体积的4mL 的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min （此处是粗提没有加酚，可以节约成本）
（4）1000rpm ，4℃，5min
（5）上清用氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000rpm ，4℃离心5min ）
（6）取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min
（7）用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500ul TE 中
（8）加入1ul RNaseA （10mg/mL），37℃处理1h
（9）用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000rpm ，4℃离心5min ）
（10）取上清，1/10V 3M NaAc，2.5V 体积的无水乙醇，-70℃沉淀30min 以上。
（11）沉淀用75%乙醇漂洗，风干，溶于20ul TE中，-20℃保存备用。
方法三
实验步骤：
1. 真菌菌丝0.5-1g ，在液氮中迅速研磨成粉
2. 加入3mL 65℃预热的DNA 提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30min ，期间混匀2-3次
3. 加入1mL 5M KAc，冰浴20min
4. 氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm ，4℃离心5min ）
5. 取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇，混匀，静置约30 min
6. 用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500ul TE 中
7. 加入1ul RNaseA（10mg/mL），37℃处理1h
8. 用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000rpm ，4℃离心5min ）
9. 取上清，1/10V 3M NaAc，2.5V 体积的无水乙醇，-70℃沉淀30min 以上
10. 沉淀用75%乙醇漂洗，风干，溶于200ul TE中，-20℃保存备用
DNA 提取缓冲液：100mM Tris-HCl （pH8.0），20mM EDTA （pH8.0），1.5M NaCl ，2% CTAB(W/V)，4% PVP40
（W/V）和2%巯基乙醇（V/V），PVP 和巯基乙醇使用前加入5M KAc
方法二和三，是大同小异。主要是DNA 提取液配方不一样！成本也不一样！
方法四：CTAB 法：
取少许新鲜菌体，加液氮研磨，加入3 ml 2%CTAB(加PVP) ，装管；65 ℃水浴45 min，13000 r/min 离心10 min ；取上清（水相）于一新离心管中，加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1），12000 r/min 离心10 min；取上清，加等体积的氯仿/异戊醇（24∶1），12000 r/min 离心10 min；取上清，加2 L 的无水乙醇和NaCl 溶液，-20 ℃ 沉淀30 min ，12 000 r/min 离心20 min ；收集沉淀，75%酒精冲洗，超净台真空干燥；100 μl TE 溶解DNA ，-20 ℃保存备用。加入1 μl 的RNA 酶，37 ℃水浴1 h；加入400 μl 氯仿/异戊醇（24∶1），12000 r/min 离心10 min，重复2次。
方法五：SDS 法：
取200 mg 菌体，液氮研磨，加入400 μl SDS 提取缓冲液；65 ℃水浴45 min ，13000 r/min 离心5 min ；取上清转到离心管中，加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1）；摇匀，离心5 min ，取上清，加等体积的氯仿/异戊醇；摇匀，离心3 min，取上清，加入2 倍体积的无水乙醇和2 mol/L NaCl，-20 ℃沉淀30 min，12 000 r/min 离心20 min；去上清，70%酒精冲洗，超净工作台倒置进行真空干燥；加500 μl TE，加2 μl 的RNA 酶，37 ℃水浴1 h；加入800 μl 氯仿/异戊醇（24∶1），12000 r/min 离心10 min，重复2 次，余下的步骤和CTAB 相同。
方法六：改良的CTAB 法：
取200 mg菌体，液氮研磨，加入3 ml 3% CTAB提取缓冲液；65 ℃水浴45 min，40 ℃ 4000 r/min离心20 min；取上清转到离心管中，加入4 μl 10 mg/ml 蛋白酶，37 ℃水浴1 h；加入800 μl Tris饱和酚，摇匀，13000 r/min 离心10min ；取上清，加入等体积的氯仿/异戊醇，摇匀，13000 r/min 离心10 min；取上清，加10 mg/ml 的RNA 酶，37 ℃水浴过夜处理；加入800 μl 氯仿/异戊醇，摇匀，13000 r/min 离心10 min；取上清，加600 μ l 异戊醇，-20 ℃沉淀30 min，余下步骤同上。
3.DNA 的检测
DNA 样品在0.8 %的琼脂糖凝胶上进行电泳, 加入4μL DNA 样品以6*10loading Buffer 1ml,作为分子标记,100 V 电压下电泳30 min ,EB溶液染色15－20min, 紫外灯下观察拍照。