武汉植物学研究! " " #$! ! %&’() *) +)**-. /0123. 45/6217. 8219:23;
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野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析>
袁晓? $袁萍? $严海燕? $李建强? $袁友明!
%? @中国科学院武汉植物园$武汉
湖北省农业科学院$武汉#A " " *#B! @
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摘
要(利用分光光度计C 高效液相色谱仪和等离子光谱仪对华中地区珍稀药用植物七叶一枝花D E F G H I J K L M J N M L L F
根茎的化学成分薯蓣皂甙元C 黄酮C 微量元素进行了分析‘@%@’]U ^? _种游离氨基酸C O P Q R ST U V W N H X Y X I H I Z V U [\S V U
结果显示(薯蓣皂甙元含量为" 黄酮含量为" 总游离氨基酸含量为" 微量元素中钙为a &! b$a " &! c b$a A A b$镁为" 钾为" 铁为" 锌为#磷为*" a **b$a ! " b$a _c b$a ! " b$#a c P d e $#&P d e ‘f d f d 关键词(七叶一枝花B 根茎B 薯蓣皂甙元B 黄酮B 游离氨基酸B 微量元素中图分类号(g _#&
文献标识码(h
文章编号(?" " " i #*" %! " " #’" &i " ) *) i " A j
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(E @W @’]U B X B Y B V u o W r |z p F G H IJ K L M J N M L L F O P Q R S T U V N H X Y X I H I %Z V U [\S V U S Q H -P U Q K -d G [Q [B Z B F Z L U T -[G V G G U P Q [-U \Q M V U \G G L G P G [R 百合科重楼属植物七叶一枝花%E F G H I
的@W %@’’J K L M J N M L L FO P Q R ST U V N H X Y X I H I Z V U [\S ]U V U
根茎%商品名为重楼’药用历史悠久$其植物属华中$
? ^珍稀濒危植物D 以前民间主要用于治疗各种疮毒C $! ^痈疽C 毒蛇咬伤等D 它还具有‘现有药理研究表明$
云南重楼的有效成分中两3U R K 2M U 等研究发现$
种寡糖有植物生长调节剂的作用$甾体皂甙能抑制
D ) ^
由酒精引起的胃损伤症‘近几年的临床实验表明$七叶一枝花根茎对治疗妇女子宫大量出血疗效显
! $&^著D 对治疗咳嗽C 喘症C 肺胀C 恶性胸水等肺系疾B
止血C 镇静镇痛C 免疫调节C 抗肿瘤C 抗炎C 抗菌抑菌C
! $A ^
抑制精子活性等作用D ‘与七叶一枝花一起列为
病和热毒引起的疾病多有奇效B 对淋巴结核溃疡C 体
*$c ^
内炎症C 毒蛇咬伤C 皮炎蜂蛰都有很显著的疗效D $
中药Z 重楼[的同属植物云南重楼%E F G H I J K L M J N M L L F @M @’@i @’O P Q R ST U V 5X X F X Y X I H I %Z V U [\S ]U [M 3U H H
D #^
是云南白药的组成之一$U S -2/\和]Q K U K S Q
_c ) 年研究了七叶一枝花根3U 1A, 和/U 2Z @?
茎中的甾体皂甙成分$发现与云南重楼的成分相同$
_^称其薯蓣皂甙为抗肿瘤和止血的有效成分D ‘近几
收稿日期(修回日期B ! " " A i ? ! i ? *$! " " #i " #i ? ) ‘
基金项目(中国科学院武汉植物园知识创新工程所长基金资助项目‘
男$副研究员$博士在读$研究方向为天然产物研究和新药开发‘>作者简介(袁晓%? _&! i ’$
) 0[
武汉植物学研究
第11卷
年来对七叶一枝花根茎中有效成分的研究主要是薯蓣皂甙! 鉴于这些! 我们对该植物的成分作了较全面以为该植物引种驯化" 迁地保护" 药理研究的分析!
及#$%种植提供基础数据&
瓶中! 待测样品中的微量元素&Z 精密称量薯预皂甙元标准品) . B 用石油醚2溶解定容至! [*+\*O3
为薯预皂甙元标准液&, **. G ]精密称量芦丁标准品1用甲醇溶解并定容至1Y ) . B ! ) . G 为芦丁的标
配制=准液&^_用, *L T =" " " M 5‘Ba " b A %标准溶液&^c 氨基酸分析柱前处理d 456789$e e f g C 5B 柱前衍生法制成氨基酸标准溶液及样品溶液&^h 液相色谱柱为=直2T %G =的分析条件d j k 5%5l , H i
径J 检测波长为1柱压Y [. . ! 长1*. . 3! J H A . ! ’材料和方法
’(’材料
七叶一枝花材料由湖北省鹤峰县科源农业技术开发有限责任公司袁唯洲提供&九月下旬在鹤峰县海拔) **+, -**. 的不同地点采集七叶一枝花全株! 取-+)年生植株的根茎! 经过烘干" 粉碎" 混匀备用&植物材料经中国科学院武汉植物园李建强博士鉴定&薯预皂甙元" 芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供&
’(/仪器与药品
011型分光光度计2上海分析厂3! 456789高效液相色谱仪2%:; 5? @5A 65B 7:=%全谱直读等离子光谱仪2C D $公司3! D %超声仪&试剂均为分析纯&
’(E 方法与条件
F 量取1*. G 甲醇于1) *. G 三角瓶中!
逐滴加入H *. G 浓硫酸2比例, IJ 3! 搅拌均匀后即为薯蓣皂甙元显色剂&K 黄酮显色剂用) L 的$M =M -甲醇溶液1) *. G 配制&N将七叶一枝花根茎在干燥箱内H *O 鼓风干燥1P ! 粉碎后过H *目筛! 再于H *O 干燥至衡重! 待用&Q 精密称量处理后的七叶一枝花根茎样品) B 于, **. G 圆底烧瓶中! 加入1*. G 去离子水置入J *O 恒温箱内发酵1J P ! 取浓硫酸) . G
逐滴加入并不断摇动! 加热回流J P 水解R 水解液加氢氧化钠溶液中和至S T 为0! 水解液抽滤! 滤渣置H *O 的烘箱内干燥1P ! 并用, **. G 石油醚索氏提取1P ! 石油醚溶液定容于, **. G 容量瓶中! 待测薯蓣皂甙元&U 精密称量处理后的七叶一枝花根茎样品) B ! 加, **. G 甲醇超声提取-*. V A ! 过滤! 重复1次! 合并滤液! 浓缩! 定容于, **. G 容量瓶中! 待测样品中的黄酮成分&W 精密称量处理后的七叶一枝花根茎样品1B !
加去离子水超声提取1*. V A ! 过滤! 定容于, **. G 容量瓶中! 待测样品中的氨基酸成分&X精密称量处理后的七叶一枝花根茎样品*Y ) B 置于-*. G 瓷坩埚中! 于) ) *O 马
福炉干灰化! 取出冷却后加, I, T =M 2浓盐酸I 水3) . G ! 加热溶解! 并用去离子水定容至1) . G 容量
为H Y -‘S5! 流速为, Y *. G m . V A &^n 等离子光谱仪工作参数d 高频功率, Y , ) l o ! $8气*Y ) G m . V A
! 泵速为, -*8m . V A ! 载气压力为-*%5R 检测器为=:p
&/结果与讨论
/(’实验结果
薯预皂甙元标准曲线制作
取标准溶液*Y ) " , Y *" , Y ) " 1Y *" 1Y ) . G 于试管中!
置水浴上挥发去溶剂! 然后加显色剂) . G 摇匀! 放置-*. V A
! 于分光光度计J , 1A . 处! 读取吸光度数值&以显色剂为空白! 回归方程为q rH Y 0H J s t*Y *, [J !
r*Y \\-0&薯预皂甙元样品测定取样品溶液*Y , . G 于试管中! 置水浴上挥发去溶剂! 然后加显色剂) . G 摇匀! 放置-*. V A ! 于分光光度计J , 1A . 处! 以显色剂为空白!
读取吸光度数值&计算结果d 薯预皂甙元为*Y [1L! p 为, Y *H L! 平均回收率, **Y ) L 2A
r) 3&芦丁标准曲线制作
取芦丁标准液*Y ) " , Y *"
, Y ) " 1Y *" 1Y ) . G ! 分别置于, *. G 容量瓶中!
加$M =M -显色剂定容于, *. G 容量瓶! 于分光光度计J 1) A . 处! 读取吸光度数值! 以$M =M -显色剂为空
白! 回归方程为q r -Y 0, 1s u *Y *, \[!
黄酮样品测定
取样品溶液) . G 加$M =M -显
色剂定容于, *. G 容量瓶! 于分光光度计J 1) A . 处! 以$M =M -显色剂为空白!
读取吸光度数值2A r ) 3&计算结果d 黄酮含量为*Y *[1H L! p 为, Y *-L! 平均回收率, **Y -L2A
r) 3&氨基酸的含量测定氨基酸的含量测定见表, &微量元素测定微量元素测定中! 标准溶液与
样品溶液酸介质浓度一致! 对实际样品平衡测定, *次R p 分别为, Y *J L" , Y J H L" , Y , -L" , Y 0H L" 1Y --L! 微量元素含量见表1&
第L 期袁晓等a 野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析
F N N
表! 七叶一枝花根茎中的游离氨基酸及其含量
" #$%&’" (&) *+, &+, -*. . /&+*
#) 12-1+,(&/(13*0#4#/121-名称含量6含量678名称78*+, &+, 5#*+, &+, 5#0&90&9天门冬氨酸
:; =’? 甘氨酸
@A B =>=I C 丙氨酸:A :=>=? =精氨酸:H @=>=’? 缬氨酸=>==C =>=’J =>’? ==>==N 名称
5#0&亮氨酸A D E 蛋氨酸KD " 色氨酸" H
9*+, &+, =>==F
从本研究结果可知]七叶一枝花根茎中含有丰薯蓣皂甙元含量也较高]并含有多种富的微量元素]
游离氨基酸]药效也较广泛]因此]可对该植物进行迁地保护]丰富其资源]并对其进行有针引种驯化]对性地开发[参考文献a
=>==L =>==F =>=’’赵子恩]彭辅松]蒋祖德>华中珍稀濒危植物^’_王诗云]
及其保存^科学出版社]>北京a ’J J F >’I J >K _
李小娜]王会教>重楼的研究及应用进展^? _边洪荣]
" B H M :A O H 5谷氨酸=>=’I 胱氨酸
=>==F 赖氨酸=>==P @A E 9B ; A B ; 脯氨酸=>=C ’异亮氨酸=>==L 氨基酸总I I
" *, #%
组氨酸=>==? 苯丙氨酸=>==L
G Q ;
表R 七叶一枝花根茎中的微量元素及含量
" #$%&? " (&) *+, &+, -*. , /#) &&%&0&+, -1+/(13*0#4#/121-微量元素名称
单位
检测结果
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R >R 讨论
6’8七叶一枝花根茎中的甾体皂甙主要以薯蓣皂甙元的多种糖甙为主[我们用分光光度法测试七叶一枝花根茎中的薯蓣皂甙元含量为=\L ? 7]与韦建荣^’=_
报道的云南元阳‘绿川‘红河等地区云南重楼的薯蓣皂甙元含量相近]其含量都较高[湖北省鹤峰县科源农业技术开发有限责任公司已将七叶一枝花作为重点药材进行大面积栽培[今后我们的着重点是将野生七叶一枝花和人工栽植七叶一枝花的化学成分进行比较]
用分析测试等手段跟踪检测]使其达到规范化种植[另外]在本实验中我们用高压液相
色谱法]参照中国药典6? ===年版8
^’’_及其它资料]在样品的制备上有所改进]改进后的方法简单可行并且重现性好]适合基层单位分析测定[
6? 8微量元素测试结果显示七叶一枝花根茎中钙‘钾‘铁‘镁的含量都较高]其中钾的含量达到近’7]这些元素不仅对人体有重要的生理调节作用]
而且对植物自身也有重要的生理调节作用^’? _[
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_>中药材]? ==? ]Rc 6I 8a ? ’? ? =>^I _季申]周坛树]张锦哲>中药重楼和云南白药中抗肿
瘤细胞毒活性物质9/#) 1%%1+的测定^b _>中成药]? ==’]Rd 6? 8a ? ’? ’F >
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>北京a 化学工业出版社]? ===>?’C >
^’? _胡家金]
肖浪涛]彭志红]洪亚辉>植物钾吸收基因及其遗传转化的研究进展^b _>生物技术通讯]?==I ]! ) 6? 8a ’L ’L P >
野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析
作者：
作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
袁晓， 袁萍， 严海燕， 李建强， 袁友明
袁晓,袁萍,严海燕,李建强(中国科学院武汉植物园,武汉,430074)， 袁友明(湖北省农业科学院,武汉,430064)
武汉植物学研究
JOURNAL OF WUHAN BOTANICAL RESEARCH2004，22(6)1次
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1.期刊论文 谭小明. 郭顺星. 周雅琴. 余丽莹. 缪剑华. TAN Xiao-Ming. GUO Shun-Xing. ZHOU Ya-Qin. YU Li-Ying. MIU Jian-Hua 七叶一枝花根的显微结构及其内生真菌分布研究 -菌物学报2006,25(2)
本文采用石蜡永久制片和光学显微摄像的方法对七叶一枝花Paris polyphylla根的显微结构及其内生真菌的分布进行了研究.结果表明,七叶一枝花的根茎由栓皮层、薄壁组织及维管组织组成,其中栓皮层由4层细胞组成;薄壁组织的细胞含有丰富的营养物质,其内有时分布有针状结晶束.不定根由表皮层、皮层、内皮层及维管束构成,表皮上有根毛,皮层所占根径的比例达80%以上;木质部为三原型.在七叶一枝花的根茎和不定根的皮层细胞中均有内生真菌的分布.真菌由表皮、外皮层侵入到皮层薄壁组织,在皮层薄壁细胞中形成菌丝结,并扩展成一定的侵染区域,部分皮层细胞中菌丝结已被消化吸收.内生真菌只侵染皮层薄壁细胞,不侵染维管柱.七叶一枝花可以通过消化细胞内的菌丝作为营养的来源之一.
2.学位论文 马德东 肺癌低灌注与乏氧的检测、干预及机制探讨 2009
第一部分肺癌低灌注与乏氧的检测与干预
肿瘤血管生成（angiogenesis）是指新生血管在肿瘤现有血管基础上形成的过程。研究证实，如果没有新生血管的支持，实体组织中的肿瘤生长直径不会超过2mm。Folkman J.等在转基因动物肿瘤模型的实验中发现，在原位癌向浸润癌发展的过程中，往往伴随着新生血管生成的开始。随后大量的临床研究也证实，血管生成与肿瘤的生长、恶变、转移，以及肿瘤病人的预后有着密切的关系。在过去的几年里，肿瘤的抗血管生成治疗引起了人们极大的研究兴趣，各种抗血管生成药物现已进入各期临床试验阶段。检测肿瘤内部血管生成可通过CT或MRI灌注显像或者SPECT等，肝脏、脑肿瘤的研究较多，而肺部肿瘤灌注的研究很少，目前的研究注意力集中在肿瘤的高灌注，针对肿瘤低灌注特别是肺部肿瘤低灌注的研究尚未见报道。
肿瘤低灌注与高灌注同样有着重要意义，微观方面，①肿瘤内低灌注限制了化疗药物的运送，导致药物在瘤体内不均匀分布达不到有效的最大治疗水平的血药浓度，特别对血管内半衰期短的药物更明显；②低灌注直接导致乏氧，糖酵解增加细胞内变酸，对一些化疗药物不敏感，乏氧促使细胞在基因和蛋白质水平发生改变使低灌注区对多种化疗药物耐药；③乏氧的瘤细胞也易于转移，近期的研究表明急性乏氧更易增加转移机会，新生血管结构缺陷，通透性增加以促进了肿瘤的转移。从宏观角度考虑，肿瘤的发生、生长、转移是肿瘤与宿主相互选择与适应的结果，低灌注与乏氧是肿瘤原发部位不能满足其生长需要，使得选择耐受乏氧的瘤细胞，并使瘤细胞脱落转移至其他部位寻找适宜生存的空间。单独抑制血管生成，我们很难阻断但血管生成的所有途径，而且这可能加速上述的选择，使得部分瘤细胞耐药、抵抗放疗，易于转移。
乏氧，作为低灌注的一个主要后果，分为急性和慢性乏氧，通过乏氧诱导因子（HIF）促进血管生成因子等基因的表达，促进血管生成，抑制抑癌基因如野生型P53表达，激活癌基因表达，肿瘤的恶性程度更高，耐受放化疗和化疗。乏氧的检测主要有PET和MRI两种方法，前者采用硝基咪唑类示踪剂，因其毒性较大，空间分辨率低（仅4-5mm），费用昂贵，应用前景不如MRI。最早用于脑功能研究的血氧水平依赖成像（BOLD）技术相对成熟安全，是较好的选择。针对乏氧的治疗措施包括适形放疗，乏氧细胞毒药物，乏氧细胞增敏剂，卡波金吸入等，这些方法多是针对改善肿瘤对放疗耐受，而改善乏氧区对化疗耐受的研究鲜见报道。
七叶一枝花，为百合科植物华重楼（Paris polyphylla Smith var.chinensis Hara）的干燥根茎，含甾体皂苷称为蚤休苷及蚤体土宁苷，后者水解后生成薯蓣苷。有用于抗肿瘤治疗的记载。其水提物及正丁醇提取物有体外抗肿瘤作用。我们的预试验显示七叶一枝花提取物可能对乏氧造成的肿瘤进展有特殊效果。
综上所述，肺癌低灌注乏氧区对于其生长、恶变、转移的重要意义，我们提出血管生成及氧供调节治疗（而不是单纯的抗血管治疗）的假设，通过兔肺移植瘤模型，改良验证检测低灌注和乏氧的方法，从而使预测转移等预后提供帮助；探索七叶一枝花调节肿瘤内部血流灌注，平衡氧供的可行性，以提高肺癌的治疗效果。 目的:
1.建立兔肺移植瘤模型，观察乏氧和灌注对预后的影响。 2.观察乏氧低灌注区域内瘤细胞生物学特性。
3.初步探讨七叶一枝花的抗肿瘤作用特别是对低灌注及乏氧的影响。
方法:
1.所有实验选用新西兰大白兔。采用瘤组织或细胞悬液直接注入肺及后下肢肌肉内建立移植瘤模型。
2.验证MRI灌注显像及BOLD氧水平显像的准确性。3只荷瘤兔行MRI灌注及BOLD检测后与OxyLite氧电极结果相比较。并比较灌注显像与BOLD氧水平显像的一致性。
3.MRI BOLD及灌注显象与肿瘤预后相关性检测。1）选取10只雄性新西兰大白兔全身麻醉后仰卧位固定，将0.1ml瘤组织悬液经右前胸壁穿刺注入。2）10天后行胸部MRI检查，观察成瘤情况。3）20天后行MRI灌注扫描及BOLD显像。4）30天时复查常规MRI测量肿瘤大小。5）45天复查MRI测量肿瘤大小，观察转移情况。继续喂养带瘤兔至死亡。
4.观察低灌注区和乏氧区瘤组织相对非低灌注、乏氧区生长和转移的差异。取3周左右下肢带瘤兔一只，行MRI灌注、BOLD及CT扫描，选取低灌注/乏氧区（A区）及非低灌注/乏氧区（B区），将MR与CT图像融合后，在CT引导下穿刺分别制成细胞悬液A、B备用。
4.1将上述细胞悬液A、B在低氧（1％O2，5％CO2）及正常氧分压下培养48h。四氮唑盐（MTT）检测细胞增值及ELISA组蛋白-DNA片断检测调亡，实时定量RT-PCR检测VEGF、HIF表达。
4.2取20只健康兔，按体重性别配比分为A、B两组，将AB悬液分别接种于右上肺内，每10天扫描观察其生长速度及转移情况，一月取活检标本通过real time RT-PCR检测VEGF、HIF表达。
5.观察七叶一枝花低灌注区及乏氧区的影响
5.1以方法4中的描述制备乏氧区细胞悬液，加入七叶一枝花水提液后在低氧及正常氧分压下培养48h，检测瘤细胞增殖及凋亡的变化。同时行实时定量RT-PCR检测VEGF、HIF表达的改变。
5.2取50只健康兔，随机分为5组OD.高剂量七叶一枝花灌胃、E.高剂量七叶一枝花灌胃加5-FU化疗，F.5-FU化疗，G.低剂量七叶一枝花灌胃，H.对照）按照前述方法观察七叶一枝花对肿瘤生长、转移及乏氧灌注的影响。 结果:
1.瘤组织悬液穿刺注入法肺癌模型建立成功率92％。有6％早期出现胸水或胸壁结节，予以剔出。 2.BOLD结果与OxyLite氧电极结果一致性较好。
3.a MRI灌注与BOLD有良好相关性，二者分布区域一致。b高灌注区体积比例与肿瘤大小，生长速度呈正相关，c低灌注区体积及程度与转移高度正相关，与生存期成负相关。灌注值离均差大小与转移率呈正相关，与生存期呈负相关。BOLD高信号区比例与肿瘤转移、生存期明显相关。
4.1）来源于乏氧区的瘤组织（A组）与源于非乏氧区的瘤组织（B组）在低氧条件下培养生长活性显著高于非乏氧区对照细胞。RT-PCR结果显示A组HIF1显著高于B组，VEGF亦高于B组，但不如HIF1升高显著。MTT法细胞增殖速度A组高于B组（P
2）A组移植瘤生长速度快于B组A组荷瘤兔生存期短于B组（P
5.1）七叶一枝花提取液可显著降低正常氧分压下瘤细胞增值率并增加瘤细胞凋亡，这种作用在低氧条件下更为明显。RT-PCR结果显示七叶一枝花提取液可降低低氧条件下瘤细胞VEGF、HIF表达的水平。
2）单纯七叶一枝花治疗组肿瘤大小与对照组相比明显减小，但不如5-FU组明显，但前者转移率低于5FU治疗（F）组。七叶一枝花治疗组（D、E、G组）乏氧低灌注区面积比例较其他两组显著降低。前者灌注值离均差亦有明显降低。E组治疗效果最佳。 结论:
1.VX2瘤组织悬液穿刺法建立兔肺移植瘤方法稳定可靠。
2.MRI检测乏氧及低灌注面积比例及离均差大小是预测肿瘤预后的满意指标。 3.乏氧低灌注区的肿瘤细胞有独特生物学特性，是治疗和预防复发的重点。 4.七叶一枝花是一种有希望的干预肿瘤低灌注和乏氧的中药。
3.期刊论文 刘学敏. 陈柏松 七叶一枝花中毒3例 -咸宁学院学报（医学版）2009,23(2)
七叶一枝花为百合科植物七叶一枝花(Parispolyphylla)的干燥根茎,因其叶多为7~10片轮生于茎项,而花单生于轮生叶片之上,故得此名.又因花的外轮花被片形大,似叶状.内轮花被片退化呈长线状,成熟时金黄色,故又名"重楼"、"金线吊重楼"、"灯台七".
4.期刊论文 陆善旦. 王健 七叶一枝花连年热销探因 -中国现代中药2008,10(5)
七叶一枝花,又叫枝花头、七叶莲、蚤休.百合科植物七叶一枝花的干燥根茎.
5.学位论文 崔艳 中药七叶一枝花某些活性成分化学结构研究 2006
本课题针对中药七叶一枝花的活性成分进行了系统的提取分离和结构研究。采用传统与现代技术相结合的方法，在实验中使用硅胶柱层析、大孔吸附树脂层析、葡聚糖凝胶层析和反相硅胶柱层析、薄层层析和重结晶等分离方法，从七叶一枝花根茎部分共提取分离得到6个纯净化合物，经波谱分析和化学方法确定它们分别为：CH3(CH2)14COOH(A)、C57H104O6(B)、25R-薯蓣皂苷元-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯呋喃糖基-(1→4)-β-D-葡萄吡喃糖苷(C)、25R-薯蓣皂苷元-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→4)-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→4)-[α-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)]-β-D-葡萄吡喃糖苷(D)、25R-偏诺皂苷元-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯呋喃糖基-(1→4)-β-D-葡萄吡喃糖苷(E)和薯蓣皂苷元(F)。
在化合物的结构研究中，除使用红外、质谱，还综合运用了各种核磁共振技术(1D、2D-NMR)，尤其HSQC、HMBC、1H-1HCOSY和选择性1DTOCSY技术的使用，使化合物的结构归属更加准确可靠。
运用X射线单晶衍射技术对首次发现的皂苷元(F)晶体进行了结构研究，得到了皂苷元的晶体结构及其分子在空间的存在形式。
本课题还首次利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱联用技术研究了七叶一枝花中的薯蓣皂苷成分，获取了它们的保留特性及质谱裂解规律等信息。
6.期刊论文 黄珊珊. 杨平. 班荔. 班殿举 ABT生根粉在七叶一枝花增产栽培中的应用试验 -中国野生植物资源2008,27(5)
七叶一枝花是一种运用广泛价值高的珍稀药用植物资源.概述了七叶一枝花的药用价值和应用前景,运用ABT生根粉的特性对七叶一枝花的增产栽培进行试验性的研究,利用ABT生根粉所具有的补充外源激素与促进植物体内内源激素合成的功效,促进七叶一枝花的根茎快速生长,缩短商品七叶一枝花的生产周期,达到可持续利用目的.
7.期刊论文 周贻谋 七叶一枝花善治痈疮 -家庭医学2006,""(11)
中药七叶一枝花,其处方名叫蚤体,又名重楼或草河车,为百合科多年生草本植物蚤体及同属多种植物的根茎.本品性微寒而味苦,归肝经,能清热解毒,消肿止痛,熄风定惊.常用于治疗痈肿疔疮、高热神昏抽搐、外伤出血肿痛等症.中曾有这样的记载:"七叶一枝花,深山是我家,痈疽如遇着,一似手拈拿."从这类民间谚语足可以看出,七叶一枝花确系治疗痈肿疮疖之要药.
8.学位论文 刘伯平 重楼HPLC指纹图谱研究 2009
重楼为常用中药，药用历史悠久，又称蚤休、七叶一枝花等。《中华人民共和国药典》(2005版)一部记载：“重楼为百合科植物云南重楼ParispolyphyllaSmith var.yunnanensis(Franch．)Hand.-Mazz或七叶一枝花Paris polyohylla Smithvar. chinensis(Franch) Hara的干燥根茎”。
本文首先建立了重楼药材中重楼皂苷I和II的含量测定方法，对来自各自然保护区的不同种源重楼植株和购买的商品重楼药材进行了分析测定，若按《中华人民共和国药典》(2005版)标准衡量，自然保护区植株中仅有滇重楼I、II根茎，商品药材中仅有重楼①、③和重楼⑧符合要求。结果表明，不同来源的药材中这两种皂苷成分的含量差异较大，证实以这两种皂苷为指标成分进行质量控制并不合理，不能全面真实地反映药材品质。
为了寻求较合理的品质评价方法，本文建立了其高效液相色谱指纹图谱分析方法，对供试品溶液制备方法进行了筛选，并以分离度、分析时间和色谱峰数等为指标对色谱条件(包括流动相、检测波长、色谱柱、进样量、梯度洗脱程序等)进行了优化。
本文接着运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》(研究版)软件对所获得的色谱图进行了分析评价，得出如下结论：(1)海拔差距在200m之内的药材品质基本一致；(2)根茎中许多化学成分在茎叶中也有体现，但某些品种重楼植株茎叶能否代替根茎入药，以及是否应和根茎区别使用
等仍有待于进一步研究；(3)来自道地产区云南的药材品质较好；(4)目前市面上流通的商品重楼药材品质参差不齐，需严格控制，最好能规范其基源。同时作为自然保护区生物标本整理整合及共享项目的子课题研究，为重楼药材的后期研究和进一步的开发利用等提供前期研究基础数据。
9.期刊论文 梅中青. 梅益丽 七叶一枝花野生变人工栽培的技术研究 -中国中药杂志2004,29(12)
七叶一枝花Paris polyphylla Simth,异名有重楼,蚤休,白蚤,独叶一枝花等.为百合科重楼属多年生草本植物.同属植物有10余种,分别为华重楼,金线重楼,轮叶王孙等.分布于我国的浙江、江苏、江西等地.其药用部分为根茎,有小毒,具有清热解毒,消肿止痛等功效.临床用于流行性乙型脑炎,阑尾炎,蛇虫咬伤等.
10.期刊论文 赵君英. Zhao Junying 七叶莲的研究进展 -光明中医2009,24(11)
七叶莲(Paris polyphylla Simth)为百合科重楼属,别名:七叶一枝花、草河车、重楼、蚤休等.多年生草本植物,高30～100cm.喜欢生长在中海拔高度的山坡、阔叶林下或溪边、灌木丛下阴湿处.地下根茎横生,肥厚,黄褐色,有斜行环节,并生须根.茎单一,无毛.叶4～9片,通常为7片,轮生茎顶;叶片长卵形.春夏间在轮生叶的中心抽出花梗,顶端生一朵花,故名七叶一枝花.秋季果熟;葫果球形,内有多数鲜红色种子.广泛分布于福建、贵州、广东、广西、浙江、台湾、四川、陕西、云南等地.
1. 李燕. 丁春邦. 张利. 杨瑞武. 周永红 四川不同产地重楼中无机元素的测定[期刊论文]-中草药 2009(6)
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武汉植物学研究! " " #$! ! %&’() *) +)**-. /0123. 45/6217. 8219:23;
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野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析>
袁晓? $袁萍? $严海燕? $李建强? $袁友明!
%? @中国科学院武汉植物园$武汉
湖北省农业科学院$武汉#A " " *#B! @
#A " " &#’
摘
要(利用分光光度计C 高效液相色谱仪和等离子光谱仪对华中地区珍稀药用植物七叶一枝花D E F G H I J K L M J N M L L F
根茎的化学成分薯蓣皂甙元C 黄酮C 微量元素进行了分析‘@%@’]U ^? _种游离氨基酸C O P Q R ST U V W N H X Y X I H I Z V U [\S V U
结果显示(薯蓣皂甙元含量为" 黄酮含量为" 总游离氨基酸含量为" 微量元素中钙为a &! b$a " &! c b$a A A b$镁为" 钾为" 铁为" 锌为#磷为*" a **b$a ! " b$a _c b$a ! " b$#a c P d e $#&P d e ‘f d f d 关键词(七叶一枝花B 根茎B 薯蓣皂甙元B 黄酮B 游离氨基酸B 微量元素中图分类号(g _#&
文献标识码(h
文章编号(?" " " i #*" %! " " #’" &i " ) *) i " A j
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@F $G L G P G [R K Q [RS G V S Q H -P U N U V Q M Q K J G V G M G R G V P Q [G M S G U [U L O R Q \U L V G K 2L R K Q [M Q \U R G R S U R M Q K -d G [Q [
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(E @W @’]U B X B Y B V u o W r |z p F G H IJ K L M J N M L L F O P Q R S T U V N H X Y X I H I %Z V U [\S V U S Q H -P U Q K -d G [Q [B Z B F Z L U T -[G V G G U P Q [-U \Q M V U \G G L G P G [R 百合科重楼属植物七叶一枝花%E F G H I
的@W %@’’J K L M J N M L L FO P Q R ST U V N H X Y X I H I Z V U [\S ]U V U
根茎%商品名为重楼’药用历史悠久$其植物属华中$
? ^珍稀濒危植物D 以前民间主要用于治疗各种疮毒C $! ^痈疽C 毒蛇咬伤等D 它还具有‘现有药理研究表明$
云南重楼的有效成分中两3U R K 2M U 等研究发现$
种寡糖有植物生长调节剂的作用$甾体皂甙能抑制
D ) ^
由酒精引起的胃损伤症‘近几年的临床实验表明$七叶一枝花根茎对治疗妇女子宫大量出血疗效显
! $&^著D 对治疗咳嗽C 喘症C 肺胀C 恶性胸水等肺系疾B
止血C 镇静镇痛C 免疫调节C 抗肿瘤C 抗炎C 抗菌抑菌C
! $A ^
抑制精子活性等作用D ‘与七叶一枝花一起列为
病和热毒引起的疾病多有奇效B 对淋巴结核溃疡C 体
*$c ^
内炎症C 毒蛇咬伤C 皮炎蜂蛰都有很显著的疗效D $
中药Z 重楼[的同属植物云南重楼%E F G H I J K L M J N M L L F @M @’@i @’O P Q R ST U V 5X X F X Y X I H I %Z V U [\S ]U [M 3U H H
D #^
是云南白药的组成之一$U S -2/\和]Q K U K S Q
_c ) 年研究了七叶一枝花根3U 1A, 和/U 2Z @?
茎中的甾体皂甙成分$发现与云南重楼的成分相同$
_^称其薯蓣皂甙为抗肿瘤和止血的有效成分D ‘近几
收稿日期(修回日期B ! " " A i ? ! i ? *$! " " #i " #i ? ) ‘
基金项目(中国科学院武汉植物园知识创新工程所长基金资助项目‘
男$副研究员$博士在读$研究方向为天然产物研究和新药开发‘>作者简介(袁晓%? _&! i ’$
) 0[
武汉植物学研究
第11卷
年来对七叶一枝花根茎中有效成分的研究主要是薯蓣皂甙! 鉴于这些! 我们对该植物的成分作了较全面以为该植物引种驯化" 迁地保护" 药理研究的分析!
及#$%种植提供基础数据&
瓶中! 待测样品中的微量元素&Z 精密称量薯预皂甙元标准品) . B 用石油醚2溶解定容至! [*+\*O3
为薯预皂甙元标准液&, **. G ]精密称量芦丁标准品1用甲醇溶解并定容至1Y ) . B ! ) . G 为芦丁的标
配制=准液&^_用, *L T =" " " M 5‘Ba " b A %标准溶液&^c 氨基酸分析柱前处理d 456789$e e f g C 5B 柱前衍生法制成氨基酸标准溶液及样品溶液&^h 液相色谱柱为=直2T %G =的分析条件d j k 5%5l , H i
径J 检测波长为1柱压Y [. . ! 长1*. . 3! J H A . ! ’材料和方法
’(’材料
七叶一枝花材料由湖北省鹤峰县科源农业技术开发有限责任公司袁唯洲提供&九月下旬在鹤峰县海拔) **+, -**. 的不同地点采集七叶一枝花全株! 取-+)年生植株的根茎! 经过烘干" 粉碎" 混匀备用&植物材料经中国科学院武汉植物园李建强博士鉴定&薯预皂甙元" 芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供&
’(/仪器与药品
011型分光光度计2上海分析厂3! 456789高效液相色谱仪2%:; 5? @5A 65B 7:=%全谱直读等离子光谱仪2C D $公司3! D %超声仪&试剂均为分析纯&
’(E 方法与条件
F 量取1*. G 甲醇于1) *. G 三角瓶中!
逐滴加入H *. G 浓硫酸2比例, IJ 3! 搅拌均匀后即为薯蓣皂甙元显色剂&K 黄酮显色剂用) L 的$M =M -甲醇溶液1) *. G 配制&N将七叶一枝花根茎在干燥箱内H *O 鼓风干燥1P ! 粉碎后过H *目筛! 再于H *O 干燥至衡重! 待用&Q 精密称量处理后的七叶一枝花根茎样品) B 于, **. G 圆底烧瓶中! 加入1*. G 去离子水置入J *O 恒温箱内发酵1J P ! 取浓硫酸) . G
逐滴加入并不断摇动! 加热回流J P 水解R 水解液加氢氧化钠溶液中和至S T 为0! 水解液抽滤! 滤渣置H *O 的烘箱内干燥1P ! 并用, **. G 石油醚索氏提取1P ! 石油醚溶液定容于, **. G 容量瓶中! 待测薯蓣皂甙元&U 精密称量处理后的七叶一枝花根茎样品) B ! 加, **. G 甲醇超声提取-*. V A ! 过滤! 重复1次! 合并滤液! 浓缩! 定容于, **. G 容量瓶中! 待测样品中的黄酮成分&W 精密称量处理后的七叶一枝花根茎样品1B !
加去离子水超声提取1*. V A ! 过滤! 定容于, **. G 容量瓶中! 待测样品中的氨基酸成分&X精密称量处理后的七叶一枝花根茎样品*Y ) B 置于-*. G 瓷坩埚中! 于) ) *O 马
福炉干灰化! 取出冷却后加, I, T =M 2浓盐酸I 水3) . G ! 加热溶解! 并用去离子水定容至1) . G 容量
为H Y -‘S5! 流速为, Y *. G m . V A &^n 等离子光谱仪工作参数d 高频功率, Y , ) l o ! $8气*Y ) G m . V A
! 泵速为, -*8m . V A ! 载气压力为-*%5R 检测器为=:p
&/结果与讨论
/(’实验结果
薯预皂甙元标准曲线制作
取标准溶液*Y ) " , Y *" , Y ) " 1Y *" 1Y ) . G 于试管中!
置水浴上挥发去溶剂! 然后加显色剂) . G 摇匀! 放置-*. V A
! 于分光光度计J , 1A . 处! 读取吸光度数值&以显色剂为空白! 回归方程为q rH Y 0H J s t*Y *, [J !
r*Y \\-0&薯预皂甙元样品测定取样品溶液*Y , . G 于试管中! 置水浴上挥发去溶剂! 然后加显色剂) . G 摇匀! 放置-*. V A ! 于分光光度计J , 1A . 处! 以显色剂为空白!
读取吸光度数值&计算结果d 薯预皂甙元为*Y [1L! p 为, Y *H L! 平均回收率, **Y ) L 2A
r) 3&芦丁标准曲线制作
取芦丁标准液*Y ) " , Y *"
, Y ) " 1Y *" 1Y ) . G ! 分别置于, *. G 容量瓶中!
加$M =M -显色剂定容于, *. G 容量瓶! 于分光光度计J 1) A . 处! 读取吸光度数值! 以$M =M -显色剂为空
白! 回归方程为q r -Y 0, 1s u *Y *, \[!
黄酮样品测定
取样品溶液) . G 加$M =M -显
色剂定容于, *. G 容量瓶! 于分光光度计J 1) A . 处! 以$M =M -显色剂为空白!
读取吸光度数值2A r ) 3&计算结果d 黄酮含量为*Y *[1H L! p 为, Y *-L! 平均回收率, **Y -L2A
r) 3&氨基酸的含量测定氨基酸的含量测定见表, &微量元素测定微量元素测定中! 标准溶液与
样品溶液酸介质浓度一致! 对实际样品平衡测定, *次R p 分别为, Y *J L" , Y J H L" , Y , -L" , Y 0H L" 1Y --L! 微量元素含量见表1&
第L 期袁晓等a 野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析
F N N
表! 七叶一枝花根茎中的游离氨基酸及其含量
" #$%&’" (&) *+, &+, -*. . /&+*
#) 12-1+,(&/(13*0#4#/121-名称含量6含量678名称78*+, &+, 5#*+, &+, 5#0&90&9天门冬氨酸
:; =’? 甘氨酸
@A B =>=I C 丙氨酸:A :=>=? =精氨酸:H @=>=’? 缬氨酸=>==C =>=’J =>’? ==>==N 名称
5#0&亮氨酸A D E 蛋氨酸KD " 色氨酸" H
9*+, &+, =>==F
从本研究结果可知]七叶一枝花根茎中含有丰薯蓣皂甙元含量也较高]并含有多种富的微量元素]
游离氨基酸]药效也较广泛]因此]可对该植物进行迁地保护]丰富其资源]并对其进行有针引种驯化]对性地开发[参考文献a
=>==L =>==F =>=’’赵子恩]彭辅松]蒋祖德>华中珍稀濒危植物^’_王诗云]
及其保存^科学出版社]>北京a ’J J F >’I J >K _
李小娜]王会教>重楼的研究及应用进展^? _边洪荣]
" B H M :A O H 5谷氨酸=>=’I 胱氨酸
=>==F 赖氨酸=>==P @A E 9B ; A B ; 脯氨酸=>=C ’异亮氨酸=>==L 氨基酸总I I
" *, #%
组氨酸=>==? 苯丙氨酸=>==L
G Q ;
表R 七叶一枝花根茎中的微量元素及含量
" #$%&? " (&) *+, &+, -*. , /#) &&%&0&+, -1+/(13*0#4#/121-微量元素名称
单位
检测结果
5#0&*. &%&0&+,
E +1, :+#%S , 1) #%/&-T %,
9#7=>N N KU 7=>? =V 7=>J P W &7=>? X +0U Y Z U C C >P
0U Y Z U
N C L
R >R 讨论
6’8七叶一枝花根茎中的甾体皂甙主要以薯蓣皂甙元的多种糖甙为主[我们用分光光度法测试七叶一枝花根茎中的薯蓣皂甙元含量为=\L ? 7]与韦建荣^’=_
报道的云南元阳‘绿川‘红河等地区云南重楼的薯蓣皂甙元含量相近]其含量都较高[湖北省鹤峰县科源农业技术开发有限责任公司已将七叶一枝花作为重点药材进行大面积栽培[今后我们的着重点是将野生七叶一枝花和人工栽植七叶一枝花的化学成分进行比较]
用分析测试等手段跟踪检测]使其达到规范化种植[另外]在本实验中我们用高压液相
色谱法]参照中国药典6? ===年版8
^’’_及其它资料]在样品的制备上有所改进]改进后的方法简单可行并且重现性好]适合基层单位分析测定[
6? 8微量元素测试结果显示七叶一枝花根茎中钙‘钾‘铁‘镁的含量都较高]其中钾的含量达到近’7]这些元素不仅对人体有重要的生理调节作用]
而且对植物自身也有重要的生理调节作用^’? _[
^b
_>中药材]? ==? ]Rc 6I 8a ? ’? ? =>^I _季申]周坛树]张锦哲>中药重楼和云南白药中抗肿
瘤细胞毒活性物质9/#) 1%%1+的测定^b _>中成药]? ==’]Rd 6? 8a ? ’? ’F >
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X (*T A @]B #+U 9@]A 1b e ]f g h i >G &4, #-#) ) (#/12&#+2*) , #-#) ) (#/12&1-*%#, &2. /*0j h k l mn o i p n q p i i h r #/>p s t t h t f t m l m#+2, (&1/4%#+,
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^L _叶燕萍]易金莉>
蚤休粉治疗女性生殖道衣原体感染的初步研究%%附P =例分析^b _>实用中西医结合杂志]’J J L ]&6C 8a ? ? ? ? N >
^N _邵利平>重楼疗肺系疾病^b
_>四川中医]? ===]! ’6N 8a ’F >
^P _石小枫]杜德极]谢定城]冉长清>重楼总皂甙对G ? ?
动物移植性肿瘤的影响^b
_>中草药]’J J ? ]! c 6? 8a I I L >
^J _K#b95]A #TW (>; , /T ) , T /&)(#/#) , &/13#, 1*+*.
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n o i p n q p i l h ^b _>j q p g o x q f #l m g k p
]’J P F ]R) 6N 8a’F L ’’F L F >
^’=_韦建荣]
董讯>重楼中薯蓣皂甙元的反相高效液相色谱法测定^b
_>色谱]’J J J ]! *6F 8a C J C J J >^’’_国家药典委员会>中华人民共和国药典6一部8^K _
>北京a 化学工业出版社]? ===>?’C >
^’? _胡家金]
肖浪涛]彭志红]洪亚辉>植物钾吸收基因及其遗传转化的研究进展^b _>生物技术通讯]?==I ]! ) 6? 8a ’L ’L P >
野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析
作者：
作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
袁晓， 袁萍， 严海燕， 李建强， 袁友明
袁晓,袁萍,严海燕,李建强(中国科学院武汉植物园,武汉,430074)， 袁友明(湖北省农业科学院,武汉,430064)
武汉植物学研究
JOURNAL OF WUHAN BOTANICAL RESEARCH2004，22(6)1次
1. 王诗云. 赵子恩. 彭辅松. 蒋祖德 华中珍稀濒危植物及其保存 1995
2. 边洪荣. 李小娜. 王会教 重楼的研究及应用进展[期刊论文]-中药材 2002(03)
3. 季申. 周坛树. 张锦哲 中药重楼和云南白药中抗肿瘤细胞毒活性物质Cracillin的测定[期刊论文]-中成药2001(02)
4. 叶燕萍. 易金莉 蚤休粉治疗女性生殖道衣原体感染的初步研究--附80例分析 1996(04)5. 邵利平 重楼疗肺系疾病[期刊论文]-四川中医 2000(07)
6. 石小枫. 杜德极. 谢定城. 冉长清 重楼总皂甙对H22动物移植性肿瘤的影响 1992(02)7. 韦建荣. 董讯 重楼中薯蓣皂甙元的反相高效液相色谱法测定[期刊论文]-色谱 1999(05)8. 国家药典委员会 中国药典(一部) 2000
9. 胡家金. 肖浪涛. 彭志红. 洪亚辉 植物钾吸收基因及其遗传转化的研究进展[期刊论文]-生物技术通讯 2003(02)
1.期刊论文 谭小明. 郭顺星. 周雅琴. 余丽莹. 缪剑华. TAN Xiao-Ming. GUO Shun-Xing. ZHOU Ya-Qin. YU Li-Ying. MIU Jian-Hua 七叶一枝花根的显微结构及其内生真菌分布研究 -菌物学报2006,25(2)
本文采用石蜡永久制片和光学显微摄像的方法对七叶一枝花Paris polyphylla根的显微结构及其内生真菌的分布进行了研究.结果表明,七叶一枝花的根茎由栓皮层、薄壁组织及维管组织组成,其中栓皮层由4层细胞组成;薄壁组织的细胞含有丰富的营养物质,其内有时分布有针状结晶束.不定根由表皮层、皮层、内皮层及维管束构成,表皮上有根毛,皮层所占根径的比例达80%以上;木质部为三原型.在七叶一枝花的根茎和不定根的皮层细胞中均有内生真菌的分布.真菌由表皮、外皮层侵入到皮层薄壁组织,在皮层薄壁细胞中形成菌丝结,并扩展成一定的侵染区域,部分皮层细胞中菌丝结已被消化吸收.内生真菌只侵染皮层薄壁细胞,不侵染维管柱.七叶一枝花可以通过消化细胞内的菌丝作为营养的来源之一.
2.学位论文 马德东 肺癌低灌注与乏氧的检测、干预及机制探讨 2009
第一部分肺癌低灌注与乏氧的检测与干预
肿瘤血管生成（angiogenesis）是指新生血管在肿瘤现有血管基础上形成的过程。研究证实，如果没有新生血管的支持，实体组织中的肿瘤生长直径不会超过2mm。Folkman J.等在转基因动物肿瘤模型的实验中发现，在原位癌向浸润癌发展的过程中，往往伴随着新生血管生成的开始。随后大量的临床研究也证实，血管生成与肿瘤的生长、恶变、转移，以及肿瘤病人的预后有着密切的关系。在过去的几年里，肿瘤的抗血管生成治疗引起了人们极大的研究兴趣，各种抗血管生成药物现已进入各期临床试验阶段。检测肿瘤内部血管生成可通过CT或MRI灌注显像或者SPECT等，肝脏、脑肿瘤的研究较多，而肺部肿瘤灌注的研究很少，目前的研究注意力集中在肿瘤的高灌注，针对肿瘤低灌注特别是肺部肿瘤低灌注的研究尚未见报道。
肿瘤低灌注与高灌注同样有着重要意义，微观方面，①肿瘤内低灌注限制了化疗药物的运送，导致药物在瘤体内不均匀分布达不到有效的最大治疗水平的血药浓度，特别对血管内半衰期短的药物更明显；②低灌注直接导致乏氧，糖酵解增加细胞内变酸，对一些化疗药物不敏感，乏氧促使细胞在基因和蛋白质水平发生改变使低灌注区对多种化疗药物耐药；③乏氧的瘤细胞也易于转移，近期的研究表明急性乏氧更易增加转移机会，新生血管结构缺陷，通透性增加以促进了肿瘤的转移。从宏观角度考虑，肿瘤的发生、生长、转移是肿瘤与宿主相互选择与适应的结果，低灌注与乏氧是肿瘤原发部位不能满足其生长需要，使得选择耐受乏氧的瘤细胞，并使瘤细胞脱落转移至其他部位寻找适宜生存的空间。单独抑制血管生成，我们很难阻断但血管生成的所有途径，而且这可能加速上述的选择，使得部分瘤细胞耐药、抵抗放疗，易于转移。
乏氧，作为低灌注的一个主要后果，分为急性和慢性乏氧，通过乏氧诱导因子（HIF）促进血管生成因子等基因的表达，促进血管生成，抑制抑癌基因如野生型P53表达，激活癌基因表达，肿瘤的恶性程度更高，耐受放化疗和化疗。乏氧的检测主要有PET和MRI两种方法，前者采用硝基咪唑类示踪剂，因其毒性较大，空间分辨率低（仅4-5mm），费用昂贵，应用前景不如MRI。最早用于脑功能研究的血氧水平依赖成像（BOLD）技术相对成熟安全，是较好的选择。针对乏氧的治疗措施包括适形放疗，乏氧细胞毒药物，乏氧细胞增敏剂，卡波金吸入等，这些方法多是针对改善肿瘤对放疗耐受，而改善乏氧区对化疗耐受的研究鲜见报道。
七叶一枝花，为百合科植物华重楼（Paris polyphylla Smith var.chinensis Hara）的干燥根茎，含甾体皂苷称为蚤休苷及蚤体土宁苷，后者水解后生成薯蓣苷。有用于抗肿瘤治疗的记载。其水提物及正丁醇提取物有体外抗肿瘤作用。我们的预试验显示七叶一枝花提取物可能对乏氧造成的肿瘤进展有特殊效果。
综上所述，肺癌低灌注乏氧区对于其生长、恶变、转移的重要意义，我们提出血管生成及氧供调节治疗（而不是单纯的抗血管治疗）的假设，通过兔肺移植瘤模型，改良验证检测低灌注和乏氧的方法，从而使预测转移等预后提供帮助；探索七叶一枝花调节肿瘤内部血流灌注，平衡氧供的可行性，以提高肺癌的治疗效果。 目的:
1.建立兔肺移植瘤模型，观察乏氧和灌注对预后的影响。 2.观察乏氧低灌注区域内瘤细胞生物学特性。
3.初步探讨七叶一枝花的抗肿瘤作用特别是对低灌注及乏氧的影响。
方法:
1.所有实验选用新西兰大白兔。采用瘤组织或细胞悬液直接注入肺及后下肢肌肉内建立移植瘤模型。
2.验证MRI灌注显像及BOLD氧水平显像的准确性。3只荷瘤兔行MRI灌注及BOLD检测后与OxyLite氧电极结果相比较。并比较灌注显像与BOLD氧水平显像的一致性。
3.MRI BOLD及灌注显象与肿瘤预后相关性检测。1）选取10只雄性新西兰大白兔全身麻醉后仰卧位固定，将0.1ml瘤组织悬液经右前胸壁穿刺注入。2）10天后行胸部MRI检查，观察成瘤情况。3）20天后行MRI灌注扫描及BOLD显像。4）30天时复查常规MRI测量肿瘤大小。5）45天复查MRI测量肿瘤大小，观察转移情况。继续喂养带瘤兔至死亡。
4.观察低灌注区和乏氧区瘤组织相对非低灌注、乏氧区生长和转移的差异。取3周左右下肢带瘤兔一只，行MRI灌注、BOLD及CT扫描，选取低灌注/乏氧区（A区）及非低灌注/乏氧区（B区），将MR与CT图像融合后，在CT引导下穿刺分别制成细胞悬液A、B备用。
4.1将上述细胞悬液A、B在低氧（1％O2，5％CO2）及正常氧分压下培养48h。四氮唑盐（MTT）检测细胞增值及ELISA组蛋白-DNA片断检测调亡，实时定量RT-PCR检测VEGF、HIF表达。
4.2取20只健康兔，按体重性别配比分为A、B两组，将AB悬液分别接种于右上肺内，每10天扫描观察其生长速度及转移情况，一月取活检标本通过real time RT-PCR检测VEGF、HIF表达。
5.观察七叶一枝花低灌注区及乏氧区的影响
5.1以方法4中的描述制备乏氧区细胞悬液，加入七叶一枝花水提液后在低氧及正常氧分压下培养48h，检测瘤细胞增殖及凋亡的变化。同时行实时定量RT-PCR检测VEGF、HIF表达的改变。
5.2取50只健康兔，随机分为5组OD.高剂量七叶一枝花灌胃、E.高剂量七叶一枝花灌胃加5-FU化疗，F.5-FU化疗，G.低剂量七叶一枝花灌胃，H.对照）按照前述方法观察七叶一枝花对肿瘤生长、转移及乏氧灌注的影响。 结果:
1.瘤组织悬液穿刺注入法肺癌模型建立成功率92％。有6％早期出现胸水或胸壁结节，予以剔出。 2.BOLD结果与OxyLite氧电极结果一致性较好。
3.a MRI灌注与BOLD有良好相关性，二者分布区域一致。b高灌注区体积比例与肿瘤大小，生长速度呈正相关，c低灌注区体积及程度与转移高度正相关，与生存期成负相关。灌注值离均差大小与转移率呈正相关，与生存期呈负相关。BOLD高信号区比例与肿瘤转移、生存期明显相关。
4.1）来源于乏氧区的瘤组织（A组）与源于非乏氧区的瘤组织（B组）在低氧条件下培养生长活性显著高于非乏氧区对照细胞。RT-PCR结果显示A组HIF1显著高于B组，VEGF亦高于B组，但不如HIF1升高显著。MTT法细胞增殖速度A组高于B组（P
2）A组移植瘤生长速度快于B组A组荷瘤兔生存期短于B组（P
5.1）七叶一枝花提取液可显著降低正常氧分压下瘤细胞增值率并增加瘤细胞凋亡，这种作用在低氧条件下更为明显。RT-PCR结果显示七叶一枝花提取液可降低低氧条件下瘤细胞VEGF、HIF表达的水平。
2）单纯七叶一枝花治疗组肿瘤大小与对照组相比明显减小，但不如5-FU组明显，但前者转移率低于5FU治疗（F）组。七叶一枝花治疗组（D、E、G组）乏氧低灌注区面积比例较其他两组显著降低。前者灌注值离均差亦有明显降低。E组治疗效果最佳。 结论:
1.VX2瘤组织悬液穿刺法建立兔肺移植瘤方法稳定可靠。
2.MRI检测乏氧及低灌注面积比例及离均差大小是预测肿瘤预后的满意指标。 3.乏氧低灌注区的肿瘤细胞有独特生物学特性，是治疗和预防复发的重点。 4.七叶一枝花是一种有希望的干预肿瘤低灌注和乏氧的中药。
3.期刊论文 刘学敏. 陈柏松 七叶一枝花中毒3例 -咸宁学院学报（医学版）2009,23(2)
七叶一枝花为百合科植物七叶一枝花(Parispolyphylla)的干燥根茎,因其叶多为7~10片轮生于茎项,而花单生于轮生叶片之上,故得此名.又因花的外轮花被片形大,似叶状.内轮花被片退化呈长线状,成熟时金黄色,故又名"重楼"、"金线吊重楼"、"灯台七".
4.期刊论文 陆善旦. 王健 七叶一枝花连年热销探因 -中国现代中药2008,10(5)
七叶一枝花,又叫枝花头、七叶莲、蚤休.百合科植物七叶一枝花的干燥根茎.
5.学位论文 崔艳 中药七叶一枝花某些活性成分化学结构研究 2006
本课题针对中药七叶一枝花的活性成分进行了系统的提取分离和结构研究。采用传统与现代技术相结合的方法，在实验中使用硅胶柱层析、大孔吸附树脂层析、葡聚糖凝胶层析和反相硅胶柱层析、薄层层析和重结晶等分离方法，从七叶一枝花根茎部分共提取分离得到6个纯净化合物，经波谱分析和化学方法确定它们分别为：CH3(CH2)14COOH(A)、C57H104O6(B)、25R-薯蓣皂苷元-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯呋喃糖基-(1→4)-β-D-葡萄吡喃糖苷(C)、25R-薯蓣皂苷元-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→4)-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→4)-[α-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)]-β-D-葡萄吡喃糖苷(D)、25R-偏诺皂苷元-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯呋喃糖基-(1→4)-β-D-葡萄吡喃糖苷(E)和薯蓣皂苷元(F)。
在化合物的结构研究中，除使用红外、质谱，还综合运用了各种核磁共振技术(1D、2D-NMR)，尤其HSQC、HMBC、1H-1HCOSY和选择性1DTOCSY技术的使用，使化合物的结构归属更加准确可靠。
运用X射线单晶衍射技术对首次发现的皂苷元(F)晶体进行了结构研究，得到了皂苷元的晶体结构及其分子在空间的存在形式。
本课题还首次利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱联用技术研究了七叶一枝花中的薯蓣皂苷成分，获取了它们的保留特性及质谱裂解规律等信息。
6.期刊论文 黄珊珊. 杨平. 班荔. 班殿举 ABT生根粉在七叶一枝花增产栽培中的应用试验 -中国野生植物资源2008,27(5)
七叶一枝花是一种运用广泛价值高的珍稀药用植物资源.概述了七叶一枝花的药用价值和应用前景,运用ABT生根粉的特性对七叶一枝花的增产栽培进行试验性的研究,利用ABT生根粉所具有的补充外源激素与促进植物体内内源激素合成的功效,促进七叶一枝花的根茎快速生长,缩短商品七叶一枝花的生产周期,达到可持续利用目的.
7.期刊论文 周贻谋 七叶一枝花善治痈疮 -家庭医学2006,""(11)
中药七叶一枝花,其处方名叫蚤体,又名重楼或草河车,为百合科多年生草本植物蚤体及同属多种植物的根茎.本品性微寒而味苦,归肝经,能清热解毒,消肿止痛,熄风定惊.常用于治疗痈肿疔疮、高热神昏抽搐、外伤出血肿痛等症.中曾有这样的记载:"七叶一枝花,深山是我家,痈疽如遇着,一似手拈拿."从这类民间谚语足可以看出,七叶一枝花确系治疗痈肿疮疖之要药.
8.学位论文 刘伯平 重楼HPLC指纹图谱研究 2009
重楼为常用中药，药用历史悠久，又称蚤休、七叶一枝花等。《中华人民共和国药典》(2005版)一部记载：“重楼为百合科植物云南重楼ParispolyphyllaSmith var.yunnanensis(Franch．)Hand.-Mazz或七叶一枝花Paris polyohylla Smithvar. chinensis(Franch) Hara的干燥根茎”。
本文首先建立了重楼药材中重楼皂苷I和II的含量测定方法，对来自各自然保护区的不同种源重楼植株和购买的商品重楼药材进行了分析测定，若按《中华人民共和国药典》(2005版)标准衡量，自然保护区植株中仅有滇重楼I、II根茎，商品药材中仅有重楼①、③和重楼⑧符合要求。结果表明，不同来源的药材中这两种皂苷成分的含量差异较大，证实以这两种皂苷为指标成分进行质量控制并不合理，不能全面真实地反映药材品质。
为了寻求较合理的品质评价方法，本文建立了其高效液相色谱指纹图谱分析方法，对供试品溶液制备方法进行了筛选，并以分离度、分析时间和色谱峰数等为指标对色谱条件(包括流动相、检测波长、色谱柱、进样量、梯度洗脱程序等)进行了优化。
本文接着运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》(研究版)软件对所获得的色谱图进行了分析评价，得出如下结论：(1)海拔差距在200m之内的药材品质基本一致；(2)根茎中许多化学成分在茎叶中也有体现，但某些品种重楼植株茎叶能否代替根茎入药，以及是否应和根茎区别使用
等仍有待于进一步研究；(3)来自道地产区云南的药材品质较好；(4)目前市面上流通的商品重楼药材品质参差不齐，需严格控制，最好能规范其基源。同时作为自然保护区生物标本整理整合及共享项目的子课题研究，为重楼药材的后期研究和进一步的开发利用等提供前期研究基础数据。
9.期刊论文 梅中青. 梅益丽 七叶一枝花野生变人工栽培的技术研究 -中国中药杂志2004,29(12)
七叶一枝花Paris polyphylla Simth,异名有重楼,蚤休,白蚤,独叶一枝花等.为百合科重楼属多年生草本植物.同属植物有10余种,分别为华重楼,金线重楼,轮叶王孙等.分布于我国的浙江、江苏、江西等地.其药用部分为根茎,有小毒,具有清热解毒,消肿止痛等功效.临床用于流行性乙型脑炎,阑尾炎,蛇虫咬伤等.
10.期刊论文 赵君英. Zhao Junying 七叶莲的研究进展 -光明中医2009,24(11)
七叶莲(Paris polyphylla Simth)为百合科重楼属,别名:七叶一枝花、草河车、重楼、蚤休等.多年生草本植物,高30～100cm.喜欢生长在中海拔高度的山坡、阔叶林下或溪边、灌木丛下阴湿处.地下根茎横生,肥厚,黄褐色,有斜行环节,并生须根.茎单一,无毛.叶4～9片,通常为7片,轮生茎顶;叶片长卵形.春夏间在轮生叶的中心抽出花梗,顶端生一朵花,故名七叶一枝花.秋季果熟;葫果球形,内有多数鲜红色种子.广泛分布于福建、贵州、广东、广西、浙江、台湾、四川、陕西、云南等地.
1. 李燕. 丁春邦. 张利. 杨瑞武. 周永红 四川不同产地重楼中无机元素的测定[期刊论文]-中草药 2009(6)
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下载时间：2010年10月10日