4.2作业
16120901 王德美 20092348
1. 与线粒体关系
单胺氧化酶存在于许多组织的细胞线粒体外膜上.
2作用.
单胺氧化酶作用于一级胺及其甲基化的二、三级胺，也作用于长链的二胺。对所谓生物胺，即酪胺、儿茶酚胺、5-羟色胺、去甲临床分析 （1）血清单胺氧化酶的活性高低能反映肝纤维化的程度，是诊断肝硬化的重要指标。肝硬化患者血清单胺氧化酶活性升高的阳性率在80%以上，最高值可超过对照参考值的两倍，而且血清单胺氧化酶活性升高与肝表面结节形成的进程相平行。 （2）各型肝炎急性期患者血清单胺氧化酶活性不增高，但暴发性重症肝炎或急性肝炎中有肝坏死时，由于线粒体破坏，血清单胺氧化酶活性可升高。单胺氧化酶活性升高还可见于甲亢、糖尿病合并脂肪肝、充血性心衰、肢端肥大症等疾病。 （3）由于生物个体血清单胺氧化酶活性易波动，应多次测定以防偏差。若单胺氧化酶活性超过80U，应将样品稀释后重新测定 肾上腺素、肾上腺素等也有作用。
3. 研究现状及与衰老关系
(1) 人体中的单胺氧化酶
人体内含有两种单胺氧化酶：单胺氧化酶A（MAO-A）和单胺氧化酶B（MAO-B）。两者都存在于神经元和星形胶质细胞中。除中枢神经系统外，MAO-A还存在于肝、胃肠道和MAO-A是消化道摄取的单胺类物质代谢中的重要酶。MAO的两种亚型都可以使单胺类神经递质失活，但两者对底物和抑制剂的专一性不同,MAO-A可通过病理途径导致头痛：5-羟色胺可被毛细血管中残留的MAO-A所分解，当它的含量较少时，血管过度舒张，而产生搏动性头痛。
人和动物的攻击行为与MAO-A基因的变种有关。[MAO-A的不同基因型也可能对人对事物的新奇感产生影响;吸烟对MAO-B有抑制作用。[MAO-B的含量随着年龄的增长而增加，因此MAO-B被认为是老化的标志，称为老化相关酶。
(2)抑制剂
1-异烟酰-2-异丙基肼（iproniazid）、β-苯基异丙基肼（pheniprazine）等药物对此酶有强烈的竞争性的阻抑作用，称为MAO抑制剂，但如果给动物，则可提高脑中去甲肾上腺素和5-羟色胺等单胺的浓度，造成行动的刺激。所以认为单胺氧化酶具有调节生物体内胺浓度的功能。单胺氧化酶抑制剂有许多药物。如治疗抑郁症的苯乙肼、异唑肼、异丙肼、苯环丙胺、
吗氯贝胺、溴法罗明、尼亚拉胺、托洛沙酮、德弗罗沙酮；治疗帕金森病药司立吉兰；治疗高血压的优降宁，抗菌药物呋喃唑酮、灰黄霉素、异烟肼，抗肿瘤药物甲基苄肼，研究工具药氯吉兰，复方药物益康宁（主要由普鲁卡因、肌醇和维生素B6组成）。值得注意的是，某些中药也有单胺氧
化酶抑制作用，如靛红、鹿茸、山楂、何首乌等。
下列药物禁止或不宜与单胺氧化酶抑制剂合用，否则可能引起不良反应，甚至是严重的、危及生命的不良反应，如血压骤然升高，甚至导致高血压危象，心动过速，呼吸困难，运动失调，高热，精神错乱等。如：
1、抗抑郁药：丙米嗪（米帕明）、氯米帕明、阿米替林等三环类抗抑郁药，马普替林、米氮平、米安色林等四环 类抗抑郁药，氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、茚达品、舍曲林、西酞普兰、安非他酮等5羟色胺摄取抑制剂，苯丙胺、诺米芬新等。
2、降压药：可乐定、胍乙啶、利血平以及含利血平的复方制剂。
3、中枢神经抑制药：水合氯醛、卤恶唑仑、替吡度尔、苯二氮卓类。
4、镇咳药：右美沙芬及其复方制剂。
5、平喘药：麻黄碱。
6、镇痛药：哌替啶、舒马普坦、芬太尼。
7、抗帕金森药：左旋多巴。
8、抗过敏药：苯噻啶。
9、促智药：阿米三嗪－萝巴新（都可喜）。
10、单胺氧化酶抑制剂：单胺氧化酶抑制剂之间亦不可合用。
单胺氧化酶抑制剂作用时间较长，必须在停药两周以上方可开始服用以上药物。单胺氧化酶抑制剂亦可通过抑制肝药酶系统，影响某些药物的代谢，致血药浓度升高，半衰期延长，药理活性增强。例如有报道单胺氧化酶抑制剂可延缓口服降糖药甲磺丁脲、氯磺丙脲、巴比妥类、苯妥英钠、乙醚和抗组胺药异丙嗪和苯海拉明的代谢，使这些药的药效增强。特别要提及的是，服用单胺氧化酶抑制剂期间，禁食富含单胺的食物和饮料，如奶酪、酸奶、动物肝脏、腌鱼、香肠、腊肉、蚕豆、扁豆、巧克力、酵母、腐乳、罐头无花果、菠萝、啤酒、葡萄酒、柑橘类果汁等，否则可因酪胺大量吸收造成血压急剧上升。
实验设计 : 乳酸脱氢酶酶活力测定
一、实验目的
测定乳酸脱氢酶酶活力。
二、实验原理
乳酸脱氢酶存在于生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化下列可逆反应。NADH, NAD+ 在340nm及260nm 处有各自的最大吸收峰，因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值得改变，定量测定酶的含量。本实验测定LDH活力，基质液中含丙酮酸及NADH，在一定条件下，加入一定量酶液，观察NADH在反应过程中340 nm 处光吸收减少值，减少越多，则LDH活力越高。其活力单位定义是：在25℃，pH7.5条件下A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。可定量测定每克湿重组织中LDH单位。定量测定蛋白质含量即可计算比活力（U/mg）。试剂和器材
三、试剂和器材
（一）试剂
50m mol/L pH6.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液母液：
A: 50 m mol/L K2HPO4: 称K2HPO41.74g加蒸馏水溶解后定容至200ml。 B: 50 m mol/L KH2PO4: 称KH2PO43.40g加蒸馏水溶解后定容至500ml。 取溶液A 31.5ml ＋ 溶液B 68.5ml, 调节pH至6.5。置4℃冰箱备用。
10m mol/L pH 6.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液用上述母液稀释得到。现用现配。 0.1mol/L pH 7.5磷酸盐缓冲液, 用上述母液稀释得到。现用现配。
NADH溶液：称3.5mg纯NADH置试管中，加0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液1ml 摇匀。现用现配。
（二）材料
丙酮酸溶液：称2.5mg丙酮酸钠，加0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液29ml, 使其完全溶解。现用现配试剂。
（三）器材
组织捣碎机，紫外分光光度计，恒温水浴，移液管(5ml, 0.1ml), 微量注射器（10ul）。
四、操作方法
（一）制备肌肉匀浆
称取20g 兔肉, 按W/V=1/4比例加入4℃预冷的10m mol/L Ph6.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液，用组织捣碎机捣碎，每次10s，连续3次。将匀浆液倒入烧杯中，置4℃冰箱中提取过夜，过滤后得到组织提取液。
（二）LDH活力测定
试验时预先将丙酮酸溶液及NADH溶液放在25℃水浴中预热。取2只石英比色杯，在1只比色杯中加入0.1m mol/L pH 7.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液3ml，置于紫外分光光度计中，在340nm处将光吸收调节至零；另一只比色杯用于测定LDH活力，依次加入丙酮酸钠溶液2.9ml, NADH溶液0.1ml，加盖摇匀后，测定340 nm光吸收值（A）。取出比色杯加入经稀释的酶液10μl，立即计时，摇匀后，每隔0.5min 测A340nm，连续测定3min，以 A对时间作图，取反应最初线性部分，计算A340nm/min减少值。加入酶液的稀释度（或加入量）应控制 A340nm/min下降值在0.1－0.2之间。
（三）数据处理
计算每毫升组织提取液中LDH活力单位.
LDH活力单位（U）/ml 提取液 ＝（A340nm/min´稀释倍数）/
（酶液加入量（10μl）´10-1
提取液中LDH总活力单位＝LDH活力（U）/ml ´ 总体积
4.2作业
16120901 王德美 20092348
1. 与线粒体关系
单胺氧化酶存在于许多组织的细胞线粒体外膜上.
2作用.
单胺氧化酶作用于一级胺及其甲基化的二、三级胺，也作用于长链的二胺。对所谓生物胺，即酪胺、儿茶酚胺、5-羟色胺、去甲临床分析 （1）血清单胺氧化酶的活性高低能反映肝纤维化的程度，是诊断肝硬化的重要指标。肝硬化患者血清单胺氧化酶活性升高的阳性率在80%以上，最高值可超过对照参考值的两倍，而且血清单胺氧化酶活性升高与肝表面结节形成的进程相平行。 （2）各型肝炎急性期患者血清单胺氧化酶活性不增高，但暴发性重症肝炎或急性肝炎中有肝坏死时，由于线粒体破坏，血清单胺氧化酶活性可升高。单胺氧化酶活性升高还可见于甲亢、糖尿病合并脂肪肝、充血性心衰、肢端肥大症等疾病。 （3）由于生物个体血清单胺氧化酶活性易波动，应多次测定以防偏差。若单胺氧化酶活性超过80U，应将样品稀释后重新测定 肾上腺素、肾上腺素等也有作用。
3. 研究现状及与衰老关系
(1) 人体中的单胺氧化酶
人体内含有两种单胺氧化酶：单胺氧化酶A（MAO-A）和单胺氧化酶B（MAO-B）。两者都存在于神经元和星形胶质细胞中。除中枢神经系统外，MAO-A还存在于肝、胃肠道和MAO-A是消化道摄取的单胺类物质代谢中的重要酶。MAO的两种亚型都可以使单胺类神经递质失活，但两者对底物和抑制剂的专一性不同,MAO-A可通过病理途径导致头痛：5-羟色胺可被毛细血管中残留的MAO-A所分解，当它的含量较少时，血管过度舒张，而产生搏动性头痛。
人和动物的攻击行为与MAO-A基因的变种有关。[MAO-A的不同基因型也可能对人对事物的新奇感产生影响;吸烟对MAO-B有抑制作用。[MAO-B的含量随着年龄的增长而增加，因此MAO-B被认为是老化的标志，称为老化相关酶。
(2)抑制剂
1-异烟酰-2-异丙基肼（iproniazid）、β-苯基异丙基肼（pheniprazine）等药物对此酶有强烈的竞争性的阻抑作用，称为MAO抑制剂，但如果给动物，则可提高脑中去甲肾上腺素和5-羟色胺等单胺的浓度，造成行动的刺激。所以认为单胺氧化酶具有调节生物体内胺浓度的功能。单胺氧化酶抑制剂有许多药物。如治疗抑郁症的苯乙肼、异唑肼、异丙肼、苯环丙胺、
吗氯贝胺、溴法罗明、尼亚拉胺、托洛沙酮、德弗罗沙酮；治疗帕金森病药司立吉兰；治疗高血压的优降宁，抗菌药物呋喃唑酮、灰黄霉素、异烟肼，抗肿瘤药物甲基苄肼，研究工具药氯吉兰，复方药物益康宁（主要由普鲁卡因、肌醇和维生素B6组成）。值得注意的是，某些中药也有单胺氧
化酶抑制作用，如靛红、鹿茸、山楂、何首乌等。
下列药物禁止或不宜与单胺氧化酶抑制剂合用，否则可能引起不良反应，甚至是严重的、危及生命的不良反应，如血压骤然升高，甚至导致高血压危象，心动过速，呼吸困难，运动失调，高热，精神错乱等。如：
1、抗抑郁药：丙米嗪（米帕明）、氯米帕明、阿米替林等三环类抗抑郁药，马普替林、米氮平、米安色林等四环 类抗抑郁药，氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、茚达品、舍曲林、西酞普兰、安非他酮等5羟色胺摄取抑制剂，苯丙胺、诺米芬新等。
2、降压药：可乐定、胍乙啶、利血平以及含利血平的复方制剂。
3、中枢神经抑制药：水合氯醛、卤恶唑仑、替吡度尔、苯二氮卓类。
4、镇咳药：右美沙芬及其复方制剂。
5、平喘药：麻黄碱。
6、镇痛药：哌替啶、舒马普坦、芬太尼。
7、抗帕金森药：左旋多巴。
8、抗过敏药：苯噻啶。
9、促智药：阿米三嗪－萝巴新（都可喜）。
10、单胺氧化酶抑制剂：单胺氧化酶抑制剂之间亦不可合用。
单胺氧化酶抑制剂作用时间较长，必须在停药两周以上方可开始服用以上药物。单胺氧化酶抑制剂亦可通过抑制肝药酶系统，影响某些药物的代谢，致血药浓度升高，半衰期延长，药理活性增强。例如有报道单胺氧化酶抑制剂可延缓口服降糖药甲磺丁脲、氯磺丙脲、巴比妥类、苯妥英钠、乙醚和抗组胺药异丙嗪和苯海拉明的代谢，使这些药的药效增强。特别要提及的是，服用单胺氧化酶抑制剂期间，禁食富含单胺的食物和饮料，如奶酪、酸奶、动物肝脏、腌鱼、香肠、腊肉、蚕豆、扁豆、巧克力、酵母、腐乳、罐头无花果、菠萝、啤酒、葡萄酒、柑橘类果汁等，否则可因酪胺大量吸收造成血压急剧上升。
实验设计 : 乳酸脱氢酶酶活力测定
一、实验目的
测定乳酸脱氢酶酶活力。
二、实验原理
乳酸脱氢酶存在于生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化下列可逆反应。NADH, NAD+ 在340nm及260nm 处有各自的最大吸收峰，因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值得改变，定量测定酶的含量。本实验测定LDH活力，基质液中含丙酮酸及NADH，在一定条件下，加入一定量酶液，观察NADH在反应过程中340 nm 处光吸收减少值，减少越多，则LDH活力越高。其活力单位定义是：在25℃，pH7.5条件下A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。可定量测定每克湿重组织中LDH单位。定量测定蛋白质含量即可计算比活力（U/mg）。试剂和器材
三、试剂和器材
（一）试剂
50m mol/L pH6.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液母液：
A: 50 m mol/L K2HPO4: 称K2HPO41.74g加蒸馏水溶解后定容至200ml。 B: 50 m mol/L KH2PO4: 称KH2PO43.40g加蒸馏水溶解后定容至500ml。 取溶液A 31.5ml ＋ 溶液B 68.5ml, 调节pH至6.5。置4℃冰箱备用。
10m mol/L pH 6.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液用上述母液稀释得到。现用现配。 0.1mol/L pH 7.5磷酸盐缓冲液, 用上述母液稀释得到。现用现配。
NADH溶液：称3.5mg纯NADH置试管中，加0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液1ml 摇匀。现用现配。
（二）材料
丙酮酸溶液：称2.5mg丙酮酸钠，加0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液29ml, 使其完全溶解。现用现配试剂。
（三）器材
组织捣碎机，紫外分光光度计，恒温水浴，移液管(5ml, 0.1ml), 微量注射器（10ul）。
四、操作方法
（一）制备肌肉匀浆
称取20g 兔肉, 按W/V=1/4比例加入4℃预冷的10m mol/L Ph6.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液，用组织捣碎机捣碎，每次10s，连续3次。将匀浆液倒入烧杯中，置4℃冰箱中提取过夜，过滤后得到组织提取液。
（二）LDH活力测定
试验时预先将丙酮酸溶液及NADH溶液放在25℃水浴中预热。取2只石英比色杯，在1只比色杯中加入0.1m mol/L pH 7.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液3ml，置于紫外分光光度计中，在340nm处将光吸收调节至零；另一只比色杯用于测定LDH活力，依次加入丙酮酸钠溶液2.9ml, NADH溶液0.1ml，加盖摇匀后，测定340 nm光吸收值（A）。取出比色杯加入经稀释的酶液10μl，立即计时，摇匀后，每隔0.5min 测A340nm，连续测定3min，以 A对时间作图，取反应最初线性部分，计算A340nm/min减少值。加入酶液的稀释度（或加入量）应控制 A340nm/min下降值在0.1－0.2之间。
（三）数据处理
计算每毫升组织提取液中LDH活力单位.
LDH活力单位（U）/ml 提取液 ＝（A340nm/min´稀释倍数）/
（酶液加入量（10μl）´10-1
提取液中LDH总活力单位＝LDH活力（U）/ml ´ 总体积