２００９年１９（６）
生物技术
８３
常小鼠血糖的影响，实验结果见表２。
缺乏：三是用化学药物对抗胰岛素作用，导致动物出现高血糖
表２褐蘑菇碱提物对正常小鼠血糖的影响
形成糖尿病口ｏ。本实验采取损伤法，即每只小鼠以７０ｍｇ／ｋｇ尾Ｔａｂｌｅ
２
Ｔｈｅ
ｉｒｒｘｐａｃｔ
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６匈）Ｄｎ＾ｓ
ｅｘｔｒａｃｔ
ｂａｓｅｏｆｔｈｅｎｏｒｍａｌｂｌｏｏｄ
ｓｕｇａｒ
静脉注射新配制四氧嘧啶溶液的方法，该法操作简单，是目前ｉｎｍｉＣｅ
采用较多的方法。四氧嘧啶是一种８一细胞毒剂，可选择性地组别，。嘴．嚣一，。竺答，篙尹
损伤鼠的胰岛Ｂ一细胞，引起实验性糖尿病。四氧嘧啶引起的实验性糖尿病近似人类糖尿病，胰岛外分泌不受损伤，几乎所空白对照组
１０
一４．８９８±０．４９１
有常用实验动物都可以进行该实验研究，且动物不用注射胰褐蘑菇碱提物低剂量组１０１００４．４３５±０．３８０＊
９．４岛素即可存活很久。实验动物注射四氧嘧啶后，血糖水平的褐蘑菇碱提物中剂量组ｔ０２００
４．３７６±０．６７２＊
１０．７变化通常出现三个时期：早期短暂的高血糖期（约１～４ｈ），接褐蘑菇碱提物高剂量组
１０
４００
４．４１０±０．５４６＊
１０
着是释放大量的胰岛素而引起低血糖期（约持续４８ｈ），然后是‘：ｐ＜Ｏ．０５。
胰岛素耗竭产生持久性的高血糖期（４８ｈ以后）ｂＪ。
表２的结果表明，灌胃褐蘑菇碱提物对正常小鼠血糖有３．２褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶糖尿病小鼠的防治作用
降低作用，褐蘑菇碱提物高、中、低剂量组与空白对照组相比，糖尿病人最显著的症状之一是血糖异常升高，从本研究均到达显著水平（Ｐ＜０．０５），其中褐蘑菇碱提物中剂量组的降预防糖尿病的实验结果来看褐蘑菇碱提物中剂量组血糖值与血糖效果要优于高、低剂量组。
２．２褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠血糖的影响
模型对照组相比降低极显著（Ｐ＜０．０１），高、低剂量组也有显褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠的影响，结果著降低血糖作用（Ｐ＜０．０５）（表１），说明褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶所致糖尿病的形成有显著的预防作用。从实验结果来如表３所示。
看，褐蘑菇碱提物能显著降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖水表３褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠血糖的影响Ｔａｂｌｅ平，褐蘑菇碱提物高、中、低剂量组对糖尿病小鼠的降糖率分３
Ｔｈｅｉｍｐａｃｔ
ｏｆ＾严五∞６趣Ｐ０ｎⅡｅｘｔｒａｃｔ
ｂａｓｅｏｆ．，ｄｌｏｘａｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ
ｔｅ—
别是１６．９％、２０．２％和１５．１％。同时，从数据中能够看出褐蘑ｔｒａｏｘｙｐｙｒｉｒｎｉｄｉｎｅ
ｂｌｏｏｄ
ｓｕｇａｒｉｎ
ｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅ
菇碱提物中剂量组降糖效果要优于高、低剂量组。有无临床组别、。嚣一，。竺％譬豸尹
应用价值有待进一步深入研究。
正常对照组１０～４．９９１±０．８２７参考文献：
模型对照组
ｌＯ
～１９．４６２±１．８４０
［１］刘莹．褐蘑菇营养成分分析及玉米秸杆培养料研究［Ｄ］．长春：东北褐蘑菇碱捉物低剂量组１０
１００１６．５２２±２．２２４＊１５．１师范大学硕士论文，２１３０７．
褐蘑菇碱提物中剂量组１０２００１５，５１６±１．７０６＊＊２０．２［２］刘莹，张丽萍．褐蘑菇多糖脱蛋白方法研究［Ｊ］．广东农业科学，
褐蘑菇碱提物高剂量纽１０４００１６．１６３±２．７５９＊１６．９２００８，２２１（８）：１１４—１１５．
阳性对照组（消渴丸）１０
６００
１４．８３２±１．８９＿５＊＊
２５．１
［３］傅博强，谢明勇，周鹏．茶叶多糖的提取纯化、组成及药理作用研究＋：ｐ＜０．０５；＊。：ｐ＜０．Ｏｌ。
进展［Ｊ］．南昌大学学报：理科版，２００１，２５（４）：３５８—３６４．
由表３的实验结果可见，褐蘑菇碱提物能显著降低四氧［４］王庭欣，赵文，蒋东升，等．海带多糖对糖尿病小鼠血糖的调节作用嘧啶所制备的糖尿病小鼠血糖浓度。褐蘑菇碱提物高、中、低［Ｊ］．营养学报，２００１，２３（２）：１３７—１３９．
剂量组对糖尿病小鼠的降血糖率分别是１６．９％、２０．２％和１５．［５］汪建红，陈晓琴，张蔚佼．黑果枸杞果实多糖降血糖生物功效及其１％。同时，表中数据显示褐蘑菇碱提物中剂量组降血糖效果机制研究［Ｊ］．食品科学，２００９，３０（５）：２４４—２４８．［６］ＸＵ
ＤＬ，ＨＵＡＮＧｘ
Ｗ
要优于高、低剂量组。
ｃ，ＹＡＮＧＧ，ｅｔａ１．Ａｎ＇，ｄｙｓｉｓｏｆｎｕｔｒｉｔｉｏｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
ｏｆ
ｏｆ
３讨论
Ｅｒａｅｒｍｏｒｐｈａｐｒｏｌｉｆｅｒａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌｚｈｅｊｉａ曜ＯｃｅａｎＵｍｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ
ＳｉｅｚＨｅｅ）（浙江海洋学院学报：自然科学版），２００３，２２（４）：３１８—３２０．３．１建立糖尿病实验性动物模型
［７３余杰，崔鹏举，陈美珍，等．富硒发酵毛头鬼伞菌丝对四氧嘧啶致糖糖尿病实验性动物模型的建立方法很多，基本分三种：一尿病小鼠抗氧化和降血糖的影响（英文）［Ｊ］．菌物学报，２００９，２８（Ｉ）：
是用各种方法损伤动物胰脏；二是胰岛８一细胞导致胰岛素的
１２０—１２８
马缨丹抑茵试验研究
林燕文１，童义平２
（１．韩山师范学院生物系，广东潮州５２１０４１；２．韩山师范学院化学系，广东潮州５２１０４１）
摘要：目的：研究马缨丹的体外抑菌效果。方法：制备马缨丹水煎煮液和乙醇提取液，测定其对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度及灭菌前后提取液抑菌效果的变化。结果：当两种提取液生药含量大于０．４ｇ／ｍＥ时，它们对三种细菌的抑菌效果依次为：枯草芽孢杆菌＞金黄色葡萄球菌＞大肠杆菌。马缨丹乙醇提取液对三种细菌的最小抑菌浓度分别为１／６４９／ｍＬ、１／１６９／ｍＬ和１／３２９／ｍＬ，都比水煎煮液的结果１／３２９／ｍＬ、１／８９，ⅡｌＬ和１／１６９／ｍＬ低。两种提取液经１２１℃高压蒸汽灭菌处理后对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用有所增强。结论：两种提取液对三种细菌均有不同程度的抑制作用，因此，马缨丹可考虑用于食品、化妆品及饲料防腐等领域，以提高产品质量。
关键词：马缨丹；水煎煮液；乙醇提取液；抑菌试验；最小抑菌浓度
中图分类号：Ｑ９４９．９
文献标识码：Ａ
文章编号：１００４—３１１Ｘ（２００９）０６—００８３一０３
Ｓｔｕｄｙ
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ｔｈｅＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＥｘｏｅｒｉｍｅｎｔｏｆＬａｎｔａｎａｃａｍａｒａ
ＬＩＮＹａｈ—ｗｅｎｌ．ＴＯＮＧＹｉ—ｐｉｎ９２
（Ｉ．ＤｅｐａｒＵｎｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇｙ，ＨａｎｓｈａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｏ小ｏｕ５２１０４１，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｑＪａｌ乜ＴｍｔｏｆｃｈｅｍｉｓＷ，ＨａｎｓｈａｌｌＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｏｚｈｏｕ５２１０４１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｅ
ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｆ／．，９１．／ｌ／ｚｌｍａｓｔｕｄｉｅｄｉｎＬａｎ／洲ＣＯ／／１０５０，ｗｅｒｅ
ｃｏ／／ｌａｒｚ／，ｗｅｒｅ
ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ
ｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔａｎｄｔｈｅｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍ
ｐｒｏｄｕｃｅｄ，ａｎｄ
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ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｎｔｈｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｉｌｄｔｉｂｉｔｉｏｎＺｏｎｅ，ｔｈｅｍｉｎｉｍａｌｉｎｈｉｂｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｔｏＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ．ＥｓｃｋｒｉｃｈｍｃｏｉｌａｎｄＳｔａｐｈｙ／ｏｃｏｃｃｕｓ国口明岱ｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｆａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｓｅｔｗｏｅｘｔｒａｃｔｆｉｏｍＬａｎｔａｎａｃａｎｌａｒａｗａｓＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ＞Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａ１１１ｅｌｉｓ＞Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｗｈｅｎｔｈｅｃｏｎｅｅｎｔｒａ・
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方数据
生物技术
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２００９年１９（６）
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马缨丹（￡ｎｎ把胁ｃ鲫舭）又名五色梅、如意草，属马鞭草科
（Ｖｅｒｈｅｎａｃｅａｅ）马缨丹属（Ｌａｎｔａｎａ）植物，原产热带美洲，广泛分
布在热带和亚热带地区，其繁殖和适应能力强，侵占大面积牧
场和耕地，被视为世界上１０种有害杂草之一…，我国广东、广西和福建等省均有野生和栽培。虽然马缨丹是外来入侵植
物［２］，是有害杂草，但其根、叶、花均可作药用，具清热解毒、散
解止痛、祛风止痒之功效【３】。近年来，国内外对马缨丹的研究主要有化学成分分析、植物化感作用以及其对有害昆虫、线虫的毒理作用¨“】，关于马缨丹对微生物抑制作用的研究很少。本实验研究马缨丹水煎煮液和乙醇提取液在体外对３种常见细菌的抑菌效果，为马缨丹在食品工业及化妆品、饲料等其它工业中的开发和利用提供理论依据。
１材料与方法
１．１材料１．１．１实验材料
植物材料：马缨丹，采自广东省潮州市慧如公园，洗净后
８０。Ｃ烘干备用。
供试菌种：枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）、大肠杆菌（西一
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）、金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｔｌｒｅｌｌｕ），由韩山师
范学院微生物室提供。
１．１．２试剂
９５％乙醇、氯化钠、盐酸等均为分析纯，广州化学试剂厂；牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉均为生物化学试剂，广东环凯微生物科技有限公司。１．１．３仪器
ＬＤＺＸ一５０ＫＢ不锈钢自动型压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；ＳＷ—ａ—ＩＣ型双人单面净化工作台（苏州净化设备有限公司）；ＳＰＸ一２７０型培养箱（宁波市科技园区新江南仪器有限公司）；ＤＧＸ一９２４３Ｂ一１鼓风干燥箱（上海福玛实验设备有限公司）；ＳＨＢ—ＩＩＩ型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；ＲＥ一５２Ｄ旋转蒸发器（上海春泸西仪器厂）；ＨＨ一２恒温水浴锅（江苏金坛市宏华仪器厂）；ＰＨＳ一３ＤｐＨ计（上海雷磁）：ＦＡｌｌ０４型电子天平（上海衡平仪器仪表厂）。１．１．４培养基
牛肉膏蛋白胨固体培养基和液体培养基。１．２方法
１．２．１马缨丹水煎煮液的制备
称取１００９马缨丹，剪碎并研磨，加入５００ｍＬ蒸馏水，浸泡３０ｍｉｍ，小火煮沸３０ｎｆｉｎ，抽滤得滤液，药渣再加５００ｍＬ蒸馏水，小火煮沸３０ｒａｉｎ，再次抽滤得滤液，合并两次滤液，然后小火加热蒸发浓缩至１００ｍＬ，制成含生药量为ｌ异，ｎ正马缨丹水煎煮液，４。Ｃ保存待用。
１．２．２马缨丹乙醇提取液的制备
称取１００９马缨丹，剪碎并研磨，加入５００ｒａＬ９５％乙醇，浸泡３ｈ后抽滤得滤液，药渣再加５００ｍＬ９５％乙醇，浸泡３ｈ后再次抽滤得滤液，合并两次滤液，用低温（≤６００Ｃ）减压蒸馏回收乙醇，浓缩制成含生药量为ｌ∥ｍＬ马缨丹乙醇提取液，４℃保存待用。
１．２．３菌悬液的制备旧１
将供试菌种分别接于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，３７。Ｃ
收稿日期：２００９—０６—１７；修回日期．＇２００９—０９—１２
作者简介：林燕文（１９７５一），女，学士，高级实验师，研究方向：食品微生物学，在核心期刊、ＳＣＩ收录期刊发表论文近３０篇，Ｆｍｍｉｌ：ｌｙｗ７５１６＠
１２６．ｃｏｍ。
万
方数据恒温培养２４ｈ后，取１环接于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置
３７℃恒温培养２４ｈ。进行平板菌落计数，根据计算结果用无菌
生理盐水将菌液调至约为ｌ驴ｄｕ／ｍＬ，４ｃｃ保存待用。１．２．４抑菌实验方法
１．２．４．１抑菌圈大小测定¨０’川
用无菌刻度吸管吸取ｌｍＬ供试菌液置于无菌培养皿中，再倒入溶化并冷却至５０。Ｃ左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约１５ｍＬ，轻轻转动培养皿，使菌液与培养基混合均匀，冷凝制成平板。将含生药量为ｌｖｇｍＬ的马缨丹水煎煮液和乙醇提取液，前者用无菌水后者用少量乙醇溶解后加无菌水稀释成浓度为０．８９／ｍＬ、０．６９ＣｍＬ、０．４９／ｍＬ、０．２９／ｍＬ、０９／ｍＬ（对照）的药液。用无菌镊子将直径为６ｍｒａ的灭菌干燥滤纸片分别放入装有各浓度药液的培养皿中浸泡３０ｍｉｒａ，然后取出滤纸片，在培养皿内壁上滤去多余的药液，将滤纸片贴人上述平板的表面，每皿贴４片，每菌每种浓度重复做３次，贴好滤纸片的平板在室温下放置２０ｍｉｒａ后倒置于３７℃恒温培养２４ｈ，取出测定抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。
Ｉ．２．４．２最小抑菌浓度（ＭＩｃ）测定
采用试管２倍稀释法测定ＭＩＣ［１¨。取１０支灭菌试管，各管分别加入牛肉膏蛋白胨液体培养基ｌｍＬ，在第１管中加入ｌｍＬ灭菌的１９，ｒＩｌＬ马缨丹提取液，混匀后吸取ｌｍＬ加入到第２管中，依次类推，直至第８管，第８管吸取ｌｍＬ弃去，使其成１：２、１：４、１：８、１：１６等浓度梯度。向１～８管中分别加入０．０５ｍＬ菌液，第９管不加马缨丹提取液，加菌液０．０５ｍＬ作为对照，以观察细菌的生长情况。第１０管加马缨丹提取液ｌｍＬ，混匀后，不加菌液，以观察提取液是否被污染。重复实验３次，将各管置于３７。Ｃ恒温培养２４ｈ，观察结果。若药液透明，可直接判定结果，若色泽较深，则用接种环挑取１环培养液于牛肉膏蛋白胨固体培养基上划线培养１８～２４ｈ，观察结果，以无菌生长的最低稀释度为ＭＩＣ。
１．２．４．３温度对抑菌效果影响测定
将浓度为０．５９／ｍＵ的两种马缨丹提取液经１２ｌ℃高压蒸汽灭菌处理后，采用１．２．４．１中所用的滤纸片法测定抑菌圈直径，以确定高压蒸汽灭菌对马缨丹提取液抑菌效果的影响。１．２．５数据分析
所得数据采用ＳＰＳＳ１７．０软件分别进行多重比较分析和ｔ检验分析。
２结果与分析
２．１抑菌圈大小的测定结果
采用滤纸片法测定马缨丹水煎煮液和乙醇提取液的抑菌圈直径，结果见表１。
由表１可知，当马缨丹两种提取液生药含量大于０．４∥ｍＬ时，它们对３种细菌都有一定的抑制作用，抑菌效果依次为：
枯草芽孢杆菌＞金黄色葡萄球菌＞大肠杆菌。马缨丹乙醇提
取液在较大浓度（１．Ｏｇ／ｍＬ）时，对３种细菌的抑制效果都强于其水煎煮液。随着两种提取液浓度的增大，抑菌圈直径也逐渐增大，但当药液浓度较低（≤Ｏ．６９／ｍＬ）时，随着药液浓度的增大，马缨丹两种提取液对大肠杆菌的抑制作用变化不明显。
由表１还可见，当马缨丹乙醇提取液浓度在１９，，１１Ｌ时，其对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别可达１４．５ｎ１Ｉｌ】和１３．４ｍｍ，具很好的抑菌效果；另外，在此浓度时，马缨丹水煎煮液对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径达１３．Ｏｍｍ，也具有很好的抑菌效果。
２．２最小抑菌浓度的测定结果
２００９年１９（６）
表１马缨丹提取液对供试细菌的抑菌圈直径（单位：－ｎｍ）
Ｔ｝ｌｌ－ｅ
１
Ｄｉａｍｅｔｅｒ
生物技术８５
ｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ加ｎｅｏｆ
ｅｘｌ／ｌｔｃｔ
ｆｒｏｍ厶玑抛，ｍｃａ／／砬ｒａｏｎ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｂａｃｔｅｒｉａ（ｕｎｉｔ：ｍｉｌｌ）
注：数据为平均值±标准差，同列不同英文小写字母和同行不同英文大写字母均表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。数据为３次平行实验的结果，因为滤纸片的直径为６ｍｍ，所以在抑菌圈直径为６ｍｍ，抑菌作用实际为０。
采用试管２倍稀释法测定马缨丹两种提取液对３种细菌的ＭＩＣ，结果见表２。
表２马缨丹提取液对供试细菌的ＭＩＣ
Ｔａｂｌｅ２
ＭＩＣｏｆ
人ｕ２。列在近两年中，研究了用乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂制备马缨丹花和叶的提取液以及从叶中提取挥发油开展抑菌试验的研究，结果发现马缨丹的花和叶的提取液以及从叶中提取的挥发油对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有一定的抑制作用。本文将马缨丹全株作为材料制备水煎煮液和乙醇提取液，探讨它们对上述３种细菌的体外抑菌效果，未见有相关报道，本试验为充分利用马缨丹的抑菌价值提供了一定的依据。
本实验采用水煎煮法和乙醇提取法制备的马缨丹提取液化学成分复杂，抑菌效果可能是其中多种有效成分共同作用的结果，以后可考虑对提取液进行成分分离，并对有抑菌效果的物质进行结构分析和鉴定。究竟哪种有效成分抑菌效果最好，还有待进一步研究。
目前，马缨丹主要用于园林观赏和治疗一些疾病，本实验研究结果为拓宽马缨丹的应用领域奠定了基础，今后，可考虑将马缨丹应用于食品、化妆品及饲料等产品的防腐，开发新型优质产品，充分利用这种入侵植物化废为宝。
参考文献：［Ｉ］Ｇｈｉｓａｌｂｅｒｔｉ
Ｅ．Ｌ．．１ａｎｔａｎａ
ｅｘｔｒａｃｔ
ｆｒｏｎｌｌａｒａａｒｍｏⅡｍａｒａｏｎ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｂａｃｔｅｒｉａ
注：表２中“一”表示无菌生长；“＋”表示有菌生长。
从表２可知，马缨丹两种提取液对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的ＭＩＣ小于其对大肠杆菌的ＭＩＣ，即两种提取液对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用较强，而它们对大肠杆菌的抑制作用较弱。马缨丹乙醇提取液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的ＭＩＣ分别是１／６４９／ｍＬ、１／１６
ｇ／Ｉｎ丽１／３２９／ｎ】Ｌ，都比水煎煮液对３种细菌的ＭＩＣ即１／３２
ｇ／ｍＬ、１／８９／ｍＬ和１／１６９／ｍＬ低，即前者抑菌效果强于后者。２．３温度对抑菌效果影响的测定结果
马缨丹两种提取液灭菌前后对供试细菌的抑菌圈直径见表３。
表３马缨丹提取液灭菌前后对供试细菌的抑菌圈直径（单位：ｉｎｍ）Ｔａｂｌｅ３
Ｈ℃ｎｔ
Ｃ０２７ｌａｌ＇ⅡＬ．（Ｖｅｒｂｅｎａｅｅｎｃ）［ＪＪ．Ｆｉｔｏｔｅｒ
ａｐｉａ，
２０００，７１：４６７—４８６．
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ｔａｎａ
Ｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ａｎｄａｆｔｅｒ
７，Ｏｒｌｅ
ｏｆｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍＬａｍａｎａｃａｍａｒａｏｎ
ｅｘｐｅｒｉ—
ｂａｃｔｅｒｉａｂｅｆｏｒｅｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ（ｕｎｉｔ：ｎｌｍ）
灭菌后抑菌圈直径灭菌前抑菌圈直径
马缨丹提取液类别
供试细菌
Ｌｉｕ—Ｆａ，ｅｔ
ａ１．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＬａｎ—
ｃａｍａｒａｌｅｄ
ｅｘｔｒａｃｔｏｎ
ｔｉｏｎｏｆ
Ｈ２０２
ｉｎｗａｔｅｒ
ｏｆｓｕｐｅｍｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅａｎｄａｃｃｕｍｕｌａ・
ｈｙａｃｉｎｔｈｌｅｉｌｆ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＭｏ・
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｔｈｅ
ｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，３２（２）：１８９—１９４．
［６３易振，张茂新，凌冰，等，马缨丹及其酚类化合物对水葫芦生长的抑制作用［Ｊ］．应用生态学报，２００６，１７（９）：１６３７—１６４０．
［７］董易之，张茂新，凌冰．马缨丹总岩茨烯对小菜蛾和斜纹夜蛾幼虫的拒食作用［Ｊ］．应用生态学报，２００５，１６（１２）：２３６１—２３６４．
注：数据为平均值±标准差；＊＊表示差异极显著（Ｐ＜０．０１）；＊表示差异显著（尸＜Ｏ．０５）。
数据为３次平行实验的结果，因为滤纸片的直径为６ｍｍ，所以在抑菌圈直径为６ｍｍ。抑菌作ｊ玎实际为０。
［８］柯云，潘沧桑．儿种植物提取液对根结线虫的抑杀作用［Ｊ］．厦门大学学报：自然科学版，２００７，４６（５）：７１ｌ一７１４．
［９］陶永霞，刘洪海，王忠民，等．番茄生物碱粗提物抑菌作用的研究［Ｊ］．天然产物研究与开发，２０１３６，１８（３）：４３８—４４０．
［１０］姚淑敏，池振明，段效辉．黄芪提取物对细菌抑制作用的研究［Ｊ］．食品科学，２００６，２７（８）：９０—９３．
表３结果表明，马缨丹两种提取液中的抑菌物质热稳定性较好，经１２ｌ℃高压蒸汽灭菌处理后，两者对枯草芽孢杆菌的抑制效果较灭菌前有极显著增强，乙醇提取液对金黄色葡萄球菌的抑制效果较灭菌前也有极显著增强，水煎煮液对金黄色葡萄球菌的抑制效果较灭菌前稍有增强，而它们对大肠杆菌的抑制作用，灭菌前后变化不大。分析原因，可能是灭菌时，高温加热过程中，不同成分间发生系列化学反应，生成了新的抗菌物质，而不同细菌对这类抗菌物质的耐性存在差异。
［１１］张红英，崔保安，夏平安，等．７种中草药提取物对猪链球菌的体外
抑菌试验［Ｊ］．河南农业科学，２００６，（７）：１１３一１１４．
［１２］ＤｅｅｐａｋＧａｎｊｅｗａｌａ，ＳｉｌｖｉｙａＳａｍ，ＫｉｓｈｗａｒＨａｙａｔＫｈａｎ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＣＯｌｌｌ—ｐｏｓｔｉｔｉｏｎｓａｎｄａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ１．ａｒａｍｔａ∞ｍ。ｒ廿ｐｌａｒＩｔｓｗｉｔｈｙｅｌｌｏｗ，ｌａｙ—ｅｎｄｅｒ，姒Ｉａｎｄ“ｉｖ＊ｆｌｏｗｅｒｓ【Ｊ］，ＥｕｒＡｓｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏＳｄｍｅｅｓ，２００９，（３）：６９—７７．
［１３］Ｏ．ＯｌｕｗａｄａｙｏＳｏｎｉｂａｒｅ，１．Ｅｆｆｉｏｎｇ．Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉ＇，ｄ
ｏｆｏｆ
ｅｆｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｏｆ［ａｎｔａｎａ
ｃａｌｌｌａｒａ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ａｎｄ
ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ
３讨论
国外学者ＤｅｅｐａｋＧａｎｊｅｗａｌａ和Ｏ．ＯｌｕｗａｄａｙｏＳｏｎｉｂａｒｅ等
Ｌ．１ｅａ＿ｖｅｓｆｒｏｍ
Ｎｉｇｅｒｉａ【Ｊｊ．ＭｒｉｅａｎＪｏｕｍａｌ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｉｏｇｙ，２００８，７（１５）：２６１８—２６２０．
万方数据
２００９年１９（６）
生物技术
８３
常小鼠血糖的影响，实验结果见表２。
缺乏：三是用化学药物对抗胰岛素作用，导致动物出现高血糖
表２褐蘑菇碱提物对正常小鼠血糖的影响
形成糖尿病口ｏ。本实验采取损伤法，即每只小鼠以７０ｍｇ／ｋｇ尾Ｔａｂｌｅ
２
Ｔｈｅ
ｉｒｒｘｐａｃｔ
ｄ伽而Ⅲｓ
６匈）Ｄｎ＾ｓ
ｅｘｔｒａｃｔ
ｂａｓｅｏｆｔｈｅｎｏｒｍａｌｂｌｏｏｄ
ｓｕｇａｒ
静脉注射新配制四氧嘧啶溶液的方法，该法操作简单，是目前ｉｎｍｉＣｅ
采用较多的方法。四氧嘧啶是一种８一细胞毒剂，可选择性地组别，。嘴．嚣一，。竺答，篙尹
损伤鼠的胰岛Ｂ一细胞，引起实验性糖尿病。四氧嘧啶引起的实验性糖尿病近似人类糖尿病，胰岛外分泌不受损伤，几乎所空白对照组
１０
一４．８９８±０．４９１
有常用实验动物都可以进行该实验研究，且动物不用注射胰褐蘑菇碱提物低剂量组１０１００４．４３５±０．３８０＊
９．４岛素即可存活很久。实验动物注射四氧嘧啶后，血糖水平的褐蘑菇碱提物中剂量组ｔ０２００
４．３７６±０．６７２＊
１０．７变化通常出现三个时期：早期短暂的高血糖期（约１～４ｈ），接褐蘑菇碱提物高剂量组
１０
４００
４．４１０±０．５４６＊
１０
着是释放大量的胰岛素而引起低血糖期（约持续４８ｈ），然后是‘：ｐ＜Ｏ．０５。
胰岛素耗竭产生持久性的高血糖期（４８ｈ以后）ｂＪ。
表２的结果表明，灌胃褐蘑菇碱提物对正常小鼠血糖有３．２褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶糖尿病小鼠的防治作用
降低作用，褐蘑菇碱提物高、中、低剂量组与空白对照组相比，糖尿病人最显著的症状之一是血糖异常升高，从本研究均到达显著水平（Ｐ＜０．０５），其中褐蘑菇碱提物中剂量组的降预防糖尿病的实验结果来看褐蘑菇碱提物中剂量组血糖值与血糖效果要优于高、低剂量组。
２．２褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠血糖的影响
模型对照组相比降低极显著（Ｐ＜０．０１），高、低剂量组也有显褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠的影响，结果著降低血糖作用（Ｐ＜０．０５）（表１），说明褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶所致糖尿病的形成有显著的预防作用。从实验结果来如表３所示。
看，褐蘑菇碱提物能显著降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖水表３褐蘑菇碱提物对四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠血糖的影响Ｔａｂｌｅ平，褐蘑菇碱提物高、中、低剂量组对糖尿病小鼠的降糖率分３
Ｔｈｅｉｍｐａｃｔ
ｏｆ＾严五∞６趣Ｐ０ｎⅡｅｘｔｒａｃｔ
ｂａｓｅｏｆ．，ｄｌｏｘａｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ
ｔｅ—
别是１６．９％、２０．２％和１５．１％。同时，从数据中能够看出褐蘑ｔｒａｏｘｙｐｙｒｉｒｎｉｄｉｎｅ
ｂｌｏｏｄ
ｓｕｇａｒｉｎ
ｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅ
菇碱提物中剂量组降糖效果要优于高、低剂量组。有无临床组别、。嚣一，。竺％譬豸尹
应用价值有待进一步深入研究。
正常对照组１０～４．９９１±０．８２７参考文献：
模型对照组
ｌＯ
～１９．４６２±１．８４０
［１］刘莹．褐蘑菇营养成分分析及玉米秸杆培养料研究［Ｄ］．长春：东北褐蘑菇碱捉物低剂量组１０
１００１６．５２２±２．２２４＊１５．１师范大学硕士论文，２１３０７．
褐蘑菇碱提物中剂量组１０２００１５，５１６±１．７０６＊＊２０．２［２］刘莹，张丽萍．褐蘑菇多糖脱蛋白方法研究［Ｊ］．广东农业科学，
褐蘑菇碱提物高剂量纽１０４００１６．１６３±２．７５９＊１６．９２００８，２２１（８）：１１４—１１５．
阳性对照组（消渴丸）１０
６００
１４．８３２±１．８９＿５＊＊
２５．１
［３］傅博强，谢明勇，周鹏．茶叶多糖的提取纯化、组成及药理作用研究＋：ｐ＜０．０５；＊。：ｐ＜０．Ｏｌ。
进展［Ｊ］．南昌大学学报：理科版，２００１，２５（４）：３５８—３６４．
由表３的实验结果可见，褐蘑菇碱提物能显著降低四氧［４］王庭欣，赵文，蒋东升，等．海带多糖对糖尿病小鼠血糖的调节作用嘧啶所制备的糖尿病小鼠血糖浓度。褐蘑菇碱提物高、中、低［Ｊ］．营养学报，２００１，２３（２）：１３７—１３９．
剂量组对糖尿病小鼠的降血糖率分别是１６．９％、２０．２％和１５．［５］汪建红，陈晓琴，张蔚佼．黑果枸杞果实多糖降血糖生物功效及其１％。同时，表中数据显示褐蘑菇碱提物中剂量组降血糖效果机制研究［Ｊ］．食品科学，２００９，３０（５）：２４４—２４８．［６］ＸＵ
ＤＬ，ＨＵＡＮＧｘ
Ｗ
要优于高、低剂量组。
ｃ，ＹＡＮＧＧ，ｅｔａ１．Ａｎ＇，ｄｙｓｉｓｏｆｎｕｔｒｉｔｉｏｎｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
ｏｆ
ｏｆ
３讨论
Ｅｒａｅｒｍｏｒｐｈａｐｒｏｌｉｆｅｒａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌｚｈｅｊｉａ曜ＯｃｅａｎＵｍｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ
ＳｉｅｚＨｅｅ）（浙江海洋学院学报：自然科学版），２００３，２２（４）：３１８—３２０．３．１建立糖尿病实验性动物模型
［７３余杰，崔鹏举，陈美珍，等．富硒发酵毛头鬼伞菌丝对四氧嘧啶致糖糖尿病实验性动物模型的建立方法很多，基本分三种：一尿病小鼠抗氧化和降血糖的影响（英文）［Ｊ］．菌物学报，２００９，２８（Ｉ）：
是用各种方法损伤动物胰脏；二是胰岛８一细胞导致胰岛素的
１２０—１２８
马缨丹抑茵试验研究
林燕文１，童义平２
（１．韩山师范学院生物系，广东潮州５２１０４１；２．韩山师范学院化学系，广东潮州５２１０４１）
摘要：目的：研究马缨丹的体外抑菌效果。方法：制备马缨丹水煎煮液和乙醇提取液，测定其对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度及灭菌前后提取液抑菌效果的变化。结果：当两种提取液生药含量大于０．４ｇ／ｍＥ时，它们对三种细菌的抑菌效果依次为：枯草芽孢杆菌＞金黄色葡萄球菌＞大肠杆菌。马缨丹乙醇提取液对三种细菌的最小抑菌浓度分别为１／６４９／ｍＬ、１／１６９／ｍＬ和１／３２９／ｍＬ，都比水煎煮液的结果１／３２９／ｍＬ、１／８９，ⅡｌＬ和１／１６９／ｍＬ低。两种提取液经１２１℃高压蒸汽灭菌处理后对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用有所增强。结论：两种提取液对三种细菌均有不同程度的抑制作用，因此，马缨丹可考虑用于食品、化妆品及饲料防腐等领域，以提高产品质量。
关键词：马缨丹；水煎煮液；乙醇提取液；抑菌试验；最小抑菌浓度
中图分类号：Ｑ９４９．９
文献标识码：Ａ
文章编号：１００４—３１１Ｘ（２００９）０６—００８３一０３
Ｓｔｕｄｙ
ｏｎ
ｔｈｅＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＥｘｏｅｒｉｍｅｎｔｏｆＬａｎｔａｎａｃａｍａｒａ
ＬＩＮＹａｈ—ｗｅｎｌ．ＴＯＮＧＹｉ—ｐｉｎ９２
（Ｉ．ＤｅｐａｒＵｎｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇｙ，ＨａｎｓｈａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｏ小ｏｕ５２１０４１，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｑＪａｌ乜ＴｍｔｏｆｃｈｅｍｉｓＷ，ＨａｎｓｈａｌｌＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｏｚｈｏｕ５２１０４１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｅ
ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｆ／．，９１．／ｌ／ｚｌｍａｓｔｕｄｉｅｄｉｎＬａｎ／洲ＣＯ／／１０５０，ｗｅｒｅ
ｃｏ／／ｌａｒｚ／，ｗｅｒｅ
ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ
ｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔａｎｄｔｈｅｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍ
ｐｒｏｄｕｃｅｄ，ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ
ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｎｔｈｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｉｌｄｔｉｂｉｔｉｏｎＺｏｎｅ，ｔｈｅｍｉｎｉｍａｌｉｎｈｉｂｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｔｏＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ．ＥｓｃｋｒｉｃｈｍｃｏｉｌａｎｄＳｔａｐｈｙ／ｏｃｏｃｃｕｓ国口明岱ｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｆａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｓｅｔｗｏｅｘｔｒａｃｔｆｉｏｍＬａｎｔａｎａｃａｎｌａｒａｗａｓＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ＞Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａ１１１ｅｌｉｓ＞Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｗｈｅｎｔｈｅｃｏｎｅｅｎｔｒａ・
ｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｅｔｗｏｅｘｔｒａｃｔｗｅｒｅ
ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ０．４ｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ
ｍｉｎｉｍａｌ
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方数据
生物技术
Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ
２００９年１９（６）
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１／３２９／ｍＬ，１／８９／ｍＬａｎｄ１／１６９／ｎｒＬ．Ｔｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｓｅ
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ｃａｎｈｅａｄｄｅｄｔｏ￥ｏｎｌｅｆｏｏｄ．ｃｏｓｍｅｔｉｃｓａｎｄｆｅｅｄｓｔｕｆｆａｓ
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马缨丹（￡ｎｎ把胁ｃ鲫舭）又名五色梅、如意草，属马鞭草科
（Ｖｅｒｈｅｎａｃｅａｅ）马缨丹属（Ｌａｎｔａｎａ）植物，原产热带美洲，广泛分
布在热带和亚热带地区，其繁殖和适应能力强，侵占大面积牧
场和耕地，被视为世界上１０种有害杂草之一…，我国广东、广西和福建等省均有野生和栽培。虽然马缨丹是外来入侵植
物［２］，是有害杂草，但其根、叶、花均可作药用，具清热解毒、散
解止痛、祛风止痒之功效【３】。近年来，国内外对马缨丹的研究主要有化学成分分析、植物化感作用以及其对有害昆虫、线虫的毒理作用¨“】，关于马缨丹对微生物抑制作用的研究很少。本实验研究马缨丹水煎煮液和乙醇提取液在体外对３种常见细菌的抑菌效果，为马缨丹在食品工业及化妆品、饲料等其它工业中的开发和利用提供理论依据。
１材料与方法
１．１材料１．１．１实验材料
植物材料：马缨丹，采自广东省潮州市慧如公园，洗净后
８０。Ｃ烘干备用。
供试菌种：枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）、大肠杆菌（西一
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）、金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｔｌｒｅｌｌｕ），由韩山师
范学院微生物室提供。
１．１．２试剂
９５％乙醇、氯化钠、盐酸等均为分析纯，广州化学试剂厂；牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉均为生物化学试剂，广东环凯微生物科技有限公司。１．１．３仪器
ＬＤＺＸ一５０ＫＢ不锈钢自动型压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；ＳＷ—ａ—ＩＣ型双人单面净化工作台（苏州净化设备有限公司）；ＳＰＸ一２７０型培养箱（宁波市科技园区新江南仪器有限公司）；ＤＧＸ一９２４３Ｂ一１鼓风干燥箱（上海福玛实验设备有限公司）；ＳＨＢ—ＩＩＩ型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；ＲＥ一５２Ｄ旋转蒸发器（上海春泸西仪器厂）；ＨＨ一２恒温水浴锅（江苏金坛市宏华仪器厂）；ＰＨＳ一３ＤｐＨ计（上海雷磁）：ＦＡｌｌ０４型电子天平（上海衡平仪器仪表厂）。１．１．４培养基
牛肉膏蛋白胨固体培养基和液体培养基。１．２方法
１．２．１马缨丹水煎煮液的制备
称取１００９马缨丹，剪碎并研磨，加入５００ｍＬ蒸馏水，浸泡３０ｍｉｍ，小火煮沸３０ｎｆｉｎ，抽滤得滤液，药渣再加５００ｍＬ蒸馏水，小火煮沸３０ｒａｉｎ，再次抽滤得滤液，合并两次滤液，然后小火加热蒸发浓缩至１００ｍＬ，制成含生药量为ｌ异，ｎ正马缨丹水煎煮液，４。Ｃ保存待用。
１．２．２马缨丹乙醇提取液的制备
称取１００９马缨丹，剪碎并研磨，加入５００ｒａＬ９５％乙醇，浸泡３ｈ后抽滤得滤液，药渣再加５００ｍＬ９５％乙醇，浸泡３ｈ后再次抽滤得滤液，合并两次滤液，用低温（≤６００Ｃ）减压蒸馏回收乙醇，浓缩制成含生药量为ｌ∥ｍＬ马缨丹乙醇提取液，４℃保存待用。
１．２．３菌悬液的制备旧１
将供试菌种分别接于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，３７。Ｃ
收稿日期：２００９—０６—１７；修回日期．＇２００９—０９—１２
作者简介：林燕文（１９７５一），女，学士，高级实验师，研究方向：食品微生物学，在核心期刊、ＳＣＩ收录期刊发表论文近３０篇，Ｆｍｍｉｌ：ｌｙｗ７５１６＠
１２６．ｃｏｍ。
万
方数据恒温培养２４ｈ后，取１环接于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置
３７℃恒温培养２４ｈ。进行平板菌落计数，根据计算结果用无菌
生理盐水将菌液调至约为ｌ驴ｄｕ／ｍＬ，４ｃｃ保存待用。１．２．４抑菌实验方法
１．２．４．１抑菌圈大小测定¨０’川
用无菌刻度吸管吸取ｌｍＬ供试菌液置于无菌培养皿中，再倒入溶化并冷却至５０。Ｃ左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约１５ｍＬ，轻轻转动培养皿，使菌液与培养基混合均匀，冷凝制成平板。将含生药量为ｌｖｇｍＬ的马缨丹水煎煮液和乙醇提取液，前者用无菌水后者用少量乙醇溶解后加无菌水稀释成浓度为０．８９／ｍＬ、０．６９ＣｍＬ、０．４９／ｍＬ、０．２９／ｍＬ、０９／ｍＬ（对照）的药液。用无菌镊子将直径为６ｍｒａ的灭菌干燥滤纸片分别放入装有各浓度药液的培养皿中浸泡３０ｍｉｒａ，然后取出滤纸片，在培养皿内壁上滤去多余的药液，将滤纸片贴人上述平板的表面，每皿贴４片，每菌每种浓度重复做３次，贴好滤纸片的平板在室温下放置２０ｍｉｒａ后倒置于３７℃恒温培养２４ｈ，取出测定抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。
Ｉ．２．４．２最小抑菌浓度（ＭＩｃ）测定
采用试管２倍稀释法测定ＭＩＣ［１¨。取１０支灭菌试管，各管分别加入牛肉膏蛋白胨液体培养基ｌｍＬ，在第１管中加入ｌｍＬ灭菌的１９，ｒＩｌＬ马缨丹提取液，混匀后吸取ｌｍＬ加入到第２管中，依次类推，直至第８管，第８管吸取ｌｍＬ弃去，使其成１：２、１：４、１：８、１：１６等浓度梯度。向１～８管中分别加入０．０５ｍＬ菌液，第９管不加马缨丹提取液，加菌液０．０５ｍＬ作为对照，以观察细菌的生长情况。第１０管加马缨丹提取液ｌｍＬ，混匀后，不加菌液，以观察提取液是否被污染。重复实验３次，将各管置于３７。Ｃ恒温培养２４ｈ，观察结果。若药液透明，可直接判定结果，若色泽较深，则用接种环挑取１环培养液于牛肉膏蛋白胨固体培养基上划线培养１８～２４ｈ，观察结果，以无菌生长的最低稀释度为ＭＩＣ。
１．２．４．３温度对抑菌效果影响测定
将浓度为０．５９／ｍＵ的两种马缨丹提取液经１２ｌ℃高压蒸汽灭菌处理后，采用１．２．４．１中所用的滤纸片法测定抑菌圈直径，以确定高压蒸汽灭菌对马缨丹提取液抑菌效果的影响。１．２．５数据分析
所得数据采用ＳＰＳＳ１７．０软件分别进行多重比较分析和ｔ检验分析。
２结果与分析
２．１抑菌圈大小的测定结果
采用滤纸片法测定马缨丹水煎煮液和乙醇提取液的抑菌圈直径，结果见表１。
由表１可知，当马缨丹两种提取液生药含量大于０．４∥ｍＬ时，它们对３种细菌都有一定的抑制作用，抑菌效果依次为：
枯草芽孢杆菌＞金黄色葡萄球菌＞大肠杆菌。马缨丹乙醇提
取液在较大浓度（１．Ｏｇ／ｍＬ）时，对３种细菌的抑制效果都强于其水煎煮液。随着两种提取液浓度的增大，抑菌圈直径也逐渐增大，但当药液浓度较低（≤Ｏ．６９／ｍＬ）时，随着药液浓度的增大，马缨丹两种提取液对大肠杆菌的抑制作用变化不明显。
由表１还可见，当马缨丹乙醇提取液浓度在１９，，１１Ｌ时，其对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别可达１４．５ｎ１Ｉｌ】和１３．４ｍｍ，具很好的抑菌效果；另外，在此浓度时，马缨丹水煎煮液对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径达１３．Ｏｍｍ，也具有很好的抑菌效果。
２．２最小抑菌浓度的测定结果
２００９年１９（６）
表１马缨丹提取液对供试细菌的抑菌圈直径（单位：－ｎｍ）
Ｔ｝ｌｌ－ｅ
１
Ｄｉａｍｅｔｅｒ
生物技术８５
ｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ加ｎｅｏｆ
ｅｘｌ／ｌｔｃｔ
ｆｒｏｍ厶玑抛，ｍｃａ／／砬ｒａｏｎ
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ｂａｃｔｅｒｉａ（ｕｎｉｔ：ｍｉｌｌ）
注：数据为平均值±标准差，同列不同英文小写字母和同行不同英文大写字母均表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。数据为３次平行实验的结果，因为滤纸片的直径为６ｍｍ，所以在抑菌圈直径为６ｍｍ，抑菌作用实际为０。
采用试管２倍稀释法测定马缨丹两种提取液对３种细菌的ＭＩＣ，结果见表２。
表２马缨丹提取液对供试细菌的ＭＩＣ
Ｔａｂｌｅ２
ＭＩＣｏｆ
人ｕ２。列在近两年中，研究了用乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂制备马缨丹花和叶的提取液以及从叶中提取挥发油开展抑菌试验的研究，结果发现马缨丹的花和叶的提取液以及从叶中提取的挥发油对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有一定的抑制作用。本文将马缨丹全株作为材料制备水煎煮液和乙醇提取液，探讨它们对上述３种细菌的体外抑菌效果，未见有相关报道，本试验为充分利用马缨丹的抑菌价值提供了一定的依据。
本实验采用水煎煮法和乙醇提取法制备的马缨丹提取液化学成分复杂，抑菌效果可能是其中多种有效成分共同作用的结果，以后可考虑对提取液进行成分分离，并对有抑菌效果的物质进行结构分析和鉴定。究竟哪种有效成分抑菌效果最好，还有待进一步研究。
目前，马缨丹主要用于园林观赏和治疗一些疾病，本实验研究结果为拓宽马缨丹的应用领域奠定了基础，今后，可考虑将马缨丹应用于食品、化妆品及饲料等产品的防腐，开发新型优质产品，充分利用这种入侵植物化废为宝。
参考文献：［Ｉ］Ｇｈｉｓａｌｂｅｒｔｉ
Ｅ．Ｌ．．１ａｎｔａｎａ
ｅｘｔｒａｃｔ
ｆｒｏｎｌｌａｒａａｒｍｏⅡｍａｒａｏｎ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｂａｃｔｅｒｉａ
注：表２中“一”表示无菌生长；“＋”表示有菌生长。
从表２可知，马缨丹两种提取液对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的ＭＩＣ小于其对大肠杆菌的ＭＩＣ，即两种提取液对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用较强，而它们对大肠杆菌的抑制作用较弱。马缨丹乙醇提取液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的ＭＩＣ分别是１／６４９／ｍＬ、１／１６
ｇ／Ｉｎ丽１／３２９／ｎ】Ｌ，都比水煎煮液对３种细菌的ＭＩＣ即１／３２
ｇ／ｍＬ、１／８９／ｍＬ和１／１６９／ｍＬ低，即前者抑菌效果强于后者。２．３温度对抑菌效果影响的测定结果
马缨丹两种提取液灭菌前后对供试细菌的抑菌圈直径见表３。
表３马缨丹提取液灭菌前后对供试细菌的抑菌圈直径（单位：ｉｎｍ）Ｔａｂｌｅ３
Ｈ℃ｎｔ
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７，Ｏｒｌｅ
ｏｆｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍＬａｍａｎａｃａｍａｒａｏｎ
ｅｘｐｅｒｉ—
ｂａｃｔｅｒｉａｂｅｆｏｒｅｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ（ｕｎｉｔ：ｎｌｍ）
灭菌后抑菌圈直径灭菌前抑菌圈直径
马缨丹提取液类别
供试细菌
Ｌｉｕ—Ｆａ，ｅｔ
ａ１．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＬａｎ—
ｃａｍａｒａｌｅｄ
ｅｘｔｒａｃｔｏｎ
ｔｉｏｎｏｆ
Ｈ２０２
ｉｎｗａｔｅｒ
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注：数据为平均值±标准差；＊＊表示差异极显著（Ｐ＜０．０１）；＊表示差异显著（尸＜Ｏ．０５）。
数据为３次平行实验的结果，因为滤纸片的直径为６ｍｍ，所以在抑菌圈直径为６ｍｍ。抑菌作ｊ玎实际为０。
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表３结果表明，马缨丹两种提取液中的抑菌物质热稳定性较好，经１２ｌ℃高压蒸汽灭菌处理后，两者对枯草芽孢杆菌的抑制效果较灭菌前有极显著增强，乙醇提取液对金黄色葡萄球菌的抑制效果较灭菌前也有极显著增强，水煎煮液对金黄色葡萄球菌的抑制效果较灭菌前稍有增强，而它们对大肠杆菌的抑制作用，灭菌前后变化不大。分析原因，可能是灭菌时，高温加热过程中，不同成分间发生系列化学反应，生成了新的抗菌物质，而不同细菌对这类抗菌物质的耐性存在差异。
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ｏｆｏｆ
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ｃａｌｌｌａｒａ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ａｎｄ
ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ
３讨论
国外学者ＤｅｅｐａｋＧａｎｊｅｗａｌａ和Ｏ．ＯｌｕｗａｄａｙｏＳｏｎｉｂａｒｅ等
Ｌ．１ｅａ＿ｖｅｓｆｒｏｍ
Ｎｉｇｅｒｉａ【Ｊｊ．ＭｒｉｅａｎＪｏｕｍａｌ
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万方数据