HPLC测定咳喘宁颗粒中盐酸麻黄碱的含量
孙杰 谷学新* 任占军 赵新颖
(首都师范大学化学系100037)
摘要: 目的 利用高效液相色谱法测定咳喘宁颗粒中盐酸麻黄碱的含量。方法 采用EconosphereC18柱(5μm，4.6×250mm)，流动相为乙腈—0.03%三乙胺(加磷酸调pH为4.85)(5：95)，检测波长：207nm，流速：1.0mL·min-1，柱温：30℃。结果 盐酸麻黄碱在0.129～0.860μg范围内线性关系良好(r=0.9996)，回收率为104.35%，RSD为1.18%(n=5)。结论 该方法简便可靠，快速，重现性好，可用于咳喘宁颗粒的质量控制。 关键词: 麻黄；盐酸麻黄碱； 咳喘宁颗粒
RP-HPLC Determination of Ephedrine in kechuanning keli
SUN Jie， GU Xu-xin*， REN Zhan-jun，ZHAO Xing-ying , (chemistry department in capital normal university 10037)
ABSTRACT: OBJECTIVE A RP-HPLC method was used for the determination of ephedrine in kechuanning keli. METHODS The chromatographoric condition were: EconosphereC18 (5μm,4.6×250mm) column , and the mobile phase was consisted of 0.03% triethylamine in water—acetonitrile (95：5) (adjusted to pH=4.85 with phosphoric acid), 207nm as detected wavelengths, the flow rate was 1.0mL.min-1. RESULTS The content of kechuanning had good linear relationship in 0.129～0.860μg (r=0.9996).The average recovery was 104.35%, RSD为1.18%(n=5). CONCLUSION The method is accurate ,reliable and can be used for the quality control of kechuanning product.
KEY WORDS: ephedrine ； kechuanning
咳喘宁颗粒由部颁标准[1]麻黄、紫菀、苦杏仁、百部、甘草等药材组成。其中麻黄为方中君药，麻黄的主要活性成分为麻黄碱，麻黄碱具有解热、抗病毒、松弛支气管平滑肌等作用[2]。通过测定咳喘宁颗粒中盐酸麻黄碱的含量，可以作为控制该产品质量的一个重要指标。文献已报道的麻黄碱含量测定方法有滴定法[3]、薄层扫描法[4]、高效液相色谱法[5]等。本实验采用高效液相法测定咳喘宁颗粒中麻黄碱的含量，操作方便，结果准确、可靠。经过方法学考察及三批样品测定，盐酸麻黄碱测定方法提取完全，重现性、精密度良好，回收率满意。
1 仪器和试药
Hitachi 7000型高效液相色谱仪， UV-VIS检测器，Hitachi自动进样器
对照品：盐酸麻黄碱购于中国药品生物制品检定所（供含量测定用）批号：171242-200404。
样品：咳喘宁颗粒由陕西华西股分制药有限公司提供，批号20050502，20050801，20050903，每袋相当于药材8.5克；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2色谱条件
Econosphere C18 (5μm，250mm×4.6mm)色谱柱，C18预柱；流动相为乙腈—0.03%三乙胺(加磷酸调pH为4.85)(5：95)为流动相，流速：1.0mL·min-1, 柱温：30℃,检测波长：207nm。
3 方法与结果
3.1溶液制备
对照品溶液配制 精确称取105℃下烘干3小时的盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇制备成24μmg·mL-1对照溶液。
供试品溶液配制 取差异项下的咳喘宁颗粒样品3g于具支锥形瓶中，准确加入
25mL0.1%H3PO4，称定重量，超声20min，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
阴性对照品溶液的制备 按处方比例及生产工艺制备咳喘宁颗粒阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
按上述色谱条件测定，结果如图1，表明阴性对照溶液无干扰.。
A B C
图1 麻黄碱的高效液相色谱图 Fig 1 HPLC chromatograms of ephedrine
A. 麻黄碱对照品 (Reference substance of ephedrine) B. 咳喘宁样品 (sample of kechuanning)
C. 阴性对照品 (sample without ephedrine)
3.2标准曲线与线性范围 精密吸取上述盐酸麻黄碱对照品溶液 10、12、14、16、18、20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积对进样量进行线性回归，得回归方程为Y=2062617X-332700 r=0.9996。盐酸麻黄碱在0.129～0.860μg之间线性良好。
3.3精密度实验 精密吸取样品溶液10μL，连续进样5次， RSD为1.23%，结果表明，本方法精密度良好。
3.4重复性试验 称取同一批号咳喘宁颗粒，分别制备5份供试品溶液，分别进样，测峰面积，计算盐酸麻黄碱的含量，RSD为1.16%，结果表明，本方法重复性良好。
3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于0,2,4,6,8,10,12,24h测定峰面积，结果面积的RSD为1.68%，实验结果表明，本品在24h内稳定性良好。
3.6 回收率试验 取已知含量同一批号样品5份，精密加入对照品适量，振荡使其充分混匀，按上述供试品溶液制备方法制备，测定含量计算回收率，见表1，结果表明本方法回收率良好。
表1 回收率试验结果 Tab 1 The Results of recovery
3.7 样品测定 取三批不同批号的咳嗽喘宁颗粒，按”供试品溶液制备方法”制备供试品溶液，进样10μL，结果见表2.
表 2 样品测定结果
Tab 2 Results of samples determination
批号 (Lot No.) 20050502 20050801 20050903
含量 Content(mg.g-1)
0.25 0.26 0.26
相对偏差 Relative derivation(%)
1.16 1.24 1.19
4讨论
4.1提取方法选择 本文考察了用0.1%的HCl甲醇溶液[7]提取和文献中记载的氯仿甲醇溶液[8]提取，结果表明酸水提方法简单，易行，且无明显干扰。生物碱的提取常见为过氧化铝柱，本实验对过氧化铝柱的样品和未过柱样品进行了比较，过柱样品杂质较少，但杂质峰并不影响麻黄碱的分离效果，考虑过柱后重现性，回收率均大大降低，所以本文章选择，酸提后取上清液过膜上柱，分离效果满意。
4.2流动相的选择 本文考察了乙腈/醋酸铵体系，乙腈/磷酸二氢钾体系[7]，乙腈/水体系，乙腈/磷酸体系[8]，确定乙腈/磷酸，加入三乙胺作为扫尾剂，分离效果满意，峰形对称。
4.3 pH值和三乙胺对分离效果的影响 本文考察了不同pH对分离度的影响，pH减小，峰较窄，但出峰过早不能达到基线分离；经考察不同浓度三乙胺分离效果，发现加入0.03%时峰形满意，三乙胺过多也会使保留时间变小，分离效果差，最终确定为0.03%三乙胺用磷酸调pH为4.85，分离效果令人满意。
参考文献
[1] 卫生部颁部标准Z20-198
[2] 陈晓城 麻黄的药理作用研究进展 实用中医药杂志2005.21(1):58 [3] 国家药典委员会 中国药典 2000年版 一部 化学工业出版社,2000:262 [4] 张秀华 麻黄提取工艺的比较 [J]时珍国医国药，2000，11（11）：963 [5] 刘 永 HPLC法测定麻黄中盐酸麻黄碱的含量 现代医药卫生,2004,20(4):238 [6] 国家药典委员会 中国药典 2005年版 一部 化学工业出版社,2000:262
[7] 彭 松高效液相法测定复方参贝止咳颗粒中盐酸麻黄碱的含量 [J]湖北中医学院学
报,2005.1(16).1:46
[8] 林朝展 麻黄药材的质量分析研究 [J]中药新药与临床药理2005.1(16).1:56
HPLC测定咳喘宁颗粒中盐酸麻黄碱的含量
孙杰 谷学新* 任占军 赵新颖
(首都师范大学化学系100037)
摘要: 目的 利用高效液相色谱法测定咳喘宁颗粒中盐酸麻黄碱的含量。方法 采用EconosphereC18柱(5μm，4.6×250mm)，流动相为乙腈—0.03%三乙胺(加磷酸调pH为4.85)(5：95)，检测波长：207nm，流速：1.0mL·min-1，柱温：30℃。结果 盐酸麻黄碱在0.129～0.860μg范围内线性关系良好(r=0.9996)，回收率为104.35%，RSD为1.18%(n=5)。结论 该方法简便可靠，快速，重现性好，可用于咳喘宁颗粒的质量控制。 关键词: 麻黄；盐酸麻黄碱； 咳喘宁颗粒
RP-HPLC Determination of Ephedrine in kechuanning keli
SUN Jie， GU Xu-xin*， REN Zhan-jun，ZHAO Xing-ying , (chemistry department in capital normal university 10037)
ABSTRACT: OBJECTIVE A RP-HPLC method was used for the determination of ephedrine in kechuanning keli. METHODS The chromatographoric condition were: EconosphereC18 (5μm,4.6×250mm) column , and the mobile phase was consisted of 0.03% triethylamine in water—acetonitrile (95：5) (adjusted to pH=4.85 with phosphoric acid), 207nm as detected wavelengths, the flow rate was 1.0mL.min-1. RESULTS The content of kechuanning had good linear relationship in 0.129～0.860μg (r=0.9996).The average recovery was 104.35%, RSD为1.18%(n=5). CONCLUSION The method is accurate ,reliable and can be used for the quality control of kechuanning product.
KEY WORDS: ephedrine ； kechuanning
咳喘宁颗粒由部颁标准[1]麻黄、紫菀、苦杏仁、百部、甘草等药材组成。其中麻黄为方中君药，麻黄的主要活性成分为麻黄碱，麻黄碱具有解热、抗病毒、松弛支气管平滑肌等作用[2]。通过测定咳喘宁颗粒中盐酸麻黄碱的含量，可以作为控制该产品质量的一个重要指标。文献已报道的麻黄碱含量测定方法有滴定法[3]、薄层扫描法[4]、高效液相色谱法[5]等。本实验采用高效液相法测定咳喘宁颗粒中麻黄碱的含量，操作方便，结果准确、可靠。经过方法学考察及三批样品测定，盐酸麻黄碱测定方法提取完全，重现性、精密度良好，回收率满意。
1 仪器和试药
Hitachi 7000型高效液相色谱仪， UV-VIS检测器，Hitachi自动进样器
对照品：盐酸麻黄碱购于中国药品生物制品检定所（供含量测定用）批号：171242-200404。
样品：咳喘宁颗粒由陕西华西股分制药有限公司提供，批号20050502，20050801，20050903，每袋相当于药材8.5克；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2色谱条件
Econosphere C18 (5μm，250mm×4.6mm)色谱柱，C18预柱；流动相为乙腈—0.03%三乙胺(加磷酸调pH为4.85)(5：95)为流动相，流速：1.0mL·min-1, 柱温：30℃,检测波长：207nm。
3 方法与结果
3.1溶液制备
对照品溶液配制 精确称取105℃下烘干3小时的盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇制备成24μmg·mL-1对照溶液。
供试品溶液配制 取差异项下的咳喘宁颗粒样品3g于具支锥形瓶中，准确加入
25mL0.1%H3PO4，称定重量，超声20min，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
阴性对照品溶液的制备 按处方比例及生产工艺制备咳喘宁颗粒阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
按上述色谱条件测定，结果如图1，表明阴性对照溶液无干扰.。
A B C
图1 麻黄碱的高效液相色谱图 Fig 1 HPLC chromatograms of ephedrine
A. 麻黄碱对照品 (Reference substance of ephedrine) B. 咳喘宁样品 (sample of kechuanning)
C. 阴性对照品 (sample without ephedrine)
3.2标准曲线与线性范围 精密吸取上述盐酸麻黄碱对照品溶液 10、12、14、16、18、20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积对进样量进行线性回归，得回归方程为Y=2062617X-332700 r=0.9996。盐酸麻黄碱在0.129～0.860μg之间线性良好。
3.3精密度实验 精密吸取样品溶液10μL，连续进样5次， RSD为1.23%，结果表明，本方法精密度良好。
3.4重复性试验 称取同一批号咳喘宁颗粒，分别制备5份供试品溶液，分别进样，测峰面积，计算盐酸麻黄碱的含量，RSD为1.16%，结果表明，本方法重复性良好。
3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于0,2,4,6,8,10,12,24h测定峰面积，结果面积的RSD为1.68%，实验结果表明，本品在24h内稳定性良好。
3.6 回收率试验 取已知含量同一批号样品5份，精密加入对照品适量，振荡使其充分混匀，按上述供试品溶液制备方法制备，测定含量计算回收率，见表1，结果表明本方法回收率良好。
表1 回收率试验结果 Tab 1 The Results of recovery
3.7 样品测定 取三批不同批号的咳嗽喘宁颗粒，按”供试品溶液制备方法”制备供试品溶液，进样10μL，结果见表2.
表 2 样品测定结果
Tab 2 Results of samples determination
批号 (Lot No.) 20050502 20050801 20050903
含量 Content(mg.g-1)
0.25 0.26 0.26
相对偏差 Relative derivation(%)
1.16 1.24 1.19
4讨论
4.1提取方法选择 本文考察了用0.1%的HCl甲醇溶液[7]提取和文献中记载的氯仿甲醇溶液[8]提取，结果表明酸水提方法简单，易行，且无明显干扰。生物碱的提取常见为过氧化铝柱，本实验对过氧化铝柱的样品和未过柱样品进行了比较，过柱样品杂质较少，但杂质峰并不影响麻黄碱的分离效果，考虑过柱后重现性，回收率均大大降低，所以本文章选择，酸提后取上清液过膜上柱，分离效果满意。
4.2流动相的选择 本文考察了乙腈/醋酸铵体系，乙腈/磷酸二氢钾体系[7]，乙腈/水体系，乙腈/磷酸体系[8]，确定乙腈/磷酸，加入三乙胺作为扫尾剂，分离效果满意，峰形对称。
4.3 pH值和三乙胺对分离效果的影响 本文考察了不同pH对分离度的影响，pH减小，峰较窄，但出峰过早不能达到基线分离；经考察不同浓度三乙胺分离效果，发现加入0.03%时峰形满意，三乙胺过多也会使保留时间变小，分离效果差，最终确定为0.03%三乙胺用磷酸调pH为4.85，分离效果令人满意。
参考文献
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报,2005.1(16).1:46
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