实验二十八 亚甲蓝分光光度法测定阴离子洗涤剂
一﹑实验目的
1. 学习萃取和索氏提取的基本操作。 2. 学习测定水样中阴离子洗涤剂的方法。
二﹑实验原理
阴离子洗涤剂主要指直链烷基苯磺酸钠和烷基磺酸钠类物质。洗涤剂的污染会造成水面产生不易消失的泡沫，并消耗水中的溶解样。
水中阴离子洗涤剂测定方法，常用的有亚甲蓝分光光度法和液相色谱法，前者操作简便，但选择性较差，后者需要有专用设备。
阴离子染料亚甲蓝与阴离子表面活性剂(包括直链烷基苯磺酸钠﹑烷基磺酸纳和脂肪醇硫酸钠)作用，生成蓝色的离子对化合物，这类能与亚甲蓝作用的物质统称亚甲蓝活性物质（MBAS）。生成的显色物可被三氯甲烷萃取，其色度与浓度成正比，并可用分光光度计在波长652nm 处测量三氯甲烷层的吸光度。
由于测定对象是水中溶解态的阴离子表面活性剂，样品在测定前需经中速定性滤纸过滤以除去悬浮物。因此，吸附在悬浮物上的表面活性剂不计在内。
三﹑实验仪器
1．分光光度计 2．250mL分液漏斗
3．索氏抽提器（150mL平底烧瓶，φ35×160 mm抽提桶，蛇型冷凝管）。
四﹑试剂
1．4%氢氧化钠溶液 2．3%硫酸 3．三氯甲烷
4．直链烷基苯磺酸钠标准储备溶液：称取0.100g标准物LAS(平均分子量344.4，称准至0.001g)，溶于50mL水中，转移到100mL容量瓶中，稀释至标线，混匀，每毫升含1.00mgLAS。保存于4℃冰箱中。如需要，每周配制一次。 5．直链烷基苯磺酸钠标准溶液：准确吸取10.00mL直链烷基苯磺酸钠标准储备溶液，用水稀释至1000mL，每毫升含10.0μgLAS。当天配制。
6．亚甲蓝溶液：称取50g磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）置于烧杯中，溶于水，缓慢加入6.8mL浓硫酸，混匀，转移入1000mL容量瓶中。另称取30mg亚甲蓝（指示剂级），用50mL水溶解后也移入容量瓶中，用水稀释至标线，摇云。此溶液储
于棕色试剂瓶中。
7．洗涤液：称取50g磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）置于烧杯中，溶于水，缓慢加入6.8mL浓硫酸，用水稀释至1000mL。
8．酚酞指示剂溶液：将1.0g酚酞溶于50mL乙醇，然后边搅拌边加入50mL水，滤去沉淀物。
9．玻璃棉或脱脂棉：在索氏提取器中，用三氯甲烷提取4hr，取出干燥，保存在清洁的具塞玻璃瓶中备用。
五﹑实验步骤
1．校准曲线的绘制
取一组分液漏斗10个，分别加入100，99，97，95，93，91，89，87，85，80mL水，然后分别移入0，1.00，3.00，5.00，7.00，9.00，11.00，13.00，15.00，20.00mL直链烷基苯磺酸钠标准溶液，摇匀。按“水样测定”步骤操作，以测得的吸光度扣除空白实验值（零浓度标准溶液的吸光度）后，与相应的LAS量绘制校准曲线。 2.试样体积
为了直接分析水和废水样,应根据预计的亚甲蓝表面活性物质的浓度选用试样体积,如下表:
当预计的MBAS浓度超过2mg/L时,按上表选取试样量,用水稀释至100mL。 3．水样测定
将待测水样(100mL)移入分液漏斗中，以酚酞为指示剂，逐滴加入4%氢氧化钠溶液至水溶液呈紫红色，再滴加3%硫酸到紫红色刚好消失。
加入25mL亚甲蓝溶液，摇匀后再加入10mL三氯甲烷，激烈振摇30s，注意放气。过分的振摇会发生乳化现象，必要时，可加入少量异丙醇（小于10mL）以破乳（标准系列亦应加入相同体积的异丙醇）。再慢慢旋转分液漏斗，使滞留在壁上的三氯甲烷液珠降落，静置分层。
将三氯甲烷层放入预先盛有 50mL洗涤液的第二个分液漏斗内，用数滴三氯甲烷洗第一个分液漏斗的颈管。重复萃取三次，每次用10mL三氯甲烷。合并所有三氯甲烷萃取液至第二个分液漏斗中，激烈摇动30s，静置分层。将三氯甲烷层通过玻璃棉或脱脂棉放入50mL容量瓶中，再用三氯甲烷萃取洗涤液两次（每次用量5mL），此三氯甲烷层也并入容量瓶中，加三氯甲烷到标线，摇匀。
在652nm处，以三氯甲烷为参比，测定样品﹑标准系列和空白实验的吸光度。
测定时应使用相同光程的比色皿。
以样品的吸光度减去空白实验的吸光度后，从校准曲线上查得LAS的含量。 4．空白实验
按“水样测定”步骤进行空白实验，仅用100mL水代替试样。在实验条件下，以10mm光程比色皿，空白实验的吸光度不应超过0.02。否则应仔细检查器皿和试剂是否有污染。
六﹑计算
本方法用亚甲蓝活性物质报告结果。以LAS计（平均分子量为344.4）。
m
C
V
式中：C—水样中亚甲蓝活性物质的浓度，mg/L； V—水样体积，mL；
M—从校准曲线上读取的LAS量，μg。
数据列表表示如下:
1．标准曲线的绘制:
2测定:
七﹑讨论 八﹑注意事项
1．实验室用玻璃器皿不能用各类洗涤剂清洗。使用前先用水彻底清洗，然后用（1+9）盐酸-乙醇洗涤，最后用水冲洗干净。
2．绘制校准曲线和水样的测定，应时用同一批三氯甲烷﹑亚甲蓝溶液和洗涤液。
3.分液漏斗的活塞不得用油脂润滑，可在使用前用三氯甲烷润湿。
实验二十八 亚甲蓝分光光度法测定阴离子洗涤剂
一﹑实验目的
1. 学习萃取和索氏提取的基本操作。 2. 学习测定水样中阴离子洗涤剂的方法。
二﹑实验原理
阴离子洗涤剂主要指直链烷基苯磺酸钠和烷基磺酸钠类物质。洗涤剂的污染会造成水面产生不易消失的泡沫，并消耗水中的溶解样。
水中阴离子洗涤剂测定方法，常用的有亚甲蓝分光光度法和液相色谱法，前者操作简便，但选择性较差，后者需要有专用设备。
阴离子染料亚甲蓝与阴离子表面活性剂(包括直链烷基苯磺酸钠﹑烷基磺酸纳和脂肪醇硫酸钠)作用，生成蓝色的离子对化合物，这类能与亚甲蓝作用的物质统称亚甲蓝活性物质（MBAS）。生成的显色物可被三氯甲烷萃取，其色度与浓度成正比，并可用分光光度计在波长652nm 处测量三氯甲烷层的吸光度。
由于测定对象是水中溶解态的阴离子表面活性剂，样品在测定前需经中速定性滤纸过滤以除去悬浮物。因此，吸附在悬浮物上的表面活性剂不计在内。
三﹑实验仪器
1．分光光度计 2．250mL分液漏斗
3．索氏抽提器（150mL平底烧瓶，φ35×160 mm抽提桶，蛇型冷凝管）。
四﹑试剂
1．4%氢氧化钠溶液 2．3%硫酸 3．三氯甲烷
4．直链烷基苯磺酸钠标准储备溶液：称取0.100g标准物LAS(平均分子量344.4，称准至0.001g)，溶于50mL水中，转移到100mL容量瓶中，稀释至标线，混匀，每毫升含1.00mgLAS。保存于4℃冰箱中。如需要，每周配制一次。 5．直链烷基苯磺酸钠标准溶液：准确吸取10.00mL直链烷基苯磺酸钠标准储备溶液，用水稀释至1000mL，每毫升含10.0μgLAS。当天配制。
6．亚甲蓝溶液：称取50g磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）置于烧杯中，溶于水，缓慢加入6.8mL浓硫酸，混匀，转移入1000mL容量瓶中。另称取30mg亚甲蓝（指示剂级），用50mL水溶解后也移入容量瓶中，用水稀释至标线，摇云。此溶液储
于棕色试剂瓶中。
7．洗涤液：称取50g磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）置于烧杯中，溶于水，缓慢加入6.8mL浓硫酸，用水稀释至1000mL。
8．酚酞指示剂溶液：将1.0g酚酞溶于50mL乙醇，然后边搅拌边加入50mL水，滤去沉淀物。
9．玻璃棉或脱脂棉：在索氏提取器中，用三氯甲烷提取4hr，取出干燥，保存在清洁的具塞玻璃瓶中备用。
五﹑实验步骤
1．校准曲线的绘制
取一组分液漏斗10个，分别加入100，99，97，95，93，91，89，87，85，80mL水，然后分别移入0，1.00，3.00，5.00，7.00，9.00，11.00，13.00，15.00，20.00mL直链烷基苯磺酸钠标准溶液，摇匀。按“水样测定”步骤操作，以测得的吸光度扣除空白实验值（零浓度标准溶液的吸光度）后，与相应的LAS量绘制校准曲线。 2.试样体积
为了直接分析水和废水样,应根据预计的亚甲蓝表面活性物质的浓度选用试样体积,如下表:
当预计的MBAS浓度超过2mg/L时,按上表选取试样量,用水稀释至100mL。 3．水样测定
将待测水样(100mL)移入分液漏斗中，以酚酞为指示剂，逐滴加入4%氢氧化钠溶液至水溶液呈紫红色，再滴加3%硫酸到紫红色刚好消失。
加入25mL亚甲蓝溶液，摇匀后再加入10mL三氯甲烷，激烈振摇30s，注意放气。过分的振摇会发生乳化现象，必要时，可加入少量异丙醇（小于10mL）以破乳（标准系列亦应加入相同体积的异丙醇）。再慢慢旋转分液漏斗，使滞留在壁上的三氯甲烷液珠降落，静置分层。
将三氯甲烷层放入预先盛有 50mL洗涤液的第二个分液漏斗内，用数滴三氯甲烷洗第一个分液漏斗的颈管。重复萃取三次，每次用10mL三氯甲烷。合并所有三氯甲烷萃取液至第二个分液漏斗中，激烈摇动30s，静置分层。将三氯甲烷层通过玻璃棉或脱脂棉放入50mL容量瓶中，再用三氯甲烷萃取洗涤液两次（每次用量5mL），此三氯甲烷层也并入容量瓶中，加三氯甲烷到标线，摇匀。
在652nm处，以三氯甲烷为参比，测定样品﹑标准系列和空白实验的吸光度。
测定时应使用相同光程的比色皿。
以样品的吸光度减去空白实验的吸光度后，从校准曲线上查得LAS的含量。 4．空白实验
按“水样测定”步骤进行空白实验，仅用100mL水代替试样。在实验条件下，以10mm光程比色皿，空白实验的吸光度不应超过0.02。否则应仔细检查器皿和试剂是否有污染。
六﹑计算
本方法用亚甲蓝活性物质报告结果。以LAS计（平均分子量为344.4）。
m
C
V
式中：C—水样中亚甲蓝活性物质的浓度，mg/L； V—水样体积，mL；
M—从校准曲线上读取的LAS量，μg。
数据列表表示如下:
1．标准曲线的绘制:
2测定:
七﹑讨论 八﹑注意事项
1．实验室用玻璃器皿不能用各类洗涤剂清洗。使用前先用水彻底清洗，然后用（1+9）盐酸-乙醇洗涤，最后用水冲洗干净。
2．绘制校准曲线和水样的测定，应时用同一批三氯甲烷﹑亚甲蓝溶液和洗涤液。
3.分液漏斗的活塞不得用油脂润滑，可在使用前用三氯甲烷润湿。