血红蛋白电泳操作规程
一．项目名称
血红蛋白电泳（HYDRAGEL HEMOGLOBIN）
二．检验方法名称
琼脂糖凝胶区带电泳
三．方法学原理
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同，这还与pH、电泳缓冲液的离子强度等有关。血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。实验使用洗涤过红细胞的溶血液来进行，在碱性的凝胶片上进行电泳来分离血红蛋白，分离出来的片段通过氨基黑染色剂来显色，烘干后的凝胶片就可以用来解释结果了。
四．方法学溯源
自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
五．仪器
（一） 型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)
（二） 分析和计算参数：
1． 处理量：约45个样本/小时
2． 所需样本量：10ul
3． 检验时间：约半小时
4． 重复性：有良好的批内和批间重复性
5． 电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）
电流0－500mA
功率0－100W
六．试剂及配套品
（一） 试剂
1． HYDRAGEL 7 HEMOGLOBIN（E）试剂盒
HYDRAGEL 15 HEMOGLOBIN（E）试剂盒
（1） 商标：SEBIA
（2） 包装规格：70测试/150测试
（3） 货号：PN4106/ PN4126
2． 脱色液
（1） 商标：SEBIA
（2） 包装规格：Pack for 10×100ml
（3） 货号：PN4540
(4) 成分：柠檬酸
3．洗涤液
（1） 商标：SEBIA
（2） 包装规格：Pack for 10×80ml
（3） 货号：PN4541
（4） 成分：叠氮钠
4．生理盐水
（二） 配套品
血红蛋白质控
（1） 商标：SEBIA
(2) 包装规格：Pack for 1×1ml
(3) 货号：PN4791
七．操作步骤
㈠ 开机，启动电泳仪。
㈡ 将加样梳置于平板上，有数字的一端向上，在2分钟内完成每块加样梳的加样，每孔加10ul样品，然后齿梳向上把加样梳放于湿盒内5分钟。
㈢ 选择“7/15Hb”电泳程序。当预期HYDRAGEL 7 / 15 HEMOGLOBIN(E)凝胶片上出现HbF和HbS，为了更好的分离，推荐使用“7/15 Hb F-S”电泳程序。
㈣ 从包装袋内取出缓冲条，将其固定在电极支架背侧的钉上，再取出凝胶，用薄滤纸快速轻轻地吸去凝胶表面多余的液体，在温控板表面下1/3处加120μl[HYDRAGEL 7 HEMOGLOBIN（E）]或200ul[HYDRAGEL 15 HEMOGLOBIN（E）]蒸馏水或去离子水，将凝胶片底边紧靠框架底边，边缘对齐边线，略弯曲凝胶片慢慢放平，注意凝胶片下面勿出现气泡。 ㈤ 自然放下支架，从湿盒中取出加样梳并去除齿梳下的保护支架，“7/15Hb”电泳程序时，将加样梳放在4号位置，“7/15 Hb F-S”电泳程序时，将加样梳放在3号位置。注意点样梳上的数字必须面对操作者，关上电泳舱盖，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始，确保仪器右侧的空气通道不被堵塞。
㈥ 电泳仪自动发出蜂鸣声,提示电泳结束，打开电泳盖，将加样梳和缓冲条丢弃，取出已烘干的胶片，用湿纸巾擦拭电极和温控板，将胶片固定于凝胶支架上放入染色空间中，在检查染色液瓶内是否有300ml染色液，脱色液瓶内是否有1000ml脱色液以及是否排空了废液瓶后，选择“PROT./B1-B2/Hb”染色程序并按“start”键开始染色。
㈦ 在染色、脱色以及干燥步骤完成后，电泳仪自动发出蜂鸣声，取出凝胶支架，将烘干的胶片用光密度仪进行扫描，若希望胶片背景更加清晰，在进行扫描前可以额外增加一个冲洗步骤，程序为“WASH ISOENZ/GEL”。
㈧ 关机，在电脑系统上对扫描结果进行分析。
八．参考范围
血红蛋白A ≥ 96.5%
血红蛋白F 2.0%
血红蛋白A2 ≤ 3.5%
九．临床意义
使用HYDRAGEL7/15 HEMOGLOBIN（E）试剂可初步筛查有无血红蛋白病和地中海贫血。若发现异常，应采用适当方法如酸性凝胶电泳等进一步分析测定，以确定异常。
以下疾病的异常图谱特征：
HbA HbA2
α地贫 有H带/Bart’s带 ↓
β地贫 ↓ ↑ 〉3.5
〈 8
HbH病 有H带出现
血 红 蛋 白 B art胎 儿 水 肿 综 合 症 有 B a r t带出现〉80%
S/D病 有 S / D出 现
C/E病 有 C / E出 现
十．标本要求
㈠ 建议采用新鲜抗凝血标本。抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。采血应按照临床实验室检测要求进行。必要时，可储存于2-8℃，5天。
㈡ 按照试剂盒内使用说明对标本进行准备：
-在进行样品准备前混匀收集试管。
-抗凝血离心，5000rpm，5分钟。
-去除血浆。
-用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞2次。若红细胞体积小于10μl，需特别小心。 -在将10μl的样本加到溶血液前，去除红细胞上层多余的生理盐水并震荡混匀。 -体积10μl红细胞加入130μl溶血液造成溶血。
-震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟即可。
注意：对于中度（10g/dl）或重度（7g/dl）贫血的病例，点样量应分别增大为15ul或20ul，其结果不受影响。
H 带的血红蛋白液的制备
-在进行样品准备前混匀收集试管。
-抗凝血离心，5000rpm，5分钟。
-去除血浆。
-用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞2次。若红细胞体积小于10μl，需特别小心。 -在将40μl的样本加到溶血液前，去除红细胞上层多余的生理盐水并震荡混匀。 -体积40μl红细胞加入100μl溶血液造成溶血。
-震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟。
-离心，10000rpm，5分钟即可。
㈢ 避免使用溶血标本。
十一. 操作注意事项
㈠ 为达到最佳检测效果，同一试剂盒内的所有组分必须一并使用。
㈡ 氨基黑染液的配制必须按照试剂盒内使用说明配置，否则会降低蛋白片段的检测效果。 ㈢ 用薄滤纸吸去凝胶表面多余液体时，接触时间不能太长，应快速移去，以免凝胶脱水。 ㈣ 注意先挂缓冲条再放凝胶片，缓冲条取出时应均匀挤捏使缓冲液能分布均匀。
血红蛋白电泳操作规程
一．项目名称
血红蛋白电泳（HYDRAGEL HEMOGLOBIN）
二．检验方法名称
琼脂糖凝胶区带电泳
三．方法学原理
血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同，这还与pH、电泳缓冲液的离子强度等有关。血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。实验使用洗涤过红细胞的溶血液来进行，在碱性的凝胶片上进行电泳来分离血红蛋白，分离出来的片段通过氨基黑染色剂来显色，烘干后的凝胶片就可以用来解释结果了。
四．方法学溯源
自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
五．仪器
（一） 型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)
（二） 分析和计算参数：
1． 处理量：约45个样本/小时
2． 所需样本量：10ul
3． 检验时间：约半小时
4． 重复性：有良好的批内和批间重复性
5． 电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）
电流0－500mA
功率0－100W
六．试剂及配套品
（一） 试剂
1． HYDRAGEL 7 HEMOGLOBIN（E）试剂盒
HYDRAGEL 15 HEMOGLOBIN（E）试剂盒
（1） 商标：SEBIA
（2） 包装规格：70测试/150测试
（3） 货号：PN4106/ PN4126
2． 脱色液
（1） 商标：SEBIA
（2） 包装规格：Pack for 10×100ml
（3） 货号：PN4540
(4) 成分：柠檬酸
3．洗涤液
（1） 商标：SEBIA
（2） 包装规格：Pack for 10×80ml
（3） 货号：PN4541
（4） 成分：叠氮钠
4．生理盐水
（二） 配套品
血红蛋白质控
（1） 商标：SEBIA
(2) 包装规格：Pack for 1×1ml
(3) 货号：PN4791
七．操作步骤
㈠ 开机，启动电泳仪。
㈡ 将加样梳置于平板上，有数字的一端向上，在2分钟内完成每块加样梳的加样，每孔加10ul样品，然后齿梳向上把加样梳放于湿盒内5分钟。
㈢ 选择“7/15Hb”电泳程序。当预期HYDRAGEL 7 / 15 HEMOGLOBIN(E)凝胶片上出现HbF和HbS，为了更好的分离，推荐使用“7/15 Hb F-S”电泳程序。
㈣ 从包装袋内取出缓冲条，将其固定在电极支架背侧的钉上，再取出凝胶，用薄滤纸快速轻轻地吸去凝胶表面多余的液体，在温控板表面下1/3处加120μl[HYDRAGEL 7 HEMOGLOBIN（E）]或200ul[HYDRAGEL 15 HEMOGLOBIN（E）]蒸馏水或去离子水，将凝胶片底边紧靠框架底边，边缘对齐边线，略弯曲凝胶片慢慢放平，注意凝胶片下面勿出现气泡。 ㈤ 自然放下支架，从湿盒中取出加样梳并去除齿梳下的保护支架，“7/15Hb”电泳程序时，将加样梳放在4号位置，“7/15 Hb F-S”电泳程序时，将加样梳放在3号位置。注意点样梳上的数字必须面对操作者，关上电泳舱盖，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始，确保仪器右侧的空气通道不被堵塞。
㈥ 电泳仪自动发出蜂鸣声,提示电泳结束，打开电泳盖，将加样梳和缓冲条丢弃，取出已烘干的胶片，用湿纸巾擦拭电极和温控板，将胶片固定于凝胶支架上放入染色空间中，在检查染色液瓶内是否有300ml染色液，脱色液瓶内是否有1000ml脱色液以及是否排空了废液瓶后，选择“PROT./B1-B2/Hb”染色程序并按“start”键开始染色。
㈦ 在染色、脱色以及干燥步骤完成后，电泳仪自动发出蜂鸣声，取出凝胶支架，将烘干的胶片用光密度仪进行扫描，若希望胶片背景更加清晰，在进行扫描前可以额外增加一个冲洗步骤，程序为“WASH ISOENZ/GEL”。
㈧ 关机，在电脑系统上对扫描结果进行分析。
八．参考范围
血红蛋白A ≥ 96.5%
血红蛋白F 2.0%
血红蛋白A2 ≤ 3.5%
九．临床意义
使用HYDRAGEL7/15 HEMOGLOBIN（E）试剂可初步筛查有无血红蛋白病和地中海贫血。若发现异常，应采用适当方法如酸性凝胶电泳等进一步分析测定，以确定异常。
以下疾病的异常图谱特征：
HbA HbA2
α地贫 有H带/Bart’s带 ↓
β地贫 ↓ ↑ 〉3.5
〈 8
HbH病 有H带出现
血 红 蛋 白 B art胎 儿 水 肿 综 合 症 有 B a r t带出现〉80%
S/D病 有 S / D出 现
C/E病 有 C / E出 现
十．标本要求
㈠ 建议采用新鲜抗凝血标本。抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。采血应按照临床实验室检测要求进行。必要时，可储存于2-8℃，5天。
㈡ 按照试剂盒内使用说明对标本进行准备：
-在进行样品准备前混匀收集试管。
-抗凝血离心，5000rpm，5分钟。
-去除血浆。
-用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞2次。若红细胞体积小于10μl，需特别小心。 -在将10μl的样本加到溶血液前，去除红细胞上层多余的生理盐水并震荡混匀。 -体积10μl红细胞加入130μl溶血液造成溶血。
-震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟即可。
注意：对于中度（10g/dl）或重度（7g/dl）贫血的病例，点样量应分别增大为15ul或20ul，其结果不受影响。
H 带的血红蛋白液的制备
-在进行样品准备前混匀收集试管。
-抗凝血离心，5000rpm，5分钟。
-去除血浆。
-用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞2次。若红细胞体积小于10μl，需特别小心。 -在将40μl的样本加到溶血液前，去除红细胞上层多余的生理盐水并震荡混匀。 -体积40μl红细胞加入100μl溶血液造成溶血。
-震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟。
-离心，10000rpm，5分钟即可。
㈢ 避免使用溶血标本。
十一. 操作注意事项
㈠ 为达到最佳检测效果，同一试剂盒内的所有组分必须一并使用。
㈡ 氨基黑染液的配制必须按照试剂盒内使用说明配置，否则会降低蛋白片段的检测效果。 ㈢ 用薄滤纸吸去凝胶表面多余液体时，接触时间不能太长，应快速移去，以免凝胶脱水。 ㈣ 注意先挂缓冲条再放凝胶片，缓冲条取出时应均匀挤捏使缓冲液能分布均匀。