・ ・ 562 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2005, 36（9）
黄芪中黄芪多糖含量测定方法的比较
杨 莉1，王志华2，陶健生2
（１． 上海交通大学附属瑞金医院药剂科，上海２０００２５；２． 上海中医药大学药学院，上海２０１２０３）
摘要：比较了采用苯酚-浓硫酸比色法和蒽酮-浓硫酸比色法，以葡萄糖和葡聚糖（分子量约20000）两种对照品测定黄芪中多糖含量的方法。结果显示，以葡聚糖为对照品、蒽酮-浓硫酸比色法测定线性关系较好（r =0.9990），平均回收率97.9％，RSD 1.53％。并测定了7个品种黄芪药材中黄芪多糖的含量。
关键词：黄芪多糖；苯酚-浓硫酸比色法；蒽酮-浓硫酸比色法；测定
中图分类号：R927.2；O657.32 文献标识码：A 文章编号：1001-8255（2005）09-0562-02
黄芪为豆科植物膜荚黄芪［Astragalus mem-branaceus （Fisch. ） Bge. ］或蒙古黄芪［Astragalus membranaceus （Fisch. ）Bge. var. mongholicus （Bge. ）Hsiao ］，具补中益气、升阳固表、托毒生肌、利水退肿之功［1］。黄芪多糖（1）是黄芪的有效成分之一，现代药理学研究表明，具有抗衰老、抗过氧化、促进免疫功能活性、改善心血管功能［2］、抗肿瘤等作用［3］。临床常用作免疫增强剂。
对黄芪药材中的1提取，本研究参考文献［4］并作适当改进，分别采用苯酚-浓硫酸比色法和蒽酮-浓硫酸比色法，以葡萄糖和葡聚糖（分子量约20000）为对照品测定，并进行了比较。1 仪器与试药
UV-VIS 分光光度仪（日本岛津）。
葡萄糖和葡聚糖（分子量约20000）对照品（中国药品生物制品检定所）；黄芪药材（上海市药材公司提供并鉴定）。
2.2 1样品溶液的制备
将黄芪药材粉碎后于60℃干燥，精密称取约10g ，加水回流提取（50ml ×3），每次1h ，趁热过滤，滤液合并，60℃浓缩至约20ml ，加乙醇至含乙醇量约85％，密闭静置24h ，抽滤，滤饼用70％乙醇洗涤3次，60℃水浴挥尽乙醇，残留物为1样品，用适量水于60℃水浴溶解，离心（2000r/min）15min ，取上清液定容至1000ml 。2.3 最大吸收波长的选择
苯酚-浓硫酸比色法［5］：分别精密量取葡萄糖或葡聚糖对照品溶液0.6ml ，加水定容至2ml ，精密加入5％苯酚水溶液1m l 、浓硫酸5m l ，混匀。另以未加葡萄糖或葡聚糖的溶液为参比，分别于400～600n m 范围内扫描，测得最大吸收波长均为490nm 。
蒽酮-浓硫酸比色法［6］：分别精密量取葡萄糖或葡聚糖对照品溶液0.6ml ，加水定容至2ml ，精密加0.2％蒽酮-浓硫酸溶液4ml ，混匀。另以未加葡萄糖或葡聚糖的溶液为参比，分别于500～700nm 范围内扫描，测得最大吸收波长均为625nm 。
取1样品溶液同上述两种方法显色后扫描，所得最大吸收波长与对照品溶液一致。2.4 稳定性试验
取1样品溶液按“2.3”项下两种方法显色后，分别于490nm 和625nm ，每隔一段时间测定吸收度A 。结果显示，苯酚-浓硫酸法显色后，由于苯酚易氧化，随放置时间增加溶液颜色不断加深，A 不断增大；蒽酮-浓硫酸法在显色30min 后，A 趋于稳定，时间约3h 。因此以下试验采用蒽酮-浓硫酸
2 方法与结果2.1 溶液配制
对照品溶液：精密称取葡萄糖和葡聚糖对照品各约10mg ，分别加水溶解并定容至100ml 。
5％苯酚水溶液：取苯酚适量，加铝片0.1g 和碳酸氢钠0.05g ，蒸馏，所得新馏苯酚用水配成5％苯酚水溶液（棕色瓶保存）。
0.2％蒽酮-浓硫酸溶液：精密称取蒽酮0.2g ，用浓硫酸溶解并定容至100ml 。
收稿日期：2005-01-12
作者简介：杨 莉（1972），女，主管药师，从事中药制剂质量研究。
Tel ：021-64370045×665125
E-mail ：[email protected]
563中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2005, 36（9） ・ ・
比色法测定，显色时间为60m in 。2.5 标准曲线
分别精密量取“2.1”项下葡萄糖或葡聚糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1ml ，按蒽酮-浓硫酸比色法操作，显色60min 后于625nm 处测吸收度A ，以A 为纵坐标，溶液中对照品的量W 为横坐标，进行线性回归，得葡萄糖回归方程A ＝5.75×10－3W ＋1.28×10－2，r ＝0.9979；葡聚糖回归方程A ＝8.32×10－3W －7.90×10－3，r ＝0.9990。线性范围均为20～100µg 。
因葡聚糖与1的分子量更接近，以下实验选择葡聚糖为对照品。2.6 回收率试验
称取已知1含量的黄芪药材样品，分别加入葡聚糖对照品适量，按“2. 2”项下方法制备并测定，由回归方程计算得平均回收率为97. 9％，RSD 为1.53％。2.7 1的含量测定
精密量取1样品溶液0.1ml ，按蒽酮-浓硫酸法显色60min 后于625nm 测吸收度A ，由回归方程计算黄芪药材中1含量。结果见表1。
［6］［4］［3］［2］
表1 7个品种黄芪药材中1含量测定结果
（％，n ＝6）
黄芪样品
膜荚黄芪（陕西）膜荚黄芪（崇明）膜荚黄芪（新疆）膜荚黄芪（山西）西藏黄芪蒙古黄芪红芪
含量5.46±1.285.76±0.595.11±1.255.33±1.486.76±0.945.87±1.787.58±0.72
参考文献：
［1］
郑虎占, 董泽宏, 余 靖. 中药现代研究与应用［M ］. 北京: 学苑出版社, 1998. 2729.
黄 桢. 黄芪多糖的药理研究进展［J ］. 中国临床药学杂志, 2002, 11（5）: 315.
袁利超, 程延安, 等. 大黄素、黄芪多糖抑制大鼠肝癌的研究［J ］. 中华现代内科学杂志, 2004, 1（5）: 391.
张洪波, 任春晓. 黄芪叶提取及黄芪多糖测定方法研究［J ］. 黑龙江医药, 2005, 18（1）: 6-8.［5］
Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK, et al. Colorimetric methodfor determination of sugars and related substances［J ］. Anal Chem , 1956, 28: 350.
张惟杰. 复合多糖生化研究技术［M ］. 上海: 上海科学技术出版社, 1987.
Comparison of the Methods for Determination of Astraglus Polysaccharides
in Radix Astragali
YANG Li1, WANG Zhi-Hua2, T AO Jian-Sheng2
（1. Dept. of Pharmacy, Ruijin Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200025;2. College of Pharmacy, Shanghai University of Traditional Chinese Medicines, Shanghai 201203）
ABSTRACT : Phenol-sulfuric acid and anthrone-sulfuric acid colorimetric methods for determination of astragluspolysaccharides in Radix Astragali were compared with glucose and dextran（Mw 20000） as the reference, respectively. Theresults showed that the correlation coefficient of anthrone-sulfuric acid method with the dextran reference was better. Theaverage recovery was 97.9％ with RSD of 1.53％. And contents of astraglus polysaccharides in seven different specimens ofRadix Astragali were determined by this method.
Key Words: astraglus polysaccharide; phenol-sulfuric acid colorimetric method; anthrone-sulfuric acid colorimetricmethod; determination
fffffffffffffffffffffffffffffffffffffffff
B36-18 一种来源于芽胞杆菌KR-8104，低pH 时稳定且具活性的非钙依赖性α-淀粉酶 Sajedi RH等［Enzyme Microb Technol, 2005, 36（5-6）: 666-671］
从土样中分离18株菌株并从中筛选得可产生淀粉酶的芽胞杆菌KR-8104。在pH5～6的生产培养基中，经60～65h 培养，可获得最高产量。利用离子交换和疏水交互作用柱色谱分离纯化得
到新的胞外非钙依赖性α-淀粉酶。经SDS-PAGE 电泳得到表观分子量为59k 的单一条带。该酶在一个较宽pH 范围内均具活性，pH 4.0～6.0时具有最大活性，pH 3.5时具有最大活性的90％。该α-淀粉酶的最适温度为75～80℃。Ca 2＋和EDTA 的存在与否对酶活性和热稳定性均无影响。
［袁 宁译 胡又佳校］
・ ・ 562 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2005, 36（9）
黄芪中黄芪多糖含量测定方法的比较
杨 莉1，王志华2，陶健生2
（１． 上海交通大学附属瑞金医院药剂科，上海２０００２５；２． 上海中医药大学药学院，上海２０１２０３）
摘要：比较了采用苯酚-浓硫酸比色法和蒽酮-浓硫酸比色法，以葡萄糖和葡聚糖（分子量约20000）两种对照品测定黄芪中多糖含量的方法。结果显示，以葡聚糖为对照品、蒽酮-浓硫酸比色法测定线性关系较好（r =0.9990），平均回收率97.9％，RSD 1.53％。并测定了7个品种黄芪药材中黄芪多糖的含量。
关键词：黄芪多糖；苯酚-浓硫酸比色法；蒽酮-浓硫酸比色法；测定
中图分类号：R927.2；O657.32 文献标识码：A 文章编号：1001-8255（2005）09-0562-02
黄芪为豆科植物膜荚黄芪［Astragalus mem-branaceus （Fisch. ） Bge. ］或蒙古黄芪［Astragalus membranaceus （Fisch. ）Bge. var. mongholicus （Bge. ）Hsiao ］，具补中益气、升阳固表、托毒生肌、利水退肿之功［1］。黄芪多糖（1）是黄芪的有效成分之一，现代药理学研究表明，具有抗衰老、抗过氧化、促进免疫功能活性、改善心血管功能［2］、抗肿瘤等作用［3］。临床常用作免疫增强剂。
对黄芪药材中的1提取，本研究参考文献［4］并作适当改进，分别采用苯酚-浓硫酸比色法和蒽酮-浓硫酸比色法，以葡萄糖和葡聚糖（分子量约20000）为对照品测定，并进行了比较。1 仪器与试药
UV-VIS 分光光度仪（日本岛津）。
葡萄糖和葡聚糖（分子量约20000）对照品（中国药品生物制品检定所）；黄芪药材（上海市药材公司提供并鉴定）。
2.2 1样品溶液的制备
将黄芪药材粉碎后于60℃干燥，精密称取约10g ，加水回流提取（50ml ×3），每次1h ，趁热过滤，滤液合并，60℃浓缩至约20ml ，加乙醇至含乙醇量约85％，密闭静置24h ，抽滤，滤饼用70％乙醇洗涤3次，60℃水浴挥尽乙醇，残留物为1样品，用适量水于60℃水浴溶解，离心（2000r/min）15min ，取上清液定容至1000ml 。2.3 最大吸收波长的选择
苯酚-浓硫酸比色法［5］：分别精密量取葡萄糖或葡聚糖对照品溶液0.6ml ，加水定容至2ml ，精密加入5％苯酚水溶液1m l 、浓硫酸5m l ，混匀。另以未加葡萄糖或葡聚糖的溶液为参比，分别于400～600n m 范围内扫描，测得最大吸收波长均为490nm 。
蒽酮-浓硫酸比色法［6］：分别精密量取葡萄糖或葡聚糖对照品溶液0.6ml ，加水定容至2ml ，精密加0.2％蒽酮-浓硫酸溶液4ml ，混匀。另以未加葡萄糖或葡聚糖的溶液为参比，分别于500～700nm 范围内扫描，测得最大吸收波长均为625nm 。
取1样品溶液同上述两种方法显色后扫描，所得最大吸收波长与对照品溶液一致。2.4 稳定性试验
取1样品溶液按“2.3”项下两种方法显色后，分别于490nm 和625nm ，每隔一段时间测定吸收度A 。结果显示，苯酚-浓硫酸法显色后，由于苯酚易氧化，随放置时间增加溶液颜色不断加深，A 不断增大；蒽酮-浓硫酸法在显色30min 后，A 趋于稳定，时间约3h 。因此以下试验采用蒽酮-浓硫酸
2 方法与结果2.1 溶液配制
对照品溶液：精密称取葡萄糖和葡聚糖对照品各约10mg ，分别加水溶解并定容至100ml 。
5％苯酚水溶液：取苯酚适量，加铝片0.1g 和碳酸氢钠0.05g ，蒸馏，所得新馏苯酚用水配成5％苯酚水溶液（棕色瓶保存）。
0.2％蒽酮-浓硫酸溶液：精密称取蒽酮0.2g ，用浓硫酸溶解并定容至100ml 。
收稿日期：2005-01-12
作者简介：杨 莉（1972），女，主管药师，从事中药制剂质量研究。
Tel ：021-64370045×665125
E-mail ：[email protected]
563中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2005, 36（9） ・ ・
比色法测定，显色时间为60m in 。2.5 标准曲线
分别精密量取“2.1”项下葡萄糖或葡聚糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1ml ，按蒽酮-浓硫酸比色法操作，显色60min 后于625nm 处测吸收度A ，以A 为纵坐标，溶液中对照品的量W 为横坐标，进行线性回归，得葡萄糖回归方程A ＝5.75×10－3W ＋1.28×10－2，r ＝0.9979；葡聚糖回归方程A ＝8.32×10－3W －7.90×10－3，r ＝0.9990。线性范围均为20～100µg 。
因葡聚糖与1的分子量更接近，以下实验选择葡聚糖为对照品。2.6 回收率试验
称取已知1含量的黄芪药材样品，分别加入葡聚糖对照品适量，按“2. 2”项下方法制备并测定，由回归方程计算得平均回收率为97. 9％，RSD 为1.53％。2.7 1的含量测定
精密量取1样品溶液0.1ml ，按蒽酮-浓硫酸法显色60min 后于625nm 测吸收度A ，由回归方程计算黄芪药材中1含量。结果见表1。
［6］［4］［3］［2］
表1 7个品种黄芪药材中1含量测定结果
（％，n ＝6）
黄芪样品
膜荚黄芪（陕西）膜荚黄芪（崇明）膜荚黄芪（新疆）膜荚黄芪（山西）西藏黄芪蒙古黄芪红芪
含量5.46±1.285.76±0.595.11±1.255.33±1.486.76±0.945.87±1.787.58±0.72
参考文献：
［1］
郑虎占, 董泽宏, 余 靖. 中药现代研究与应用［M ］. 北京: 学苑出版社, 1998. 2729.
黄 桢. 黄芪多糖的药理研究进展［J ］. 中国临床药学杂志, 2002, 11（5）: 315.
袁利超, 程延安, 等. 大黄素、黄芪多糖抑制大鼠肝癌的研究［J ］. 中华现代内科学杂志, 2004, 1（5）: 391.
张洪波, 任春晓. 黄芪叶提取及黄芪多糖测定方法研究［J ］. 黑龙江医药, 2005, 18（1）: 6-8.［5］
Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK, et al. Colorimetric methodfor determination of sugars and related substances［J ］. Anal Chem , 1956, 28: 350.
张惟杰. 复合多糖生化研究技术［M ］. 上海: 上海科学技术出版社, 1987.
Comparison of the Methods for Determination of Astraglus Polysaccharides
in Radix Astragali
YANG Li1, WANG Zhi-Hua2, T AO Jian-Sheng2
（1. Dept. of Pharmacy, Ruijin Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200025;2. College of Pharmacy, Shanghai University of Traditional Chinese Medicines, Shanghai 201203）
ABSTRACT : Phenol-sulfuric acid and anthrone-sulfuric acid colorimetric methods for determination of astragluspolysaccharides in Radix Astragali were compared with glucose and dextran（Mw 20000） as the reference, respectively. Theresults showed that the correlation coefficient of anthrone-sulfuric acid method with the dextran reference was better. Theaverage recovery was 97.9％ with RSD of 1.53％. And contents of astraglus polysaccharides in seven different specimens ofRadix Astragali were determined by this method.
Key Words: astraglus polysaccharide; phenol-sulfuric acid colorimetric method; anthrone-sulfuric acid colorimetricmethod; determination
fffffffffffffffffffffffffffffffffffffffff
B36-18 一种来源于芽胞杆菌KR-8104，低pH 时稳定且具活性的非钙依赖性α-淀粉酶 Sajedi RH等［Enzyme Microb Technol, 2005, 36（5-6）: 666-671］
从土样中分离18株菌株并从中筛选得可产生淀粉酶的芽胞杆菌KR-8104。在pH5～6的生产培养基中，经60～65h 培养，可获得最高产量。利用离子交换和疏水交互作用柱色谱分离纯化得
到新的胞外非钙依赖性α-淀粉酶。经SDS-PAGE 电泳得到表观分子量为59k 的单一条带。该酶在一个较宽pH 范围内均具活性，pH 4.0～6.0时具有最大活性，pH 3.5时具有最大活性的90％。该α-淀粉酶的最适温度为75～80℃。Ca 2＋和EDTA 的存在与否对酶活性和热稳定性均无影响。
［袁 宁译 胡又佳校］