1、细胞活性的鉴定：死细胞对许多抗体均有很强的非特异性染色，这就使样本细胞活性检测变得非常重要，尤其是经过长时间运输和储存的样本。检测的方法通常有两种：（1）实时的流式检测：利用荧光染料PI 、7-AAD 或EMA 进行死细胞染色，而活细胞拒染这些染料。此方法的优势是细胞表面标志和活性分析可同时进行。尤其适用于高度坏死的样本。7-AAD 最常用，因为在488nm 激发下，其最大发射光在670nm 左右，适合与FITC 或PE 进行多色标记。但随着时间延长，7-AAD 会在固定的细胞群体重新分配，死活细胞的区分变得困难。因此，对于染色并在固定后12小时以上分析的标本，最好用EMA 。EMA 与死细胞DNA 稳定的共价结合保证了长时间固定后仍能很好的区分固定前的死活状态。（2）手工检测：使用Trypanblue 或其他细胞活性染料。（3）使用专门的仪器进行检测。如Vi-cell 。
2、7-AAD （7-amino-actinomycin D）是一种核酸染料，在流式细胞术中用于鉴定死细胞，这种作用与PI 相似。它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD 的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA 的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD 标记DNA 的强弱，将细胞分为三群：7-AAD 强为死亡细胞，7-AAD 弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。7-AAD 同PI 有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI 窄，PI 检测时同时占据FL-2和FL-3通道，而7-AAD 只占FL-3通道，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。
3、Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用红色荧光染料PE （Phycoerythrin ）标记的AnnexinV 作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine ，PS ）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V ）是一种分子量为35-36KD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS 高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。
另外，本试剂盒中提供的7-AAD 可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。7-AAD 是一种核酸染料，同PI 有着相似的荧光特性，但其发射光谱较PI 窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品，可与Annexin V 联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA 结合。因此将AnnexinV-PE 与7-AAD 联合使用时，7-AAD 则被排除在活细胞（AnnexinV-/7-AAD-）和早期凋亡细胞（AnnexinV+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被AnnexinV-PE 和7-AAD 结合染色呈现双阳性（AnnexinV+/7-AAD+），可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。。
操作方法
样品染色
1）悬浮细胞：300g ，4℃离心5 min收集细胞。
贴壁细胞：用不含EDTA 的胰酶消化后，300g ，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。
2）用4℃预冷的PBS 洗涤细胞2次，每次均需300g ，4℃离心5 min。
3）加入250μl 1×Binding Buffer重悬细胞，调节其浓度为1×106细胞/ml。
4）取100 μl 细胞悬液于5ml 流式管中，加入5μl Annexin V/PE和10 μl7-AAD ，轻轻混匀。
5）避光、室温反应15 min。
6）加入400μl1×Binding Buffer，混匀，样品在1小时内检测。
4、CFSE (carboxyfluoresceindiacetate, succinimidyl ester 羧基荧光素双乙酸盐，琥珀酰亚胺酯) 被动扩散进入细胞，其本身是无色无荧光的，被细胞内的酯酶分解后产生高强度的绿色荧光，定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光染色最强，该荧光产物与胞内的氨基结合长时间留存于细胞内并可被乙醛固定。未结合的试剂与副产物扩散至胞外基质中，被洗去。
传代或胚胎分裂分析，CFSE 与赖氨酸侧链或其他氨基基团反应，共价偶联至细胞内和细胞表面的蛋白，细胞分裂时被平均分配至子代细胞，荧光强度降到母代细胞的一半。适合用于胞内示踪，在细胞分裂或融合后分配至子代细胞中，并不会被转移至邻近的细胞。在小鼠淋巴细胞迁移实验中，CFSE 注射进入小鼠体内后，标记的淋巴细胞的检测可长达8周。肝内注射荧光显微镜定位检测可长达20天。
1、细胞活性的鉴定：死细胞对许多抗体均有很强的非特异性染色，这就使样本细胞活性检测变得非常重要，尤其是经过长时间运输和储存的样本。检测的方法通常有两种：（1）实时的流式检测：利用荧光染料PI 、7-AAD 或EMA 进行死细胞染色，而活细胞拒染这些染料。此方法的优势是细胞表面标志和活性分析可同时进行。尤其适用于高度坏死的样本。7-AAD 最常用，因为在488nm 激发下，其最大发射光在670nm 左右，适合与FITC 或PE 进行多色标记。但随着时间延长，7-AAD 会在固定的细胞群体重新分配，死活细胞的区分变得困难。因此，对于染色并在固定后12小时以上分析的标本，最好用EMA 。EMA 与死细胞DNA 稳定的共价结合保证了长时间固定后仍能很好的区分固定前的死活状态。（2）手工检测：使用Trypanblue 或其他细胞活性染料。（3）使用专门的仪器进行检测。如Vi-cell 。
2、7-AAD （7-amino-actinomycin D）是一种核酸染料，在流式细胞术中用于鉴定死细胞，这种作用与PI 相似。它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD 的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA 的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD 标记DNA 的强弱，将细胞分为三群：7-AAD 强为死亡细胞，7-AAD 弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。7-AAD 同PI 有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI 窄，PI 检测时同时占据FL-2和FL-3通道，而7-AAD 只占FL-3通道，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。
3、Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用红色荧光染料PE （Phycoerythrin ）标记的AnnexinV 作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine ，PS ）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V ）是一种分子量为35-36KD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS 高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。
另外，本试剂盒中提供的7-AAD 可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。7-AAD 是一种核酸染料，同PI 有着相似的荧光特性，但其发射光谱较PI 窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品，可与Annexin V 联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA 结合。因此将AnnexinV-PE 与7-AAD 联合使用时，7-AAD 则被排除在活细胞（AnnexinV-/7-AAD-）和早期凋亡细胞（AnnexinV+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被AnnexinV-PE 和7-AAD 结合染色呈现双阳性（AnnexinV+/7-AAD+），可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。。
操作方法
样品染色
1）悬浮细胞：300g ，4℃离心5 min收集细胞。
贴壁细胞：用不含EDTA 的胰酶消化后，300g ，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。
2）用4℃预冷的PBS 洗涤细胞2次，每次均需300g ，4℃离心5 min。
3）加入250μl 1×Binding Buffer重悬细胞，调节其浓度为1×106细胞/ml。
4）取100 μl 细胞悬液于5ml 流式管中，加入5μl Annexin V/PE和10 μl7-AAD ，轻轻混匀。
5）避光、室温反应15 min。
6）加入400μl1×Binding Buffer，混匀，样品在1小时内检测。
4、CFSE (carboxyfluoresceindiacetate, succinimidyl ester 羧基荧光素双乙酸盐，琥珀酰亚胺酯) 被动扩散进入细胞，其本身是无色无荧光的，被细胞内的酯酶分解后产生高强度的绿色荧光，定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光染色最强，该荧光产物与胞内的氨基结合长时间留存于细胞内并可被乙醛固定。未结合的试剂与副产物扩散至胞外基质中，被洗去。
传代或胚胎分裂分析，CFSE 与赖氨酸侧链或其他氨基基团反应，共价偶联至细胞内和细胞表面的蛋白，细胞分裂时被平均分配至子代细胞，荧光强度降到母代细胞的一半。适合用于胞内示踪，在细胞分裂或融合后分配至子代细胞中，并不会被转移至邻近的细胞。在小鼠淋巴细胞迁移实验中，CFSE 注射进入小鼠体内后，标记的淋巴细胞的检测可长达8周。肝内注射荧光显微镜定位检测可长达20天。