从活化酵母中提取β-葡聚糖的工艺研究
[摘 要]笔者采用酸法、碱法和酸碱融合法提取酵母细胞壁中的 β- 葡聚糖,对得率和纯度进行对比分析后,发现用碱法浸提工艺从破壁酵母中提取碱不溶性 β- 葡聚糖效率最高。通过正交试验得出最佳提取条件为:在 75°C 条件下、0.75mol/L 的碱液处理15min。不同脱水和干燥条件的对比实验表明:脱水和干燥条件影响产品的色泽;溶剂和水分蒸发得越快,产品最终含水率越低,产品颜色越白。
[关键词]酵母细胞壁 β- 葡聚糖 碱法 酸法 酸碱法
0.引言
β- 葡聚糖作为活性多糖不仅具有免疫促进作用,而且具有抗癌、
抗肿瘤、提高抗病能力和降低胆固醇等生理活性,是一类研究较多的活
性多糖。由于其具有高粘性、高持水性和热稳定性,以及制备工艺简单
等方面的优点,在食品、医学、化妆品、造纸和建筑材料等行业得以广泛
应用。
在国内外相关研究报道中,对于 β-葡聚糖的制备,有酸法,碱法,
以及酸碱、有机溶剂和酶相结合的方法。其中,碱法由于其浸提工艺简
单,产品纯度高,是从废弃酵母中有效提取高纯度 β-葡聚糖的理想途
径。
本文在对比酸法、碱法和酸碱法的基础上,主要研究用碱法工艺提
取 β- 葡聚糖的最佳条件,并分析不同提取条件对产物得率和纯度的
影响,以及干燥和脱水条件的选择对结果的影响,为啤酒生产中的废酵
母泥利用提供技术参考。
1.材料与方法
1.1 材料和试剂
酵母粉,乙酸,NaOH, 无水乙醇,无水乙醚,硫酸等,均为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 酵母破壁
盐法破壁:在酵母菌体浓度 10%,氯化钠浓度 2.5%,破壁时间
2.5h,破壁温度 70℃的实验条件下进行破壁。
1.2.2 酸法
配制 1.0mol/L 醋酸溶液 60mL,加入酵母粉 3g,在 70℃下水浴 1- 2
小时。3000r/min 离心 15min,沉淀物水洗 2 次,然后用无水乙醇洗涤,无
水乙醚脱水,在 37℃条件下干燥至恒重。
1.2.3 碱法
配制 1.0mol/L NaOH 溶液 60mL,加入酵母粉 3g,在 70℃下水浴
1- 2 小时。3000r/min 离心 15min,沉淀物水洗 2 次,然后用无水乙醇洗
涤,无水乙醚脱水,在 37℃条件下干燥至恒重。
1.2.4 酸碱法
4g 酵母粉加适量水制成酵母泥,加入 200mL 1mol/L NaOH 在 90℃
下,作用 2h 后 3000r/min 离心 15min,水洗 2 遍,加入 4%的乙酸溶液
50mL 室温处理 2h,3000r/min 离心 10min 后,用无水乙醇和无水乙醚分
别脱水两次,在 37℃下干燥 12h 至恒重。
1.2.5 碱法分离提取的最佳实验条件
表 1 碱法分离提纯 β- 葡聚糖正交实验
采用碱法分离提纯 β- 葡聚糖时,其得率和纯度受多种因素影响,
通过单因素试验,初步确定碱处理时间、碱处理温度、碱液浓度为主要因
素,进而通过正交实验,确定碱法分离提纯 β- 葡聚糖的最佳工艺条件。
碱法分离提纯 β- 葡聚糖正交实验设计见表 1,每个处理用 2g酵
母粉,60mLNaOH,通过正交试验处理后,3000r/min 离心 15min,沉淀物
水洗两遍,用无水乙醇在 75℃条件脱水 1- 2h,然后在干燥箱中干燥至
恒重,记录结果并分析。
1.2.6 葡聚糖含量测定
用苯酚—硫酸法,在 490nm 处测定标准葡萄糖溶液在不同浓度
(mg/mL)下的吸光度 OD,以 OD为纵坐标,标准葡萄糖浓度(mg/mL)为横
坐标绘制工作曲线。对所测样品经准确称量后,用 H
2
SO
4
完全水解,加
苯酚显色,在 490nm处测得各样品的 OD,然后通过工作曲线计算各样
品葡聚糖的含量。
1.2.7 脱水和干燥条件对产品色泽的影响
将所得β-葡聚糖依次用不同量的无水乙醇和无水乙醚脱水,探讨无
水乙醇和无水乙醚用量对 β-葡聚糖色泽的影响。将所得 β-葡聚糖进行
自然干燥和真空干燥,比较两种干燥方法对 β- 葡聚糖色泽的影响。
2.结果分析
2.1 酸法、碱法和酸碱法结果对比分析
分别对三种不同工艺所得的产品进行计算得率:葡聚糖得率 = 葡
聚糖(沉淀物)/ 酵母干重 x100%。
表 2 酸法、碱法和酸碱法的对比
2.2 正交试验的结果
表 3 碱法提取正交试验结果
实验号 温度 /℃ 时间 /min 碱液浓度 mol/L
1 75 15 0.50
2 75 30 0.75
3 75 60 1.00
4 85 15 0.75
5 85 30 1.00
6 85 60 0.50
7 100 15 1.00
8 100 30 0.50
9 100 60 0.75
因素
方法
实验条件
实验
用料
葡聚糖
/g
得率
/%
纯度
/%
温度
/°C
时间
/min
酸法 70
60- 12
1mol/L 乙酸
3g 酵母粉
0.769 25.63 41.22
碱法 75 15
0.5mol/L NaOH
2g 酵母粉
0.486 24.33 54.33
酸碱法 变温 240
1mol/L NaOH
4% 乙酸
4g 酵母粉
0.91 22.75 71.22
实验号 粗葡聚糖 /g 纯葡聚糖 /g 得率 /% 纯度 /%
1 0.486 0.2640 24.33 54.33
2 0.3976 0.2181 19.88 54.85
3 0.2422 0.1348 12.11 55.65
4 0.4438 0.2229 22.19 50.22
5 0.2864 0.1463 14.32 51.08
6 0.089 0.0463 4.45 52.01
7 0.2318 0.1128 12.59 48.66
8 0.1734 0.0852 8.67 49.13
9 0.0374 0.0187 1.87 50.05
高校理科研究
— 529—科技信息
根据单因素试验确定影响因素后,设计正交试验,得出的结果如表
3。
2.3 碱法提取最佳条件的确定
(1)碱处理时间对得率和纯度的影响
碱处理时间对得率的影响见图 1,对纯度的影响见图 2。由图 1 和
图 2 可见,β- 葡聚糖的得率随碱处理时间的增加呈下降趋势,而β-
葡聚糖的纯度随碱处理时间的延长呈上升趋势。分析:碱处理时间的延
长可以有效的除去碱溶性物质从而提高产品纯度;碱处理时间过短,粗
品中碱溶性物质不能完全融于碱液中,得率虽然提高了但纯度下降;若
碱处理时间过长,会使 β- 葡聚糖降解成低聚糖,导致产品损失,从而
得率和纯度都下降。
图 1 碱处理时间对得率的影响 图 2 碱处理时间对纯度的影响
(2)碱液浓度对得率和纯度的影响
碱液浓度对得率的影响见图 3,对纯度的影响见图 4。碱液浓度由
低到高时,产品的得率和纯度呈曲线状,在 0.8mol/L左右出现转折。但
综观之,无论是得率还是纯度,碱液浓度都不是其主要影响因素。因而
综合考虑碱液浓度为 0.75mol/L为佳。
图 3 碱液浓度对得率的影响 图 4 碱液浓度对纯度的影响
(3)碱处理温度对得率和纯度的影响
碱处理温度 75℃、85℃、100℃时的得率分别是 25%、15%、10%,纯
度分别是 55%、51%、49%。可见,β- 葡聚糖的得率和纯度随碱处理温
度升高呈下降趋势,75℃时的得率高于 85℃和 100℃时的得率,其水解
后溶液中葡萄糖的含量也高,原因可能是由于在高温作用下,部分葡聚
糖降解为低聚糖融于碱液中,随离心后的上清液被除去,以致含量下
降。
综合各种因素:温度、时间、碱液浓度,确定 β- 葡聚糖的最佳提取
条件为:破壁酵母在 75℃条件下,用 0.75mol/L的碱液处理 15min。
3.结论
本实验共采取了三种实验方法来提取 β- 葡聚糖:酸法,碱法,酸
碱法。
其中,酸法提取对于实际生产利用价值较小,而且操作复杂,不适
合推广,但可以作为实验室的尝试技术。
碱法提取酵母细胞壁中的 β- 葡聚糖,所得产品纯度较高,去除了
细胞壁中的蛋白质和甘露聚糖成分,且葡聚糖的得率高,是从酵母中提
取葡聚糖的高效方法。同时,实验还观测到,产品的色泽与溶剂和水分
的蒸发速度,以及产品最终含水量相关联。
酸碱法提取 β- 葡聚糖产品纯度较高,但其工艺复杂,成本较高,
废液多,适合大工厂特别是啤酒厂在废酵母中提取 β- 葡聚糖,为废啤
酒酵母的综合利用提供了可靠的途径。
水洗可提高纯度,但会造成多糖损失,一般水洗 2- 3 次为佳。要获
得白色粉末状产品,脱水步骤最为关键,结果表明无水乙醇脱水效果较
好,用无水乙醇脱水可除去大部分色素,并随乙醇温度升高及作用时间
的延长,产品就越纯,色泽越浅。无水乙醚除脱水外还有脱脂作用。另
外,溶剂和水分的蒸发速度也能影响产品的色泽,脱水后产品颗粒越
细,所得产品越白。
现在工业上对于干燥通常采用的方法有有机溶剂脱水、冻干和喷
雾干燥法。有人研究发现,喷雾干燥所得的 β- 葡聚糖粉末比另外两种
方法制取的粉末产品有更高的生物活性。所以,对于用于制取试验和研
究用的 β- 葡聚糖时,条件充足的情况下建议用喷雾干燥法。
参考文献
[1]王淼,丁霄霖.葡聚糖生物活性与结构的关系[J].无锡轻工大学
学报,1997,16(2):90- 92
[2]李花霞,杨文鸽.啤酒酵母中葡聚糖的研究[J].食品研究与开发,
2004,25(5):54- 56
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学学报,1999,25(5):477- 479
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物特性研究[D].武汉:华中农业大学,2002
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料工业,2004,25(10)
[9]连喜军,鲁晓翔等.国际标准酶法测定 β- 葡聚糖含量的研究
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[10]连喜军,鲁晓翔等.苯酚 - 硫酸法测定 β- 葡聚糖含量研究
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出版社,1994
[12]万婕,刘成梅等.从破壁酵母中提取 β- 葡聚糖的工艺研究
[J].农产品加工,2006
分析。通过虚拟维修仿真,分析维修中是否可能遇
到不能解决的障碍,取消不太可能完成的维修任务,避免不必要的人
力、物力资源浪费;②维修难易度分析。通过虚拟维修仿真,分析维修中
维修人员操作的难易程度,在确保维修安全的前提下,尽可能的减轻维
修人员负担、提高维修效率;③维修时间分析。通过虚拟维修仿真,制定
更接近实际工时的维修计划工时。
本文仅进行了虚拟维修的初级探讨,未进行更深入的技术研究。虚
拟维修技术能解决的问题涉及维修性工程、维修保障工程、人机工程、
维修训练、产品支援等多个专业;在应用效果上,它不仅分析精度不断
提高,演示效果更加逼真,而且大幅提高了相关工作的自动化程度,缩
短了研制周期,提高了产品质量,降低了研制费用。作为新兴的技术科
学,虚拟维修拥有良好的应用前景和巨大的发展潜力。探讨其技术特征
与内涵,分析其具体研究内容和关键技术,提出其发展趋势,对深入开
展虚拟维修技术的应用研究和系统开发具有重要意义及参考价值。
参考文献
[1]刘玉海,张锡恩.虚拟现实在装备维修中的应用研究[J].计算机
工程, 2001(8):132- 133
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tions within virtual environment[sC].Proceedings of the Annual R eliability
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配系统[J].中国图象图形学报: A, 2002, 7 (1):27- 35
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[10]Wang Songban,Gao Mingjun,Zhu Xiaodong,et al.Study on virtual
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高校理科研究
— 530—
从活化酵母中提取β-葡聚糖的工艺研究
[摘 要]笔者采用酸法、碱法和酸碱融合法提取酵母细胞壁中的 β- 葡聚糖,对得率和纯度进行对比分析后,发现用碱法浸提工艺从破壁酵母中提取碱不溶性 β- 葡聚糖效率最高。通过正交试验得出最佳提取条件为:在 75°C 条件下、0.75mol/L 的碱液处理15min。不同脱水和干燥条件的对比实验表明:脱水和干燥条件影响产品的色泽;溶剂和水分蒸发得越快,产品最终含水率越低,产品颜色越白。
[关键词]酵母细胞壁 β- 葡聚糖 碱法 酸法 酸碱法
0.引言
β- 葡聚糖作为活性多糖不仅具有免疫促进作用,而且具有抗癌、
抗肿瘤、提高抗病能力和降低胆固醇等生理活性,是一类研究较多的活
性多糖。由于其具有高粘性、高持水性和热稳定性,以及制备工艺简单
等方面的优点,在食品、医学、化妆品、造纸和建筑材料等行业得以广泛
应用。
在国内外相关研究报道中,对于 β-葡聚糖的制备,有酸法,碱法,
以及酸碱、有机溶剂和酶相结合的方法。其中,碱法由于其浸提工艺简
单,产品纯度高,是从废弃酵母中有效提取高纯度 β-葡聚糖的理想途
径。
本文在对比酸法、碱法和酸碱法的基础上,主要研究用碱法工艺提
取 β- 葡聚糖的最佳条件,并分析不同提取条件对产物得率和纯度的
影响,以及干燥和脱水条件的选择对结果的影响,为啤酒生产中的废酵
母泥利用提供技术参考。
1.材料与方法
1.1 材料和试剂
酵母粉,乙酸,NaOH, 无水乙醇,无水乙醚,硫酸等,均为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 酵母破壁
盐法破壁:在酵母菌体浓度 10%,氯化钠浓度 2.5%,破壁时间
2.5h,破壁温度 70℃的实验条件下进行破壁。
1.2.2 酸法
配制 1.0mol/L 醋酸溶液 60mL,加入酵母粉 3g,在 70℃下水浴 1- 2
小时。3000r/min 离心 15min,沉淀物水洗 2 次,然后用无水乙醇洗涤,无
水乙醚脱水,在 37℃条件下干燥至恒重。
1.2.3 碱法
配制 1.0mol/L NaOH 溶液 60mL,加入酵母粉 3g,在 70℃下水浴
1- 2 小时。3000r/min 离心 15min,沉淀物水洗 2 次,然后用无水乙醇洗
涤,无水乙醚脱水,在 37℃条件下干燥至恒重。
1.2.4 酸碱法
4g 酵母粉加适量水制成酵母泥,加入 200mL 1mol/L NaOH 在 90℃
下,作用 2h 后 3000r/min 离心 15min,水洗 2 遍,加入 4%的乙酸溶液
50mL 室温处理 2h,3000r/min 离心 10min 后,用无水乙醇和无水乙醚分
别脱水两次,在 37℃下干燥 12h 至恒重。
1.2.5 碱法分离提取的最佳实验条件
表 1 碱法分离提纯 β- 葡聚糖正交实验
采用碱法分离提纯 β- 葡聚糖时,其得率和纯度受多种因素影响,
通过单因素试验,初步确定碱处理时间、碱处理温度、碱液浓度为主要因
素,进而通过正交实验,确定碱法分离提纯 β- 葡聚糖的最佳工艺条件。
碱法分离提纯 β- 葡聚糖正交实验设计见表 1,每个处理用 2g酵
母粉,60mLNaOH,通过正交试验处理后,3000r/min 离心 15min,沉淀物
水洗两遍,用无水乙醇在 75℃条件脱水 1- 2h,然后在干燥箱中干燥至
恒重,记录结果并分析。
1.2.6 葡聚糖含量测定
用苯酚—硫酸法,在 490nm 处测定标准葡萄糖溶液在不同浓度
(mg/mL)下的吸光度 OD,以 OD为纵坐标,标准葡萄糖浓度(mg/mL)为横
坐标绘制工作曲线。对所测样品经准确称量后,用 H
2
SO
4
完全水解,加
苯酚显色,在 490nm处测得各样品的 OD,然后通过工作曲线计算各样
品葡聚糖的含量。
1.2.7 脱水和干燥条件对产品色泽的影响
将所得β-葡聚糖依次用不同量的无水乙醇和无水乙醚脱水,探讨无
水乙醇和无水乙醚用量对 β-葡聚糖色泽的影响。将所得 β-葡聚糖进行
自然干燥和真空干燥,比较两种干燥方法对 β- 葡聚糖色泽的影响。
2.结果分析
2.1 酸法、碱法和酸碱法结果对比分析
分别对三种不同工艺所得的产品进行计算得率:葡聚糖得率 = 葡
聚糖(沉淀物)/ 酵母干重 x100%。
表 2 酸法、碱法和酸碱法的对比
2.2 正交试验的结果
表 3 碱法提取正交试验结果
实验号 温度 /℃ 时间 /min 碱液浓度 mol/L
1 75 15 0.50
2 75 30 0.75
3 75 60 1.00
4 85 15 0.75
5 85 30 1.00
6 85 60 0.50
7 100 15 1.00
8 100 30 0.50
9 100 60 0.75
因素
方法
实验条件
实验
用料
葡聚糖
/g
得率
/%
纯度
/%
温度
/°C
时间
/min
酸法 70
60- 12
1mol/L 乙酸
3g 酵母粉
0.769 25.63 41.22
碱法 75 15
0.5mol/L NaOH
2g 酵母粉
0.486 24.33 54.33
酸碱法 变温 240
1mol/L NaOH
4% 乙酸
4g 酵母粉
0.91 22.75 71.22
实验号 粗葡聚糖 /g 纯葡聚糖 /g 得率 /% 纯度 /%
1 0.486 0.2640 24.33 54.33
2 0.3976 0.2181 19.88 54.85
3 0.2422 0.1348 12.11 55.65
4 0.4438 0.2229 22.19 50.22
5 0.2864 0.1463 14.32 51.08
6 0.089 0.0463 4.45 52.01
7 0.2318 0.1128 12.59 48.66
8 0.1734 0.0852 8.67 49.13
9 0.0374 0.0187 1.87 50.05
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根据单因素试验确定影响因素后,设计正交试验,得出的结果如表
3。
2.3 碱法提取最佳条件的确定
(1)碱处理时间对得率和纯度的影响
碱处理时间对得率的影响见图 1,对纯度的影响见图 2。由图 1 和
图 2 可见,β- 葡聚糖的得率随碱处理时间的增加呈下降趋势,而β-
葡聚糖的纯度随碱处理时间的延长呈上升趋势。分析:碱处理时间的延
长可以有效的除去碱溶性物质从而提高产品纯度;碱处理时间过短,粗
品中碱溶性物质不能完全融于碱液中,得率虽然提高了但纯度下降;若
碱处理时间过长,会使 β- 葡聚糖降解成低聚糖,导致产品损失,从而
得率和纯度都下降。
图 1 碱处理时间对得率的影响 图 2 碱处理时间对纯度的影响
(2)碱液浓度对得率和纯度的影响
碱液浓度对得率的影响见图 3,对纯度的影响见图 4。碱液浓度由
低到高时,产品的得率和纯度呈曲线状,在 0.8mol/L左右出现转折。但
综观之,无论是得率还是纯度,碱液浓度都不是其主要影响因素。因而
综合考虑碱液浓度为 0.75mol/L为佳。
图 3 碱液浓度对得率的影响 图 4 碱液浓度对纯度的影响
(3)碱处理温度对得率和纯度的影响
碱处理温度 75℃、85℃、100℃时的得率分别是 25%、15%、10%,纯
度分别是 55%、51%、49%。可见,β- 葡聚糖的得率和纯度随碱处理温
度升高呈下降趋势,75℃时的得率高于 85℃和 100℃时的得率,其水解
后溶液中葡萄糖的含量也高,原因可能是由于在高温作用下,部分葡聚
糖降解为低聚糖融于碱液中,随离心后的上清液被除去,以致含量下
降。
综合各种因素:温度、时间、碱液浓度,确定 β- 葡聚糖的最佳提取
条件为:破壁酵母在 75℃条件下,用 0.75mol/L的碱液处理 15min。
3.结论
本实验共采取了三种实验方法来提取 β- 葡聚糖:酸法,碱法,酸
碱法。
其中,酸法提取对于实际生产利用价值较小,而且操作复杂,不适
合推广,但可以作为实验室的尝试技术。
碱法提取酵母细胞壁中的 β- 葡聚糖,所得产品纯度较高,去除了
细胞壁中的蛋白质和甘露聚糖成分,且葡聚糖的得率高,是从酵母中提
取葡聚糖的高效方法。同时,实验还观测到,产品的色泽与溶剂和水分
的蒸发速度,以及产品最终含水量相关联。
酸碱法提取 β- 葡聚糖产品纯度较高,但其工艺复杂,成本较高,
废液多,适合大工厂特别是啤酒厂在废酵母中提取 β- 葡聚糖,为废啤
酒酵母的综合利用提供了可靠的途径。
水洗可提高纯度,但会造成多糖损失,一般水洗 2- 3 次为佳。要获
得白色粉末状产品,脱水步骤最为关键,结果表明无水乙醇脱水效果较
好,用无水乙醇脱水可除去大部分色素,并随乙醇温度升高及作用时间
的延长,产品就越纯,色泽越浅。无水乙醚除脱水外还有脱脂作用。另
外,溶剂和水分的蒸发速度也能影响产品的色泽,脱水后产品颗粒越
细,所得产品越白。
现在工业上对于干燥通常采用的方法有有机溶剂脱水、冻干和喷
雾干燥法。有人研究发现,喷雾干燥所得的 β- 葡聚糖粉末比另外两种
方法制取的粉末产品有更高的生物活性。所以,对于用于制取试验和研
究用的 β- 葡聚糖时,条件充足的情况下建议用喷雾干燥法。
参考文献
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分析。通过虚拟维修仿真,分析维修中是否可能遇
到不能解决的障碍,取消不太可能完成的维修任务,避免不必要的人
力、物力资源浪费;②维修难易度分析。通过虚拟维修仿真,分析维修中
维修人员操作的难易程度,在确保维修安全的前提下,尽可能的减轻维
修人员负担、提高维修效率;③维修时间分析。通过虚拟维修仿真,制定
更接近实际工时的维修计划工时。
本文仅进行了虚拟维修的初级探讨,未进行更深入的技术研究。虚
拟维修技术能解决的问题涉及维修性工程、维修保障工程、人机工程、
维修训练、产品支援等多个专业;在应用效果上,它不仅分析精度不断
提高,演示效果更加逼真,而且大幅提高了相关工作的自动化程度,缩
短了研制周期,提高了产品质量,降低了研制费用。作为新兴的技术科
学,虚拟维修拥有良好的应用前景和巨大的发展潜力。探讨其技术特征
与内涵,分析其具体研究内容和关键技术,提出其发展趋势,对深入开
展虚拟维修技术的应用研究和系统开发具有重要意义及参考价值。
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高校理科研究
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