桑树分子生物学研究进展

广东农业科学2013年第12期

153

桑树分子生物学研究进展

王钰婷,汪泰初,李瑞雪,王

(安徽省农科院蚕桑研究所,安徽合肥

230061)

要:桑树是多年生木本植物,具有良好的经济效益、生态效益和社会效益。遗传改良在桑树资源可持续发展中起到关键作

用,现代分子生物学技术的迅速发展为之带来了新的机遇和挑战。近年来,桑树分子生物技术研究取得了重要突破,显示出独特的优势和巨大的发展潜力。概述了桑树分子生物学研究进展,包括分子标记技术、转基因技术、筛选基因耐型、桑树育种等,并对桑树分子生物学研究的应用前景进行讨论,以期为桑树分子生物学的进一步研究提供参考资料。

关键词:桑树;分子生物学;改良;基因转化中图分类号:S888.3+1

文献标识码:A

文章编号:1004-874X(2013)12-0153-03

Researchadvancesonmulberrymolecularbiology

WANGYu-ting,WANGTai-chu,LIRui-xue,WANGWei

(TheSericulturalResearchInstitute,AnhuiAcademyofAgriculturalSciences,Hefei230061,China)

Abstract:Mulberryisaperennialwoodyplantwithahugeeconomic,ecologicalandsocialvalue.Geneticimprovementprogramsplayacrucialroleinthesustainablemanagementofmulberryresources.Therapiddevelopmentofmodernmolecularbiotechnologybringsnewopportunitiesandchallengestomulberryimprovement.Molecularbiotechnologyhasalreadyshowngreatapplicationpotentialformulberryimprovement.Therecentadvanceonmolecularbiologyofmulberry,includingitsmolecularmarkers,transgenictechnology,screeningforgenotypicstresstoleranceandmulberrybreedingweresummarizedinthispaper.Moreover,theperspectiveapplicationsofmolecularbiotechnologytomulberrygeneticimprovementwerealsodiscussed.Thisworkprovidesareferenceforfurtherstudyofthemolecularbiologyofmulberry.

Keywords:mulberry;molecularbiology;amelioration;genetictransformation

桑树是一种多年生木本植物,属于蔷薇目(Rosales)桑科(Moraceae)桑属(MorusL.)桑种(MorusalbaL.)[1]。作为家蚕的唯一饲料,桑树良种是发展蚕业生产的重要物质基础,种植优良桑树品种不仅可以提高桑叶产量和质量,增加蚕桑生产经济效益,而且对茧丝绸的品质改善也起着重要作用,具有重要的生态和经济价值。桑树分子生物学研究始于20世纪80年代,随着现代分子生物学及其技术的快速发展,现代先进研究手段逐步应用于桑树研究,桑树分子生物学研究得到了长足发展,对桑树种质资源的研究也由早期的种质资源鉴定、分布调查及形态学特征等方面的基础研究,逐步深入到桑树种质资源分子生物学研究的发展阶段。本文对分子生物学技术在桑树中的研究现状进行综述,以期为桑树分子生物学的进一步研究提供参考。

及其技术的快速发展,分子标记技术广泛应用于各种作物的种质资源鉴定与分类、遗传图谱构建、基因定位以及育种中。DNA分子标记技术能对不同发育时期的个体、所有组织器官甚至细胞作检测,具有多肽性高、多等位基因、遍及整个基因组且不受组织和环境及其他因素影响等特点。当前DNA分子标记已广泛应用于作物遗传资源与育种研究,分别被称为分子种质资源鉴定和分子标记育种[2]。DNA分子标记可以克服形态学鉴定以及同工酶、蛋白电泳鉴定中的许多缺陷和难题,因而在品种鉴定方面展示了广阔的应用前景。

桑树是重要的经济作物,但分子标记技术在桑树上的应用较晚。1993年,杨光伟等[3]采用显性分子标记RAPD技术对我国桑树现行分类的15个种、4个变种及近缘属的48份供试材料进行桑属种群遗传结构分析,结果表明桑树具有丰富的遗传多样性,多态位点百分率为78.95%。向仲怀等[4]利用RAPD技术研究了PCR反应条件,构建了桑属9个种的共9种材料基因DNA指纹图谱,对桑属植物分类进行了探索性研究。之后,楼程富等[5]、赵卫国等[6]、

1桑树DNA分子标记技术

分子标记是以DNA多态性为基础的遗传标记,是DNA水平遗传变异的直接反映。近年来,随着分子生物学

收稿日期:2013-03-25

基金项目:安徽省农科院院长青年创新基金(13B0632);国家蚕桑产业技术体系合肥综合试验站(CARS-22-SYZ09);安徽省农科院创新团队项目(11C0610)

作者简介:王钰婷(1985-),女,硕士,助理研究员,E-mail:wang

Bhattacharya等[7]利用此技术对桑树不同种质资源进行了多态性分析,为构建桑树遗传图谱、分子辅助育种、重要农艺性状基因定位和系统分类等提供了重要理论依据。

随着分子生物学的发展,新的分子标记技术不断出现,ISSR(Inter-simplesequencerepeats)标记在桑树中是最常见的分子标记,并可结合RAPD(Randomlyamplified

[email protected]

通讯作者:汪泰初(1970-),男,硕士,研究员,E-mail:189498538

[email protected]

polymorphicDNA)[8]和SSR(Simplesequencerepeats)[9]研究桑树品种的遗传变异。因SNP(Singlenucleotide

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polymorphism)在任何生物基因组中都具有最丰富多态性,以单碱基变化作为标记,可以帮助区分两个个体遗传物质的差异,被认为是应用前景最好的遗传标记。但至今尚未见关于桑树SNP的报道。桑树SNP检测可以对候选基因的表型变异、数量性状位点(QTL)图谱、遗传多样性评估进行关联分析,并可对新型农作物品种进行共线性比较,为基因研究提供一条新的途径。

离脯氨酸积累、光合产量、硝酸还原酶活性、细胞膜稳定性、相对含水量、碳同位素分辨率等[25-26]。以上分析可以通过细胞转运子,如MiNHX在对比基因型中的表达分析来加以补充证明。抗旱性桑树基因型的筛选已开始近20年,干旱条件下节点外植体培养已作为一种有效的评价技术用于模拟干旱条件下筛选桑基因型[27]。目前,在现有的基因库中,干旱胁迫耐受与高产、相对含水量、抗氧化酶活性、脯氨酸积累、甘氨酸甜菜碱含量和ABA含量的增加相关[28]。Das等(2011年)对10个基因型桑在盐碱和干旱胁迫下进行了筛选,并比较了胁迫应答基因,如HAL3a、脱水蛋白、NHX1和ABC转运蛋白的表达谱。

细菌和真菌性叶斑病、白粉病、叶锈病、根结线虫是桑树的主要疾病,它不仅使桑叶生产力下降10%~20%,也极度影响桑叶品质。因此,将具有稳定抗性的桑树种质与育种计划结合研究至关重要。然而,单个或多个抗性基因的确定需要进一步的定性和定量的遗传分析。为探讨抗性,已有科学家在探索抵抗细菌[29]和病原真菌[30]的桑树种质的栽培育种和育种路线上做了不懈努力,但成果有限。因此,为发展多个抗病桑树,需创新研究方法将开发高效抗病品种融入育种程序中。

2桑树转基因技术

桑树转基因技术是指通过cDNA文库调取或PCR技术、人工合成等直接分离或克隆途径获得目的基因,通过适当载体转移到桑树基因组中,使桑树定向获得新的农艺性状,如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等。目前在桑树的遗传转化中获得转基因植株的方法主要有叶盘转化法、基因枪法、茎尖转化法和整株转化法。基因转化的细胞或组织要根据转化基因的不同,及时选用适宜的选择性标记基因,在一定时间和适宜的条件下进行筛选。目前常用的筛选标记基因主要有两大类:抗生素抗性酶基因和除草剂抗性酶基因。

大量研究表明,桑树是比较理想的外源基因受体。1990年日本学者Machii[10]通过农杆菌介导将β-葡萄糖昔酸酶(GUS)基因导入桑树叶盘并在桑叶中成功表达,进一步证明了桑树细胞或组织是外源基因的良好受体。自此,国内外许多学者在桑树转基因领域进行了大量的研究和探索。

到目前为止,已有抗菌肽基因[11-12]、大豆球蛋白基因[13]、几丁质酶基因[14]、水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因[15]和

4桑树育种

桑树品种是决定产量和叶质的首要因素。选育优良的

桑树品种,进行繁育和推广应用是提高蚕茧产量、质量和效益的重要措施。这取决于几个重要量化特征,如:叶保留能力、叶片尺寸和大小、总生物量、抗病虫害、干旱、盐碱、冷应激等非生物胁迫的耐受性。作为优良桑品种的条件,不仅要能适应当地土壤、气候条件,并且能充分利用当地自然条件生产更多更优的桑叶。选育适合当地的高产、优质、抗逆(病)性强的桑树品种是桑树育种的目标和任务[31]。

传统的育种方法由于固有的遗传限制、多年生植物系统的杂合性质、植物遗传性状和遗传标记信息的不可用性等多种障碍而进展缓慢。而且,像盐、干旱等非生物胁迫这些不利于桑树产量的复杂数量性状很难通过常规育种和表型选择操作。另一个阻碍桑树遗传进程的因素是缺乏足够的可变性,这是育种计划启动的先决条件。桑树作为多年生木本植物,选育1个新品种约需15~20年。随着基因组学和分子生物学技术的不断发展,有希望克服常规育种的相关问题,提高桑树在胁迫环境中的生产力。

GUS基因[16]成功转入桑树组织细胞。Bhatnagar等[17]通过基因枪和农杆菌介导成功获得了转基因印度桑(Morusindica);Das等[18]通过根瘤土壤杆菌成功转化成熟叶,转化率高达90%,已被证明是一种快速、高效的转化系统。功能性证据表明,Hva1基因的表达在抗应激反应中具有里程碑的意义[19-20]。Lal等[21]通过农杆菌转化法,将过表达的大麦Hva1基因成功转入桑树中,生理、生化和分子水平的详细数据显示:过量表达大麦耐寒基因Hva1后,转基因桑树株系在形态学上与未转基因株系基本一致,且具有良好的耐旱、耐盐和耐寒性,田间试验结果也表明转基因株系比非转基因株系表现更为良好。2009年,Das等[22]首次尝试通过β-胡萝卜素羟化酶-1基因的过表达,成功操纵了类胡萝卜素的生物合成途径。试验显示转基因桑在高温、强光、紫外线辐射胁迫下表现高胁迫抗性。通过超高效液相色谱法(UPLC)分析显示,转基因植物与非转基因植物相比,在胁迫环境下聚集了更高水平的叶黄素。

5展望

我国桑树基础研究起步较晚,分子基础研究仍然较为

3筛选基因耐型

桑树种植受多种胁迫负面影响,干旱和盐碱是最具破

薄弱。对于桑树的诸多生物学性状的基因表达调控机制尚不清楚。就桑树分子生物学研究而言,选择适宜的试验材料和技术手段对于解决相关问题将起到重要作用。随着分子生物学技术的不断完善和发展,可以对桑树优良性状的基因的分析、定位、克隆和转化进行控制,揭示桑树优势性状的分子机制,获得控制关键节点的功能基因,加强遗传转化的机制研究,阐明分子网络调控机制,加速选育桑树新品种,有利于改善我国长期以来桑树基础研究

坏性的,几乎50%的桑园种植面积受到干旱和半干旱影响。Hossain等[23]、Vijayan等[24]通过盐胁迫下桑腋芽的培养对筛选耐盐细胞系作了初步尝试,以体外条件下不同基因型桑树种子萌发率来评定植株耐盐性。在印度桑品种中,盐胁迫效应也可以通过生理和生化参数来研究,如游

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薄弱、育种水平不高的局面,对促进桑树产业技术创新、提升桑树产业的整体竞争实力有深远的影响[32]。

[4]

向仲怀,张孝勇,余茂德,等.采用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)在桑属植物系统学研究的应用初报[J].蚕业科学,1995,21(4):203-

DNA分子标记技术的开发是近年来分子生物学领域研究的热点。目前,利用DNA分子标记技术,在农作物种质资源鉴定和分类、目标性状基因的定位、遗传图谱的构建等方面,已取得了突破性进展。可以利用与目的基因紧密连锁的

207.[5][6][7]

楼程富,张有做,周金妹.桑树有性杂交后代与双亲基因组DNA的RAPD分析初报[J].农业生物技术学报,1997,5(4):387-403.赵卫国,潘一乐,黄敏仁.桑属种质资源的随机扩增多态性DNA研究[J].蚕业科学,2000(4):1-8.

DNA标记,直接筛选,提高效率,培育出高产、优质、多抗的桑树新品种。在进行新性状DNA分子标记筛选的同时,积极寻找与重要农艺性状连锁更为紧密的标记,缩小遗传距离,扩展桑种质资源遗传多样性,深入探索桑属植物的进化分类与亲缘关系。目前,已利用分子标记技术对如抗白粉病基因、耐盐基因及数量性状基因等与经济性状及重要农艺性状有关的基因进行了基因定位,但桑树方面仍属空白,需要进一步加强有重要利用价值基因的挖掘和克隆工作,特别是与高产、优质、抗病虫和抗逆性等农艺性状相关的基因,以期为桑树分子育种提供重要的基因资源。利用分子标记技术辅助育种,可以对高产基因、抗逆、抗病抗虫基因进行重点研究,利用分子标记将抗胁迫的关键基因导入到高产、优质品种中,创造高产优质品种或杂交组合,建立相应的分子标记育种体系[33]。随着分子标记新方法的不段出现、检测过程的自动化、数据分析的计算机化,在桑树上利用分子标记技术将有广阔的应用前景。

转基因技术在遗传育种中显示出极大的优越性,使育种逐渐发展成为可控制的定向育种。研究桑树转基因技术,将重要抗性基因导入到高产优质品种中,可以获得高产优质高抗品种,使其产量、叶质和其他性状有更大的突破。虽然植物基因工程与传统桑树育种相比已显示出更大优势,但是通过桑树基因工程获得的只是一种人工种质新材料,并不能完全取代传统育种。要培育适合蚕业发展所需的突破性新桑品种,仍然需要将基因工程与常规育种紧密配合,因此,我们在注重提高桑树产质、产量的同时,也要保护好桑树资源的遗传多样性。

桑树自身独特的生物学特性极大地限制了其遗传改良进程,现代分子生物学技术的迅速发展给桑遗传改良研究带来了新的机遇和挑战。加强新技术、新方法的研究和应用是解决桑树品种改良问题的关键,将传统育种方法与基因工程、细胞工程及分子标记辅助育种等先进分子生物学技术相结合,挖掘、鉴定有重要育种价值的基因,促进传统育种向现代化育种的转变,为开展遗传育种基础理论研究、优化育种程序培育新品种奠定基础。相信随着分子生物学理论和技术的飞速发展,传统育种方法和转基因技术相结合,桑树育种学科必将迎来一个崭新的阶段。

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壳长日增长率

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图1

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He

合浦珠母贝家系各遗传参数与壳长日增长率的关系

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(上接第155页)

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Keywords:mulberry;molecularbiology;amelioration;genetictransformation

桑树是一种多年生木本植物,属于蔷薇目(Rosales)桑科(Moraceae)桑属(MorusL.)桑种(MorusalbaL.)[1]。作为家蚕的唯一饲料,桑树良种是发展蚕业生产的重要物质基础,种植优良桑树品种不仅可以提高桑叶产量和质量,增加蚕桑生产经济效益,而且对茧丝绸的品质改善也起着重要作用,具有重要的生态和经济价值。桑树分子生物学研究始于20世纪80年代,随着现代分子生物学及其技术的快速发展,现代先进研究手段逐步应用于桑树研究,桑树分子生物学研究得到了长足发展,对桑树种质资源的研究也由早期的种质资源鉴定、分布调查及形态学特征等方面的基础研究,逐步深入到桑树种质资源分子生物学研究的发展阶段。本文对分子生物学技术在桑树中的研究现状进行综述,以期为桑树分子生物学的进一步研究提供参考。

及其技术的快速发展,分子标记技术广泛应用于各种作物的种质资源鉴定与分类、遗传图谱构建、基因定位以及育种中。DNA分子标记技术能对不同发育时期的个体、所有组织器官甚至细胞作检测,具有多肽性高、多等位基因、遍及整个基因组且不受组织和环境及其他因素影响等特点。当前DNA分子标记已广泛应用于作物遗传资源与育种研究,分别被称为分子种质资源鉴定和分子标记育种[2]。DNA分子标记可以克服形态学鉴定以及同工酶、蛋白电泳鉴定中的许多缺陷和难题,因而在品种鉴定方面展示了广阔的应用前景。

桑树是重要的经济作物,但分子标记技术在桑树上的应用较晚。1993年,杨光伟等[3]采用显性分子标记RAPD技术对我国桑树现行分类的15个种、4个变种及近缘属的48份供试材料进行桑属种群遗传结构分析,结果表明桑树具有丰富的遗传多样性,多态位点百分率为78.95%。向仲怀等[4]利用RAPD技术研究了PCR反应条件,构建了桑属9个种的共9种材料基因DNA指纹图谱,对桑属植物分类进行了探索性研究。之后,楼程富等[5]、赵卫国等[6]、

1桑树DNA分子标记技术

分子标记是以DNA多态性为基础的遗传标记,是DNA水平遗传变异的直接反映。近年来,随着分子生物学

收稿日期:2013-03-25

基金项目:安徽省农科院院长青年创新基金(13B0632);国家蚕桑产业技术体系合肥综合试验站(CARS-22-SYZ09);安徽省农科院创新团队项目(11C0610)

作者简介:王钰婷(1985-),女,硕士,助理研究员,E-mail:wang

Bhattacharya等[7]利用此技术对桑树不同种质资源进行了多态性分析,为构建桑树遗传图谱、分子辅助育种、重要农艺性状基因定位和系统分类等提供了重要理论依据。

随着分子生物学的发展,新的分子标记技术不断出现,ISSR(Inter-simplesequencerepeats)标记在桑树中是最常见的分子标记,并可结合RAPD(Randomlyamplified

[email protected]

通讯作者:汪泰初(1970-),男,硕士,研究员,E-mail:189498538

[email protected]

polymorphicDNA)[8]和SSR(Simplesequencerepeats)[9]研究桑树品种的遗传变异。因SNP(Singlenucleotide

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polymorphism)在任何生物基因组中都具有最丰富多态性,以单碱基变化作为标记,可以帮助区分两个个体遗传物质的差异,被认为是应用前景最好的遗传标记。但至今尚未见关于桑树SNP的报道。桑树SNP检测可以对候选基因的表型变异、数量性状位点(QTL)图谱、遗传多样性评估进行关联分析,并可对新型农作物品种进行共线性比较,为基因研究提供一条新的途径。

离脯氨酸积累、光合产量、硝酸还原酶活性、细胞膜稳定性、相对含水量、碳同位素分辨率等[25-26]。以上分析可以通过细胞转运子,如MiNHX在对比基因型中的表达分析来加以补充证明。抗旱性桑树基因型的筛选已开始近20年,干旱条件下节点外植体培养已作为一种有效的评价技术用于模拟干旱条件下筛选桑基因型[27]。目前,在现有的基因库中,干旱胁迫耐受与高产、相对含水量、抗氧化酶活性、脯氨酸积累、甘氨酸甜菜碱含量和ABA含量的增加相关[28]。Das等(2011年)对10个基因型桑在盐碱和干旱胁迫下进行了筛选,并比较了胁迫应答基因,如HAL3a、脱水蛋白、NHX1和ABC转运蛋白的表达谱。

细菌和真菌性叶斑病、白粉病、叶锈病、根结线虫是桑树的主要疾病,它不仅使桑叶生产力下降10%~20%,也极度影响桑叶品质。因此,将具有稳定抗性的桑树种质与育种计划结合研究至关重要。然而,单个或多个抗性基因的确定需要进一步的定性和定量的遗传分析。为探讨抗性,已有科学家在探索抵抗细菌[29]和病原真菌[30]的桑树种质的栽培育种和育种路线上做了不懈努力,但成果有限。因此,为发展多个抗病桑树,需创新研究方法将开发高效抗病品种融入育种程序中。

2桑树转基因技术

桑树转基因技术是指通过cDNA文库调取或PCR技术、人工合成等直接分离或克隆途径获得目的基因,通过适当载体转移到桑树基因组中,使桑树定向获得新的农艺性状,如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等。目前在桑树的遗传转化中获得转基因植株的方法主要有叶盘转化法、基因枪法、茎尖转化法和整株转化法。基因转化的细胞或组织要根据转化基因的不同,及时选用适宜的选择性标记基因,在一定时间和适宜的条件下进行筛选。目前常用的筛选标记基因主要有两大类:抗生素抗性酶基因和除草剂抗性酶基因。

大量研究表明,桑树是比较理想的外源基因受体。1990年日本学者Machii[10]通过农杆菌介导将β-葡萄糖昔酸酶(GUS)基因导入桑树叶盘并在桑叶中成功表达,进一步证明了桑树细胞或组织是外源基因的良好受体。自此,国内外许多学者在桑树转基因领域进行了大量的研究和探索。

到目前为止,已有抗菌肽基因[11-12]、大豆球蛋白基因[13]、几丁质酶基因[14]、水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因[15]和

4桑树育种

桑树品种是决定产量和叶质的首要因素。选育优良的

桑树品种,进行繁育和推广应用是提高蚕茧产量、质量和效益的重要措施。这取决于几个重要量化特征,如:叶保留能力、叶片尺寸和大小、总生物量、抗病虫害、干旱、盐碱、冷应激等非生物胁迫的耐受性。作为优良桑品种的条件,不仅要能适应当地土壤、气候条件,并且能充分利用当地自然条件生产更多更优的桑叶。选育适合当地的高产、优质、抗逆(病)性强的桑树品种是桑树育种的目标和任务[31]。

传统的育种方法由于固有的遗传限制、多年生植物系统的杂合性质、植物遗传性状和遗传标记信息的不可用性等多种障碍而进展缓慢。而且,像盐、干旱等非生物胁迫这些不利于桑树产量的复杂数量性状很难通过常规育种和表型选择操作。另一个阻碍桑树遗传进程的因素是缺乏足够的可变性,这是育种计划启动的先决条件。桑树作为多年生木本植物,选育1个新品种约需15~20年。随着基因组学和分子生物学技术的不断发展,有希望克服常规育种的相关问题,提高桑树在胁迫环境中的生产力。

GUS基因[16]成功转入桑树组织细胞。Bhatnagar等[17]通过基因枪和农杆菌介导成功获得了转基因印度桑(Morusindica);Das等[18]通过根瘤土壤杆菌成功转化成熟叶,转化率高达90%,已被证明是一种快速、高效的转化系统。功能性证据表明,Hva1基因的表达在抗应激反应中具有里程碑的意义[19-20]。Lal等[21]通过农杆菌转化法,将过表达的大麦Hva1基因成功转入桑树中,生理、生化和分子水平的详细数据显示:过量表达大麦耐寒基因Hva1后,转基因桑树株系在形态学上与未转基因株系基本一致,且具有良好的耐旱、耐盐和耐寒性,田间试验结果也表明转基因株系比非转基因株系表现更为良好。2009年,Das等[22]首次尝试通过β-胡萝卜素羟化酶-1基因的过表达,成功操纵了类胡萝卜素的生物合成途径。试验显示转基因桑在高温、强光、紫外线辐射胁迫下表现高胁迫抗性。通过超高效液相色谱法(UPLC)分析显示,转基因植物与非转基因植物相比,在胁迫环境下聚集了更高水平的叶黄素。

5展望

我国桑树基础研究起步较晚,分子基础研究仍然较为

3筛选基因耐型

桑树种植受多种胁迫负面影响,干旱和盐碱是最具破

薄弱。对于桑树的诸多生物学性状的基因表达调控机制尚不清楚。就桑树分子生物学研究而言,选择适宜的试验材料和技术手段对于解决相关问题将起到重要作用。随着分子生物学技术的不断完善和发展,可以对桑树优良性状的基因的分析、定位、克隆和转化进行控制,揭示桑树优势性状的分子机制,获得控制关键节点的功能基因,加强遗传转化的机制研究,阐明分子网络调控机制,加速选育桑树新品种,有利于改善我国长期以来桑树基础研究

坏性的,几乎50%的桑园种植面积受到干旱和半干旱影响。Hossain等[23]、Vijayan等[24]通过盐胁迫下桑腋芽的培养对筛选耐盐细胞系作了初步尝试,以体外条件下不同基因型桑树种子萌发率来评定植株耐盐性。在印度桑品种中,盐胁迫效应也可以通过生理和生化参数来研究,如游

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薄弱、育种水平不高的局面,对促进桑树产业技术创新、提升桑树产业的整体竞争实力有深远的影响[32]。

[4]

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DNA分子标记技术的开发是近年来分子生物学领域研究的热点。目前,利用DNA分子标记技术,在农作物种质资源鉴定和分类、目标性状基因的定位、遗传图谱的构建等方面,已取得了突破性进展。可以利用与目的基因紧密连锁的

207.[5][6][7]

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DNA标记,直接筛选,提高效率,培育出高产、优质、多抗的桑树新品种。在进行新性状DNA分子标记筛选的同时,积极寻找与重要农艺性状连锁更为紧密的标记,缩小遗传距离,扩展桑种质资源遗传多样性,深入探索桑属植物的进化分类与亲缘关系。目前,已利用分子标记技术对如抗白粉病基因、耐盐基因及数量性状基因等与经济性状及重要农艺性状有关的基因进行了基因定位,但桑树方面仍属空白,需要进一步加强有重要利用价值基因的挖掘和克隆工作,特别是与高产、优质、抗病虫和抗逆性等农艺性状相关的基因,以期为桑树分子育种提供重要的基因资源。利用分子标记技术辅助育种,可以对高产基因、抗逆、抗病抗虫基因进行重点研究,利用分子标记将抗胁迫的关键基因导入到高产、优质品种中,创造高产优质品种或杂交组合,建立相应的分子标记育种体系[33]。随着分子标记新方法的不段出现、检测过程的自动化、数据分析的计算机化,在桑树上利用分子标记技术将有广阔的应用前景。

转基因技术在遗传育种中显示出极大的优越性,使育种逐渐发展成为可控制的定向育种。研究桑树转基因技术,将重要抗性基因导入到高产优质品种中,可以获得高产优质高抗品种,使其产量、叶质和其他性状有更大的突破。虽然植物基因工程与传统桑树育种相比已显示出更大优势,但是通过桑树基因工程获得的只是一种人工种质新材料,并不能完全取代传统育种。要培育适合蚕业发展所需的突破性新桑品种,仍然需要将基因工程与常规育种紧密配合,因此,我们在注重提高桑树产质、产量的同时,也要保护好桑树资源的遗传多样性。

桑树自身独特的生物学特性极大地限制了其遗传改良进程,现代分子生物学技术的迅速发展给桑遗传改良研究带来了新的机遇和挑战。加强新技术、新方法的研究和应用是解决桑树品种改良问题的关键,将传统育种方法与基因工程、细胞工程及分子标记辅助育种等先进分子生物学技术相结合,挖掘、鉴定有重要育种价值的基因,促进传统育种向现代化育种的转变,为开展遗传育种基础理论研究、优化育种程序培育新品种奠定基础。相信随着分子生物学理论和技术的飞速发展,传统育种方法和转基因技术相结合,桑树育种学科必将迎来一个崭新的阶段。

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He

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