实验4乳糖牛肉膏 蛋白培养胨的基制备 高与压汽蒸菌
灭
乳牛糖肉膏蛋白培养基胨制的 高备蒸压汽灭菌 ：附实验主要玻用璃皿的器包扎
乳
糖肉膏牛白胨蛋养基的培备制
实验目的 验实原理 剂试与材 器验实步 骤考思
题实验目的
确明培养基配制原的理通 过对基础培基的养配制掌，握制培养配基的一 般方和步法骤
验实原理
养基培人工配制是适的合生微物生长繁或积累殖 代谢物的产营养基。用质培养以、分离、定鉴保、存种微生物各或积累代谢产物 培养。种基类繁。多无但论何如一，般均应 有水含、分碳、源源氮、源、能无盐以及生长机因素。等 本验实所用的糖乳肉牛膏蛋白胨养基培是一应种广用 的细泛菌础培基基养由于。种培养这中基有含般一细生长菌繁殖 需要的所最本基营的物质，所养以供可微生物生作长殖繁之 用。 础基养培含基有肉膏、蛋白牛、胨NaCl和。其中牛肉膏 为微物提供碳源、能源生、酸盐磷维和生，蛋白素胨要提主 氮供和源生维，素Na而l提供C无机。盐
糖牛乳肉膏白胨蛋培基的养体配具如方下
：次本实验每组配量需
：糖乳5. 0g 肉牛粉 4膏0.g 酵母 粉50g. 蛋白胨10 .g0葡 糖 萄10.0g aNl 5C0g. 脂粉琼 210g.水
乳糖1.25 牛 肉粉膏 1.0g0酵 粉母1 25.g 蛋胨 2.白5g 葡糖萄 25.g aCNl 12.5 琼g粉 脂3.0g
0
实
验剂试器与
材剂试 ：糖，乳牛膏粉，肉母粉，酵蛋胨，NaC白l，葡糖，萄琼 脂，1mol/L 粉aNOH1，molL/H Cl； 器：材 试管，角瓶，烧三，量筒，玻杯璃棒，养培基分装器， 平天，角匙，牛压蒸高灭菌锅，气H试纸(pp5H5～9..)0,棉花，牛皮 ，记纸笔号麻绳，纱，布等
。
实验
骤步
1
称、量按 养基培配方比例次 准确地依称葡取糖萄乳、、酵母糖粉 、肉牛粉、蛋膏白胨Na、l等 放C入杯烧中。
药品时严防称品混药杂一，牛把匙用角于种药一，品称或取种一品 药后，洗净擦干，再称取，一药品另瓶盖也。要盖不。错
、2化溶在 上烧杯中先加入少述所于要的 水量需，玻棒搅用匀然，，后在电上炉加使热 其溶解。 药品待全溶解完后，补水充到所 的需体总积 。称将的好脂放琼已溶的药入品中 ，再热溶加，最化补后足损所失的分水在制。备用 角瓶盛三体固培养时基，一般也先将 可定量的一体培液基养装分三角于瓶，中然 后1按2％.2～.0％的量琼脂直接分别加入各将三 角瓶中，必不加热溶化，是灭而和菌加热溶 化同进行步，省时节。间
在脂溶化琼程中过应控制，力火以免，养培基沸因腾而出溢器。容 同，需不时搅拌断以防琼脂糊底，焦，烧配培养制时基，可不用 或铁锅铜加溶化热，免以子进离培入养中，影响细基菌长。
3生调、p 在未H调Hp
前,用精先密Hp试纸量培测养的基原pH,如始果偏, 酸用管滴培养基中向逐滴加入1mol/LN OHa边，加边拌,并随搅用pH时试 纸测p其,H直pH达至本实验需所的68.反之,.1用ml/oLHC l行调节。进
Hp要不过头，调避以回调而免影培养基响内各离的子度浓 。配制H低的p琼脂养基时，培若预调好先p并在H高压气下灭蒸， 则菌脂琼因解水不凝能固此时。应培养基将的分和琼脂成分开菌 灭后再混合或，中在pH性件条灭下菌再调，pH。
整5
分、装 用培养利基分装将器制的配养培分基入试装内或管三角瓶内 。加的量试管样以高其度的14/右为左宜
。
分装程过，中意不要注使养基培沾管在瓶(口)，上免以沾棉塞而污 引污起。（分染完装后马上毕洗）
清
、加塞6 培养基装分毕完后，在试管 口或角烧三瓶口上塞上 棉塞或硅胶(塞试及管 帽等)，阻止以外界生物进 微入养培内而造成污染，基 保并有证良好的通性能气。
7
包、 加塞后，扎全部将试 放管入量杯。中用记号注笔明 养培名称、基组、配别 制日期三。烧角加瓶塞，外后 包皮牛纸用，绳以活结形 麻式好扎，使时容易用解， 同开用样记笔号注培养基名明称、组 、别制日期配 。意：注把记号别在瓶塞写、 试管、帽杯上。
量本分部见详附：实验录主要用璃玻皿器包的扎
次实本各容验封器口法方
•所 试有装管样用品塑料试管帽口 •封 角烧三瓶硅胶用塞封 • 口备自璃玻瓶用层二铝箔口
封
、灭菌8 上述培养将基以.031MaP1，21 ，高压蒸气℃菌灭30mi n。
9、搁斜面置待 灭菌试的培管基养 至冷50左右℃(以防斜上冷 凝面太多)，水将试口端管搁在 棒玻其他合或适度的高具上，器搁 置斜面的度长不超过以管 试长的总一为宜。半
0、无菌1检查 已将灭培养基菌入放3 7℃的室温中养培24 ～84h ，看否有是杂长菌出以检查灭， 是菌否底。
高压蒸彻汽菌
实灭目验的实 原理 验验器材 实实验步 骤考思
题
实验目的了
高解蒸汽压灭菌的本基理原应用及范围 学高习压汽蒸灭菌操的作方
法
实原理
验压蒸汽高菌是将待灭菌灭的品物放在个一闭密加的压 灭菌锅，内过通热加使灭，锅菌套隔的间沸腾水而产生蒸 气。水待蒸急剧地将锅内的冷气空从气排阀气驱尽中，后 关闭排气阀然，继加热，续此时由于汽蒸不能出逸，增而了加锅 内的力，压而使沸从增点，得到高高于100的℃度温致导 体蛋菌质白凝变性而达固到菌灭的目的
。本实
验用所手提的式灭锅菌结如构：下
6
54321
71
2
1
01
1
1 83 419
D
S-X28B0自动（）
内部构
造5压力.表
1.下手柄
.2上柄手（内有全安锁） 3.汽孔 4.放汽阀 6排安全阀. 11调温旋钮 7..桶 身8.座底9. 电开关源1 .保3温
1灯
0.放阀 14.时间水钮旋
1
.2加灯热
实验器材手提
高式压蒸灭汽菌锅 自配培。养及其基所需他灭 物品。菌
实
验步骤1、
先将内层锅首取出，用纯水再外层锅的水将补齐到面与角三架搁平。相
2、放
内层回，并锅装入待菌灭品。
物本实验次需灭菌的物为品
0：85.％NCa ×l6
9
lm（ 配） 自培皿 ×1养
100lm移液管 1 5×m斜面培养l 三基角装瓶302lm培 养 基×4 1×
意注要装不太得，挤免以妨蒸碍流通汽影响灭而菌果效三角。烧与瓶自备大口 璃玻
×瓶1试管 端口不均与要桶接触，以壁免冷水凝淋包湿的口纸透入棉而。塞
3加、盖并将盖上，的气软管插入排内层锅排气槽内的。顺时旋针拧转 紧。箭红头朝。右
1
2
3
4
、打电开源开，调节温关度保和温间时同时，开排打气阀排气。
5、水沸待腾将冷气空全排尽完 （后汽排五分钟）关上，排阀气。 让锅内的度温随蒸汽压增力加 而逐上升。渐当锅内压力上升到的 所压需力，时维压持力至所时 间。 本实需在1验.30MPa， 11℃2件下灭条菌3m0ni。
6、灭时间到菌后切断，电源，让菌锅内温灭度自下降，然当压表力 的力降压至“”0时，开打排气，阀盖将子打开缝，一利用锅的余内热 烘干灭物品，取出灭菌物菌。品
、7取出的将灭菌培养放基37℃温入培箱2养4h。查检无杂若生菌， 即可使长。
用
实验
用主要玻器皿璃包的
1扎、培皿 养养皿培常通用旧报包 紧。纸般一5取～01培套养皿作 包。一注意养培皿的取应一向致。包 时，装一卷滚边一， 边将头的两报往内覆折。
纸尾收将时出来的露头纸 一并入里面折。 后最将，好包的培养 皿在手放上轻轻动，以不晃 发出璃的玻撞声为碰妥。
2、
移管液包装 ，先在干前燥液移管距粗头顶端约0.其5c处塞一 m约1段5.mc的长棉花 。装时包，先移将液尖管端放斜在纸报条近的端左与，报 纸约呈4°5，并将角左多余端的段一纸覆折在吸上。管
再
整根将移液卷管报入，纸 端多余的右报纸打一结。 小包的好移管其液嘴管应端是钝头该。的
、打3 打结结时，用左手大先 拇摁住指棉绳的头一，然右 后手住绳拉的外一另在端口上 瓶绕圈最后。打活一结。 第一圈应在绕拇指上， 大方以便面打结。后
思考
题1
、养培配好基，为什么必须后即立灭？菌何如检灭菌查的培养基 后无是菌的 ？、在配2制培养的操基作程中应过意哪些注题问？什为？
么3、
压高汽蒸菌灭始之开，为前什要么将锅内的冷气排尽空灭？完 毕后菌，什么待压为降力到低“”时才0能打开排阀气开，取盖物 ？4、在用使高压汽蒸灭菌时，怎样锅杜一绝不切安全素因 ？5、菌在灭生微实物验操作有中何要作用重？ 6、曲黑
霉的子与芽孢杆孢菌的胞对子的抗热性个更哪强为什？么？
实验4乳糖牛肉膏 蛋白培养胨的基制备 高与压汽蒸菌
灭
乳牛糖肉膏蛋白培养基胨制的 高备蒸压汽灭菌 ：附实验主要玻用璃皿的器包扎
乳
糖肉膏牛白胨蛋养基的培备制
实验目的 验实原理 剂试与材 器验实步 骤考思
题实验目的
确明培养基配制原的理通 过对基础培基的养配制掌，握制培养配基的一 般方和步法骤
验实原理
养基培人工配制是适的合生微物生长繁或积累殖 代谢物的产营养基。用质培养以、分离、定鉴保、存种微生物各或积累代谢产物 培养。种基类繁。多无但论何如一，般均应 有水含、分碳、源源氮、源、能无盐以及生长机因素。等 本验实所用的糖乳肉牛膏蛋白胨养基培是一应种广用 的细泛菌础培基基养由于。种培养这中基有含般一细生长菌繁殖 需要的所最本基营的物质，所养以供可微生物生作长殖繁之 用。 础基养培含基有肉膏、蛋白牛、胨NaCl和。其中牛肉膏 为微物提供碳源、能源生、酸盐磷维和生，蛋白素胨要提主 氮供和源生维，素Na而l提供C无机。盐
糖牛乳肉膏白胨蛋培基的养体配具如方下
：次本实验每组配量需
：糖乳5. 0g 肉牛粉 4膏0.g 酵母 粉50g. 蛋白胨10 .g0葡 糖 萄10.0g aNl 5C0g. 脂粉琼 210g.水
乳糖1.25 牛 肉粉膏 1.0g0酵 粉母1 25.g 蛋胨 2.白5g 葡糖萄 25.g aCNl 12.5 琼g粉 脂3.0g
0
实
验剂试器与
材剂试 ：糖，乳牛膏粉，肉母粉，酵蛋胨，NaC白l，葡糖，萄琼 脂，1mol/L 粉aNOH1，molL/H Cl； 器：材 试管，角瓶，烧三，量筒，玻杯璃棒，养培基分装器， 平天，角匙，牛压蒸高灭菌锅，气H试纸(pp5H5～9..)0,棉花，牛皮 ，记纸笔号麻绳，纱，布等
。
实验
骤步
1
称、量按 养基培配方比例次 准确地依称葡取糖萄乳、、酵母糖粉 、肉牛粉、蛋膏白胨Na、l等 放C入杯烧中。
药品时严防称品混药杂一，牛把匙用角于种药一，品称或取种一品 药后，洗净擦干，再称取，一药品另瓶盖也。要盖不。错
、2化溶在 上烧杯中先加入少述所于要的 水量需，玻棒搅用匀然，，后在电上炉加使热 其溶解。 药品待全溶解完后，补水充到所 的需体总积 。称将的好脂放琼已溶的药入品中 ，再热溶加，最化补后足损所失的分水在制。备用 角瓶盛三体固培养时基，一般也先将 可定量的一体培液基养装分三角于瓶，中然 后1按2％.2～.0％的量琼脂直接分别加入各将三 角瓶中，必不加热溶化，是灭而和菌加热溶 化同进行步，省时节。间
在脂溶化琼程中过应控制，力火以免，养培基沸因腾而出溢器。容 同，需不时搅拌断以防琼脂糊底，焦，烧配培养制时基，可不用 或铁锅铜加溶化热，免以子进离培入养中，影响细基菌长。
3生调、p 在未H调Hp
前,用精先密Hp试纸量培测养的基原pH,如始果偏, 酸用管滴培养基中向逐滴加入1mol/LN OHa边，加边拌,并随搅用pH时试 纸测p其,H直pH达至本实验需所的68.反之,.1用ml/oLHC l行调节。进
Hp要不过头，调避以回调而免影培养基响内各离的子度浓 。配制H低的p琼脂养基时，培若预调好先p并在H高压气下灭蒸， 则菌脂琼因解水不凝能固此时。应培养基将的分和琼脂成分开菌 灭后再混合或，中在pH性件条灭下菌再调，pH。
整5
分、装 用培养利基分装将器制的配养培分基入试装内或管三角瓶内 。加的量试管样以高其度的14/右为左宜
。
分装程过，中意不要注使养基培沾管在瓶(口)，上免以沾棉塞而污 引污起。（分染完装后马上毕洗）
清
、加塞6 培养基装分毕完后，在试管 口或角烧三瓶口上塞上 棉塞或硅胶(塞试及管 帽等)，阻止以外界生物进 微入养培内而造成污染，基 保并有证良好的通性能气。
7
包、 加塞后，扎全部将试 放管入量杯。中用记号注笔明 养培名称、基组、配别 制日期三。烧角加瓶塞，外后 包皮牛纸用，绳以活结形 麻式好扎，使时容易用解， 同开用样记笔号注培养基名明称、组 、别制日期配 。意：注把记号别在瓶塞写、 试管、帽杯上。
量本分部见详附：实验录主要用璃玻皿器包的扎
次实本各容验封器口法方
•所 试有装管样用品塑料试管帽口 •封 角烧三瓶硅胶用塞封 • 口备自璃玻瓶用层二铝箔口
封
、灭菌8 上述培养将基以.031MaP1，21 ，高压蒸气℃菌灭30mi n。
9、搁斜面置待 灭菌试的培管基养 至冷50左右℃(以防斜上冷 凝面太多)，水将试口端管搁在 棒玻其他合或适度的高具上，器搁 置斜面的度长不超过以管 试长的总一为宜。半
0、无菌1检查 已将灭培养基菌入放3 7℃的室温中养培24 ～84h ，看否有是杂长菌出以检查灭， 是菌否底。
高压蒸彻汽菌
实灭目验的实 原理 验验器材 实实验步 骤考思
题
实验目的了
高解蒸汽压灭菌的本基理原应用及范围 学高习压汽蒸灭菌操的作方
法
实原理
验压蒸汽高菌是将待灭菌灭的品物放在个一闭密加的压 灭菌锅，内过通热加使灭，锅菌套隔的间沸腾水而产生蒸 气。水待蒸急剧地将锅内的冷气空从气排阀气驱尽中，后 关闭排气阀然，继加热，续此时由于汽蒸不能出逸，增而了加锅 内的力，压而使沸从增点，得到高高于100的℃度温致导 体蛋菌质白凝变性而达固到菌灭的目的
。本实
验用所手提的式灭锅菌结如构：下
6
54321
71
2
1
01
1
1 83 419
D
S-X28B0自动（）
内部构
造5压力.表
1.下手柄
.2上柄手（内有全安锁） 3.汽孔 4.放汽阀 6排安全阀. 11调温旋钮 7..桶 身8.座底9. 电开关源1 .保3温
1灯
0.放阀 14.时间水钮旋
1
.2加灯热
实验器材手提
高式压蒸灭汽菌锅 自配培。养及其基所需他灭 物品。菌
实
验步骤1、
先将内层锅首取出，用纯水再外层锅的水将补齐到面与角三架搁平。相
2、放
内层回，并锅装入待菌灭品。
物本实验次需灭菌的物为品
0：85.％NCa ×l6
9
lm（ 配） 自培皿 ×1养
100lm移液管 1 5×m斜面培养l 三基角装瓶302lm培 养 基×4 1×
意注要装不太得，挤免以妨蒸碍流通汽影响灭而菌果效三角。烧与瓶自备大口 璃玻
×瓶1试管 端口不均与要桶接触，以壁免冷水凝淋包湿的口纸透入棉而。塞
3加、盖并将盖上，的气软管插入排内层锅排气槽内的。顺时旋针拧转 紧。箭红头朝。右
1
2
3
4
、打电开源开，调节温关度保和温间时同时，开排打气阀排气。
5、水沸待腾将冷气空全排尽完 （后汽排五分钟）关上，排阀气。 让锅内的度温随蒸汽压增力加 而逐上升。渐当锅内压力上升到的 所压需力，时维压持力至所时 间。 本实需在1验.30MPa， 11℃2件下灭条菌3m0ni。
6、灭时间到菌后切断，电源，让菌锅内温灭度自下降，然当压表力 的力降压至“”0时，开打排气，阀盖将子打开缝，一利用锅的余内热 烘干灭物品，取出灭菌物菌。品
、7取出的将灭菌培养放基37℃温入培箱2养4h。查检无杂若生菌， 即可使长。
用
实验
用主要玻器皿璃包的
1扎、培皿 养养皿培常通用旧报包 紧。纸般一5取～01培套养皿作 包。一注意养培皿的取应一向致。包 时，装一卷滚边一， 边将头的两报往内覆折。
纸尾收将时出来的露头纸 一并入里面折。 后最将，好包的培养 皿在手放上轻轻动，以不晃 发出璃的玻撞声为碰妥。
2、
移管液包装 ，先在干前燥液移管距粗头顶端约0.其5c处塞一 m约1段5.mc的长棉花 。装时包，先移将液尖管端放斜在纸报条近的端左与，报 纸约呈4°5，并将角左多余端的段一纸覆折在吸上。管
再
整根将移液卷管报入，纸 端多余的右报纸打一结。 小包的好移管其液嘴管应端是钝头该。的
、打3 打结结时，用左手大先 拇摁住指棉绳的头一，然右 后手住绳拉的外一另在端口上 瓶绕圈最后。打活一结。 第一圈应在绕拇指上， 大方以便面打结。后
思考
题1
、养培配好基，为什么必须后即立灭？菌何如检灭菌查的培养基 后无是菌的 ？、在配2制培养的操基作程中应过意哪些注题问？什为？
么3、
压高汽蒸菌灭始之开，为前什要么将锅内的冷气排尽空灭？完 毕后菌，什么待压为降力到低“”时才0能打开排阀气开，取盖物 ？4、在用使高压汽蒸灭菌时，怎样锅杜一绝不切安全素因 ？5、菌在灭生微实物验操作有中何要作用重？ 6、曲黑
霉的子与芽孢杆孢菌的胞对子的抗热性个更哪强为什？么？