６
南昌大学学报（医学版）２０１２年第５２卷第８期
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｃｈａｎｇｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌｓｃｉｅｎｃｅ）２０１２，Ｖ０１．５２Ｎｏ．８
饮食诱导小鼠肥胖疾病模型的建立
胡晓东，李鸿炎
（浙江海正药业股份有限公司中央研究院药理研究所，浙江台州３１８０００）
摘要：目的
建立适合的食源性肥胖症动物疾病模型，用于评价减肥药物临床前动物实验的有效性和安全性。方
法
将１２０只Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠按随机数字表法分为２组，模型组（ｎ＝１１０）采用高脂饲养饮食诱导肥胖（Ｄ１０），对照
组（ｎ一１０）采用标准饲料饲养，２组均饲养１２周。每周监测小鼠体质量和摄食量的变化，ＥＬＩｓＡ法检测血浆中血
糖、血脂和胰岛素水平，断尾采血进行糖耐量（０ＧＴＴ）试验。结果饲养１２周后，模型组和对照组小鼠体质量分别为（３６．９０土５．０７）、（２７．６８±２．２７）ｇ，２组比较差异有统计学意义（Ｐ＜ｏ．００１）；模型组有８０．９％的小鼠发育为Ｄ１０；模型组较对照组摄食量明显增加（Ｐ＜ｏ．０１）。与对照一ｏＧＴＴ组相比，ＤＩｐＯＧＴＴ组血糖和胰岛素明显增加（Ｐ＜ｏ．０１），并伴有糖耐量减低和高脂血症。结论饮食诱导可成功建立小鼠肥胖疾病模型，高脂饮食可以导致具有肥胖倾向的小鼠体质量增加，此模型与临床肥胖症病理接近，且具有稳定性好、操作简单、费用低等优点。关键词：饮食诱导肥胖；糖耐量；动物模型；ｃ５７ＢＩ。／６Ｊ小鼠
中图分类号：Ｒ一３３２文献标志码：Ａ
．．文章编号：１０００一２２９４（２０１２）０８一ｏ００６一０４
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＡＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌｏｆＤｉｅｔ—ｉｎｄｕｃｅｄＯｂｅｓｉｔｙ
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Ａ
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ＫＥＹ
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国际肥胖症研究协会在２０１０年第１１届国际肥经是２１世纪人类面临的最严峻的公共卫生危机之一。肥胖症既是一种独立的疾病，又是引发２型糖已近１０亿，肥胖症患者达到４．７５亿：１｜。肥胖症已
尿病、心血管病、高血压、脑卒中（中风）和多种癌症
万方数据
胖症大会上发布的报告显示，目前全球身体超重者收稿日期：２０１２一０４—１０
基金项目：“十一五”国家创新药重大专项课题（２００９ｚｘ０９３０３）
作者简介：胡晓东（１９７９一），女，硕士，工程师，主要从事肥胖、糖尿病、高血压、高血脂等代谢疾病的研究。
胡晓东等：饮食诱导小鼠肥胖疾病模型的建立
的危险因素［２］。全球范围内，４４％的２型糖尿病患者、２３％的缺血性心脏病患者和７％～４１％某些癌症患者的病因可归咎于超重和肥胖，世界卫生组织已将其列为影响人类健康的第五大最常见的危险因素口ｏ。对肥胖症患者来说，如何通过有效的干预手段，降低发病率及病死率，已成为一个重大公共卫生问题，故开发出新的肥胖症治疗方法显得尤为迫切。现今国际上制定了统一的减肥原则，即不抑制食欲、不引起腹泻、减轻体质量而不降低体力。因此，研制和开发新的高效低毒的减肥药物是科研人员面临的重要社会责任，而对减肥药进行临床前动物实验，建立适合的肥胖症动物模型就成为一种必然。本研究室经过长期摸索，成功构建了成熟的肥胖症动物模型，可运用于减肥药、降糖降脂药临床前药效评价。
１材料和方法
４
１．１材料
１２０只Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠（雄性，３周龄，７～９
ｇ，
北京维通利华，许可证号ＳＣｘＫ（沪）２００７～０００５）；离心机（美国贝克曼库尔特有限公司）；自制抗凝管；肝素（美国希格玛股份有限公司）；电子称（上海赛得利斯精密仪器仪表有限公司）；全自动生化分析仪（日本希森美康公司）；动物饲养设备；血糖试剂盒（日本希森美康公司，ＺＧＯ００５）；胆固醇试剂盒（日本希森美康公司，ｚＧｌ００２）；三酰甘油试剂盒（日本希森美康公司，ＺＧ０００７）；胰岛素试剂盒（美国密理博公司，１７７５５４６）。１．２动物饲料
标准饲料（ＳＴＤ，ｌｏｔ０８１０１５０６，１０％ｋＪ％ｆａｔ，
Ｄ１２４５０Ｂ，ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｅｔｓＩｎｃ．），１６．１１
ｋＪ・ｇ一１；高
脂饲料（ＨＦＤ，ｌ。ｔ１１１１１４０１，６０％ｋＪ％ｆａｔ，Ｄ１２４９２，
ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｅｔｓＩｎｃ．），２１。９２
ｋＪ・ｇ～，２种饲料组成
成分见表ｌ。
表１
高脂饲料与标准饲料组成成分
＊高脂饲料增加的脂肪来自猪油。１．３
Ｄｌｏ小鼠肥胖疾病模型建立方法
实验动物饲养：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，饲养子无特定
病原体动物（ＳＰＦ）动物房，温度：２２～２４℃，湿度：４５％～７０％，维持１２ｈ昼夜交替（光照度１５０～
万方数据
７
３００
１ｘ，０７：００—１９：Ｏｏ），随意自由饮水和进食。１２０
只小鼠用标准饲料适应性喂养１周，１０只・笼～，１周后称体质量。１２０只小鼠按随机数字表法分为２组，分别为模型组给予高脂饲养（ｎ一１１０）和对照组（７ｚ一１０）给予标准饲料饲养，５只・笼～，总共２４笼。每笼中的５只小鼠分别进行剪耳标识，小鼠均随意自由饮水和进食。
体质量和摄食量记录：称体质量前１ｄ下午（每周一下午）１５：００禁食，小鼠随意自由饮水。每周二上午０９：００电子称称重，即分别对每只小鼠在４～１６周龄称重并记录，绘制模型组和对照组平均体质量变化图。记录每笼每周的小鼠摄食量ｍ／ｇ，计算模型组和对照组平均每日摄入的热量。计算方法：
模型组平均每日摄人的热量Ｑ／ｋＪ一２１．９２×模型组平均每日摄食量７７ｚ／ｇ÷５×７。
对照组平均每日摄入的热量Ｑ／ｋＪ＝１６．１１×对
照组平均每日摄食量ｍ／ｇ÷５×７。
按照上述公式得出每天每只小鼠的摄人热量，再算出每组均值。饲养１２周后，模型组动物体质量超过对照组最高体质量者，视作有肥胖趋向小鼠，设为Ｄ１０小鼠。
１．４实验动物生化指标分析
在１２周造模实验的最后１次称重和摄食量记录后，从１１０只模型组小鼠筛选出５０只体质量接近模型组均值的有肥胖趋向的小鼠５０只和对照组小鼠１０只，每只动物短暂乙醚麻醉下眼眶取血，分别装入自制肝素抗凝管，离心处理血样品
（３０００
ｒ・ｍｉｎ～，离心１５ｍｉｎ，４℃），收集血浆测定
血糖，胰岛素和血脂（总胆固醇和三酰甘油），具体操作步骤见试剂盒说明书。
１．５
口服糖耐量试验（ＯＧＴＴ）
在进行本试验前１周，对实验动物进行掐尾适
应性训练。
各组小鼠在第１６周末进行口服糖耐量试验。从５０只ＤＩＯ组小鼠中筛选出体质量接近该组平均值的１８只小鼠（ＤＩｏ～ｏＧＴＴ组），从ｌｏ只对照组小鼠中筛选出体质量接近该组平均值的６只小鼠（对照一０ＧＴＴ组），禁食过夜，禁食１２ｈ断尾采血，为Ｔ０血糖。灌胃５０％葡萄糖（２ｍｇ葡萄糖・蛞叫体质量），分别测定灌胃后３０、６０、９０、１２０ｍｉｎ血糖值。
每个采血点采５０扯Ｌ血，分别装入自制肝素抗凝管并作标识，离心处理血样品（３
０００
ｒ・ｍｉｎ～，
１５
ｍｉｎ，４℃），收集血浆测定血糖。
１．６统计学方法
用统计软件ＰＲＩＳＭ５．ｏ进行数据处理。实验
８
ＤＩＯ组小鼠血浆血糖、胆固醇、胰岛素水平明
显高于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜ｏ．０１或Ｐ＜
：：：００１），三酰甘油水平略高于对照组，但差异无统计
学意义（Ｐ＞０．０５）。见表２。
兰：兰竺组和ＤＩｏ组血浆血糖、胰岛素、胆固醇、三酰甘油水平
ｉ士ｓ，ｃ／（ｍｍ。１．Ｌ一，）
？去意赢羔羔焉煮岩Ｌ』鲨釜。Ｐ＜ｏ・ｏｌ，△尸＞ｏ．０５，＃Ｐ＜ｏ．Ｏｏｌ与对照组比较。—————————————————～
鲨鲨禁食１２
ｈ后，Ｄ１０一ＯＧＴＴ组小鼠空腹血糖水
墟墟Ｍｎ
ｍｉｎ后，对照一０ＧＴＴ组血糖ｍ
８ｍｉｎ出现高６４２
ｏ
ｍｉｎ血糖水平Ｏ
∞
∞
∞
１２０
口服葡萄糖后时间ｔＡｉ“
‘‘・一阱口。嗍白１１８）＋对黑刁Ｇｒ『衄（ｎ。‘）
图３
１２周造模后Ｄ１００ＧＴＴ组与对照一ＯＧＴＴ组血糖水平
万方数据
表１模型组和对照组体质量及造模期间每日摄入热量变化
平比对照一ＯＧＴＴ组更高，差异有统计学意义（Ｐ＜ｏ・０１）。口服葡萄糖３０出现高峰，而ＤＩＯ—ＯＧＴＴ组血糖在６０峰。Ｄ１０一ＯＧＴＴ组小鼠血糖水平在葡萄糖耐量试验中，各时间点的血糖水平均明显高于对照一ＯＧＴＴ组，并且，ＤＩＯ—ＯＧＴＴ组小鼠在１２０明显高于口服葡萄糖前的血糖，出现糖耐量减低。
胡晓东等：饮食诱导小鼠肥胖疾病模型的建立
９
３讨论
肥胖是一种社会性慢性疾病，像高血脂、高血压和糖尿病一样，它在很大程度上是依照环境变化的。在肥胖症研究领域，有多种肥胖动物模型，如基因敲除模型（ｏｂ／ｏｂ小鼠）、损毁下丘脑模型、ＤＩＯ模型等。饮食诱导的肥胖小鼠（ＤＩＯｍｉｃｅ）动物模型与人类肥胖有许多共同特征，如高胰岛素血症、高呼吸商、胰岛素抵抗和脂质代谢紊乱等，非常适用减肥药物的临床前药效学评价和肥胖机制的研究卧］。
本实验室选择Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠品种，因为它容易饲养、寿命长，发展成肿瘤的可能性低，也因此被广泛应用于其他各种研究领域，包括心血管、发育、糖尿病、遗传、免疫、神经和转基因鼠的研究。相对于ＢＡＬＢ／ｃ和ＤＢＡ／２Ｊ小鼠，它最大的优势是延缓衰老。另外，它容易发展成饮食诱导肥胖、２型糖尿
小鼠较为安静，可降低应激反应引起的血糖升高。经过本研究室多次试验，发现目前采用的采血方式血糖值较稳定。
ＤＩｏ小鼠肥胖疾病模型已经成为本研究所减肥药物和抗２型糖尿病药临床前药效研究的首选模型，实验结果发现，此模型具有稳定性好（每批Ｃ５７小鼠成模率均达８０％以上）、重复性好（本实验室不同的实验人员参与建立此模型均可达到理想的造模效果）、操作简单、费用低等良好的动物疾病模型所具备的优点。整个造模期间，没有动物死亡。
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ＰＬ，ＬａｎｃｈａＡＨ
病和动脉粥样硬化［５］。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠高脂饮食除
诱导肥胖外，还引起高胰岛素血症、轻微至中度高血糖‘６Ｉ。
本研究中，长期进食高脂饲料的模型组小鼠，体质量明显高于标准饲料喂养组，其中８０．９％的小鼠发育为ＤＩｏ。整个造模期间，模型组小鼠体质量呈缓慢增长，每日摄人的热量平稳，波动小，虽然饮食诱导的肥胖小鼠动物模型的建立耗时长达３个月，但此模型较为真实地模拟了人类肥胖症患者的病因和体质量增长过程，即由长期高热量饮食和缺乏运动的生活状态所致。此肥胖模型动物，伴有高血糖、高胰岛素血症和脂质代谢紊乱，符合人类肥胖症患者所具有的血液生化指标的变化，所以此模型适合用于评价治疗肥胖症药物的临床前药效。
在进行口服糖耐量试验前１周，对筛选出来的动物进行掐尾适应性训练，以降低其疼痛应激反应。采血时，让小鼠钻人手套指端，露出尾部，在黑暗中（上接第５页）
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６
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法
将１２０只Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠按随机数字表法分为２组，模型组（ｎ＝１１０）采用高脂饲养饮食诱导肥胖（Ｄ１０），对照
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糖、血脂和胰岛素水平，断尾采血进行糖耐量（０ＧＴＴ）试验。结果饲养１２周后，模型组和对照组小鼠体质量分别为（３６．９０土５．０７）、（２７．６８±２．２７）ｇ，２组比较差异有统计学意义（Ｐ＜ｏ．００１）；模型组有８０．９％的小鼠发育为Ｄ１０；模型组较对照组摄食量明显增加（Ｐ＜ｏ．０１）。与对照一ｏＧＴＴ组相比，ＤＩｐＯＧＴＴ组血糖和胰岛素明显增加（Ｐ＜ｏ．０１），并伴有糖耐量减低和高脂血症。结论饮食诱导可成功建立小鼠肥胖疾病模型，高脂饮食可以导致具有肥胖倾向的小鼠体质量增加，此模型与临床肥胖症病理接近，且具有稳定性好、操作简单、费用低等优点。关键词：饮食诱导肥胖；糖耐量；动物模型；ｃ５７ＢＩ。／６Ｊ小鼠
中图分类号：Ｒ一３３２文献标志码：Ａ
．．文章编号：１０００一２２９４（２０１２）０８一ｏ００６一０４
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ａｎ
ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｏｆｄｉｅｔ—ｉｎｄｕｃｅｄｏｂｅｓｉｔｙ（ＤＩＯ），ａｎｄ
ｔｏｉｎ—
ｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙａｎｄｓａｆｅｔｙｏｆｗｅｉｇｈｔ—ｌｏｓｓｄｒｕｇｓｉｎｐｒｅ－ｃｌｉｎｉｃａＩａｎｉｍａｌ
ｔｅｓｔｉｎｇ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
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ｔｏｔａｌｏｆ１２０Ｃ５７ＢＬ／６Ｊｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆｅｄｈｉｇｈ—ｆａｔｄｉｅｔ（ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｅｔｓＩｎｃ．，
Ｄ１２４９２，６０％ｋｃａｌ％ｆａｔ；ＤＩＯｇｒｏｕｐ，程一１１０）ｏｒｓｔａｎｄａｒｄｃｈｏｗ（ｃｏｎｔｒｏｌｇｒ。ｕｐ，竹一１０）ｆｏｒ
１２
ｗｅｅｋｓ．Ｆｏｏｄｉｎｔａｋｅａｎｄｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｗｅｅｋｌｙ．Ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐｌａｓｍａｇｌｕｃｏｓｅ，ｉｎｓｕｌｉｎａｎｄｌｉｐｉｄｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｅｎｚｙｍｅ一１ｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．Ｂ１００ｄｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌ—ｌｅｃｔｅｄｂｙｔａｉｌｃｕｔｔｉｎｇｆｏｒ９１ｕｃｏｓｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
Ａｆｔｅｒｆｅｅｄｉｎｇｆｏｒ１２ｗｅｅｋｓ，８０．９％ｏｆ
ｍｉｃｅｉｎＤ１０ｇｒｏｕｐｄｅｖｅｌｏｐｅｄｏｂｅｓｉｔｙａｎｄｈａｄｉｍｐａｉｒｅｄｇｌｕｃｏｓｅｔ０１ｅｒａｎｃｅ，ａｎｄｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒ０１ｇｒｏｕｐ，ｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎＤＩＯｇｒｏｕｐ［（３６．９０土５．
０７）ｇ
ｖｓ（２７．６８±２．２７）ｇ，Ｐ＜ｏ．００１］．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｆｏｏｄｉｎｔａｋｅａｎｄｌｅｖｅｌｓｏｆｐｌａｓｍａ９１ｕｃｏｓｅａｎｄｉｎ—
ｓｕｌｉｎｏｂｖｉｏｕｓｌｙｅｌｅｖａｔｅｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
Ｈｉｇｈ—ｆａｔｄｉｅｔｆｅｅｄ—
ｉｎｇ
ｃａｎ
ｉｎｄｕｃｅＤＩＯａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｉｎｍｉｃｅ．Ｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｏｄｅｌｉｓｃｌｏｓｅｄｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃａｌ
ｏｂｅｓｉｔｙｗｉｔｈｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｇｏｏｄｓｔａｂｉＩｉｔｙ，ｓｉｍｐｌｅｏｐｅｒａｔｉｏｎａｎｄ１０ｗｃｏｓｔ．
ＫＥＹ
ＷＯＲＤＳ：ｄｉｅｔ—ｉｎｄｕｃｅｄｏｂｅｓｉｔｙ；９１ｕｃｏｓｅｔ０１ｅｒａｎｃｅ；ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌ；Ｃ５７ＢＬ／６Ｊｍｉｃｅ
国际肥胖症研究协会在２０１０年第１１届国际肥经是２１世纪人类面临的最严峻的公共卫生危机之一。肥胖症既是一种独立的疾病，又是引发２型糖已近１０亿，肥胖症患者达到４．７５亿：１｜。肥胖症已
尿病、心血管病、高血压、脑卒中（中风）和多种癌症
万方数据
胖症大会上发布的报告显示，目前全球身体超重者收稿日期：２０１２一０４—１０
基金项目：“十一五”国家创新药重大专项课题（２００９ｚｘ０９３０３）
作者简介：胡晓东（１９７９一），女，硕士，工程师，主要从事肥胖、糖尿病、高血压、高血脂等代谢疾病的研究。
胡晓东等：饮食诱导小鼠肥胖疾病模型的建立
的危险因素［２］。全球范围内，４４％的２型糖尿病患者、２３％的缺血性心脏病患者和７％～４１％某些癌症患者的病因可归咎于超重和肥胖，世界卫生组织已将其列为影响人类健康的第五大最常见的危险因素口ｏ。对肥胖症患者来说，如何通过有效的干预手段，降低发病率及病死率，已成为一个重大公共卫生问题，故开发出新的肥胖症治疗方法显得尤为迫切。现今国际上制定了统一的减肥原则，即不抑制食欲、不引起腹泻、减轻体质量而不降低体力。因此，研制和开发新的高效低毒的减肥药物是科研人员面临的重要社会责任，而对减肥药进行临床前动物实验，建立适合的肥胖症动物模型就成为一种必然。本研究室经过长期摸索，成功构建了成熟的肥胖症动物模型，可运用于减肥药、降糖降脂药临床前药效评价。
１材料和方法
４
１．１材料
１２０只Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠（雄性，３周龄，７～９
ｇ，
北京维通利华，许可证号ＳＣｘＫ（沪）２００７～０００５）；离心机（美国贝克曼库尔特有限公司）；自制抗凝管；肝素（美国希格玛股份有限公司）；电子称（上海赛得利斯精密仪器仪表有限公司）；全自动生化分析仪（日本希森美康公司）；动物饲养设备；血糖试剂盒（日本希森美康公司，ＺＧＯ００５）；胆固醇试剂盒（日本希森美康公司，ｚＧｌ００２）；三酰甘油试剂盒（日本希森美康公司，ＺＧ０００７）；胰岛素试剂盒（美国密理博公司，１７７５５４６）。１．２动物饲料
标准饲料（ＳＴＤ，ｌｏｔ０８１０１５０６，１０％ｋＪ％ｆａｔ，
Ｄ１２４５０Ｂ，ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｅｔｓＩｎｃ．），１６．１１
ｋＪ・ｇ一１；高
脂饲料（ＨＦＤ，ｌ。ｔ１１１１１４０１，６０％ｋＪ％ｆａｔ，Ｄ１２４９２，
ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｅｔｓＩｎｃ．），２１。９２
ｋＪ・ｇ～，２种饲料组成
成分见表ｌ。
表１
高脂饲料与标准饲料组成成分
＊高脂饲料增加的脂肪来自猪油。１．３
Ｄｌｏ小鼠肥胖疾病模型建立方法
实验动物饲养：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，饲养子无特定
病原体动物（ＳＰＦ）动物房，温度：２２～２４℃，湿度：４５％～７０％，维持１２ｈ昼夜交替（光照度１５０～
万方数据
７
３００
１ｘ，０７：００—１９：Ｏｏ），随意自由饮水和进食。１２０
只小鼠用标准饲料适应性喂养１周，１０只・笼～，１周后称体质量。１２０只小鼠按随机数字表法分为２组，分别为模型组给予高脂饲养（ｎ一１１０）和对照组（７ｚ一１０）给予标准饲料饲养，５只・笼～，总共２４笼。每笼中的５只小鼠分别进行剪耳标识，小鼠均随意自由饮水和进食。
体质量和摄食量记录：称体质量前１ｄ下午（每周一下午）１５：００禁食，小鼠随意自由饮水。每周二上午０９：００电子称称重，即分别对每只小鼠在４～１６周龄称重并记录，绘制模型组和对照组平均体质量变化图。记录每笼每周的小鼠摄食量ｍ／ｇ，计算模型组和对照组平均每日摄入的热量。计算方法：
模型组平均每日摄人的热量Ｑ／ｋＪ一２１．９２×模型组平均每日摄食量７７ｚ／ｇ÷５×７。
对照组平均每日摄入的热量Ｑ／ｋＪ＝１６．１１×对
照组平均每日摄食量ｍ／ｇ÷５×７。
按照上述公式得出每天每只小鼠的摄人热量，再算出每组均值。饲养１２周后，模型组动物体质量超过对照组最高体质量者，视作有肥胖趋向小鼠，设为Ｄ１０小鼠。
１．４实验动物生化指标分析
在１２周造模实验的最后１次称重和摄食量记录后，从１１０只模型组小鼠筛选出５０只体质量接近模型组均值的有肥胖趋向的小鼠５０只和对照组小鼠１０只，每只动物短暂乙醚麻醉下眼眶取血，分别装入自制肝素抗凝管，离心处理血样品
（３０００
ｒ・ｍｉｎ～，离心１５ｍｉｎ，４℃），收集血浆测定
血糖，胰岛素和血脂（总胆固醇和三酰甘油），具体操作步骤见试剂盒说明书。
１．５
口服糖耐量试验（ＯＧＴＴ）
在进行本试验前１周，对实验动物进行掐尾适
应性训练。
各组小鼠在第１６周末进行口服糖耐量试验。从５０只ＤＩＯ组小鼠中筛选出体质量接近该组平均值的１８只小鼠（ＤＩｏ～ｏＧＴＴ组），从ｌｏ只对照组小鼠中筛选出体质量接近该组平均值的６只小鼠（对照一０ＧＴＴ组），禁食过夜，禁食１２ｈ断尾采血，为Ｔ０血糖。灌胃５０％葡萄糖（２ｍｇ葡萄糖・蛞叫体质量），分别测定灌胃后３０、６０、９０、１２０ｍｉｎ血糖值。
每个采血点采５０扯Ｌ血，分别装入自制肝素抗凝管并作标识，离心处理血样品（３
０００
ｒ・ｍｉｎ～，
１５
ｍｉｎ，４℃），收集血浆测定血糖。
１．６统计学方法
用统计软件ＰＲＩＳＭ５．ｏ进行数据处理。实验
８
ＤＩＯ组小鼠血浆血糖、胆固醇、胰岛素水平明
显高于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜ｏ．０１或Ｐ＜
：：：００１），三酰甘油水平略高于对照组，但差异无统计
学意义（Ｐ＞０．０５）。见表２。
兰：兰竺组和ＤＩｏ组血浆血糖、胰岛素、胆固醇、三酰甘油水平
ｉ士ｓ，ｃ／（ｍｍ。１．Ｌ一，）
？去意赢羔羔焉煮岩Ｌ』鲨釜。Ｐ＜ｏ・ｏｌ，△尸＞ｏ．０５，＃Ｐ＜ｏ．Ｏｏｌ与对照组比较。—————————————————～
鲨鲨禁食１２
ｈ后，Ｄ１０一ＯＧＴＴ组小鼠空腹血糖水
墟墟Ｍｎ
ｍｉｎ后，对照一０ＧＴＴ组血糖ｍ
８ｍｉｎ出现高６４２
ｏ
ｍｉｎ血糖水平Ｏ
∞
∞
∞
１２０
口服葡萄糖后时间ｔＡｉ“
‘‘・一阱口。嗍白１１８）＋对黑刁Ｇｒ『衄（ｎ。‘）
图３
１２周造模后Ｄ１００ＧＴＴ组与对照一ＯＧＴＴ组血糖水平
万方数据
表１模型组和对照组体质量及造模期间每日摄入热量变化
平比对照一ＯＧＴＴ组更高，差异有统计学意义（Ｐ＜ｏ・０１）。口服葡萄糖３０出现高峰，而ＤＩＯ—ＯＧＴＴ组血糖在６０峰。Ｄ１０一ＯＧＴＴ组小鼠血糖水平在葡萄糖耐量试验中，各时间点的血糖水平均明显高于对照一ＯＧＴＴ组，并且，ＤＩＯ—ＯＧＴＴ组小鼠在１２０明显高于口服葡萄糖前的血糖，出现糖耐量减低。
胡晓东等：饮食诱导小鼠肥胖疾病模型的建立
９
３讨论
肥胖是一种社会性慢性疾病，像高血脂、高血压和糖尿病一样，它在很大程度上是依照环境变化的。在肥胖症研究领域，有多种肥胖动物模型，如基因敲除模型（ｏｂ／ｏｂ小鼠）、损毁下丘脑模型、ＤＩＯ模型等。饮食诱导的肥胖小鼠（ＤＩＯｍｉｃｅ）动物模型与人类肥胖有许多共同特征，如高胰岛素血症、高呼吸商、胰岛素抵抗和脂质代谢紊乱等，非常适用减肥药物的临床前药效学评价和肥胖机制的研究卧］。
本实验室选择Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠品种，因为它容易饲养、寿命长，发展成肿瘤的可能性低，也因此被广泛应用于其他各种研究领域，包括心血管、发育、糖尿病、遗传、免疫、神经和转基因鼠的研究。相对于ＢＡＬＢ／ｃ和ＤＢＡ／２Ｊ小鼠，它最大的优势是延缓衰老。另外，它容易发展成饮食诱导肥胖、２型糖尿
小鼠较为安静，可降低应激反应引起的血糖升高。经过本研究室多次试验，发现目前采用的采血方式血糖值较稳定。
ＤＩｏ小鼠肥胖疾病模型已经成为本研究所减肥药物和抗２型糖尿病药临床前药效研究的首选模型，实验结果发现，此模型具有稳定性好（每批Ｃ５７小鼠成模率均达８０％以上）、重复性好（本实验室不同的实验人员参与建立此模型均可达到理想的造模效果）、操作简单、费用低等良好的动物疾病模型所具备的优点。整个造模期间，没有动物死亡。
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ＰＬ，ＬａｎｃｈａＡＨ
病和动脉粥样硬化［５］。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠高脂饮食除
诱导肥胖外，还引起高胰岛素血症、轻微至中度高血糖‘６Ｉ。
本研究中，长期进食高脂饲料的模型组小鼠，体质量明显高于标准饲料喂养组，其中８０．９％的小鼠发育为ＤＩｏ。整个造模期间，模型组小鼠体质量呈缓慢增长，每日摄人的热量平稳，波动小，虽然饮食诱导的肥胖小鼠动物模型的建立耗时长达３个月，但此模型较为真实地模拟了人类肥胖症患者的病因和体质量增长过程，即由长期高热量饮食和缺乏运动的生活状态所致。此肥胖模型动物，伴有高血糖、高胰岛素血症和脂质代谢紊乱，符合人类肥胖症患者所具有的血液生化指标的变化，所以此模型适合用于评价治疗肥胖症药物的临床前药效。
在进行口服糖耐量试验前１周，对筛选出来的动物进行掐尾适应性训练，以降低其疼痛应激反应。采血时，让小鼠钻人手套指端，露出尾部，在黑暗中（上接第５页）
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