专题2课题1
《微生物的实验室培养》学案
【课程标准】
具体内容标准：进行微生物的分离和培养
活动建议：用大肠杆菌为材料进行平面培养，分离菌落
【学习目标】
知识目标：1.举例说明有关培养基的基础知识
2.概述无菌操作技术包括的主要内容
能力目标：掌握纯化大肠杆菌的基本操作
【学习重难点】
重点：说出有关培养基的基础知识
难点：微生物培养中的有关实验操作
【学习过程】
第一部分：自主预习
一、基础知识
（一）培养基
1.培养基的种类包括 培养基和 培养基等。
2.培养基的化学成分一般都含有 、 、 、 四类营养成分。
3.在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对 、 _ 以及 等的要求。例如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加 ；培养霉菌时需要将培养基的PH调至 ；培养细菌时需要将培养基的PH调至 ；培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件。
（二）无菌技术
1.获得纯净培养物的关键是 。避免杂菌污染的方法主要包括以下四个内容：①对实验操作的 、操作者的衣着和手进行清洁和 。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行 。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在____________________附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与___________________________相接触。
2.消毒和灭菌
（1）消毒是指使用____________________________________仅杀死物体表面或_________的部分微生物（不包括______和_______）。常用的消毒方法有 、 。此外，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用 、 等。此外，实验室里还用 或 进行消毒。
（2）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体__________的微生物，包括芽孢和孢子。常用的灭菌方法有 、 、 ，
二、实验操作
本实验用_________________________培养基进行大肠杆菌的纯化培养，可分成___________________和______________________两个阶段进行。
1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 → → → →倒平板
2.纯化大肠杆菌
微生物接种的方法中最常用的是 和 。
（1）平板划线法是指接种环在琼脂固体培养基表面____________的操作，将聚集的菌种______________到培养基的表面。
(2)稀释涂布平板法是指将菌液进行一系列的__________，然后将不同________的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度 的菌液时，聚集在一起的微生物将被分散成_________________，从而能在培养基表面形成单个的________。
三、结果分析与评价
1.如果接种大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明接种符合要求。
2.若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中_____________未达到要求。
3.__________________的作为对照的培养基，在培养过程中出现了菌落，则说明培养基_______不彻底，实验失败。
四、菌种的保存
1.对于频繁使用的菌种，我们可以采用 法；
2.对于需要长期保存的菌种，可以采用 法。
第二部分：课中探究
探究一：消毒与灭菌的比较
探究二：有关“倒平板”操作
01.培养基灭菌后，需要冷却到50C左右，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的温度？
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
探究三：有关“平板划线法”操作
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
3.在作第二次以及其后的划线操作是为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
探究四：有关“稀释涂布平板法”操作
1.系列稀释操作中应注意的事项有哪些？
2.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行，结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，涂布平板操作的第2步应如何进行无菌操作？
第三部分：课后练习
1.下列措施中不属于消毒的是（ ）
A.酒精擦拭双手 B.向水中通入少量Cl2 C.皮肤受伤处涂紫药水 D.灼烧接种环
2.有关平板划线操作的叙述，正确的是（ ）
A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞
C.把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可
D.最后将平板倒置，放入培养箱中培养
3.下列有关平板划线接种法的操作错误的是（ ）
A.将接种环放在火焰上燃烧 B.将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液
C.蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D. 接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连
4.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是（ ）
A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
0C.等培养基冷却至50C左右时进行倒平板 D.将平板冷却凝固5-10分钟后将平板倒过来放置
5.细菌培养过程分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（ ）
A. 接种环、手、培养基 B.高压锅、手、接种环 C.培养基、手、接种环 D.接种环、手、高压锅
6.有关稀释涂布平板法的叙述错误的是( )
A.首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B.然后将不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面
C.适宜条件下培养 D.结果都可在培养基表面形成单个的菌落
7. 如右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1→2→3→4→5。下列操作方法
正确的是( )
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌
B．划线操作须在火焰上进行
C．在5区域中才可以得到所需菌落
D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌
8.为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是( )
A.对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B.临时保藏的菌种一般接种到试管的斜面培养基上
0 C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异 D.对于需要长期保存的菌种，可以采用低温-4C保藏的方法
9.（2009·宁夏理综，40）
（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 、 和渗透压等条件。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行 处理（消毒、灭菌），其中对培养皿进行灭菌常用的方法是 ；操作者的双手需要进行清洗 。
（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的 。
（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 。
（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。
（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
10. （2010年重庆理综）炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性，通过实验确诊。
（1）细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。
（2）细菌鉴定：实验流程如下图所示。
①对配制的液体培养基等需采取 方法灭菌；实验所用液体培养基的碳源为 （填“无机碳”或“有机碳”）。
②挑选可疑菌落制片后，用 观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。
③接种可疑菌后，35℃培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是 。对照组试管中应加入 ，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组 （填“高”或“低”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。
④对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体，与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有 。
答案：
1-8 DDDAC DDD
9.（1）PH 温度（2）灭菌 干热灭菌 消毒（3）比例合适（4）鉴定（5）将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生（6）灭菌
10.（2）①高压蒸汽 有机碳 ②显微镜 ③细菌大量繁殖 等量生理盐水 低 ④吞噬细胞、浆细胞
专题2课题1
《微生物的实验室培养》学案
【课程标准】
具体内容标准：进行微生物的分离和培养
活动建议：用大肠杆菌为材料进行平面培养，分离菌落
【学习目标】
知识目标：1.举例说明有关培养基的基础知识
2.概述无菌操作技术包括的主要内容
能力目标：掌握纯化大肠杆菌的基本操作
【学习重难点】
重点：说出有关培养基的基础知识
难点：微生物培养中的有关实验操作
【学习过程】
第一部分：自主预习
一、基础知识
（一）培养基
1.培养基的种类包括 培养基和 培养基等。
2.培养基的化学成分一般都含有 、 、 、 四类营养成分。
3.在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对 、 _ 以及 等的要求。例如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加 ；培养霉菌时需要将培养基的PH调至 ；培养细菌时需要将培养基的PH调至 ；培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件。
（二）无菌技术
1.获得纯净培养物的关键是 。避免杂菌污染的方法主要包括以下四个内容：①对实验操作的 、操作者的衣着和手进行清洁和 。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行 。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在____________________附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与___________________________相接触。
2.消毒和灭菌
（1）消毒是指使用____________________________________仅杀死物体表面或_________的部分微生物（不包括______和_______）。常用的消毒方法有 、 。此外，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用 、 等。此外，实验室里还用 或 进行消毒。
（2）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体__________的微生物，包括芽孢和孢子。常用的灭菌方法有 、 、 ，
二、实验操作
本实验用_________________________培养基进行大肠杆菌的纯化培养，可分成___________________和______________________两个阶段进行。
1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 → → → →倒平板
2.纯化大肠杆菌
微生物接种的方法中最常用的是 和 。
（1）平板划线法是指接种环在琼脂固体培养基表面____________的操作，将聚集的菌种______________到培养基的表面。
(2)稀释涂布平板法是指将菌液进行一系列的__________，然后将不同________的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度 的菌液时，聚集在一起的微生物将被分散成_________________，从而能在培养基表面形成单个的________。
三、结果分析与评价
1.如果接种大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明接种符合要求。
2.若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中_____________未达到要求。
3.__________________的作为对照的培养基，在培养过程中出现了菌落，则说明培养基_______不彻底，实验失败。
四、菌种的保存
1.对于频繁使用的菌种，我们可以采用 法；
2.对于需要长期保存的菌种，可以采用 法。
第二部分：课中探究
探究一：消毒与灭菌的比较
探究二：有关“倒平板”操作
01.培养基灭菌后，需要冷却到50C左右，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的温度？
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
探究三：有关“平板划线法”操作
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
3.在作第二次以及其后的划线操作是为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
探究四：有关“稀释涂布平板法”操作
1.系列稀释操作中应注意的事项有哪些？
2.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行，结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，涂布平板操作的第2步应如何进行无菌操作？
第三部分：课后练习
1.下列措施中不属于消毒的是（ ）
A.酒精擦拭双手 B.向水中通入少量Cl2 C.皮肤受伤处涂紫药水 D.灼烧接种环
2.有关平板划线操作的叙述，正确的是（ ）
A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞
C.把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可
D.最后将平板倒置，放入培养箱中培养
3.下列有关平板划线接种法的操作错误的是（ ）
A.将接种环放在火焰上燃烧 B.将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液
C.蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D. 接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连
4.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是（ ）
A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
0C.等培养基冷却至50C左右时进行倒平板 D.将平板冷却凝固5-10分钟后将平板倒过来放置
5.细菌培养过程分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（ ）
A. 接种环、手、培养基 B.高压锅、手、接种环 C.培养基、手、接种环 D.接种环、手、高压锅
6.有关稀释涂布平板法的叙述错误的是( )
A.首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B.然后将不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面
C.适宜条件下培养 D.结果都可在培养基表面形成单个的菌落
7. 如右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1→2→3→4→5。下列操作方法
正确的是( )
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌
B．划线操作须在火焰上进行
C．在5区域中才可以得到所需菌落
D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌
8.为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是( )
A.对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B.临时保藏的菌种一般接种到试管的斜面培养基上
0 C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异 D.对于需要长期保存的菌种，可以采用低温-4C保藏的方法
9.（2009·宁夏理综，40）
（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 、 和渗透压等条件。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行 处理（消毒、灭菌），其中对培养皿进行灭菌常用的方法是 ；操作者的双手需要进行清洗 。
（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的 。
（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 。
（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。
（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
10. （2010年重庆理综）炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性，通过实验确诊。
（1）细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。
（2）细菌鉴定：实验流程如下图所示。
①对配制的液体培养基等需采取 方法灭菌；实验所用液体培养基的碳源为 （填“无机碳”或“有机碳”）。
②挑选可疑菌落制片后，用 观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。
③接种可疑菌后，35℃培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是 。对照组试管中应加入 ，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组 （填“高”或“低”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。
④对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体，与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有 。
答案：
1-8 DDDAC DDD
9.（1）PH 温度（2）灭菌 干热灭菌 消毒（3）比例合适（4）鉴定（5）将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生（6）灭菌
10.（2）①高压蒸汽 有机碳 ②显微镜 ③细菌大量繁殖 等量生理盐水 低 ④吞噬细胞、浆细胞