科学研究
食品研究与开发
２００９年７月第３０卷第７期
２』＝，
响应面分析法优化槐米总黄酮的提取工艺
闫克玉，高远翔
（郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州４５０００２）
摘要：通过对槐米总黄酮提取，考察体积分数、提取时间、提取温度、料液比四因素对槐米总黄酮提取率的影响。用ＲＡＳ软件程序对试验数据进行二次响应面分析，对３项工艺参数进行优化，得出槐米总黄酮提取的二次回归方程；通过分析得出槐米总黄酮提取的最佳条件为：６０％乙醇（体积分数），提取２．２ｈ，料液比（ｇ：ｍＬ）ｌ：１７．９，温度８０．０℃。在此条件下测得的总黄酮提取率为１８．４６％。关键词：槐米；总黄酮；提取；响应面分析法
０ＰＩ’ＩＭＩＺＡＴＩＯＮＯＦ’Ｉ’ＨＥＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＯＦＴＯＴＡＬＦＬＡＶＯＮＥＦＲＯＭＳＯ，ＷＯＲＡＪＡＰＯＮＩＣＡ厶
ＵＳＩＮＧＲＥＳＰＯＮＳＥＳＵＲＦＡＣＥＡＮＡＩＪＳＩＳ
ＹＡＮＫｅ—ｙｕ，ＧＡＯＹｕａｎ－ｘｉａｎｇ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｏｄａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ
４５０００２，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖｏｌｕｍｅ，ｔｉｍｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆ
ｗｅｒｅ
ｓｏｌｉｄ－ｆｌｕｉｄ值：ｍＬ），ｏｎｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅ
ｓｔｕｄｉｅｄａｎｄｔｈｅｐａｒａｍｅｔｅｒｓｆｏｒｏｐｔｉｍｕｍｙｉｅｌｄ
ｗｅｒｅ
ｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｕｓｉｎｇＲＡＳｓｏｆｔｗａｖｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｐａｒａｍｅｔｅｒｓｗａｓ：６０ｐｅｒｃｅｎｔｅｔｈａｎｏｌｖｏｌｕｍｅ，２．２ｓｉｔｕａｔｉｏｎ．ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｙｉｅｌｄｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｉｓ１８．４６％．Ｋｅｙ
ｈ，１：１７．９（ｇ：ｍＥ），ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ８０．０℃．Ｉｎ
ｔｈｉｓ
ｗｏｒｄｓ：ＳｏｐｈｏｒａｊａｐｏｎｉｃａＬ．；ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅａｎａｌｙｓｉｓ
槐米为豆科植物槐树（Ｓｏｐｈｏｒａｊａｐｏｎｉｃａ￡．）的干燥花蕾及花，槐米。又名槐花米，夏季花蕾形成时或花开放初采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质。前者习称”槐米”，后者习称“槐花”。槐米用作药用已有２０００多年历史，《神农本草经》还将其列为上品。槐米中含有芦丁、槲皮素、皂苷、多糖等成分，其中。芦丁是主要药用成分，具有凉血止血、清肝泻火功能。因此对其研究有非常现实的意义。目前，我国芦丁生产主要以槐米（槐米中的芦丁随产地及收取时间的不同其含量在１０％．
米低糖酸奶工艺研究１６］。专家预测槐米饮品及其系列保健产品，很快会风靡世界同。
本文就提取中影响槐米总黄酮提取率的几个重要因素作了系统研究，并运用响应面分析（ｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｓｕｒｆａｃｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ，ＲＳＡ）法【８】对槐米总黄酮的提取条件
进行了优化。用Ｂｏｘ—Ｂｅｎｈｎｋｅｎ的中心组合实验设计。对试验数据进行ＲＳＡ法分析。对拟合数学模型进行了较为详细的描述，得到了槐米总黄酮提取的最佳条件。１材料与方法１．１材料
槐米样品：购于河南省医药药材有限公司．６０℃干燥，粉碎过４０目筛备用；芦丁：生化试剂，上海药品检验所；亚硝酸钠与硝酸铝等均为分析纯。１．２仪器
ＢＳ
２８％之间）为原料进行提取㈣。槐米是一种营养保健
佳品，可药用也可食用。李杜风利用槐米研究了一种保健香茶闭。槐米其抗氧化成分对食用油脂具有较强的抗氧化作用。可作为一种具有保健功能的新型食用油脂和含脂食品添加剂使用，具有广泛的应用前景［４１。此外，槐米还可以在食品中配置饮料。根据槐米的营养价值，以槐米为原料，配合其他辅料研究了一种槐米速溶饮料的工艺［５１。还有谭长征利用槐米研究发酵型槐
基金项目：河南省烟草专卖局科技攻关资助项目【豫烟科（２００６）７号】作者简介：曰克玉（１９５０一），男（汉），教授，学士，硕士研究生导师，主要从事烟草原料学、烟草化学、卷烟工艺学的教学和科研工作。
２００Ｓ电子天平：北京赛多利斯天平有限公司，
感量０．００１ｇ；ＳＰ－２１００型可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司；ＦＳＪ一１１４型植物样本粉碎机：农牧渔业部扶沟科学仪器厂；ＳＨＢ—ＩＩＩ循环水式多用真空泵：河南
万方数据
善００３０镙７％
第
卷第期
食品研究与开发民明Ⅵ『乃－＝｜丌Ⅸ
科学研究
－＝＝２２
省巩义市英峪仪器厂：７０１一Ａ型干燥箱：大连实验设备厂；恒温水浴锅：北京医疗设备总厂；ＫＤＭ可调控温电热套：山东省光明仪器有限公司：等。１．３方法
１．３．１芦丁标准曲线制作
精确称取经１２０℃干燥至恒重的芦丁对照品１０ｍｇ，置于１０ｍＬ容量瓶中，加乙醇适量，使充分溶解，用乙醇稀释至刻度。摇匀。所得溶液含芦丁对照品１
ｒａｇ／ｍＥ。
精确移取芦丁对照品溶液０．０、０．１、０．２、０－３、Ｏ．４、０．５、０．６ｍＬ，分别置于１０ｍＬ容量瓶中，各加水至６ｍＬ，加５％亚硝酸钠溶液１．０ｍＬ，摇匀，放置６ｍｉｎ，加１０％硝酸铝溶液１．０ｍＬ，摇匀，放置６ｍｉｎ，加４％氢氧化钠溶液５．０ｍＬ，再加水定容至刻度，摇匀，放置１５
ｍｉｎ。
按分光光度法（中国药典２０００年版一部附录ＶＢ），在
５１０
ｌｌｍ波长处测定吸光度，以浓度（Ｃ）与吸光度（Ａ）进
行直线回归，绘制标准曲线，得到标准曲线方程为：Ａ＝
１０．４０６Ｃ一０．００６６（Ｒ＿２＝０．９９９４）。
１．３．２样品溶液的制备
精确称取干燥槐米粉末３０．００ｇ，包人滤纸包，置于索氏提取器中，加３００ｍＬ石油醚于圆底烧瓶中，回流提取２ｈ进行脱脂，至溶剂无色．取出滤纸包挥干溶剂。再将３００ｍＬ，８０％乙醇放人圆底烧瓶，对样品进行索氏提取至溶液几乎无色。过滤、浓缩后用蒸馏水作溶剂定容于１
０００
ｍＬ容量瓶中，待用。
总黄酮含量的测定：精密移取前面备用的水溶液
１
ｍＬ，按照标准曲线的测定方法测定吸光度后。在芦
丁标准曲线中查出浓度．计算即可得到样品的总黄酮含量。
１．３．３槐米总黄酮最佳提取条件的确定
通过单因素试验结果分析。选择水浴温度、乙醇浓度、提取时间、液固比四个因素，应用Ｄｅｓｉｇｎ—ＥｘｐｅｒｔＳｏｆｔｗａｒｅ７．０软件，设计３因素３水平（共１７个试验点５个中心点）的响应面试验，利用响应面试验结果，确定槐米中总黄酮的最佳提取条件。２结果与讨论２．１单因素试验
２．１．１乙醇体积分数对槐米总黄酮提取率的影响
准确称取２．０００ｇ槐米粉末４份，置于回流冷凝装置中．分别用不同体积分数的乙醇（３０％、４５％、６０％、７５％）回流提取。料液比为１：３０，水浴温度６０℃，回流提取２ｈ，趁热过滤，冷却后用相同浓度乙醇定容至
１００
ｍＬ，移取Ｏ．１ｍＬ按照１．３．１方法测定其吸光度Ａ，
万方数据
９８
７
冰
６
彝
５盛
４
璐ｃ
３
２ｌＯｌ
乙醇体积分数，％
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｅｔｈａｎｏｌ／％
图１乙醇体积分数对槐米总黄酮提取率的影响
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｏｎ
ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．１．２料液比对槐米总黄酮提取率的影响
准确称取２．０００ｇ槐米粉末５份，置于回流冷凝装置中，分别加入料液比为１：１０、ｌ：２０、１：３０、１：４０、１：５０的６０％乙醇，用回流冷凝装置在温度为６０℃水浴中浸提３ｈ，趁热过滤，冷却后用相同浓度乙醇定容至
１００
ｍＬ。移取０．１ｍＬ按照１．３．１方法测定其吸光度Ａ
值，得总黄酮提取率与料液比的关系（见图２）。
球
君ｌＬ罄掣
料液Ｉ七／（ｇ：ｍＬ）
Ｔｈｅｒａｔｉｏｎｏｆｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ／（ｇ：ｍＬ）
图２料液比对槐米总黄酮提取率的影响
Ｆｉｇ二Ｚ
Ｔｈｅｒａｔｅｓｏｆｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ
０１１
ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．１．３提取时间对槐米总黄酮提取率的影响
准确称取２．０００ｇ干燥并粉碎的槐米４份．置于回流冷凝装置中．分别加入料液比为１：３０的６０％乙醇
６０
ｍＬ，在温度为６０℃的水浴中分别浸提１、２、３、４
ｈ，
趁热过滤，冷却后用相同浓度乙醇定容至１００ｍＬ，移取
０．１
ｍＬ按照１．３．１方法测定其吸光度Ａ．得总黄酮提取
率与提取时间的关系（见图３）。
堡
瓣盛掣
提取时间，ＩＩ
Ｅｘｔｒａｔｉｏｎｔｉｍｅ／ｈ
图３提取时间对槐米总黄酮提取率的影响
Ｆｉｇ．３
Ｅｘｔｒａｃｔ／ｏｎｔｉｍｅＯｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｔｌａｖｏｎｏｉｄｓ
Ｆｉｇ．１
得总黄酮提取率与乙醇体积分数的关系（见图１）。
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食品研究与开发
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２．１．４提取温度对槐米总黄酮提取率的影响
准确称取２．０００ｇ干燥并粉碎的槐米４份．置于回流冷凝装置中，加入料液比为１：３０的６０％乙醇６０ｍＬ。分别在６０、７０、８０、９０℃的水浴中浸提３ｈ，趁热过滤，冷却后用相同浓度乙醇定容至１００ｍＬ。移取０．１ｍＬ按照１．３．１方法测定其吸光度Ａ值，得提取温度与总黄酮提取率的关系（见图４）。
术
彝
盛璀
温度／℃
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ／。Ｃ
图４提取温度对槐米总黄酮提取率的影响
ＦｉｇＡ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．２采用响应面分析法对槐米总黄酮提取工艺的优化２．２．１响应面分析因素水平的选取
根据Ｂｏｘ—Ｂｅｎｈｎｋｅｎ的中心组合试验设计原理．综合２．１单因素影响试验结果。选取乙醇浓度、提取时间、料液比对槐米总黄酮提取影响显著的３个因素，在单因素试验的基础上采用三因素三水平的响应面分析方法。试验因素与水平设计见表１。
表ｌ响应面试验因素与水平
Ｔａｂｌｅｌ
Ｆａｃｔｏｒｓｍａｄｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｏｆＲｅｓｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅ
Ａｎａｌｙｓｉｓ
试验因素
因素水平／Ｆａｃｔｏｒｌｅｖｅｌｓ
Ｆａｃｔｏｒｓ
一１
０
１
Ａ提取时Ｉ司／ｈＥｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ／ｈ
１
２３Ｂ乙醇浓度，％Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｅｔｈａｎｏｌ／％４５
６０７５Ｃ料液附（ｇ，ｍＬ）Ｔｈｅ
ｒａｔｉｏｏｆ
ｓｏｌｉｄ－ｆｌｕｉｄ／（ｇ／ｍＬ）
２０
３０
４０
２．２．２响应面分析试验设计方案
以提取时间Ａ、乙醇浓度Ｂ、料液比Ｃ为自变量，以槐米总黄酮提取率为响应值（’Ｙ），进行响应面分析试验。试验方案及试验结果见表２。
表２响应面分析方案夏试脸结果
Ｔａｂｌｅ２
Ｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｅｓｔｉｍａｔｅｄｖｍｕｅｓｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｖｅｌｓｏｆ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎ
万方数据
２３＝＝＝一
续表２响应面分析方案及试脸结果
Ｃｏｎｔｉｎｕｅ
ｔａｂｌｅ
２
Ｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｅｓｔｉｍａｔｅｄｖａｌｕｅｓｆｏｒｄｉ骶ｒｅｎｔｌｅｖｅｌｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎ
２．２．３多元二次响应面回归模型的建立与分析
对表２试验结果通过ＲＡＳ软件程序进行二次回归响应面分析．建立多元二次响应面回归模型：
Ｙ＝１７．５２—０．１１Ａ＋０．７７Ｂ－０．２７Ｃ＋０．０９５ＡＢ＋０．０２５ＡＣ—
Ｏ．１７ＢＣ一０．０８９Ａ２＋１．４０８２＋０．４１Ｃ２．各因素的方差分析见表３。
表３二次响应面回归模型方差分析Ｔａｂｌｅ３Ａｎａｌｙｚｅｏｆｍｅａｎｓｑｕａｒｅ
从表３可以看出，模型是显著的（Ｐ＜０．０００１），回归模型的决定系数为Ｂ（乙醇浓度）、Ｃ（料液比）、Ａ（提取时间）、ＢＣ（乙醇浓度与料液比的交互作用）、ＡＣ（提取时间与料液比的交互作用），它们的Ｐｒｏｂ＞Ｆ值分别为
０．００１７，０．１２１８，０．４８１９．０．４５０５，０．９１２
３对总黄酮提取
箬００３０镙７南
第卷第期
食品研究与开发民阴岍乃叫丌蹑
科学研究
－＝＝２４
率影响显著，说明该模型的拟合度好。
从表３中还可以看出，影响槐米总黄酮提取率的各因素按影响大小排序依次为Ｂ（乙醇浓度）、Ｃ（料液比）、Ａ（提取时间），其中乙醇浓度达到极著显著水平。
从表３的分析中得出．本试验中ＡＢ的交互作用和Ｂｃ的交互作用影响显著．试验结果见图５、图７．ＡＣ的交互作用见图６。随着Ｂ（乙醇浓度）的增加总黄酮提取率先增加后降低再增加，从响应面的图示可以看出，Ｂ在０到１．０的范围内，由Ａ的交互作用．总黄酮的提取率较高。
图５提取时间与乙醇浓度交互作用对槐米总黄酮提取率影响响应面
Ｆｉｇ．５
ＲｅｓｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅｏｆｉｎｔｅｒｒｅｌａｔｅｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｉｍｅ
柚ｄ∞Ⅱ嘲１咖ｎ。ｎ协山Ｖ。ｎｍｄｓｍｋ
图６提取时间与料液比交互作用对槐米总黄酮提取率影响响应面图
Ｆｉｇ．６胁ｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅｏｆｉｎｔｅｒｒｅｌａｔｅｄ
ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｉｍｅａｎｄｔｈｅ
ｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｉｄ－ｆｌｕｉｄｔｏ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｍｔｅ
围７乙醇浓度与料液比交互作用对槐米总黄酮提取率影响响应面
Ｆ＇ｉｇ．７
ＲｅｓｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅｏｆｉｎｔｅｒｒｅｌａｔｅｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅ
ｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｉｄ－ｆｌｕｉｄ
ｔｏｗａｔｅｒｔｏｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｒａｔｅ
万方数据
２．２．４模型的验证性试验
通过槐米总黄酮得率的二次多项数学模型解逆矩阵。得出在提取乙醇浓度为６３．１５％，提取时间为２．２１ｈ，水料比为１７．９：１和水浴温度８３．２℃的工艺条件下。槐米总黄酮最大提取得率预测值为
１８．４５６％。
为检验ＲＳＡ法的可靠性．采用上述最优提取条件进行槐米总黄酮提取试验。同时考虑到实际操作的便利，将槐米总黄酮提取最佳条件修正为室温下提取时间２．８ｈ，乙醇浓度为６０％，料液比１：１８，水浴温度为８０℃。实际测得的提取率为１８．１６％。与理论预测值相差不大，因此，采用ＲＳＡ法优化得到的提取条件准确可靠，具有实用价值。
３结论
响应面法克服了正交设计只能处理离散的水平值，而无法找出整个区域上因素的最佳组合和响应值的最优值的缺陷。响应面分析方法是研究几种因素间
交互作用的回归分析方法。用该方法研究槐米总黄酮提取工艺参数，求得的回归方程精度高；可以准确找到整个区域上因素的最佳组合和响应值的最优值，是比较理想的方法。该方法通过响应面图直观分析了各因素对槐米总黄酮提取率的影响．以及各因素之间对提取过程的交互影响。应用响应面设计法优化出最佳提取条件：乙醇浓度为６０％，提取时间为２．２ｈ．料液比１：１７．９，水浴温度８０．０ｏＣ，得到槐米中的总黄酮提取率为１８．４６％。参考文献：
…１
龚盛昭，何远伦．从槐米中提取芦丁的研究［Ｊ】．中国资源综合利用，２００３（１）：２２—２４
【２】张来新．槐花米中芦丁的提取【Ｊ】．山西化工，２００２，２２（１）：１６－１７
【３】李杜风，薰淑敏，李兴福，等．槐米保健香茶的研制叨．药膳食疗
研究．１９９９（２）：８
【４】黄海兰，李俊，徐波．槐米抗食用油脂氧化活性及其成分研究【Ｊ】．
食品科学。２００７，２８（８）：８６－８９
【５】王丽英，马玉青，于志彬，等．槐米的营养价值及其速溶饮料的研
究叨．食品科学，２００８，２４（６）：７０—７３
３３（１）：３７－３９
（１）：３６－３７
学报．２００１，２２（３）：９１—９４
收稿日期：２００８—０７一１７
【６】谭长征．发酵型槐米低糖酸奶工艺研究【Ｊ】湖南林业科技，２００６，
【７】孙蕾，隋道庆．槐米及其澄清汁饮料的研制［Ｊ］．经济林研究，１９９８
【ｓ】慕运动．响应面方法及其在食品工业中的应用Ⅲ．郑州工程学院
响应面分析法优化槐米总黄酮的提取工艺
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：引用次数：
闫克玉， 高远翔， YAN Ke-yu， GAO Yuan-xiang
郑州轻工业学院,食品与生物工程学院,河南,郑州,450002食品研究与开发
FOOD RESEARCH AND DEVELOPMENT2009，30(7)0次
参考文献(8条)
1.龚盛昭.何远伦 从槐米中提取芦丁的研究[期刊论文]-中国资源综合利用 2003(1)2.张来新 槐花米中芦丁的提取[期刊论文]-山西化工 2002(1)3.李杜风.薰淑敏.李兴福 槐米保健香茶的研制 1999(2)
4.黄海兰.李俊.徐波 槐米抗食用油脂氧化活性及其成分研究[期刊论文]-食品科学 2007(8)
5.王丽英.马玉青.于志彬.刘卫华.田益玲 槐米的营养价值及其速溶饮料的研究[期刊论文]-中国农学通报 2008(6)6.谭长征 发酵型槐米低糖酸奶工艺研究[期刊论文]-湖南林业科技 2006(1)7.孙蕾.隋道庆 槐米及其澄清汁饮料的研制 1998(1)
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相似文献(10条)
1.期刊论文 许云峰.张臻.周建芹.陈晶磊.王剑文.XU Yun-feng.ZHANG Zhen.ZHOU Jian-qin.CHEN Jinglei.WANGJian-wen 内生镰刀菌漆酶辅助提取槐米中总黄酮的研究 -中草药2008,39(11)
目的 研究内生真菌胞外漆酶在槐米总黄酮提取中的应用.方法 内生镰刀菌在起始pH 7.0的综合马铃薯培养基中,20℃下摇瓶培养6 d,具有较高的漆酶活力(36.1 U/mL).槐米干粉投入真菌发酵液中进行酶解处理,比较酶料比、酶解温度、酶解时间和酶解液pH值对槐米总黄酮提取率的影响.结果 槐米干粉以酶料比40:1加入粗酶液中,在pH 7.0、20℃下酶解处理1 h后,总黄酮提取率可达11.4%.比常规提取法提高了28.7%.结论 内生菌漆酶辅助提取法为槐米总黄酮提取的可行新方法.
2.期刊论文 张黎明.尹东剑.赵希.高文远.ZHANG Li-ming.YIN Dong-jian.ZHAO Xi.GAO Wen-yuan 超声辅助萃取条件对槐米总黄酮提取效果的影响 -天津科技大学学报2009,24(5)
以提取物得率和总黄酮含量为指标,研究了超声辅助萃取条件对槐米总黄酮提取效果的影响.结果表明,超声辅助萃取条件对于槐米总黄酮提取物的得率和总黄酮含量有明显的影响,相应提取物红外光谱的特征峰型、峰高和峰位置也存在一定的差异.通过对这些提取物定量-定性分析,得出超声辅助碱溶酸沉法萃取槐米总黄酮的最佳条件为:固定超声频率20kHz,固液比(g:mL)1:10,硼砂加入量为槐米质量的2%,提取液的pH为9,提取温度45℃,超声波功率100W,超声提取时间30 min.在此条件下,提取物的得率为18.8%,总黄酮含量为91.2%.
3.期刊论文 唐坤.龙绪欢.李标 微波-超声波提取槐米的工艺研究 -湘潭师范学院学报（自然科学版）2009,31(4)
为了优选槐米的最佳提取工艺,以槐米总黄酮的含量为检测指标,采用微波-超声波技术,通过正交试验确定最佳提取工艺条件.结果表明,槐米的最佳提取工艺为称取适量的细颗粒槐米,加入10倍量的70%乙醇,微波中火加热,水浴中超声30 min.该提取工艺为制备槐米的最佳工艺.
4.期刊论文 闫克玉.高远翔.YAN Ke-yu.GAO Yuan-xiang 大孔吸附树脂法纯化槐米总黄酮的研究 -现代食品科技2009,25(6)
对大孔吸附树脂纯化槐米总黄酮的工艺进行了研究.方法是采用优选树脂纯化槐米总黄酮,以分光光度法测定槐米总黄酮含量.结果表明AB-8树脂吸附与纯化槐米总黄酮的效果较好,其工艺参数为:原液上样质量浓度为2.802mg/mL,最大吸附量为30.8mg/g,吸附速度为1 BV/h,上样2次,吸附时间为1 h,洗脱剂为45%乙醇,用量为3BV,洗脱速度为4BV/h,且树脂可重复使用3次.
5.学位论文 王琴 槐米和甘草中有效成份的提取分离和结构鉴定 2007
本文主要对槐米和甘草中有效成分一芦丁和甘草酸的提取工艺、分离工艺进行了研究。
本文用醇提法和超声波辅助提取法提取槐米中的总黄酮，正交实验得出了超声波提取法提取槐米中总黄酮的最佳工艺条件，并探讨了各实验条件对得率和含量的影响。在最佳工艺条件下，总黄酮平均得率为22.28％，含量为92.09％。与醇提法相比，黄酮得率、纯度明显提高，由此可见超声波提取法优于醇提法。分光光度法测定总黄酮的浓度，HPLC测定芦丁和槲皮素的纯度。聚酰胺具有很好的吸附和解析能力，聚酰胺分离纯化后的芦丁和槲皮素纯度分别为96.64％和96.28％。用红外、质谱、核磁共振对所得芦丁和槲皮素进行结构鉴定， X-射线单晶衍射测定芦丁单晶结构。本文还以芦丁、槲皮素为配体，合成配合物芦丁-Cu(Ⅱ)、芦丁-Zn(Ⅱ)、槲皮素-Cu(Ⅱ)、槲皮素-Mn(Ⅱ)的金属配合物，并用FT-IR对其进行结构表征。
用超声波提取甘草中甘草酸时，研究了在超声条件下影响提取率的几个因素：溶剂、溶剂浓度、超声功率、超声时间、甘草粗粉的粒度等几个方面，正交实验确定了最佳工艺。用紫外一可见分光光度分析法检测提取物中甘草酸的浓度。
6.期刊论文 喻樊.YU Fan 槐米中总黄酮的含量测定 -海峡药学2008,20(7)
目的 建立槐米中总黄酮的含量测定方法.方法 采用紫外分光光度法,通过紫外扫描确定最大吸收波长,以芦丁为对照品制定标准曲线,并进行样品溶液稳定性试验和重现性试验与精密度试验.结果 最大吸收波长为510nm,在0.0128～0.0640mg·mL-1范围内,具有良好的线性关系.回归方程为A=23.227c+0.0087 ,R=0.9998.结论 该方法简单方便、准确可靠,可以用来测定槐米中总黄酮的含量.
7.学位论文 凌伫怡 微波辅助萃取金银花、野菊花和槐米中有效成分的研究 2007
本文对微波辅助萃取金银花、野菊花和槐米中的有效成份进行了研究。采用HPLC法对金银花和野菊花中的绿原酸进行含量测定，采用紫外分光光度法对槐米中的总黄酮(以芦丁计)进行含量测定。文章以乙醇为萃取溶剂，分别考察了萃取溶剂浓度、提取时间、微波功率、溶剂用量、浸泡时间、药材
粉碎度6个因素对微波辅助萃取的影响规律，确定5因素5水平的微波辅助萃取均匀设计实验，得到三种药材的微波辅助萃取优化参数。在小试实验的基础上进行中试放大研究，中试结果与小试结果相近，表明微波辅助萃取金银花、野菊花和槐米具有产业化应用前景。
8.会议论文 张黎明.赵希.高文远 红外光谱技术在槐米总黄酮提取过程中的应用 2007
本研究以芦丁标准品作对照,应用分光光度法和红外光谱法(FT-IR)对碱提酸沉法、乙醇回流法和超声波辅助法3种不同提取方法制备的槐米总黄酮提取物进行了分析。结果表明,利用碱提酸沉法提取,碱提取液pH值9及硼砂作稳定剂时,所得提取物的得率和总黄酮含量均较高,分别为19.44％和82.53％。由于提取方法和条件的不同,对应提取物红外光谱的特征峰型、峰高和峰位置存在一定的差异,通过分析提取物红外图谱特征,并与芦丁标准品比较,为采用定量分析方法结合红外光谱技术控制槐米总黄酮提取物的质量提供了参考依据。
9.期刊论文 许云峰.周建芹.陈晶磊.王剑文.XU Yun-feng.ZHOU Jian-qin.CHEN Jing-lei.WANG Jian-wen 内生青霉菌纤维素酶辅助提取槐米总黄酮 -生物加工过程2009,7(2)
研究内生青霉菌(Penicillium sp.B-4)胞外纤维素酶在槐米总黄酮提取中的辅助应用.内生青霉菌在起始pH 4.5的综合马铃薯培养基中,150
r/min,40 ℃下摇瓶,培养7 d,具有较高的纤维素酶比活力(3.57 U/mL).槐米干粉投入青霉菌发酵液中进行酶解处理,比较酶料比、酶解温度、酶解时间和酶解液pH对槐米总黄酮提取率的影响,发现槐米干粉以酶料比40∶1(mL/g)加入粗酶液中,在pH 4.5、温度40 ℃下酶解处理1 h后,黄酮提取率可达12.2%,比常规提取率增加了38.7%.内生菌纤维素酶辅助提取法为槐米黄酮提取的可行新方法.
10.学位论文 郝博 解毒救脑注射剂的制剂工艺研究 2004
中风又称卒中,是以突然昏仆、半身不遂、口舌歪斜、言语蹇涩或不语、偏身麻木为主要临床表现的一种独立的疾病.相当于西医的急性脑血管病,主要包括缺血性中风和出血性中风两大类型.在临床上一般按中风病发展进程的不同分为急性期、恢复期和后遗症期中风病严重影响人类健康,在许多国家的中风病死率居人口死亡率之首.而对中风病急性期的治疗又在整个治疗过程中起着至关重要的作用.该课题主要对用于中风病急性期的中药新药解毒救脑注射剂的制剂工艺进行了研究与开发.1栀子提取纯化工艺的研究:应用正交试验设计,单因素试验设计等方法,以栀子苷为指标成分,考察并确立了栀子药材水煎煮提取,醇沉除杂,吸附剂纯化的工艺条件.2葛根提取纯化工艺的研究:应用正交试验设计,单因素试验设计等方法,以葛根素为指标成分,考察并确立了葛根药材乙醇回流提取,水饱和正丁醇萃取的工艺条件.3槐米提取纯化工艺的研究:应用正交试验设计,以芦丁和总黄酮为指标成分,考察并确立了槐米药材乙醇回流提取的工艺条件及纯化的工艺条件.4郁金挥发油提取工艺的研究:以挥发油的提取量为指标考察并确立了郁金挥发油的提取工艺.5石菖蒲挥发油提取工艺的研究:以挥发油的提取量为指标考察并确立了石菖蒲挥发油的提取工艺.6解毒救脑注射剂的制剂工艺研究:以栀子苷、葛根素的含量及溶液的澄明度为指标考察了注射剂的pH值,非水溶媒的用量及活性炭的用量,确立了注射剂的制剂成型工艺.
本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_spyjykf200907007.aspx
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科学研究
食品研究与开发
２００９年７月第３０卷第７期
２』＝，
响应面分析法优化槐米总黄酮的提取工艺
闫克玉，高远翔
（郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州４５０００２）
摘要：通过对槐米总黄酮提取，考察体积分数、提取时间、提取温度、料液比四因素对槐米总黄酮提取率的影响。用ＲＡＳ软件程序对试验数据进行二次响应面分析，对３项工艺参数进行优化，得出槐米总黄酮提取的二次回归方程；通过分析得出槐米总黄酮提取的最佳条件为：６０％乙醇（体积分数），提取２．２ｈ，料液比（ｇ：ｍＬ）ｌ：１７．９，温度８０．０℃。在此条件下测得的总黄酮提取率为１８．４６％。关键词：槐米；总黄酮；提取；响应面分析法
０ＰＩ’ＩＭＩＺＡＴＩＯＮＯＦ’Ｉ’ＨＥＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＯＦＴＯＴＡＬＦＬＡＶＯＮＥＦＲＯＭＳＯ，ＷＯＲＡＪＡＰＯＮＩＣＡ厶
ＵＳＩＮＧＲＥＳＰＯＮＳＥＳＵＲＦＡＣＥＡＮＡＩＪＳＩＳ
ＹＡＮＫｅ—ｙｕ，ＧＡＯＹｕａｎ－ｘｉａｎｇ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｏｄａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ
４５０００２，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖｏｌｕｍｅ，ｔｉｍｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆ
ｗｅｒｅ
ｓｏｌｉｄ－ｆｌｕｉｄ值：ｍＬ），ｏｎｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅ
ｓｔｕｄｉｅｄａｎｄｔｈｅｐａｒａｍｅｔｅｒｓｆｏｒｏｐｔｉｍｕｍｙｉｅｌｄ
ｗｅｒｅ
ｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｕｓｉｎｇＲＡＳｓｏｆｔｗａｖｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｐａｒａｍｅｔｅｒｓｗａｓ：６０ｐｅｒｃｅｎｔｅｔｈａｎｏｌｖｏｌｕｍｅ，２．２ｓｉｔｕａｔｉｏｎ．ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｙｉｅｌｄｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｉｓ１８．４６％．Ｋｅｙ
ｈ，１：１７．９（ｇ：ｍＥ），ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ８０．０℃．Ｉｎ
ｔｈｉｓ
ｗｏｒｄｓ：ＳｏｐｈｏｒａｊａｐｏｎｉｃａＬ．；ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅａｎａｌｙｓｉｓ
槐米为豆科植物槐树（Ｓｏｐｈｏｒａｊａｐｏｎｉｃａ￡．）的干燥花蕾及花，槐米。又名槐花米，夏季花蕾形成时或花开放初采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质。前者习称”槐米”，后者习称“槐花”。槐米用作药用已有２０００多年历史，《神农本草经》还将其列为上品。槐米中含有芦丁、槲皮素、皂苷、多糖等成分，其中。芦丁是主要药用成分，具有凉血止血、清肝泻火功能。因此对其研究有非常现实的意义。目前，我国芦丁生产主要以槐米（槐米中的芦丁随产地及收取时间的不同其含量在１０％．
米低糖酸奶工艺研究１６］。专家预测槐米饮品及其系列保健产品，很快会风靡世界同。
本文就提取中影响槐米总黄酮提取率的几个重要因素作了系统研究，并运用响应面分析（ｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｓｕｒｆａｃｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ，ＲＳＡ）法【８】对槐米总黄酮的提取条件
进行了优化。用Ｂｏｘ—Ｂｅｎｈｎｋｅｎ的中心组合实验设计。对试验数据进行ＲＳＡ法分析。对拟合数学模型进行了较为详细的描述，得到了槐米总黄酮提取的最佳条件。１材料与方法１．１材料
槐米样品：购于河南省医药药材有限公司．６０℃干燥，粉碎过４０目筛备用；芦丁：生化试剂，上海药品检验所；亚硝酸钠与硝酸铝等均为分析纯。１．２仪器
ＢＳ
２８％之间）为原料进行提取㈣。槐米是一种营养保健
佳品，可药用也可食用。李杜风利用槐米研究了一种保健香茶闭。槐米其抗氧化成分对食用油脂具有较强的抗氧化作用。可作为一种具有保健功能的新型食用油脂和含脂食品添加剂使用，具有广泛的应用前景［４１。此外，槐米还可以在食品中配置饮料。根据槐米的营养价值，以槐米为原料，配合其他辅料研究了一种槐米速溶饮料的工艺［５１。还有谭长征利用槐米研究发酵型槐
基金项目：河南省烟草专卖局科技攻关资助项目【豫烟科（２００６）７号】作者简介：曰克玉（１９５０一），男（汉），教授，学士，硕士研究生导师，主要从事烟草原料学、烟草化学、卷烟工艺学的教学和科研工作。
２００Ｓ电子天平：北京赛多利斯天平有限公司，
感量０．００１ｇ；ＳＰ－２１００型可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司；ＦＳＪ一１１４型植物样本粉碎机：农牧渔业部扶沟科学仪器厂；ＳＨＢ—ＩＩＩ循环水式多用真空泵：河南
万方数据
善００３０镙７％
第
卷第期
食品研究与开发民明Ⅵ『乃－＝｜丌Ⅸ
科学研究
－＝＝２２
省巩义市英峪仪器厂：７０１一Ａ型干燥箱：大连实验设备厂；恒温水浴锅：北京医疗设备总厂；ＫＤＭ可调控温电热套：山东省光明仪器有限公司：等。１．３方法
１．３．１芦丁标准曲线制作
精确称取经１２０℃干燥至恒重的芦丁对照品１０ｍｇ，置于１０ｍＬ容量瓶中，加乙醇适量，使充分溶解，用乙醇稀释至刻度。摇匀。所得溶液含芦丁对照品１
ｒａｇ／ｍＥ。
精确移取芦丁对照品溶液０．０、０．１、０．２、０－３、Ｏ．４、０．５、０．６ｍＬ，分别置于１０ｍＬ容量瓶中，各加水至６ｍＬ，加５％亚硝酸钠溶液１．０ｍＬ，摇匀，放置６ｍｉｎ，加１０％硝酸铝溶液１．０ｍＬ，摇匀，放置６ｍｉｎ，加４％氢氧化钠溶液５．０ｍＬ，再加水定容至刻度，摇匀，放置１５
ｍｉｎ。
按分光光度法（中国药典２０００年版一部附录ＶＢ），在
５１０
ｌｌｍ波长处测定吸光度，以浓度（Ｃ）与吸光度（Ａ）进
行直线回归，绘制标准曲线，得到标准曲线方程为：Ａ＝
１０．４０６Ｃ一０．００６６（Ｒ＿２＝０．９９９４）。
１．３．２样品溶液的制备
精确称取干燥槐米粉末３０．００ｇ，包人滤纸包，置于索氏提取器中，加３００ｍＬ石油醚于圆底烧瓶中，回流提取２ｈ进行脱脂，至溶剂无色．取出滤纸包挥干溶剂。再将３００ｍＬ，８０％乙醇放人圆底烧瓶，对样品进行索氏提取至溶液几乎无色。过滤、浓缩后用蒸馏水作溶剂定容于１
０００
ｍＬ容量瓶中，待用。
总黄酮含量的测定：精密移取前面备用的水溶液
１
ｍＬ，按照标准曲线的测定方法测定吸光度后。在芦
丁标准曲线中查出浓度．计算即可得到样品的总黄酮含量。
１．３．３槐米总黄酮最佳提取条件的确定
通过单因素试验结果分析。选择水浴温度、乙醇浓度、提取时间、液固比四个因素，应用Ｄｅｓｉｇｎ—ＥｘｐｅｒｔＳｏｆｔｗａｒｅ７．０软件，设计３因素３水平（共１７个试验点５个中心点）的响应面试验，利用响应面试验结果，确定槐米中总黄酮的最佳提取条件。２结果与讨论２．１单因素试验
２．１．１乙醇体积分数对槐米总黄酮提取率的影响
准确称取２．０００ｇ槐米粉末４份，置于回流冷凝装置中．分别用不同体积分数的乙醇（３０％、４５％、６０％、７５％）回流提取。料液比为１：３０，水浴温度６０℃，回流提取２ｈ，趁热过滤，冷却后用相同浓度乙醇定容至
１００
ｍＬ，移取Ｏ．１ｍＬ按照１．３．１方法测定其吸光度Ａ，
万方数据
９８
７
冰
６
彝
５盛
４
璐ｃ
３
２ｌＯｌ
乙醇体积分数，％
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｅｔｈａｎｏｌ／％
图１乙醇体积分数对槐米总黄酮提取率的影响
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｏｎ
ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．１．２料液比对槐米总黄酮提取率的影响
准确称取２．０００ｇ槐米粉末５份，置于回流冷凝装置中，分别加入料液比为１：１０、ｌ：２０、１：３０、１：４０、１：５０的６０％乙醇，用回流冷凝装置在温度为６０℃水浴中浸提３ｈ，趁热过滤，冷却后用相同浓度乙醇定容至
１００
ｍＬ。移取０．１ｍＬ按照１．３．１方法测定其吸光度Ａ
值，得总黄酮提取率与料液比的关系（见图２）。
球
君ｌＬ罄掣
料液Ｉ七／（ｇ：ｍＬ）
Ｔｈｅｒａｔｉｏｎｏｆｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ／（ｇ：ｍＬ）
图２料液比对槐米总黄酮提取率的影响
Ｆｉｇ二Ｚ
Ｔｈｅｒａｔｅｓｏｆｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ
０１１
ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．１．３提取时间对槐米总黄酮提取率的影响
准确称取２．０００ｇ干燥并粉碎的槐米４份．置于回流冷凝装置中．分别加入料液比为１：３０的６０％乙醇
６０
ｍＬ，在温度为６０℃的水浴中分别浸提１、２、３、４
ｈ，
趁热过滤，冷却后用相同浓度乙醇定容至１００ｍＬ，移取
０．１
ｍＬ按照１．３．１方法测定其吸光度Ａ．得总黄酮提取
率与提取时间的关系（见图３）。
堡
瓣盛掣
提取时间，ＩＩ
Ｅｘｔｒａｔｉｏｎｔｉｍｅ／ｈ
图３提取时间对槐米总黄酮提取率的影响
Ｆｉｇ．３
Ｅｘｔｒａｃｔ／ｏｎｔｉｍｅＯｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｔｌａｖｏｎｏｉｄｓ
Ｆｉｇ．１
得总黄酮提取率与乙醇体积分数的关系（见图１）。
科学研究
食品研究与开发
２００９年７月第３０卷第７期
２．１．４提取温度对槐米总黄酮提取率的影响
准确称取２．０００ｇ干燥并粉碎的槐米４份．置于回流冷凝装置中，加入料液比为１：３０的６０％乙醇６０ｍＬ。分别在６０、７０、８０、９０℃的水浴中浸提３ｈ，趁热过滤，冷却后用相同浓度乙醇定容至１００ｍＬ。移取０．１ｍＬ按照１．３．１方法测定其吸光度Ａ值，得提取温度与总黄酮提取率的关系（见图４）。
术
彝
盛璀
温度／℃
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ／。Ｃ
图４提取温度对槐米总黄酮提取率的影响
ＦｉｇＡ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．２采用响应面分析法对槐米总黄酮提取工艺的优化２．２．１响应面分析因素水平的选取
根据Ｂｏｘ—Ｂｅｎｈｎｋｅｎ的中心组合试验设计原理．综合２．１单因素影响试验结果。选取乙醇浓度、提取时间、料液比对槐米总黄酮提取影响显著的３个因素，在单因素试验的基础上采用三因素三水平的响应面分析方法。试验因素与水平设计见表１。
表ｌ响应面试验因素与水平
Ｔａｂｌｅｌ
Ｆａｃｔｏｒｓｍａｄｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｏｆＲｅｓｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅ
Ａｎａｌｙｓｉｓ
试验因素
因素水平／Ｆａｃｔｏｒｌｅｖｅｌｓ
Ｆａｃｔｏｒｓ
一１
０
１
Ａ提取时Ｉ司／ｈＥｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ／ｈ
１
２３Ｂ乙醇浓度，％Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｅｔｈａｎｏｌ／％４５
６０７５Ｃ料液附（ｇ，ｍＬ）Ｔｈｅ
ｒａｔｉｏｏｆ
ｓｏｌｉｄ－ｆｌｕｉｄ／（ｇ／ｍＬ）
２０
３０
４０
２．２．２响应面分析试验设计方案
以提取时间Ａ、乙醇浓度Ｂ、料液比Ｃ为自变量，以槐米总黄酮提取率为响应值（’Ｙ），进行响应面分析试验。试验方案及试验结果见表２。
表２响应面分析方案夏试脸结果
Ｔａｂｌｅ２
Ｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｅｓｔｉｍａｔｅｄｖｍｕｅｓｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｖｅｌｓｏｆ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎ
万方数据
２３＝＝＝一
续表２响应面分析方案及试脸结果
Ｃｏｎｔｉｎｕｅ
ｔａｂｌｅ
２
Ｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｅｓｔｉｍａｔｅｄｖａｌｕｅｓｆｏｒｄｉ骶ｒｅｎｔｌｅｖｅｌｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎ
２．２．３多元二次响应面回归模型的建立与分析
对表２试验结果通过ＲＡＳ软件程序进行二次回归响应面分析．建立多元二次响应面回归模型：
Ｙ＝１７．５２—０．１１Ａ＋０．７７Ｂ－０．２７Ｃ＋０．０９５ＡＢ＋０．０２５ＡＣ—
Ｏ．１７ＢＣ一０．０８９Ａ２＋１．４０８２＋０．４１Ｃ２．各因素的方差分析见表３。
表３二次响应面回归模型方差分析Ｔａｂｌｅ３Ａｎａｌｙｚｅｏｆｍｅａｎｓｑｕａｒｅ
从表３可以看出，模型是显著的（Ｐ＜０．０００１），回归模型的决定系数为Ｂ（乙醇浓度）、Ｃ（料液比）、Ａ（提取时间）、ＢＣ（乙醇浓度与料液比的交互作用）、ＡＣ（提取时间与料液比的交互作用），它们的Ｐｒｏｂ＞Ｆ值分别为
０．００１７，０．１２１８，０．４８１９．０．４５０５，０．９１２
３对总黄酮提取
箬００３０镙７南
第卷第期
食品研究与开发民阴岍乃叫丌蹑
科学研究
－＝＝２４
率影响显著，说明该模型的拟合度好。
从表３中还可以看出，影响槐米总黄酮提取率的各因素按影响大小排序依次为Ｂ（乙醇浓度）、Ｃ（料液比）、Ａ（提取时间），其中乙醇浓度达到极著显著水平。
从表３的分析中得出．本试验中ＡＢ的交互作用和Ｂｃ的交互作用影响显著．试验结果见图５、图７．ＡＣ的交互作用见图６。随着Ｂ（乙醇浓度）的增加总黄酮提取率先增加后降低再增加，从响应面的图示可以看出，Ｂ在０到１．０的范围内，由Ａ的交互作用．总黄酮的提取率较高。
图５提取时间与乙醇浓度交互作用对槐米总黄酮提取率影响响应面
Ｆｉｇ．５
ＲｅｓｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅｏｆｉｎｔｅｒｒｅｌａｔｅｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｉｍｅ
柚ｄ∞Ⅱ嘲１咖ｎ。ｎ协山Ｖ。ｎｍｄｓｍｋ
图６提取时间与料液比交互作用对槐米总黄酮提取率影响响应面图
Ｆｉｇ．６胁ｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅｏｆｉｎｔｅｒｒｅｌａｔｅｄ
ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｉｍｅａｎｄｔｈｅ
ｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｉｄ－ｆｌｕｉｄｔｏ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｍｔｅ
围７乙醇浓度与料液比交互作用对槐米总黄酮提取率影响响应面
Ｆ＇ｉｇ．７
ＲｅｓｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅｏｆｉｎｔｅｒｒｅｌａｔｅｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅ
ｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｉｄ－ｆｌｕｉｄ
ｔｏｗａｔｅｒｔｏｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｒａｔｅ
万方数据
２．２．４模型的验证性试验
通过槐米总黄酮得率的二次多项数学模型解逆矩阵。得出在提取乙醇浓度为６３．１５％，提取时间为２．２１ｈ，水料比为１７．９：１和水浴温度８３．２℃的工艺条件下。槐米总黄酮最大提取得率预测值为
１８．４５６％。
为检验ＲＳＡ法的可靠性．采用上述最优提取条件进行槐米总黄酮提取试验。同时考虑到实际操作的便利，将槐米总黄酮提取最佳条件修正为室温下提取时间２．８ｈ，乙醇浓度为６０％，料液比１：１８，水浴温度为８０℃。实际测得的提取率为１８．１６％。与理论预测值相差不大，因此，采用ＲＳＡ法优化得到的提取条件准确可靠，具有实用价值。
３结论
响应面法克服了正交设计只能处理离散的水平值，而无法找出整个区域上因素的最佳组合和响应值的最优值的缺陷。响应面分析方法是研究几种因素间
交互作用的回归分析方法。用该方法研究槐米总黄酮提取工艺参数，求得的回归方程精度高；可以准确找到整个区域上因素的最佳组合和响应值的最优值，是比较理想的方法。该方法通过响应面图直观分析了各因素对槐米总黄酮提取率的影响．以及各因素之间对提取过程的交互影响。应用响应面设计法优化出最佳提取条件：乙醇浓度为６０％，提取时间为２．２ｈ．料液比１：１７．９，水浴温度８０．０ｏＣ，得到槐米中的总黄酮提取率为１８．４６％。参考文献：
…１
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研究．１９９９（２）：８
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究叨．食品科学，２００８，２４（６）：７０—７３
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（１）：３６－３７
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【６】谭长征．发酵型槐米低糖酸奶工艺研究【Ｊ】湖南林业科技，２００６，
【７】孙蕾，隋道庆．槐米及其澄清汁饮料的研制［Ｊ］．经济林研究，１９９８
【ｓ】慕运动．响应面方法及其在食品工业中的应用Ⅲ．郑州工程学院
响应面分析法优化槐米总黄酮的提取工艺
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：引用次数：
闫克玉， 高远翔， YAN Ke-yu， GAO Yuan-xiang
郑州轻工业学院,食品与生物工程学院,河南,郑州,450002食品研究与开发
FOOD RESEARCH AND DEVELOPMENT2009，30(7)0次
参考文献(8条)
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相似文献(10条)
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目的 研究内生真菌胞外漆酶在槐米总黄酮提取中的应用.方法 内生镰刀菌在起始pH 7.0的综合马铃薯培养基中,20℃下摇瓶培养6 d,具有较高的漆酶活力(36.1 U/mL).槐米干粉投入真菌发酵液中进行酶解处理,比较酶料比、酶解温度、酶解时间和酶解液pH值对槐米总黄酮提取率的影响.结果 槐米干粉以酶料比40:1加入粗酶液中,在pH 7.0、20℃下酶解处理1 h后,总黄酮提取率可达11.4%.比常规提取法提高了28.7%.结论 内生菌漆酶辅助提取法为槐米总黄酮提取的可行新方法.
2.期刊论文 张黎明.尹东剑.赵希.高文远.ZHANG Li-ming.YIN Dong-jian.ZHAO Xi.GAO Wen-yuan 超声辅助萃取条件对槐米总黄酮提取效果的影响 -天津科技大学学报2009,24(5)
以提取物得率和总黄酮含量为指标,研究了超声辅助萃取条件对槐米总黄酮提取效果的影响.结果表明,超声辅助萃取条件对于槐米总黄酮提取物的得率和总黄酮含量有明显的影响,相应提取物红外光谱的特征峰型、峰高和峰位置也存在一定的差异.通过对这些提取物定量-定性分析,得出超声辅助碱溶酸沉法萃取槐米总黄酮的最佳条件为:固定超声频率20kHz,固液比(g:mL)1:10,硼砂加入量为槐米质量的2%,提取液的pH为9,提取温度45℃,超声波功率100W,超声提取时间30 min.在此条件下,提取物的得率为18.8%,总黄酮含量为91.2%.
3.期刊论文 唐坤.龙绪欢.李标 微波-超声波提取槐米的工艺研究 -湘潭师范学院学报（自然科学版）2009,31(4)
为了优选槐米的最佳提取工艺,以槐米总黄酮的含量为检测指标,采用微波-超声波技术,通过正交试验确定最佳提取工艺条件.结果表明,槐米的最佳提取工艺为称取适量的细颗粒槐米,加入10倍量的70%乙醇,微波中火加热,水浴中超声30 min.该提取工艺为制备槐米的最佳工艺.
4.期刊论文 闫克玉.高远翔.YAN Ke-yu.GAO Yuan-xiang 大孔吸附树脂法纯化槐米总黄酮的研究 -现代食品科技2009,25(6)
对大孔吸附树脂纯化槐米总黄酮的工艺进行了研究.方法是采用优选树脂纯化槐米总黄酮,以分光光度法测定槐米总黄酮含量.结果表明AB-8树脂吸附与纯化槐米总黄酮的效果较好,其工艺参数为:原液上样质量浓度为2.802mg/mL,最大吸附量为30.8mg/g,吸附速度为1 BV/h,上样2次,吸附时间为1 h,洗脱剂为45%乙醇,用量为3BV,洗脱速度为4BV/h,且树脂可重复使用3次.
5.学位论文 王琴 槐米和甘草中有效成份的提取分离和结构鉴定 2007
本文主要对槐米和甘草中有效成分一芦丁和甘草酸的提取工艺、分离工艺进行了研究。
本文用醇提法和超声波辅助提取法提取槐米中的总黄酮，正交实验得出了超声波提取法提取槐米中总黄酮的最佳工艺条件，并探讨了各实验条件对得率和含量的影响。在最佳工艺条件下，总黄酮平均得率为22.28％，含量为92.09％。与醇提法相比，黄酮得率、纯度明显提高，由此可见超声波提取法优于醇提法。分光光度法测定总黄酮的浓度，HPLC测定芦丁和槲皮素的纯度。聚酰胺具有很好的吸附和解析能力，聚酰胺分离纯化后的芦丁和槲皮素纯度分别为96.64％和96.28％。用红外、质谱、核磁共振对所得芦丁和槲皮素进行结构鉴定， X-射线单晶衍射测定芦丁单晶结构。本文还以芦丁、槲皮素为配体，合成配合物芦丁-Cu(Ⅱ)、芦丁-Zn(Ⅱ)、槲皮素-Cu(Ⅱ)、槲皮素-Mn(Ⅱ)的金属配合物，并用FT-IR对其进行结构表征。
用超声波提取甘草中甘草酸时，研究了在超声条件下影响提取率的几个因素：溶剂、溶剂浓度、超声功率、超声时间、甘草粗粉的粒度等几个方面，正交实验确定了最佳工艺。用紫外一可见分光光度分析法检测提取物中甘草酸的浓度。
6.期刊论文 喻樊.YU Fan 槐米中总黄酮的含量测定 -海峡药学2008,20(7)
目的 建立槐米中总黄酮的含量测定方法.方法 采用紫外分光光度法,通过紫外扫描确定最大吸收波长,以芦丁为对照品制定标准曲线,并进行样品溶液稳定性试验和重现性试验与精密度试验.结果 最大吸收波长为510nm,在0.0128～0.0640mg·mL-1范围内,具有良好的线性关系.回归方程为A=23.227c+0.0087 ,R=0.9998.结论 该方法简单方便、准确可靠,可以用来测定槐米中总黄酮的含量.
7.学位论文 凌伫怡 微波辅助萃取金银花、野菊花和槐米中有效成分的研究 2007
本文对微波辅助萃取金银花、野菊花和槐米中的有效成份进行了研究。采用HPLC法对金银花和野菊花中的绿原酸进行含量测定，采用紫外分光光度法对槐米中的总黄酮(以芦丁计)进行含量测定。文章以乙醇为萃取溶剂，分别考察了萃取溶剂浓度、提取时间、微波功率、溶剂用量、浸泡时间、药材
粉碎度6个因素对微波辅助萃取的影响规律，确定5因素5水平的微波辅助萃取均匀设计实验，得到三种药材的微波辅助萃取优化参数。在小试实验的基础上进行中试放大研究，中试结果与小试结果相近，表明微波辅助萃取金银花、野菊花和槐米具有产业化应用前景。
8.会议论文 张黎明.赵希.高文远 红外光谱技术在槐米总黄酮提取过程中的应用 2007
本研究以芦丁标准品作对照,应用分光光度法和红外光谱法(FT-IR)对碱提酸沉法、乙醇回流法和超声波辅助法3种不同提取方法制备的槐米总黄酮提取物进行了分析。结果表明,利用碱提酸沉法提取,碱提取液pH值9及硼砂作稳定剂时,所得提取物的得率和总黄酮含量均较高,分别为19.44％和82.53％。由于提取方法和条件的不同,对应提取物红外光谱的特征峰型、峰高和峰位置存在一定的差异,通过分析提取物红外图谱特征,并与芦丁标准品比较,为采用定量分析方法结合红外光谱技术控制槐米总黄酮提取物的质量提供了参考依据。
9.期刊论文 许云峰.周建芹.陈晶磊.王剑文.XU Yun-feng.ZHOU Jian-qin.CHEN Jing-lei.WANG Jian-wen 内生青霉菌纤维素酶辅助提取槐米总黄酮 -生物加工过程2009,7(2)
研究内生青霉菌(Penicillium sp.B-4)胞外纤维素酶在槐米总黄酮提取中的辅助应用.内生青霉菌在起始pH 4.5的综合马铃薯培养基中,150
r/min,40 ℃下摇瓶,培养7 d,具有较高的纤维素酶比活力(3.57 U/mL).槐米干粉投入青霉菌发酵液中进行酶解处理,比较酶料比、酶解温度、酶解时间和酶解液pH对槐米总黄酮提取率的影响,发现槐米干粉以酶料比40∶1(mL/g)加入粗酶液中,在pH 4.5、温度40 ℃下酶解处理1 h后,黄酮提取率可达12.2%,比常规提取率增加了38.7%.内生菌纤维素酶辅助提取法为槐米黄酮提取的可行新方法.
10.学位论文 郝博 解毒救脑注射剂的制剂工艺研究 2004
中风又称卒中,是以突然昏仆、半身不遂、口舌歪斜、言语蹇涩或不语、偏身麻木为主要临床表现的一种独立的疾病.相当于西医的急性脑血管病,主要包括缺血性中风和出血性中风两大类型.在临床上一般按中风病发展进程的不同分为急性期、恢复期和后遗症期中风病严重影响人类健康,在许多国家的中风病死率居人口死亡率之首.而对中风病急性期的治疗又在整个治疗过程中起着至关重要的作用.该课题主要对用于中风病急性期的中药新药解毒救脑注射剂的制剂工艺进行了研究与开发.1栀子提取纯化工艺的研究:应用正交试验设计,单因素试验设计等方法,以栀子苷为指标成分,考察并确立了栀子药材水煎煮提取,醇沉除杂,吸附剂纯化的工艺条件.2葛根提取纯化工艺的研究:应用正交试验设计,单因素试验设计等方法,以葛根素为指标成分,考察并确立了葛根药材乙醇回流提取,水饱和正丁醇萃取的工艺条件.3槐米提取纯化工艺的研究:应用正交试验设计,以芦丁和总黄酮为指标成分,考察并确立了槐米药材乙醇回流提取的工艺条件及纯化的工艺条件.4郁金挥发油提取工艺的研究:以挥发油的提取量为指标考察并确立了郁金挥发油的提取工艺.5石菖蒲挥发油提取工艺的研究:以挥发油的提取量为指标考察并确立了石菖蒲挥发油的提取工艺.6解毒救脑注射剂的制剂工艺研究:以栀子苷、葛根素的含量及溶液的澄明度为指标考察了注射剂的pH值,非水溶媒的用量及活性炭的用量,确立了注射剂的制剂成型工艺.
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下载时间：2010年5月21日