ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＩ．ＯＦＡＮＡＴ（）ＭＹＶ（）ｌ＿２９
Ｎｏ．１
２００６
解剖学杂志２００６年第２９卷第１期
Ｃ６胶质瘤细胞体外诱导神经干细胞的迁移８
林社裕１
高树梓２刘
梅１
高宜录２△
（１南通大学江苏省神经再生重点实验室，南通２２６００１；２南通大学附属医院神经外科）
摘要目的：体外观察ｃ６胶质瘤细胞的培养上清是否有诱导神经干细胞迁移的作用。方法：实验组取处于指数
生长期的Ｃ６胶质瘤细胞或星形胶质细胞的无血清培养上清加入细胞培养室的下室，并加无血清培养基；培养室的上室加处于对数生长期的神经干细胞球悬液，培养箱中共培养，光镜下计数迁移的细胞球数。结果：Ｃ６胶质瘤细胞的上清引起神经干细胞球迁移的数目明显多于星形胶质细胞的上清和新鲜无血清培养基。结论：Ｃ６胶
质瘤细胞的培养上清中存在诱导神经干细胞球迁移的物质，这将为研究诱导神经干细胞迁移的物质提供很大的
便利。
关键词神经胶质瘤；干细胞；神经元；细胞运动
Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
ｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ
Ｓｈｅ－Ｙｕ．ＧＡＯＳｈｕ＿Ｚｉ。Ｉ，ＩＵＭｅｉ，ＧＡｏＹｉ－Ｌｕ
ＬＩＮ
（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｅｕｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＮａｎｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ２２６００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｗｈｅｔｈｅｒ
ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ
ｏｆＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓ
ｏｒ
ｃａｎ
ｉｎｄｕｃｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎ
ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ
ｔｈｅｌｏｗｅｒ
ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ
ｏｆＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓ
ａｓｔｒｏｃｙｔｅ
ｃｅｌｌｓｉｎｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｐｈａｓｅｗｅｒｅａｄｄｅｄｉｎｔｏ
ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓｏｆｔｈｅＴｒａｎｓｗｅｌｌｅｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｃｈａｍｂｅｒｓ。ｔｈｅｎａｄｄｉｔｉｏｎａｌｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅｃｕｌｔｕｒｅｗａｓａｄｄｅｄｉｎ
ｅａｃｈｏｆｔｈｅｍａｎｄｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｗｅｒｅｐｌａｃｅｄｉｎａｌｌｔｈｅｕｐｐｅｒｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓ．Ａｆｔｅｒｅｏ－ｉｎｃｕ—ｂａｔｉｏｎｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｍｉｇｒａｔｉｏｎｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｗａｓｃｏｕｎｔｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｏｆＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓｏｂｖｉｏｕｓｌｙｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｔｉｓｓｕｇ—
ｇｅｓｔｅｄｔｈａｔ
ｓｏｍｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｅｘｉｓｔｉｎｔｈｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ
ｏｎ
ｔｏｉｎｄｕｃｅ
ｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ；ｔｈｉｓｐｒｏｖｉｄｅｓ
ａ
ｂａｓｉｓ
ｆｏｒｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ
ｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．
ｇｌｉｏｍａ；ｓｔｅｍｃｅｌｌｓ；ｎｅｕｒｏｎｓ；ｃｅｌｌｍｏｖｅｍｅｎｔ
Ｔａｎｇ等［１］将神经干细胞分别注人荷胶质瘤裸鼠的对侧脑实质、脑室、静脉系统和腹腔，结果发现注入对侧脑实质、脑室、静脉系统的神经干细胞都不同程度的聚集在胶质瘤内，而非注射局部。这说明胶质瘤细胞中存在着诱导神经干细胞迁移和分化的信号物质，而且在体内可以诱导神经干
细胞向胶质瘤迁移。那么，在体外培养的胶质瘤
１材料和方法
１．１细胞的培养及鉴定
１．１．１
神经干细胞的培养及鉴定从新生５～７
ｄ
ＳＤ大鼠（由南通大学实验动物中心提供）大脑皮质分离培养神经干细胞。用无血清培养基ＤＭＥＭ／Ｆ１２（购自ＮＩＶＩＴＲＯＧＥＮ公司，其中ｂＦ（、Ｆ购自ＰＥＰＲＯＴＥＣＨ公司，Ｂ２７
Ｓｅｒｕｍ－ＦｒｅｅＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ购
细胞是否也可以引起神经干细胞迁移？本研究的
目的即是观察体外培养的胶质瘤细胞是否可以在
自ＮＩＶＩＴＲＯＧＥＮ公司）进行培养大约７ｄ，使得神经干细胞生长处于指数期［２］。免疫荧光法检测培养细胞Ｎｅｓｔｉｎ表达：（１）贴壁：将培养的原代神经细胞
体外引起神经干细胞的迁移，为进一步研究胶质
瘤细胞中存在促进神经干细胞迁移的物质打下基础。
球吸出，接种至置有多聚赖氨酸包被盖玻片的２４孔培养板，放人３７℃、５％Ｃ０２培养箱培养２ｈ，使神经
细胞球贴壁。（２）固定：吸去培养液加人４％多聚甲醛１Ｈｌｌ，室温下固定３０ｍｉｎ。洗涤后，用含１０％羊血清、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ－１００的０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ液在３７℃条件下孵育封闭１０ｍｉｎ，吸去封闭液。加一
＊江苏省自然科学基金（ＢＫ２００２１４５）△通讯作者
收稿日期：２００５—０６—０３；修回日期：２００５—１０—０８
——４４－－－－——
万方数据
抗（小鼠抗ＮｅｓｔｉｎＩｇＧｌ按１：５００倍稀释，购自
ＣＨＥＭＩＣＯＮ公司），放入４。Ｃ冰箱过夜，洗涤后，再加入二抗（ＦＩＴＣ标记的羊抗小鼠ＩｇＧ，按１：１５０倍稀释，购自Ｓｉｇｍａ公司），避光，在３７℃水浴箱内孵育３０ｍｉｎ，吸去二抗，洗涤，在激发光波长为
４９０
ｎｍ，滤色光波长为５２０ｎｍ的共聚焦显微镜下
观察照相。细胞传代能力鉴定——ＢｒｄＵ免疫荧光检测：将获得的原代神经球吹打制成单细胞悬
液，接种至含ＢｒｄＵ（５ｔｘｍｏｌ／Ｌ）的培养液中培养
５～７
ｄ即可形成次代神经球。贴壁、固定、封闭，免疫荧光染色和观察均同前。小鼠抗ＢｒｄＵＩｇＧｌ按
１：１
０００倍稀释，为ＮＥＯＭＡＲＫＥＲＳ公司产品，
ＦＩＴＣ标记的羊抗小鼠ＩｇＧ，按１：２００倍稀释。１．１．２星形胶质细胞的培养及鉴定从ＳＤ新生红皮鼠大脑皮质分离星形胶质细胞，用含２０％
小牛血清培养基ＤＭＥＭ／Ｆ１２进行培养大约
２８
ｄ，使得星形胶质细胞生长处于指数期［３］。免
ＩｇＧｌ，按１：５００倍稀释，
ＦＩＴＣ标记的羊抗小鼠ＩｇＧ，按１：２００倍稀释，二
者均购自Ｓｉｇｍａ公司。
１．１．３
Ｃ６细胞培养Ｃ６胶质瘤细胞购自中科院
上海细胞所，用含２０％小牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２
培养基进行培养４～６ｄ，待细胞生长处于对数期时使用。
用多聚碳酸膜有８肚ｍ微孔的“Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ”细
ｈ，把培养Ｃ６胶质瘤细胞和星ｈ。迁
ｔＡ；第２组（Ｃ６细胞培
ｔｘｌ和２００肚１无血清培养
ｔ＊ｌ，共培养３６ｈ。取出培养杯，用甲醇ｍｉｎ；用Ｇｉｅｍｓａ染色１０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗３次；
多组间比较采用方差分析，两组间比较采用
万
方数据２结果
２．１神经干细胞和星形胶质细胞的培养鉴定２．１．１神经干细胞和星形胶质细胞培养鉴定的结果新生大鼠大脑皮质细胞在接种后大部分
存活，胞体光滑圆润，胞质透亮，２４～４８ｈ内细胞开始聚集，形成细胞团，随后聚集的细胞迅速分裂，细胞团中的细胞数量快速增加，至３～４ｄ已初步形成神经球，培养至１周左右时每个培养瓶
中可形成数十个至百余个呈悬浮生长、大小基本一致、形态规则的神经球。Ｎｅｓｔｉｎ即巢蛋白是神
经干细胞的标志物［５］。Ｎｅｓｔｉｎ免疫荧光检测发现培养的神经球内的几乎所有细胞均呈Ｎｅｓｔｉｎ阳
性；５一ＢｒｄＵ即５一溴一２脱氧尿苷。在细胞分裂的
ＤＮＡ合成前期，可以作为底物结合到新合成的
ＤＮＡ中，从而可验证神经干细胞的增殖能力。
将神经干细胞球用含５一ＢｒｄＵ的培养液制成单细胞悬液并培养，大约７ｄ形成次代神经细胞球。对次代神经细胞球进行５－ＢｒｄＵ免疫荧光检测显
示，新形成的次代神经细胞球中，绝大多数细胞呈５－ＢｒｄＵ阳性，其细胞核中可见荧光标记。说明次代神经细胞球中大部分细胞为传代后经细胞分裂而来，即培养神经干细胞具有分裂传代能
力。从而证明我们培养的细胞球是神经干细胞球（图１，２）。
２．１．２星形胶质细胞培养和ＧＦＡＰ免疫荧光检
测分离的大鼠大脑皮质细胞在原代培养（种植）
４
ｈ后，部分细胞即可长出细小胞突，培养３～４ｄ
后，细胞数量便明显增加，随着培养时间的延长，培养物中星形胶质细胞的比例越来越大，而神经
元及其他细胞成分的比例越来越小。大鼠大脑皮
质细胞原代培养一般在９～１４ｄ，以星形胶质细胞
为主的细胞即可长满培养瓶壁。经传代后星形胶
质细胞的比例更高，几近单一细胞培养物。ＧＦＡＰ即胶质纤维酸性蛋白，是星形胶质细胞的骨架蛋白，为星形胶质细胞所特有，可作为星形胶质细胞的标志物。对培养的胶质细胞进行ＧＦＡＰ免疫荧
光检测显示，绝大多数细胞表现为ＧＦＡＰ阳性，说
明培养的细胞是星形胶质细胞（图３）。
２．２细胞迁移结果
每次实验每组３个孔，实验共重复３次（ｎ一９）。每孑Ｌ的迁移细胞球数（细胞球的突起钻过膜
孔，使细胞球紧贴膜者）为光镜下放大１００倍，中间９个格中的平均数，统计结果：Ｃ６细胞上清组
为６４．００±５．００，星形细胞上清组为４１．７８±６．９１，
一４５—
疫荧光法检测培养细胞的ＧＦＡＰ表达，方法同前。小鼠抗ＧＦＡＰ１．２细胞迁移实验
胞培养室（ＣｏＲＮＩＮＧ公司产品）进行迁移实验。
细胞迁移实验前３６形胶质细胞的含小牛血清的上清去掉，然后换上无血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基进行培养３６移实验时共分３组，第１组（对照）在细胞培养室的下室加人无血清培养基６００养上清）：在细胞培养室的下室加入Ｃ６细胞无血清培养基培养的上清４００基；第３组（星形细胞培养上清）：在细胞培养室的
下室加入星形胶质细胞无血清培养基培养的上清
４００＿ｕｌ和２００牡ｌ无血清培养基。在所有３组的细
胞培养室的上室加入神经干细胞球悬液（６．７×１０２／ｍ１）２００固定１０用解剖刀取下膜，转置在自制的带网格的载玻片上，取中问９个格进行光镜下放大１００倍计数［４］。
１．３统计学处理
最小显著差数法。基本培养基组为２７．８９±５．６４，方差分析结果显示
组间有显著性差异（Ｐ％Ｏ．０１）。各组间又进行多重比较。结果可以看出，Ｃ６胶质瘤细胞的上清引
著差异（Ｐ＜ｏ．０５）。这说明Ｃ６胶质瘤细胞的上清
明显地促进了神经干细胞球的迁移（图４～６）。有理由推测Ｃ６胶质瘤细胞的上清中存在着某种或几种促进神经干细胞球迁移的活性物质。
起神经干细胞球迁移的数目与星形胶质细胞的上
清、新鲜无血清培养基都有极显著差异（Ｐ＜０．０１），星形胶质细胞与新鲜无血清培养基向有显
图１图２图３
ＳＤ新生大鼠脑皮质分离、培养１周的神经干细胞球（Ｎｅｓｔｉｎ—ＦＩＴＣ），×２０．ＳＤ新生大鼠脑皮质分离、培养的传代后次级神经干细胞球（ＢｒｄＵＦＩＴＣ），×２０．ＳＤ大鼠脑皮质分离、培养的星形胶质细胞ＧＦＡＰＦＩＴＣ，×２０．
图４基本培养基引起神经干细胞迁移，×５．图５图６
Ｆｉｇ
ｌ
星形胶质细胞上清引起神经干细胞迁移，×５．Ｃ６胶质瘤细胞上清引起神经干细胞迁移，×５．
Ｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍ
ｎｅｗ
ｂｏｒｎ
ｒａｔ
ｂｒａｉｎｂｒａｉｎ
ｃｏｒｔｅｘ
ａｆｔｅｒ
ｏｎｅ
ｗｅｅｋｃｕｌｔｕｒｅ．×２０
Ｆｉｇ２ＦｉｇＦｉｇＦｉｇＦｉｇ
３４５６
Ｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｎｅｗ—ｂｏｒｎＡｓｔｒｏｃｙｔｅｃｅｌｌｓｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍ
ｒａｔ
ｒａｔｃｏｒｔｅｘ
ａｆｔｅｒｐａｓｓａｇｅ，×２０．
ｂｒａｉｎ
ｃｏｒｔｅｘ
ａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅ，×２０．
Ｍｉｇｒａｔｉｏｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅｍｅｄｉｕｍ，×５．ＭｉｇｒａｔｉｏｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＭｉｇｒａｔｉｏｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙ
ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ
ｏｆ
ａｓｔｒｏｃｙｔｅ
ｃｅｌｌｓ，×５．
ｏｆＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓ，×５．
３讨论
在体内胶质瘤吸引神经干细胞现象已被证
在胶质瘤细胞的培养上清中可能存在吸引神经干细胞迁移的物质。由于胶质瘤细胞株的永生性，
细胞成分单一，培养上清容易得到，且上清中的蛋
白成分相对较细胞和组织少，这一研究发现，为分离、纯化促进神经干细胞迁移物质提供了极大便利。
胶质瘤细胞吸引神经干细胞的迁移作用的发
实［１］，目前已发现不少与神经干细胞迁移相关的
因子，包括细胞基质衍生因子ｌａ（ＳＤＦ一１ｄ）扣］、血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）［６］、单核细胞化学吸引蛋白１（ＭＣＰ１）Ｅ７］等，它们在胶质瘤标本中和众多胶质瘤细胞系中有高表达［８￣１０｜，这就不难理解胶质瘤
现，无论对于胶质瘤和神经再生的基础研究和临
床应用都有着极重要价值。在胶质瘤，一方面可以为瘤细胞的迁移、浸润机制研究提供借鉴；另一方面，利用胶质瘤细胞吸引神经干细胞的特点，可以将神经干细胞作为载体，携带药物或因子追踪
杀伤肿瘤细胞。事实上，美国哈佛大学的Ｓｈａｈ
细胞在体内吸引神经干细胞迁移的现象。
Ｃ６胶质瘤细胞系是１９６８年由Ｂｅｎｄａ等［１１ｊ从大鼠脑胶质瘤分离培养并克隆建立，具有胶质瘤的典型生物学特征。有关胶质细胞上清对神经干细胞的迁移作用未见文献报道，本研究结果显示，
４６
万
方数据
等［１２｜，已经工程出能分泌肿瘤坏死因子相关凋亡
ｏｆ
ｔｍｎｓｐｋｍｔｅｄｈｕｍａｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉＳｉｎｄｕｃｅｄｂｙｖａｓｃｕｌａｒ
ａｎ－
诱导配体的鼠神经干细胞，对肿瘤细胞具有明显ｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ．Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，２００５，７（６）：６２３—６２９．
的杀伤作用。在活体实验中已证实工程化的神经７
ＷｉｄｅｒａＤ，ＨｏｈｋａｍｐＷ，ＥｎｔｓｃｈｌａｄｅｎＦ，ｅｔａ１．ＭＣＰ一１ｉｎ—
ｄｕｃｅｓｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆａｄｕｌｔｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．ＥｕｒＪＣｅｌｌＢｉｏｌ，
干细胞迁移人肿瘤，并导致肿瘤明显消退。在神２００４，８３（８）ｌ３８１—３８７．经再生方面，吸引神经干细胞迁移因子的研究，不８ＢａｒｂｅｒｏＳ。Ｂｏｎａｖｉａ
Ｒ，ＢａｊｅｔｔｏＡ，ｅｔａ１．Ｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ—ｄｅｒｉｖｅｄ
仅为研究神经发育和再生过程中，神经干细胞迁ｆａｃｔｏｒｌａｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｈｕｍａｎｇｌｉｏｈｌａｓｔｏｍａｅｅｌｌｇｒｏｗｔｈｔｈｒｏｕｇｈ移机制打下基础，也为临床吸引内源性或移植的ｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｂｏｔｈｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅｓ１／神经干细胞至损伤处，修复损伤带来一丝曙光。２ａｎｄＡｋｔ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００３，６３（８）：１９６９—１９７４．
９ＹａｎｇＳＸ，ＣｈｅｎＪＨ，ＪｉａｎｇＸＦ，ｅｔａ１．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｃｈｅｍｏｋｉｎｅＳｕｎ等［１３］和Ｃｏｏｐｅｒ等［１４］的工作已证实了这一点。ｒｅｃｅｐｔｏｒＣＸＣＲ４ｉｎｍａｌｉｇｎａｎｔｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅ
ｐｒｏ—
Ｓｕｎ等用具有吸引神经干细胞迁移作用的重组的ｄｕｃｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙ
干细胞因子，将移植的神经干细胞吸引到了脑损ＲｅｓＣ。ｍｍｕｎ，２００５，３３５（２）：５２３—５２８．
伤部位；Ｃｏｏｐｅｒ等用立体定向技术灌注转化因子１０Ｈｕａｆｌｇ其・ＬｉｎＹ，ＣｈｅｎｇＣ，ｅｔａ１．Ｃｏｎｎｅｘｉｎ
４３
ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ
ａ人鼠脑切除多巴胺神经元的部位，引起成年鼠脑
ｈｕｍａｎｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｃｅｌｌ
ｇｒｏｗｔｈｂｙｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏ—
ｃｙｔｅｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ１，ａｓｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｕｓｉｎｇ室下带的神经干细胞迁移入损伤区，并出现增殖。
ｐｒｏｔｅｉｎａｒｒａｙ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００２，６２（１０）：２８０６—２８１２．１１
ＢｅｎｃｈＰ，ＬｉｇｈｔｂｏｄｙＪ，Ｓａｔｏａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ
ｒａｔ
参考文献
Ｇ，ｅｔ
ｇｌｉａｌｃｅｌｌ
ｓｔｒａｉｎｉｎｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅ，１９６８，１６１（８３９）：３７０－３７１．
１
ＴａｎｇＹ，Ｓｈａｈ
Ｋ，ＭｅｓｓｅｒｌｉＳＭ，ｅｔａ１．Ｉｎｖｉｖｏｔｒａｃｋｉｎｇｏｆ
１２
ＳｈａｈＫ。ＢｕｒｅａｕＥ，ＫｉｍＤＥ，ｅｔａ１．Ｇｌｉｏｍａｔｈｅｒａｐｙａｎｄｒｅａｌ—ｎｅｕｒａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ
ｃｅｌｌ
ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
ｔＯ
ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｓ．Ｈｕｍａｎ
ｔｉｍｅｉｍａｇｉｎｇ０ｆｎｅｕｒａｌ
ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ
ｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｔｕｍｏｒ
ｒｅ—
ＧｅｎｅＴｈｅｒ，２００３，１４（１３）ｉ１２４７—１２５４．
ｇｒｅｓｓｉｏｎ．ＡｎｎＮｅｕｒｏｌ，２００５，５７（１）：３４—４１．２刘仕勇，张可成，杨辉，等．神经干细胞的分离培养及其鉴
１３
ＳｕｎＬ，Ｌｅｅ
Ｊ。ＨｏｗａｒｄＡＦ．Ｎｅｕｒｏｎａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｔｅｍｃｅｌｌ
定．第三军医大学学报，２０００，１（２２）：２６—２８．
ｆａｃｔｏｒｉｎｄｕｃｅｓｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｅｅｌｌ
ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
ｔＯａｒｅａｓ
ｏｆｂｒａｉｎｉｎｊｕ—
３薛庆善主编．体外培养的原理与技术：大鼠星形胶质细胞的
ｒｙ．ＪｅｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，２００４，１１３：１３６４—１３７４．
体外培养．北京：科学出版社，２００３．６７８—６８２．
１４
Ｃｃ，ｏｐｅｆＯ，Ｉｓａｅｓｏｎ
ＱＩｎｔｒａｓｔｒｉａｔａｌｔｒａｎｓｆｏｒｒｎｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ
４栾庆先，涉谷俊昭，牧克教，等．牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞
ａｌｐｈａｄｅｌｉｖｅｒｙ
ｔＯａ
ｍｏｄｅｌｏｆＰａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓｄｉｓｅａｓｅｉｎｄｕｃｅｓｐｒｏｌｉｆ—
对白细胞介素８的趋化反应．中华口腔医学杂志，２００１，３６
ｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓａｄｕｌｔｎｅｕｒａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ
（１）：４０—４１．ｃｅｌｌｓｗｉｔｈｏｕｔ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎｔｏ
ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ
ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｊ
５
ＥｒｌａｎｄｓｓｏｎＡ，ＬａｒｓｓｏｎＪ，Ｆｏｒｓｂｅｒｇ－Ｎｉｌｓｓｏｎ
Ｋ．鳢黜ｃｅｌｌｆａｃ—
Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００４，２４（４１）：８９２４—８９３１．
ｔｏｔ
ｉｓ
ａ
ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔａｎｄ
ａ
ｓｕｒｖｉｖａｌｆａｃｔｏｒｆｏｒＣＮＳｓｔｅｍ（编辑：许家军）
ｃｅｌｌｓ．ＥｘｐＣｅｌｌＲｅｓ，２００４，３０１（２）：２０１—２１０．６
ＳｃｈｒｎｉｄｔＮＯ，Ｐｒ２ｙｌｅｃｋｉ
Ｗ，ＹａｎｇＷ，ｅｔａ１．Ｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｔｍｐｉｓｍ
《解剖学杂志》编委会成员名单
名誉主编：郑思竞黄瀛吴晋宝于彦铮
顾问：丁士海左焕琛刘斌吴良芳张朝佑胡人义贲长恩鲍琦主
编：陈尔瑜
副主编：许家军（常务）丁文龙吴明章沈馨亚周国民党瑞山
编
委：丁自海壬怀经王克强王鹤鸣李和李云庆孙善全朱钦
朱唏朱清仙向正华刘勇刘树伟刘厚奇羊惠君杨天祝陈东应大君邵旭建张传森张绍祥张雅芳余安胜宋健席焕久姜宗来原林顾晓松高秀来高英茂徐晨黄威权崔慧先康仲涵彭裕文韩卉景雅蔡文琴宋志坚周嘉伟柏树令姚志彬钟翠平
编辑部：许家军（主任）刘芳张志英黄会龙冀凯宏
（除名誉主编外，均按笔画顺序）
万
方数据一４７—
ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＩ．ＯＦＡＮＡＴ（）ＭＹＶ（）ｌ＿２９
Ｎｏ．１
２００６
解剖学杂志２００６年第２９卷第１期
Ｃ６胶质瘤细胞体外诱导神经干细胞的迁移８
林社裕１
高树梓２刘
梅１
高宜录２△
（１南通大学江苏省神经再生重点实验室，南通２２６００１；２南通大学附属医院神经外科）
摘要目的：体外观察ｃ６胶质瘤细胞的培养上清是否有诱导神经干细胞迁移的作用。方法：实验组取处于指数
生长期的Ｃ６胶质瘤细胞或星形胶质细胞的无血清培养上清加入细胞培养室的下室，并加无血清培养基；培养室的上室加处于对数生长期的神经干细胞球悬液，培养箱中共培养，光镜下计数迁移的细胞球数。结果：Ｃ６胶质瘤细胞的上清引起神经干细胞球迁移的数目明显多于星形胶质细胞的上清和新鲜无血清培养基。结论：Ｃ６胶
质瘤细胞的培养上清中存在诱导神经干细胞球迁移的物质，这将为研究诱导神经干细胞迁移的物质提供很大的
便利。
关键词神经胶质瘤；干细胞；神经元；细胞运动
Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
ｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ
Ｓｈｅ－Ｙｕ．ＧＡＯＳｈｕ＿Ｚｉ。Ｉ，ＩＵＭｅｉ，ＧＡｏＹｉ－Ｌｕ
ＬＩＮ
（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｅｕｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＮａｎｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ２２６００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｗｈｅｔｈｅｒ
ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ
ｏｆＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓ
ｏｒ
ｃａｎ
ｉｎｄｕｃｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎ
ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ
ｔｈｅｌｏｗｅｒ
ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ
ｏｆＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓ
ａｓｔｒｏｃｙｔｅ
ｃｅｌｌｓｉｎｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｐｈａｓｅｗｅｒｅａｄｄｅｄｉｎｔｏ
ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓｏｆｔｈｅＴｒａｎｓｗｅｌｌｅｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｃｈａｍｂｅｒｓ。ｔｈｅｎａｄｄｉｔｉｏｎａｌｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅｃｕｌｔｕｒｅｗａｓａｄｄｅｄｉｎ
ｅａｃｈｏｆｔｈｅｍａｎｄｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｗｅｒｅｐｌａｃｅｄｉｎａｌｌｔｈｅｕｐｐｅｒｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓ．Ａｆｔｅｒｅｏ－ｉｎｃｕ—ｂａｔｉｏｎｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｍｉｇｒａｔｉｏｎｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｗａｓｃｏｕｎｔｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｏｆＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓｏｂｖｉｏｕｓｌｙｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｔｉｓｓｕｇ—
ｇｅｓｔｅｄｔｈａｔ
ｓｏｍｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｅｘｉｓｔｉｎｔｈｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ
ｏｎ
ｔｏｉｎｄｕｃｅ
ｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ；ｔｈｉｓｐｒｏｖｉｄｅｓ
ａ
ｂａｓｉｓ
ｆｏｒｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ
ｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．
ｇｌｉｏｍａ；ｓｔｅｍｃｅｌｌｓ；ｎｅｕｒｏｎｓ；ｃｅｌｌｍｏｖｅｍｅｎｔ
Ｔａｎｇ等［１］将神经干细胞分别注人荷胶质瘤裸鼠的对侧脑实质、脑室、静脉系统和腹腔，结果发现注入对侧脑实质、脑室、静脉系统的神经干细胞都不同程度的聚集在胶质瘤内，而非注射局部。这说明胶质瘤细胞中存在着诱导神经干细胞迁移和分化的信号物质，而且在体内可以诱导神经干
细胞向胶质瘤迁移。那么，在体外培养的胶质瘤
１材料和方法
１．１细胞的培养及鉴定
１．１．１
神经干细胞的培养及鉴定从新生５～７
ｄ
ＳＤ大鼠（由南通大学实验动物中心提供）大脑皮质分离培养神经干细胞。用无血清培养基ＤＭＥＭ／Ｆ１２（购自ＮＩＶＩＴＲＯＧＥＮ公司，其中ｂＦ（、Ｆ购自ＰＥＰＲＯＴＥＣＨ公司，Ｂ２７
Ｓｅｒｕｍ－ＦｒｅｅＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ购
细胞是否也可以引起神经干细胞迁移？本研究的
目的即是观察体外培养的胶质瘤细胞是否可以在
自ＮＩＶＩＴＲＯＧＥＮ公司）进行培养大约７ｄ，使得神经干细胞生长处于指数期［２］。免疫荧光法检测培养细胞Ｎｅｓｔｉｎ表达：（１）贴壁：将培养的原代神经细胞
体外引起神经干细胞的迁移，为进一步研究胶质
瘤细胞中存在促进神经干细胞迁移的物质打下基础。
球吸出，接种至置有多聚赖氨酸包被盖玻片的２４孔培养板，放人３７℃、５％Ｃ０２培养箱培养２ｈ，使神经
细胞球贴壁。（２）固定：吸去培养液加人４％多聚甲醛１Ｈｌｌ，室温下固定３０ｍｉｎ。洗涤后，用含１０％羊血清、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ－１００的０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ液在３７℃条件下孵育封闭１０ｍｉｎ，吸去封闭液。加一
＊江苏省自然科学基金（ＢＫ２００２１４５）△通讯作者
收稿日期：２００５—０６—０３；修回日期：２００５—１０—０８
——４４－－－－——
万方数据
抗（小鼠抗ＮｅｓｔｉｎＩｇＧｌ按１：５００倍稀释，购自
ＣＨＥＭＩＣＯＮ公司），放入４。Ｃ冰箱过夜，洗涤后，再加入二抗（ＦＩＴＣ标记的羊抗小鼠ＩｇＧ，按１：１５０倍稀释，购自Ｓｉｇｍａ公司），避光，在３７℃水浴箱内孵育３０ｍｉｎ，吸去二抗，洗涤，在激发光波长为
４９０
ｎｍ，滤色光波长为５２０ｎｍ的共聚焦显微镜下
观察照相。细胞传代能力鉴定——ＢｒｄＵ免疫荧光检测：将获得的原代神经球吹打制成单细胞悬
液，接种至含ＢｒｄＵ（５ｔｘｍｏｌ／Ｌ）的培养液中培养
５～７
ｄ即可形成次代神经球。贴壁、固定、封闭，免疫荧光染色和观察均同前。小鼠抗ＢｒｄＵＩｇＧｌ按
１：１
０００倍稀释，为ＮＥＯＭＡＲＫＥＲＳ公司产品，
ＦＩＴＣ标记的羊抗小鼠ＩｇＧ，按１：２００倍稀释。１．１．２星形胶质细胞的培养及鉴定从ＳＤ新生红皮鼠大脑皮质分离星形胶质细胞，用含２０％
小牛血清培养基ＤＭＥＭ／Ｆ１２进行培养大约
２８
ｄ，使得星形胶质细胞生长处于指数期［３］。免
ＩｇＧｌ，按１：５００倍稀释，
ＦＩＴＣ标记的羊抗小鼠ＩｇＧ，按１：２００倍稀释，二
者均购自Ｓｉｇｍａ公司。
１．１．３
Ｃ６细胞培养Ｃ６胶质瘤细胞购自中科院
上海细胞所，用含２０％小牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２
培养基进行培养４～６ｄ，待细胞生长处于对数期时使用。
用多聚碳酸膜有８肚ｍ微孔的“Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ”细
ｈ，把培养Ｃ６胶质瘤细胞和星ｈ。迁
ｔＡ；第２组（Ｃ６细胞培
ｔｘｌ和２００肚１无血清培养
ｔ＊ｌ，共培养３６ｈ。取出培养杯，用甲醇ｍｉｎ；用Ｇｉｅｍｓａ染色１０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗３次；
多组间比较采用方差分析，两组间比较采用
万
方数据２结果
２．１神经干细胞和星形胶质细胞的培养鉴定２．１．１神经干细胞和星形胶质细胞培养鉴定的结果新生大鼠大脑皮质细胞在接种后大部分
存活，胞体光滑圆润，胞质透亮，２４～４８ｈ内细胞开始聚集，形成细胞团，随后聚集的细胞迅速分裂，细胞团中的细胞数量快速增加，至３～４ｄ已初步形成神经球，培养至１周左右时每个培养瓶
中可形成数十个至百余个呈悬浮生长、大小基本一致、形态规则的神经球。Ｎｅｓｔｉｎ即巢蛋白是神
经干细胞的标志物［５］。Ｎｅｓｔｉｎ免疫荧光检测发现培养的神经球内的几乎所有细胞均呈Ｎｅｓｔｉｎ阳
性；５一ＢｒｄＵ即５一溴一２脱氧尿苷。在细胞分裂的
ＤＮＡ合成前期，可以作为底物结合到新合成的
ＤＮＡ中，从而可验证神经干细胞的增殖能力。
将神经干细胞球用含５一ＢｒｄＵ的培养液制成单细胞悬液并培养，大约７ｄ形成次代神经细胞球。对次代神经细胞球进行５－ＢｒｄＵ免疫荧光检测显
示，新形成的次代神经细胞球中，绝大多数细胞呈５－ＢｒｄＵ阳性，其细胞核中可见荧光标记。说明次代神经细胞球中大部分细胞为传代后经细胞分裂而来，即培养神经干细胞具有分裂传代能
力。从而证明我们培养的细胞球是神经干细胞球（图１，２）。
２．１．２星形胶质细胞培养和ＧＦＡＰ免疫荧光检
测分离的大鼠大脑皮质细胞在原代培养（种植）
４
ｈ后，部分细胞即可长出细小胞突，培养３～４ｄ
后，细胞数量便明显增加，随着培养时间的延长，培养物中星形胶质细胞的比例越来越大，而神经
元及其他细胞成分的比例越来越小。大鼠大脑皮
质细胞原代培养一般在９～１４ｄ，以星形胶质细胞
为主的细胞即可长满培养瓶壁。经传代后星形胶
质细胞的比例更高，几近单一细胞培养物。ＧＦＡＰ即胶质纤维酸性蛋白，是星形胶质细胞的骨架蛋白，为星形胶质细胞所特有，可作为星形胶质细胞的标志物。对培养的胶质细胞进行ＧＦＡＰ免疫荧
光检测显示，绝大多数细胞表现为ＧＦＡＰ阳性，说
明培养的细胞是星形胶质细胞（图３）。
２．２细胞迁移结果
每次实验每组３个孔，实验共重复３次（ｎ一９）。每孑Ｌ的迁移细胞球数（细胞球的突起钻过膜
孔，使细胞球紧贴膜者）为光镜下放大１００倍，中间９个格中的平均数，统计结果：Ｃ６细胞上清组
为６４．００±５．００，星形细胞上清组为４１．７８±６．９１，
一４５—
疫荧光法检测培养细胞的ＧＦＡＰ表达，方法同前。小鼠抗ＧＦＡＰ１．２细胞迁移实验
胞培养室（ＣｏＲＮＩＮＧ公司产品）进行迁移实验。
细胞迁移实验前３６形胶质细胞的含小牛血清的上清去掉，然后换上无血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基进行培养３６移实验时共分３组，第１组（对照）在细胞培养室的下室加人无血清培养基６００养上清）：在细胞培养室的下室加入Ｃ６细胞无血清培养基培养的上清４００基；第３组（星形细胞培养上清）：在细胞培养室的
下室加入星形胶质细胞无血清培养基培养的上清
４００＿ｕｌ和２００牡ｌ无血清培养基。在所有３组的细
胞培养室的上室加入神经干细胞球悬液（６．７×１０２／ｍ１）２００固定１０用解剖刀取下膜，转置在自制的带网格的载玻片上，取中问９个格进行光镜下放大１００倍计数［４］。
１．３统计学处理
最小显著差数法。基本培养基组为２７．８９±５．６４，方差分析结果显示
组间有显著性差异（Ｐ％Ｏ．０１）。各组间又进行多重比较。结果可以看出，Ｃ６胶质瘤细胞的上清引
著差异（Ｐ＜ｏ．０５）。这说明Ｃ６胶质瘤细胞的上清
明显地促进了神经干细胞球的迁移（图４～６）。有理由推测Ｃ６胶质瘤细胞的上清中存在着某种或几种促进神经干细胞球迁移的活性物质。
起神经干细胞球迁移的数目与星形胶质细胞的上
清、新鲜无血清培养基都有极显著差异（Ｐ＜０．０１），星形胶质细胞与新鲜无血清培养基向有显
图１图２图３
ＳＤ新生大鼠脑皮质分离、培养１周的神经干细胞球（Ｎｅｓｔｉｎ—ＦＩＴＣ），×２０．ＳＤ新生大鼠脑皮质分离、培养的传代后次级神经干细胞球（ＢｒｄＵＦＩＴＣ），×２０．ＳＤ大鼠脑皮质分离、培养的星形胶质细胞ＧＦＡＰＦＩＴＣ，×２０．
图４基本培养基引起神经干细胞迁移，×５．图５图６
Ｆｉｇ
ｌ
星形胶质细胞上清引起神经干细胞迁移，×５．Ｃ６胶质瘤细胞上清引起神经干细胞迁移，×５．
Ｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍ
ｎｅｗ
ｂｏｒｎ
ｒａｔ
ｂｒａｉｎｂｒａｉｎ
ｃｏｒｔｅｘ
ａｆｔｅｒ
ｏｎｅ
ｗｅｅｋｃｕｌｔｕｒｅ．×２０
Ｆｉｇ２ＦｉｇＦｉｇＦｉｇＦｉｇ
３４５６
Ｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｎｅｗ—ｂｏｒｎＡｓｔｒｏｃｙｔｅｃｅｌｌｓｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍ
ｒａｔ
ｒａｔｃｏｒｔｅｘ
ａｆｔｅｒｐａｓｓａｇｅ，×２０．
ｂｒａｉｎ
ｃｏｒｔｅｘ
ａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅ，×２０．
Ｍｉｇｒａｔｉｏｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅｍｅｄｉｕｍ，×５．ＭｉｇｒａｔｉｏｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＭｉｇｒａｔｉｏｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｈｅｒｅｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙ
ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ
ｏｆ
ａｓｔｒｏｃｙｔｅ
ｃｅｌｌｓ，×５．
ｏｆＣ６ｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓ，×５．
３讨论
在体内胶质瘤吸引神经干细胞现象已被证
在胶质瘤细胞的培养上清中可能存在吸引神经干细胞迁移的物质。由于胶质瘤细胞株的永生性，
细胞成分单一，培养上清容易得到，且上清中的蛋
白成分相对较细胞和组织少，这一研究发现，为分离、纯化促进神经干细胞迁移物质提供了极大便利。
胶质瘤细胞吸引神经干细胞的迁移作用的发
实［１］，目前已发现不少与神经干细胞迁移相关的
因子，包括细胞基质衍生因子ｌａ（ＳＤＦ一１ｄ）扣］、血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）［６］、单核细胞化学吸引蛋白１（ＭＣＰ１）Ｅ７］等，它们在胶质瘤标本中和众多胶质瘤细胞系中有高表达［８￣１０｜，这就不难理解胶质瘤
现，无论对于胶质瘤和神经再生的基础研究和临
床应用都有着极重要价值。在胶质瘤，一方面可以为瘤细胞的迁移、浸润机制研究提供借鉴；另一方面，利用胶质瘤细胞吸引神经干细胞的特点，可以将神经干细胞作为载体，携带药物或因子追踪
杀伤肿瘤细胞。事实上，美国哈佛大学的Ｓｈａｈ
细胞在体内吸引神经干细胞迁移的现象。
Ｃ６胶质瘤细胞系是１９６８年由Ｂｅｎｄａ等［１１ｊ从大鼠脑胶质瘤分离培养并克隆建立，具有胶质瘤的典型生物学特征。有关胶质细胞上清对神经干细胞的迁移作用未见文献报道，本研究结果显示，
４６
万
方数据
等［１２｜，已经工程出能分泌肿瘤坏死因子相关凋亡
ｏｆ
ｔｍｎｓｐｋｍｔｅｄｈｕｍａｎｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉＳｉｎｄｕｃｅｄｂｙｖａｓｃｕｌａｒ
ａｎ－
诱导配体的鼠神经干细胞，对肿瘤细胞具有明显ｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ．Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，２００５，７（６）：６２３—６２９．
的杀伤作用。在活体实验中已证实工程化的神经７
ＷｉｄｅｒａＤ，ＨｏｈｋａｍｐＷ，ＥｎｔｓｃｈｌａｄｅｎＦ，ｅｔａ１．ＭＣＰ一１ｉｎ—
ｄｕｃｅｓｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆａｄｕｌｔｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．ＥｕｒＪＣｅｌｌＢｉｏｌ，
干细胞迁移人肿瘤，并导致肿瘤明显消退。在神２００４，８３（８）ｌ３８１—３８７．经再生方面，吸引神经干细胞迁移因子的研究，不８ＢａｒｂｅｒｏＳ。Ｂｏｎａｖｉａ
Ｒ，ＢａｊｅｔｔｏＡ，ｅｔａ１．Ｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ—ｄｅｒｉｖｅｄ
仅为研究神经发育和再生过程中，神经干细胞迁ｆａｃｔｏｒｌａｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｈｕｍａｎｇｌｉｏｈｌａｓｔｏｍａｅｅｌｌｇｒｏｗｔｈｔｈｒｏｕｇｈ移机制打下基础，也为临床吸引内源性或移植的ｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｂｏｔｈｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅｓ１／神经干细胞至损伤处，修复损伤带来一丝曙光。２ａｎｄＡｋｔ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００３，６３（８）：１９６９—１９７４．
９ＹａｎｇＳＸ，ＣｈｅｎＪＨ，ＪｉａｎｇＸＦ，ｅｔａ１．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｃｈｅｍｏｋｉｎｅＳｕｎ等［１３］和Ｃｏｏｐｅｒ等［１４］的工作已证实了这一点。ｒｅｃｅｐｔｏｒＣＸＣＲ４ｉｎｍａｌｉｇｎａｎｔｇｌｉｏｍａｃｅｌｌｓｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅ
ｐｒｏ—
Ｓｕｎ等用具有吸引神经干细胞迁移作用的重组的ｄｕｃｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙ
干细胞因子，将移植的神经干细胞吸引到了脑损ＲｅｓＣ。ｍｍｕｎ，２００５，３３５（２）：５２３—５２８．
伤部位；Ｃｏｏｐｅｒ等用立体定向技术灌注转化因子１０Ｈｕａｆｌｇ其・ＬｉｎＹ，ＣｈｅｎｇＣ，ｅｔａ１．Ｃｏｎｎｅｘｉｎ
４３
ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ
ａ人鼠脑切除多巴胺神经元的部位，引起成年鼠脑
ｈｕｍａｎｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｃｅｌｌ
ｇｒｏｗｔｈｂｙｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏ—
ｃｙｔｅｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ１，ａｓｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｕｓｉｎｇ室下带的神经干细胞迁移入损伤区，并出现增殖。
ｐｒｏｔｅｉｎａｒｒａｙ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００２，６２（１０）：２８０６—２８１２．１１
ＢｅｎｃｈＰ，ＬｉｇｈｔｂｏｄｙＪ，Ｓａｔｏａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ
ｒａｔ
参考文献
Ｇ，ｅｔ
ｇｌｉａｌｃｅｌｌ
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１
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Ｋ，ＭｅｓｓｅｒｌｉＳＭ，ｅｔａ１．Ｉｎｖｉｖｏｔｒａｃｋｉｎｇｏｆ
１２
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ｃｅｌｌ
ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
ｔＯ
ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｓ．Ｈｕｍａｎ
ｔｉｍｅｉｍａｇｉｎｇ０ｆｎｅｕｒａｌ
ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ
ｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｔｕｍｏｒ
ｒｅ—
ＧｅｎｅＴｈｅｒ，２００３，１４（１３）ｉ１２４７—１２５４．
ｇｒｅｓｓｉｏｎ．ＡｎｎＮｅｕｒｏｌ，２００５，５７（１）：３４—４１．２刘仕勇，张可成，杨辉，等．神经干细胞的分离培养及其鉴
１３
ＳｕｎＬ，Ｌｅｅ
Ｊ。ＨｏｗａｒｄＡＦ．Ｎｅｕｒｏｎａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｔｅｍｃｅｌｌ
定．第三军医大学学报，２０００，１（２２）：２６—２８．
ｆａｃｔｏｒｉｎｄｕｃｅｓｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｅｅｌｌ
ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
ｔＯａｒｅａｓ
ｏｆｂｒａｉｎｉｎｊｕ—
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ｒｙ．ＪｅｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，２００４，１１３：１３６４—１３７４．
体外培养．北京：科学出版社，２００３．６７８—６８２．
１４
Ｃｃ，ｏｐｅｆＯ，Ｉｓａｅｓｏｎ
ＱＩｎｔｒａｓｔｒｉａｔａｌｔｒａｎｓｆｏｒｒｎｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ
４栾庆先，涉谷俊昭，牧克教，等．牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞
ａｌｐｈａｄｅｌｉｖｅｒｙ
ｔＯａ
ｍｏｄｅｌｏｆＰａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓｄｉｓｅａｓｅｉｎｄｕｃｅｓｐｒｏｌｉｆ—
对白细胞介素８的趋化反应．中华口腔医学杂志，２００１，３６
ｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓａｄｕｌｔｎｅｕｒａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ
（１）：４０—４１．ｃｅｌｌｓｗｉｔｈｏｕｔ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎｔｏ
ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ
ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｊ
５
ＥｒｌａｎｄｓｓｏｎＡ，ＬａｒｓｓｏｎＪ，Ｆｏｒｓｂｅｒｇ－Ｎｉｌｓｓｏｎ
Ｋ．鳢黜ｃｅｌｌｆａｃ—
Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００４，２４（４１）：８９２４—８９３１．
ｔｏｔ
ｉｓ
ａ
ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔａｎｄ
ａ
ｓｕｒｖｉｖａｌｆａｃｔｏｒｆｏｒＣＮＳｓｔｅｍ（编辑：许家军）
ｃｅｌｌｓ．ＥｘｐＣｅｌｌＲｅｓ，２００４，３０１（２）：２０１—２１０．６
ＳｃｈｒｎｉｄｔＮＯ，Ｐｒ２ｙｌｅｃｋｉ
Ｗ，ＹａｎｇＷ，ｅｔａ１．Ｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｔｍｐｉｓｍ
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万
方数据一４７—