原花青素的研究

科l技I论j坛

科衰罐蠢

原花青素的研究

邵丽丽刘志杰

(哈药集团制药总厂,黑龙江哈尔滨150086)

摘要:葡萄籽中舍有丰富原花青素,而原花青素具有抗氧化等一系列多种生物活性,作为世界最受欢迎的十大植物药之一,己被广泛的用作药品、保健品和化妆品等。重点介绍了葡萄原花青素的性质、结构、药理、应用以及国内外从葡萄籽中提取原花青素的研究进展。’关键词:葡萄籽;原花青素;提取

前言

葡萄籽提取物原花青素作为—种重要的抗氧

损伤。而Pc有清除自由基、抑制氧化损伤的功效。有报道表明Pc可抑制辐射引起的脂质过氧化,这

品(原花青素低聚体和儿茶素),二氧化碳和改陵刺

可循环利用,环境无污染。

化剂,已被应用到多种产品领域。体现出较高的经

济和保踺价值,受到人们的青睐。主要阐述了葡萄籽提取物原花青素的陛质,功能及其应用。

l原花青素的性质及作用1.1原花青素的化学结构

源花青素Qmcyanidins,简称PQ吲直物王国中广泛存在的一大类多酚化合物的总称,起初通归

可胄睫Pc抑制辐射损伤的主要原因。

2原花青素的提取分离

目前,原花青素的提取方法主要是有机溶剂提取法等。具有传魇速度快、分离效率高、生产能力大

212厉羽精素的分抄功珐

测定原花青素可采用薄层层析法、铁盐催化比色法HPLC法、HPLC飞行质谱法等。铁盐催化比色法反应时间较长且需要使用毒性较大的正丁醇作为反应的介质;HPLc法测定准确,尤其能够测定各个聚合物及不同异构体的含量,但测定所需的原花青素各单体Bl、B2、B4、cl等不易得到,只能自行纯化制备,各异构体之间分离不完全,且分析时间较长,一般超过60min,因此限制了此法的普及应用。

3原花青素的研究目的及意义

等一系列优点。我国的葡萄、山楂和松树等资源都

很丰富,为开发利用原花青素提供了便利。因此,若

能充分开发植物中的Pc资源,并结合我国传统中

医药技术,物尽其用,将会大大促进原花青素在药

于缩合鞣质或黄烷醇类,随着分离鉴定技术的提高和对此类物质的深入研究,现己成为独树一帜的一大类物质并称之为原花青素。原花青素是由不同

数量的儿茶素或表儿茶素缩合而成。最简单的原花

品、保健食品和化妆品中的应用。

2l原花青素的提取分离方法

目前原花青素主要从植物中提取与精制。普遍采用的提取工艺是先8糊旨的方法包括压榨法、溶剂

青素是儿茶素或表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形

成的二聚体、三聚体、四聚体等直至十聚体。在各类

劂精素经过多年的开发研究和临床应用,以

其优越的抗氧化活性为^们所青睐。其既可作为营养强化剂,又可作为防腐剂替代合成防腐剂仗口苯甲酸等),符合人们回归自然的要求,提高了其应用的

安全性。是~种具有广阔发展前景的天然原料资源。本试验的目的就是尽量提高其提取率,降低成本,使原花青素为人类服务。而且我国葡萄栽培地域广阔,用于酿酒和其他行业的葡萄量很大,葡萄籽作为副产品很浪费。这样一来可以充分利用资源,变废为宝,x}建立节约型社会具有积极意义。

参考文献

法湖临界c0:萃取法。其中,超临界c0:萃取法最

佳,不仅油脂提取率高,而且对原花青素的破坏作

原花青素中,二聚体分布最广,研究最多,是最重要

的—类原花青素。

用最小,厉涮清素质量较好。精制主要有溶剂分级

精制法和吸附层析法J比夕p还有清隆炭吸附法。活陛

炭吸附法的原花青素得率很高,但是其抗氧化作用远不如溶剂分级精制法中的乙酸乙酯萃取物,而且

12原龙苛素的物理陛质

由于原花青素含有很多酚羟基,溶解度较银

杏黄酮等高,特别是低聚体鲫容解幽E常好。判别

原花青素质量好坏,—个很重要的指标是其在水、

溶剂萃取法简便、省时、经济。

a溶剂萃取法

法国JacquesMasquelier以海松树皮为原料,用沸水提取,乙酸乙酯萃取沸水粗提液,再用三氯甲烷沉淀。波兰0szmianskiJan以丙酮为溶剂超声

醇中溶解度的大小。Pc是白色粉末,溶于水、乙醇、

甲醇、丙酮,也可溶于乙酸乙酯,不溶于乙醚、氯仿、

苯等,有涩味。UV在280nm有强吸收。在酸瞄容液

中加热可溶解和氧化形成花色素。

【1]吕丽爽,曹栋.脱脂葡萄籽中低聚原花青素的提

取Ⅱl无锡轻工大学学报,2001120㈤.20&

13屠唰清素的分布

原花青素主要分布在下列植物中:银杏、大黄、

山楂、耳叶番泻、小连翘、葡萄、日本罗汉柏、北美崖

提取葡萄籽,零下18℃乙酸乙酯萃取丙酮提取液,

再用三氯甲烷沉淀。美国Henkel公司申请专利,以

翻刘叶玲,王春波.原花青素的研究进展m社区医

沸水从葡萄籽中提取PC,乙酸乙酯萃取粗提物,再

用三氯甲烷沉淀产品。采用乙醇从石油醚脱脂的葡

h吸附层析法

采用AB一8、NKA—II及D3520三种国产大孔

学杂志2004卿7.

柏、花旗松、白桦树、野生豪4葵、番荔枝、野草莓、海岸

松、洋委陵菜、甘薯等。但研究发现葡萄籽与松树皮提取物中原花青素的含量最高。

14原花青素的药理作用

萄籽中提取PC,然后冷却薄崾取液,翮姓E蒸馏。

吸附树脂对葡萄籽原花青素进行分离,通过静态和

pⅨotaT,MomK,Nakumorj

K声t

a1.Icreaseof

anti日xidativeprotentialofmtplasmaby()m1ad—

mini§∞tionofproanthoeyanidin埘ch

extractfmm

髀peseed帆J

【4芦aint

eties

cricq

A黟icFood

20世纪80年代以来,人们对近十种植物的原花青素低聚体和高聚体进行了生物、药理活陛的研

究,不同聚合度的原花青素其生物、药理活性不尽相同。

De

Chenl999’47@1892.

GaIllejavN,ProVostC,ViVasN.

of

动态吸附试验得出AB一8对Pc的吸附能力最强,P01yphenolprofiles

Food

Frenchciderapple

vari—

吸附后以乙酸乙酯洗脱,产槐总酚含量可达90%以

上。用聚酰胺柱层析提纯葡萄籽粗提取物,分离后的产品纯度可达99%。还用薄层色谱法精制Pc,薄层板为05%CMC・Na硅胶G板,流动相为甲苯一丙酮一乙酸0:3:1),显色剂为10%香草醛盐酸,展开后按色带刮下带有样品的硅胶,装柱,用无水甲醇洗脱收集,最终收集物用HPLc测定其纯度可达95%以上。有人分别以甲醇——水、乙醇、水和甲醇为洗脱溶剂,从聚酰胺柱和交联葡聚糖柱上分离山楂叶及花中原花青素的单体和低聚合体,得到原花

A鲥c

Cheml999㈣4255.

d施化活性

PC有较强的抗氧化活性,对活性氧有很强的

消除能力。Ko鼬等的研究结果显示,摄人PC可提

高血浆对氧化应激自勺=}氐抗力;Provost等的研究发现这些多酚化合物清除自由基的能力与它们的化学

圈张冰若涝业兴,苏薇税原花青素的研究现状及开发前景m中药材000326(1掣905_907.

f6融兵,王玉禾欧阳藩超声波在植物提取中的应用叽中草药,199叼0∽1-3.

用樊丽华.葡萄籽中原花青素提取方法的进一步研

究叽新疆大学学报000421(1}103.

181孙云,谷文英.大孔吸附树脂对葡萄籽原花青素的

性质和立体结构密切相关。葡萄或葡萄酒中Pc的食子酸等厦强。

的韧中瘤作用

活l崾E妣—些天然抗隼鼢J例如维生素c、没

国外许多研究证实,PC对多种癌细胞包括乳

吸附研究m离子交换与吸附,2003,1粥561_566

[9H尊武胜,赵道辉,黄剑锋紫外分光光度法测定葡

萄籽提取物中的原花青素含量【且食品研究与开发,

青素的10种聚体化合物,且各化合物纯度较高。

睬用翅临界萃取方法提取原花青素

国内孙传经关于超临界二氧化碳提取葡萄籽油和原花青素低聚物的方法,分两步第~步是提取葡萄籽油,操作条件是控制萃取压力为25—29Mpa'温度为601C筛二步是提取剂二氧化碳加入以丙酮

比水为7Q30的改性剂,CO:与改性剂量比为4:1。

20022粥9o.

腺癌细胞、前列腺癌细胞、皮肤癌细胞等具有不同

作用的抑制作用。Pc也有抗炎、抗过敏作用,能有效的改善皮呋过敏症状及过敏l生哮喘症状。

c抗辐射作用

自由基学说是辐射损伤的基础理论,机体受

辐射后可产生的内源胜自由基,引发脂质过氧化等

据报道这种方法的优氏邑提取出原花青素两种产

一35—

万方数据

原花青素的研究

作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):被引用次数:

邵丽丽, 刘志杰

哈药集团制药总厂,黑龙江,哈尔滨,150086

黑龙江科技信息

HEILONGJIANG SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION2011(4)1次

参考文献(9条)

1.吕丽爽;曹栋 脱脂葡萄籽中低聚原花青素的提取[期刊论文]-无锡轻工大学学报 2001(02)2.刘叶玲;王春波 原花青素的研究进展[期刊论文]-社区医学杂志 2004(06)

3.Kota T;Moro K;Nakumori K Icrease of antioxidative protential of rat plasma by oral administrationof proanthoeyanidin-rich extract from grape seeds[外文期刊] 1999(05)

4.Saint Cricq De Ganlejav N;Provost C;Vivas N Polyphenol profiles of French cider apple varieties1999(02)

5.张冰若;劳业兴;苏薇薇 原花青素的研究现状及开发前景[期刊论文]-中药材 2003(12)6.赵兵;王玉春;欧阳藩 超声波在植物提取中的应用[期刊论文]-中草药 1999(09)

7.樊丽华 葡萄籽中原花青素提取方法的进一步研究[期刊论文]-新疆大学学报(自然科学版) 2004(01)8.孙云;谷文英 大孔吸附树脂对葡萄籽原花青素的吸附研究[期刊论文]-离子交换与吸附 2003(06)9.傅武胜;赵道辉;黄剑锋 紫外分光光度法测定葡萄籽提取物中的原花青素含量[期刊论文]-食品研究与开发2002(06)

本文读者也读过(6条)

1. 史国富.王新瑞 天然高效抗氧化剂原花青素提取工艺研究概况[期刊论文]-中国药物与临床2011,11(5)2. 汪多仁.WANG Duo-ren 原花青素的开发与应用进展[期刊论文]-饮料工业2011,14(4)

3. 于立梅.曾晓房.陈海光.白卫东.YU Li-mei.ZENG Xiao-fang.CHEN Hai-guang.BAI Wei-dong 大孔树脂对马尾松树皮原花青素的吸附分离特性[期刊论文]-食品研究与开发2010,31(9)

4. 栾连军.陈娜.刘雪松.吴永江.Luan Lianjun.Chen Na.Liu Xuesong.Wu Yongjiang 葡萄籽原花青素多级逆流提取工艺研究[期刊论文]-中国食品学报2010,10(5)

5. 李春阳.张红城.王乃富.戴宇翔.LI Chun-yang.ZHANG Hong-cheng.WANG Nai-fu.DAI Yu-xiang 葡萄籽原花青素的单元结构[期刊论文]-江苏农业学报2010,26(5)

6. 陈红波.徐保明.CHEN Hong-bo.XU Bao-ming 壁材组成对原花青素微胶囊化的影响[期刊论文]-食品研究与开发2010,31(9)

引证文献(1条)

1.杨晓龙.黄宁 蔓越莓抗菌作用研究进展[期刊论文]-中国抗生素杂志 2012(8)

本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_hljkjxx201104039.aspx

科l技I论j坛

科衰罐蠢

原花青素的研究

邵丽丽刘志杰

(哈药集团制药总厂,黑龙江哈尔滨150086)

摘要:葡萄籽中舍有丰富原花青素,而原花青素具有抗氧化等一系列多种生物活性,作为世界最受欢迎的十大植物药之一,己被广泛的用作药品、保健品和化妆品等。重点介绍了葡萄原花青素的性质、结构、药理、应用以及国内外从葡萄籽中提取原花青素的研究进展。’关键词:葡萄籽;原花青素;提取

前言

葡萄籽提取物原花青素作为—种重要的抗氧

损伤。而Pc有清除自由基、抑制氧化损伤的功效。有报道表明Pc可抑制辐射引起的脂质过氧化,这

品(原花青素低聚体和儿茶素),二氧化碳和改陵刺

可循环利用,环境无污染。

化剂,已被应用到多种产品领域。体现出较高的经

济和保踺价值,受到人们的青睐。主要阐述了葡萄籽提取物原花青素的陛质,功能及其应用。

l原花青素的性质及作用1.1原花青素的化学结构

源花青素Qmcyanidins,简称PQ吲直物王国中广泛存在的一大类多酚化合物的总称,起初通归

可胄睫Pc抑制辐射损伤的主要原因。

2原花青素的提取分离

目前,原花青素的提取方法主要是有机溶剂提取法等。具有传魇速度快、分离效率高、生产能力大

212厉羽精素的分抄功珐

测定原花青素可采用薄层层析法、铁盐催化比色法HPLC法、HPLC飞行质谱法等。铁盐催化比色法反应时间较长且需要使用毒性较大的正丁醇作为反应的介质;HPLc法测定准确,尤其能够测定各个聚合物及不同异构体的含量,但测定所需的原花青素各单体Bl、B2、B4、cl等不易得到,只能自行纯化制备,各异构体之间分离不完全,且分析时间较长,一般超过60min,因此限制了此法的普及应用。

3原花青素的研究目的及意义

等一系列优点。我国的葡萄、山楂和松树等资源都

很丰富,为开发利用原花青素提供了便利。因此,若

能充分开发植物中的Pc资源,并结合我国传统中

医药技术,物尽其用,将会大大促进原花青素在药

于缩合鞣质或黄烷醇类,随着分离鉴定技术的提高和对此类物质的深入研究,现己成为独树一帜的一大类物质并称之为原花青素。原花青素是由不同

数量的儿茶素或表儿茶素缩合而成。最简单的原花

品、保健食品和化妆品中的应用。

2l原花青素的提取分离方法

目前原花青素主要从植物中提取与精制。普遍采用的提取工艺是先8糊旨的方法包括压榨法、溶剂

青素是儿茶素或表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形

成的二聚体、三聚体、四聚体等直至十聚体。在各类

劂精素经过多年的开发研究和临床应用,以

其优越的抗氧化活性为^们所青睐。其既可作为营养强化剂,又可作为防腐剂替代合成防腐剂仗口苯甲酸等),符合人们回归自然的要求,提高了其应用的

安全性。是~种具有广阔发展前景的天然原料资源。本试验的目的就是尽量提高其提取率,降低成本,使原花青素为人类服务。而且我国葡萄栽培地域广阔,用于酿酒和其他行业的葡萄量很大,葡萄籽作为副产品很浪费。这样一来可以充分利用资源,变废为宝,x}建立节约型社会具有积极意义。

参考文献

法湖临界c0:萃取法。其中,超临界c0:萃取法最

佳,不仅油脂提取率高,而且对原花青素的破坏作

原花青素中,二聚体分布最广,研究最多,是最重要

的—类原花青素。

用最小,厉涮清素质量较好。精制主要有溶剂分级

精制法和吸附层析法J比夕p还有清隆炭吸附法。活陛

炭吸附法的原花青素得率很高,但是其抗氧化作用远不如溶剂分级精制法中的乙酸乙酯萃取物,而且

12原龙苛素的物理陛质

由于原花青素含有很多酚羟基,溶解度较银

杏黄酮等高,特别是低聚体鲫容解幽E常好。判别

原花青素质量好坏,—个很重要的指标是其在水、

溶剂萃取法简便、省时、经济。

a溶剂萃取法

法国JacquesMasquelier以海松树皮为原料,用沸水提取,乙酸乙酯萃取沸水粗提液,再用三氯甲烷沉淀。波兰0szmianskiJan以丙酮为溶剂超声

醇中溶解度的大小。Pc是白色粉末,溶于水、乙醇、

甲醇、丙酮,也可溶于乙酸乙酯,不溶于乙醚、氯仿、

苯等,有涩味。UV在280nm有强吸收。在酸瞄容液

中加热可溶解和氧化形成花色素。

【1]吕丽爽,曹栋.脱脂葡萄籽中低聚原花青素的提

取Ⅱl无锡轻工大学学报,2001120㈤.20&

13屠唰清素的分布

原花青素主要分布在下列植物中:银杏、大黄、

山楂、耳叶番泻、小连翘、葡萄、日本罗汉柏、北美崖

提取葡萄籽,零下18℃乙酸乙酯萃取丙酮提取液,

再用三氯甲烷沉淀。美国Henkel公司申请专利,以

翻刘叶玲,王春波.原花青素的研究进展m社区医

沸水从葡萄籽中提取PC,乙酸乙酯萃取粗提物,再

用三氯甲烷沉淀产品。采用乙醇从石油醚脱脂的葡

h吸附层析法

采用AB一8、NKA—II及D3520三种国产大孔

学杂志2004卿7.

柏、花旗松、白桦树、野生豪4葵、番荔枝、野草莓、海岸

松、洋委陵菜、甘薯等。但研究发现葡萄籽与松树皮提取物中原花青素的含量最高。

14原花青素的药理作用

萄籽中提取PC,然后冷却薄崾取液,翮姓E蒸馏。

吸附树脂对葡萄籽原花青素进行分离,通过静态和

pⅨotaT,MomK,Nakumorj

K声t

a1.Icreaseof

anti日xidativeprotentialofmtplasmaby()m1ad—

mini§∞tionofproanthoeyanidin埘ch

extractfmm

髀peseed帆J

【4芦aint

eties

cricq

A黟icFood

20世纪80年代以来,人们对近十种植物的原花青素低聚体和高聚体进行了生物、药理活陛的研

究,不同聚合度的原花青素其生物、药理活性不尽相同。

De

Chenl999’47@1892.

GaIllejavN,ProVostC,ViVasN.

of

动态吸附试验得出AB一8对Pc的吸附能力最强,P01yphenolprofiles

Food

Frenchciderapple

vari—

吸附后以乙酸乙酯洗脱,产槐总酚含量可达90%以

上。用聚酰胺柱层析提纯葡萄籽粗提取物,分离后的产品纯度可达99%。还用薄层色谱法精制Pc,薄层板为05%CMC・Na硅胶G板,流动相为甲苯一丙酮一乙酸0:3:1),显色剂为10%香草醛盐酸,展开后按色带刮下带有样品的硅胶,装柱,用无水甲醇洗脱收集,最终收集物用HPLc测定其纯度可达95%以上。有人分别以甲醇——水、乙醇、水和甲醇为洗脱溶剂,从聚酰胺柱和交联葡聚糖柱上分离山楂叶及花中原花青素的单体和低聚合体,得到原花

A鲥c

Cheml999㈣4255.

d施化活性

PC有较强的抗氧化活性,对活性氧有很强的

消除能力。Ko鼬等的研究结果显示,摄人PC可提

高血浆对氧化应激自勺=}氐抗力;Provost等的研究发现这些多酚化合物清除自由基的能力与它们的化学

圈张冰若涝业兴,苏薇税原花青素的研究现状及开发前景m中药材000326(1掣905_907.

f6融兵,王玉禾欧阳藩超声波在植物提取中的应用叽中草药,199叼0∽1-3.

用樊丽华.葡萄籽中原花青素提取方法的进一步研

究叽新疆大学学报000421(1}103.

181孙云,谷文英.大孔吸附树脂对葡萄籽原花青素的

性质和立体结构密切相关。葡萄或葡萄酒中Pc的食子酸等厦强。

的韧中瘤作用

活l崾E妣—些天然抗隼鼢J例如维生素c、没

国外许多研究证实,PC对多种癌细胞包括乳

吸附研究m离子交换与吸附,2003,1粥561_566

[9H尊武胜,赵道辉,黄剑锋紫外分光光度法测定葡

萄籽提取物中的原花青素含量【且食品研究与开发,

青素的10种聚体化合物,且各化合物纯度较高。

睬用翅临界萃取方法提取原花青素

国内孙传经关于超临界二氧化碳提取葡萄籽油和原花青素低聚物的方法,分两步第~步是提取葡萄籽油,操作条件是控制萃取压力为25—29Mpa'温度为601C筛二步是提取剂二氧化碳加入以丙酮

比水为7Q30的改性剂,CO:与改性剂量比为4:1。

20022粥9o.

腺癌细胞、前列腺癌细胞、皮肤癌细胞等具有不同

作用的抑制作用。Pc也有抗炎、抗过敏作用,能有效的改善皮呋过敏症状及过敏l生哮喘症状。

c抗辐射作用

自由基学说是辐射损伤的基础理论,机体受

辐射后可产生的内源胜自由基,引发脂质过氧化等

据报道这种方法的优氏邑提取出原花青素两种产

一35—

万方数据

原花青素的研究

作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):被引用次数:

邵丽丽, 刘志杰

哈药集团制药总厂,黑龙江,哈尔滨,150086

黑龙江科技信息

HEILONGJIANG SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION2011(4)1次

参考文献(9条)

1.吕丽爽;曹栋 脱脂葡萄籽中低聚原花青素的提取[期刊论文]-无锡轻工大学学报 2001(02)2.刘叶玲;王春波 原花青素的研究进展[期刊论文]-社区医学杂志 2004(06)

3.Kota T;Moro K;Nakumori K Icrease of antioxidative protential of rat plasma by oral administrationof proanthoeyanidin-rich extract from grape seeds[外文期刊] 1999(05)

4.Saint Cricq De Ganlejav N;Provost C;Vivas N Polyphenol profiles of French cider apple varieties1999(02)

5.张冰若;劳业兴;苏薇薇 原花青素的研究现状及开发前景[期刊论文]-中药材 2003(12)6.赵兵;王玉春;欧阳藩 超声波在植物提取中的应用[期刊论文]-中草药 1999(09)

7.樊丽华 葡萄籽中原花青素提取方法的进一步研究[期刊论文]-新疆大学学报(自然科学版) 2004(01)8.孙云;谷文英 大孔吸附树脂对葡萄籽原花青素的吸附研究[期刊论文]-离子交换与吸附 2003(06)9.傅武胜;赵道辉;黄剑锋 紫外分光光度法测定葡萄籽提取物中的原花青素含量[期刊论文]-食品研究与开发2002(06)

本文读者也读过(6条)

1. 史国富.王新瑞 天然高效抗氧化剂原花青素提取工艺研究概况[期刊论文]-中国药物与临床2011,11(5)2. 汪多仁.WANG Duo-ren 原花青素的开发与应用进展[期刊论文]-饮料工业2011,14(4)

3. 于立梅.曾晓房.陈海光.白卫东.YU Li-mei.ZENG Xiao-fang.CHEN Hai-guang.BAI Wei-dong 大孔树脂对马尾松树皮原花青素的吸附分离特性[期刊论文]-食品研究与开发2010,31(9)

4. 栾连军.陈娜.刘雪松.吴永江.Luan Lianjun.Chen Na.Liu Xuesong.Wu Yongjiang 葡萄籽原花青素多级逆流提取工艺研究[期刊论文]-中国食品学报2010,10(5)

5. 李春阳.张红城.王乃富.戴宇翔.LI Chun-yang.ZHANG Hong-cheng.WANG Nai-fu.DAI Yu-xiang 葡萄籽原花青素的单元结构[期刊论文]-江苏农业学报2010,26(5)

6. 陈红波.徐保明.CHEN Hong-bo.XU Bao-ming 壁材组成对原花青素微胶囊化的影响[期刊论文]-食品研究与开发2010,31(9)

引证文献(1条)

1.杨晓龙.黄宁 蔓越莓抗菌作用研究进展[期刊论文]-中国抗生素杂志 2012(8)

本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_hljkjxx201104039.aspx


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